人IL-6 mRNA的实时定量检测法

目的：建立TaqMan-MGB技术实时定量检测人IL-6 mRNA的方法，并用于检测人外周血单个核细胞在牛膝多糖诱导下IL-6 mRNA的表达。方法：（1）抽取人外周静脉血，EDTA抗凝，用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞，用Trizol裂解液提取总RNA，将总RNA逆转录为cDNA，PCR扩增IL-6后纯化PCR产物，与pMD 18-T载体进行连接，转化宿主菌DH-5α。提取重组质粒DNA，作为实时荧光定量检测的标准品。建立TaqMan-MGB技术实时定量检测IL-6 mRNA的方法。（2）终浓度分别为0、100、200、400、800和1 600 mg/L的牛膝多糖作用于人外周血单个核细胞，定量检测IL-6 mRNA的表达。结果：（1）酶切分析、PCR扩增以及测序结果均证实IL-6 cDNA成功重组到pMD 18-T载体上。（2）TaqMan-MGB技术检测IL-6 mRNA线性范围广；灵敏度高；特异性好；重复性好。（3）牛膝多糖作用于人外周血单个核细胞后IL-6 mRNA表达增高。结论：TaqMan-MGB技术能较为精确地定量IL-6 mRNA。     

牛膝多糖体外诱导人T细胞表达IFN-γ和IL-4蛋白的机制探讨

目的 :探讨牛膝多糖免疫调节作用的机制。方法 :使用牛膝多糖在不同浓度或在不同时间内对人T细胞进行体外诱导培养 ,用ELISA方法测定培养上清液的IFN γ及IL 4的蛋白表达情况。结果 :①人T细胞受不同浓度ABPS刺激时 ,IFN γ分泌水平随ABPS浓度递增 ,在 4 0 0 μg ml时 ,IFN γ表达量最高 (P <0 0 5 ) ,而IL 4的分泌始终处于低水平 (P >0 0 5 )。②人T细胞在ABPS刺激不同时间后 ,IFN γ分泌水平逐步增高 ,在 4 8小时时与其他各时间点比较 ,有非常显著的差异 (P <0 0 0 1) ,而IL 4的分泌始终处于低水平 (P >0 0 5 )。结论 :①ABPS能诱导人T细胞分泌IFN γ ,该作用呈时间、剂量依赖性变化 ,而抑制IL 4的分泌。②在蛋白表达水平上证实ABPS能够促进Th1类细胞因子的分泌 ,而抑制Th2类细胞因子的分泌。     

内镜双乳晕同侧腋窝径路甲状腺手术与内镜乳晕径路甲状腺手术临床疗效比较

目的通过与内镜双乳晕径路甲状腺手术(BBAET)临床疗效的对比,探讨内镜双乳晕同侧腋窝径路甲状腺手术(BBIAA)的安全性及可行性。方法回顾性分析2012年8月~2014年8月行BBIAA与BBAET进行单侧甲状腺切除的各25例临床资料,比较两组的手术时间、出血量、手术分离皮瓣的面积、术后第1天引流量、术后住院时间、术后第1天VAS疼痛评分、术后并发症等指标。结果两组的手术时间、出血量、手术分离皮瓣的面积、术后第1天引流量、术后住院时间、术后第1天VAS疼痛评分、术后并发症均没有显著差异。结论与内镜甲状腺手术(BBAET)相比,BBIAA是安全的、可行的,具有美容、疼痛轻、易推广的优点,可以作为BBAET的替代手术方式。     

2型糖尿病患者mtDNA变异筛查研究

目的探讨线粒体基因突变与2型糖尿病的关系。方法随机筛查222例散发2型糖尿病患者和191名正常对照，以聚合酶链反应、限制性内切酶片段长度多态性及T-A克隆测序和变性高效液相色谱分析技术验证等方法检测线粒体基因突变。结果糖尿病组线粒体基因（3153—3551nt）突变总的发生率（24．32％）明显高于正常组（7．33％）（P〈0．05）；发现3个尚未见报道的新突变位点：A3209T、T3253G和A3467C，而C3497T则在糖尿病中是首次报道；起病年龄、体重指数、空腹血糖、糖化血红蛋白、高密度脂蛋白和糖尿病肾病等指标是线粒体基因突变的相关因素（P〈0．05）。结论温州地区糖尿病患者存在多种线粒体基因点突变，其在糖尿病的发生发展中起重要作用。     

