不同血液透析液对U937细胞凋亡和PKCδ表达的影响

目的 研究不同血液透析液对U937细胞蛋白激酶C-δ(PKCδ)表达及细胞凋亡的影响.方法 在对数生长期人单核细胞株U937细胞培养液中添加不同血液透析液进行干预,分为A液+B液组(血液透析液A液+B液组合)、A液+B液+PKCδ特异性抑制剂(rottlerin)组、A液+B粉组(血液透析液A液+B粉组合)、A液+B粉+ rottlerin组,同时设立空白对照和正常对照组.分组干预后24 h和48 h分别收集细胞,Hoechst33258染色后荧光显微镜观察细胞形态学改变;Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡;RT-PCR和Western blotting 检测PKCδ mRNA和蛋白表达.结果 A液+B粉组凋亡细胞明显增多,呈凋亡典型形态学改变,分组干预24 h和48 h的细胞凋亡率明显高于相应时间点空白对照组、正常对照组和A液+B粉+rottlerin组(P<0.05);同时与两对照组和A液+B粉+rottlerin组比较,A液+B粉组U937细胞PKCδ mRNA和蛋白表达均明显上调(P<0.05).A液+B液组细胞凋亡率及PKCδ mRNA和蛋白表达与两对照组和A液+B液+rottlerin组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 血液透析液A液+B粉组合对U937细胞有明显促凋亡作用,其机制可能与上调细胞PKCδ表达有关;与A液+B粉组合比较,选择A液+B液组合作为血液透析液可降低患者外周血单核细胞的细胞凋亡率.     

不同血液透析液对U937细胞凋亡和PKCδ表达的影响

目的 研究不同血液透析液对U937细胞蛋白激酶C-δ（PKCδ）表达及细胞凋亡的影响。方法 在对数生长期人单核细胞株U937细胞培养液中添加不同血液透析液进行干预,分为A液＋B液组（血液透析液A液＋B液组合）、A液＋B液+PKCδ特异性抑制剂（rottlerin）组、A液＋B粉组（血液透析液A液＋B粉组合）、A液＋B粉+ rottlerin组,同时设立空白对照和正常对照组。分组干预后24 h和48 h分别收集细胞,Hoechst33258染色后荧光显微镜观察细胞形态学改变;Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡;RT-PCR和Western blotting 检测PKCδ mRNA和蛋白表达。结果 A液+B粉组凋亡细胞明显增多,呈凋亡典型形态学改变,分组干预24 h和48 h的细胞凋亡率分别为（34.99±3.54）%和（46.35±4.22）%,明显高于相应时间点空白对照组的（7.40±1.33）%和（7.62±0.95）%、正常对照组的（5.37±0.29）%和（6.46±1.02）%和A液＋B粉+rottlerin组的（23.58±4.12）%和（33.70±4.50）%（P<0.05）;同时与两对照组和A液＋B粉+rottlerin组比较,A液＋B粉组U937细胞PKCδ mRNA和蛋白表达均明显上调（P<0.05）。A液＋B液组细胞凋亡率及PKCδ mRNA和蛋白表达与两对照组和A液＋B液+rottlerin组比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 血液透析液A液＋B粉组合对U937细胞有明显促凋亡作用,其机制可能与上调细胞PKCδ表达有关;与A液＋B粉组合比较,选择A液＋B液组合作为血液透析液可降低患者外周血单核细胞的细胞凋亡率。     

他克莫司对癫痫持续状态大鼠海马PKCδ表达的影响

目的 研究氯化锂-匹鲁卡品癫痫持续状态(SE)大鼠模型中海马神经元蛋白激酶Cδ亚型(PKCδ)的表达及他克莫司(FK506)对其的影响.方法 将108只健康成年雄性大鼠随机分为对照组、癫痫组和FK506处理组,每组36只.采用HE染色法观察大鼠癫痫持续状态(SE)后海马神经元的损伤,应用逆转录PCR、免疫组织化学法检测各组大鼠海马PKCδ mRNA及蛋白的表达.结果 对照组PKCδ mRNA和蛋白仅有少量表达;与对照组相比,癫痫组各个时点PKCδ表达均显著增多(P＜0.05),SE后6 h PKCδ mRNA表达最高,PKCδ蛋白的平均光密度值SE后12h达高峰(P＜0.01),以后二者均逐渐降低,但72 h仍高于对照组水平(P＜0.05);FK506预处理可降低其表达,同时可减轻海马神经元损伤(P＜0.05).结论 FKS06可能通过抑制依赖PKCδ的细胞凋亡途径,发挥抗癫痫和脑保护作用.     

P73基因在长春新碱诱导髓性白血病细胞系U937细胞凋亡过程中的表达

目的 :探讨长春新碱诱导U937细胞凋亡过程中P73mRNA的表达变化 ,以进一步了解P73基因在U937细胞凋亡中的作用。方法 :用长春新碱诱导U937细胞凋亡 ,凋亡指标采用细胞形态学、DNA片段电泳、流式细胞术检测DNA含量等方法 ;采用半定量逆转录PCR(RT -PCR)检测P73mRNA的表达变化。结果 :长春新碱可诱导U937细胞凋亡。 2 0 μg/ml的长春新碱使用于U937细胞 1 8h ,光镜下见细胞明显聚集、体积缩小 ,荧光染色见染色质明显浓缩、核碎裂等现象 ,而对照组未出现上述现象 ;DNA片段电泳见清晰的梯形条带 ;流式细胞仪检测 :长春新碱作用于U937细胞 1 8h ,2 4h ,细胞的凋亡率分别为 1 0 .54 %、35 .1 5 % ,而对照组的凋亡率仅为 0 .93 % ;半定量RT -PCR结果 :在U937细胞凋亡前后 ,P73mRNA的表达差异无显著性。结论 :在U937细胞凋亡过程中P73的mRNA表达差异无统计学意义     

甲氨喋呤和三磷酸腺苷诱导U937细胞凋亡机制探讨

目的 :探讨甲氨喋吟、三磷酸腺苷诱导髓性白血病细胞系U937细胞凋亡过程中P73mRNA的表达变化 ,以进一步了解P73基因在U937细胞凋亡中的作用。方法 :用上述药物诱导U937细胞凋亡 ,凋亡指标采用细胞形态学、DNA片段电泳、流式细胞术检测DNA含量等方法 ;采用半定量逆转录PCR (RT -PCR)检测P73mRNA的表达变化。结果 :甲氨蝶呤、三磷酸腺苷均可诱导U937细胞凋亡。 5 μmol/L的甲氨蝶呤和0 .2 5g/L的三磷酸腺苷分别作用于U937细胞 6h、2 4h ,光镜下见细胞明显聚集、体积缩小 ,Wright’s Giemsa染色见染色质明显浓缩、核碎裂等现象 ,而对照组未出现上述现象 ;DNA片断电泳见清晰的梯形条带 ;流式细胞仪检测 :5 μmol/L的甲氨蝶呤作用于U937细胞 6h、8h、10h ,细胞的凋亡率分别为 :5 .15 %、11.4 3%、14 .7% ,0 .2 5 g/L的三磷酸腺苷作用于U937细胞 2 4h、36h、4 8h细胞的凋亡率分别为 :2 .33%、11.90 %、35 .4 9% ,而对照组的细胞凋亡率分别为 :0 .0 0 %和 1.0 9% ;半定量RT -PCR结果 :与对照组相比 ,仅三磷酸腺苷处理 4 8h组P73mRNA的表达下调。结论 :在U937细胞凋亡过程中P73的mRNA表达差异无统计学意义。     

缬沙坦对U937泡沫细胞血管内皮生长因子表达与分泌的影响

【目的】观察缬沙坦对泡沫细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达与蛋白分泌的影响。【方法】以氧化型低密度脂蛋白刺激体外培养的人单核细胞株U937细胞,建立U937泡沫细胞模型。采用不同浓度的缬沙坦(0.01μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L)进行干预。RT-PCR检测泡沫细胞VEGF mRNA表达,ELISA检测泡沫细胞VEGF蛋白的分泌。【结果】U937泡沫细胞VEGF mRNA表达(2.371±0.253)和VEGF蛋白分泌(1804.18±177.59pg/mL)增加,与U937巨噬细胞组(0.954±0.245,716.19±60.82pg/mL)相比,差异有统计学意义(P<0.01)。不同浓度缬沙坦干预后,U937泡沫细胞VEGF mRNA表达水平呈浓度依赖性降低(1.853±0.252、1.265±0.347、1.036±0.156);VEGF蛋白分泌(1625.73±148.54、1388.01±45.82、906.18±78.09pg/mL)也呈浓度依赖性降低,差异有显著性(均P<0.01)。【结论】U937泡沫细胞VEGF mRNA表达、蛋白分泌水平较U937巨噬细胞显著性...     