牛膝多糖对CD4+T细胞的诱导和分化作用研究

目的：探讨牛膝多糖免疫调节作用的机制。 方法： (1)以牛膝多糖 (800 mg/L)分别对哮喘和肺癌病人的(PBMC)进行体外诱导培养，在18 h以RT-PCR检测IFN-γ和IL-4的基因表达率。(2)用牛膝多糖在不同时间内和不同剂量分别对Th细胞进行体外诱导其分化，并分别收集细胞悬液和抽提细胞中RNA，分别采用RT-PCR和ELISA检测Th细胞所分泌的IFN-γ和IL-4的含量。 结果： (1)哮喘和肺癌患者PBMC中IFN-γ mRNA表达率分别由6/25升到14/25(P<0.01)、3/22升到10/22(P<0.05)，IL-4 mRNA的表达率由17/25降到9/25(P<0.05)、14/22降到5/22(P<0.05)。 (2)Th细胞培养至6 h，即可检到IFN-γ mRNA分泌，18 h达到高峰，之后迅速下降，48 h已难以检出。而IL-4被抑制。(3) IFN-γ蛋白表达量存在时间依赖性，从18-24 h时段开始，蛋白表达量开始显著增加(P<0.05)，但在24 h、36 h和48 h的3个时段内，蛋白表达量增加不明显(P>0.05)，进入平台期。IL-4蛋白表达量被抑制。(4)IFN-γ基因水平和蛋白表达量分别与牛膝多糖的诱导浓度相关(r=0.979)。400 mg/L和800 mg/L是较好的的诱导浓度。而IL-4的蛋白表达被抑制。 结论： (1)应用牛膝多糖能初步纠正肺癌和哮喘患者Th1和Th2细胞因子的失平衡。(2)牛膝多糖能在转录水平和翻译水平促进Th1类细胞因子的分泌，而抑制Th2类细胞因子的分泌。     

SHV-4型ESBL在pET26b/BL(DE3)中的表达纯化及其特性研究

目的:表达SHV-4型超广谱β-内酰胺酶,对纯化的SHY-4酶进行特性研究.方法:将SHV-4基因克隆到pET26b表达质粒,重组质粒转入E.coli BL21(DE3)构建工程菌,重组工程菌经摇瓶发酵后获得种子菌,种子菌转入发酵罐发酵,当菌体密度OD600为0.8时,加入诱导剂IPTG至终浓度为1.0 mmol/L,于37℃培养6 h.培养液离心收获菌体沉淀,其超声裂解上清液进行Ni2 亲和层析,获取的SHV-4酶进行分子量、纯度、等电点、最适条件、米氏常数、催化常数等特性进行分析.结果:SDS-PAGE电泳,等电聚焦电泳及系列的酶动力学实验表明SHV-4酶分子量约为30 kD,纯度大于95%,等电点为7.9,最适pH值为6.0～8.0,最适温度为37℃,以头孢硝噻吩为底物测定的Km值为2.61×10-6 mol/L,Kcat为258 s,Kcat/Km为9.88×107 mol-1·s-1·vL.结论:重组的SHV-4酶初步满足制成商品酶的条件.     

免疫磁珠及尼龙毛分离纯化T淋巴细胞的比较研究

目的:探讨免疫磁珠及尼龙毛分离纯化外周血T淋巴细胞的方法及其特点.方法:用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,再分别以尼龙毛和免疫磁珠分离出T细胞,然后使用流式细胞仪鉴定细胞纯度、回收率,以台盼蓝检测细胞活力,MTT法检测细胞增殖性能.结果:免疫磁珠方法分离后T细胞的纯度显著高于尼龙毛分离方法(P＜0.05),而且回收率也大于尼龙毛分离方法(P＜0.001),但二种方法分离的T细胞在细胞活力和增殖性能方面比较差异无显著性(P＞0.05).结论:在细胞生物学研究中,免疫磁珠分离法是有效分纯T细胞的较佳方法.     

线粒体tRNALeu(UUR)基因A3243G突变糖尿病家系的基因诊断

目的确认一个由线粒体tRNA^Leu（UUR）基因A3243G点突变引起的母系遗传糖尿病家系，并分析其临床特征。方法采用PCR产物直接测序法对53例无血缘关系的有家族史的2型糖尿病（T2DM）患者线粒体DNA（mitochondria DNA，mtDNA）片段（nt3153-nt3551）进行点突变筛选，然后对筛选到的A3243G异质性突变样本作DHPLC分析确认。详细调查此突变糖尿病家系发病特征，并做线粒体基因组全序列分析。结果在53例样本中检测到1例A3243G突变，对其家系调查发现7例母系成员中5例患病（1男4女），患者多数伴听力损害，体重指数减低，口服降糖药效果不佳最终需用胰岛素治疗，呈母系遗传，发病年龄不等，平均32．75岁。线粒体全基因组测序表明患者存在包括A3243G突变的共33个变异位点，但除A3243G突变外其余都不是进化上高度保守的位点，因此A3243G突变是与这个糖尿病家系发病有关的惟一的mtDNA突变。结论线粒体tRNA^Leu（UUR）基因A3243G突变是这个三代母系遗传糖尿病家系发病的原因，其临床特点是发病年龄轻、不胖、母系遗传、耳聋发生率和使用胰岛素比率高等。     

构建基于课程思政的医学检验技术专业课程体系的探索

笔者从推进课程思政建设的视角,阐述了医学检验技术专业课程体系中存在的问题,从专业育人角度对优化课程设置、挖掘思政教学内容、改善教学方法、拓宽教育渠道进行了深入分析,探讨了在课程思政原则的指导下,构建覆盖面广,层次性强,专业特色突出的课程体系的可行路径。     

分子生物学教学初探

通过对分子生物学教学的回顾和总结,从教学内容、教学方法、教学改革、考试形式等方面进行了多方位、多层次的审视,初步形成了一套适应本科生的分子生物学教学思想和教学模式。