模拟的锰超氧化物歧化酶对U937细胞增殖和凋亡的影响

目的研究模拟的锰超氧化物歧化酶(mimic manganese superoxide dismutase,Mn SODm)对急性单核细胞白血病细胞(U937细胞)凋亡和增殖的影响及部分机制。方法以不同剂量的Mn SODm(1、2、3和4mg·L-1)处理U937细胞后,用MTT法检测U937细胞的增殖率,用Annexin V-PE/7-AAD双染法检测U937细胞的凋亡率。用蛋白印迹法测定cleaved-caspase-8、cleaved-caspase-9和cleaved-caspase-3蛋白的表达。结果 Mn SODm处理组U937细胞的增殖率明显低于对照组(P<0.05);Mn SODm能够有效地抑制U937细胞的增殖,这种抑制作用呈现明显的浓度依赖性及时间依赖性(P<0.05)。Mn SODm处理组U937细胞的凋亡率明显高于对照组(P<0.05);Mn SODm的凋亡诱导作用具有明显的浓度依赖性(P<0.05)。蛋白印迹法结果显示cleaved-caspase-8、cleaved-caspase-9和cleaved-caspase-3蛋白的表达亦呈现出浓度依赖性上升的趋势。结论 Mn SODm能够有效地抑制U937细胞的增殖,促进U937细胞的凋亡,其作用具有浓度依赖性及时间依赖性。     

TSA促U937细胞凋亡机理的初步研究

目的研究组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylase,HDAC）抑制剂曲古菌素A（trichostatin A,TSA）诱导白血病细胞株U937细胞凋亡的规律及初步研究其作用的分子机理。方法应用细胞培养、Annexin V/PI双标流式细胞术观察TSA对U937细胞诱导细胞凋亡的效应及规律,用Western blot检测TSA作用U937细胞一定时间后蛋白表达的变化。结果TSA能以时间、剂量依赖性方式诱导U937细胞凋亡。400nmol/L的TSA处理24h后,U937细胞Bcl-2蛋白表达开始下降。TSA作用48h后,该蛋白表达下降更明显。这与TSA诱导U937细胞凋亡的时间规律相一致。结论TSA能诱导U937细胞凋亡。TSA对U937细胞的杀伤机制可能与抗凋亡蛋白Bcl-2的下调有关。     

沉默 Fas和 PKCδ表达对游离脂肪酸诱导的 HUVEC 凋亡的影响

目的：探讨Fas与PKCδ在游离脂肪酸（ FFA）诱导的人脐静脉内皮细胞（ HUVEC）凋亡中的作用。方法：①取对数生长期HUVEC,分为空白组,对照组,50、75、100μmol／L FFA组及相应FFA＋PKCδsiRNA转染组,采用比色法检测细胞增殖情况,Western blot检测p-PKCδ蛋白的表达。②将HUVEC分为空白组,对照组,FFA组（100μmol／L FFA处理）和FFA＋PKCδsiRNA组,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况。③取100μmol／L FFA干预后的HUVEC分别转染无关序列siRNA和Fas siRNA,以未转染细胞作空白对照,Western blot法检测p-PKCδ和Fas蛋白的表达。结果：①各组细胞增殖水平差异有统计学意义（F＝20．863,P＜0．001）,FFA可抑制细胞增殖（P＜0．05）,而PKCδ siRNA能减弱FFA对细胞增殖的抑制（P＜0．05）。各组细胞p-PKCδ蛋白的表达差异有统计学意义（F＝229．072,P＜0．001）,FFA能提高p-PKCδ蛋白的表达水平（P＜0．05）,而PKCδ siRNA可抑制FFA引起p-PKCδ蛋白的表达（P＜0．05）。②各组细胞凋亡率差异有统计学意义（F＝86．973,P＜0．001）,FFA可增加细胞凋亡（P＜0．05）,而PKCδ siR-NA能降低FFA所致的凋亡（P＜0．05）。③各组细胞Fas蛋白表达差异有统计学意义（F＝122．162,P＜0．001）,Fas siRNA可减低HUVECFas蛋白的表达（P＜0．05）。结论：FFA诱导的HUVEC凋亡可能由PKCδ涉及的Fas通路介导。     

重组人生长激素对内毒素诱导的巨噬细胞凋亡和NF-κB的影响

目的 观察内毒素(LPS)对巨噬细胞的凋亡作用以及重组人生长激素(rhGH)的干预效果.方法 巨噬细胞系U937细胞经传代培养24 h后,换用舍LPS(40μg/mL)和LPS+rhGH(4u/L)新鲜培养液继续培养16 h,流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫细胞化学法检测巨噬细胞内NF-κB的活化程度.结果 U937细胞经LPS和LPS+rhGH作用16 h后,rhGH明显降低LPS诱导U937细胞的细胞凋亡率,并可抑制NF-κB的活化.结论 rhGH能抑制LPS诱导的U937细胞凋亡,并对NF-κB的活化有一定的抑制作用.     

三七总皂苷诱导U937细胞凋亡及对Caspase-3表达的影响

目的观察三七总皂苷（PNS）对人急性单核细胞白血病细胞系U937细胞的增殖、凋亡及Caspase-3表达的影响。方法用不同浓度PNS作用于U937细胞,采用MTT法检测细胞增殖活性,用流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western-blot法检测Caspase-3蛋白表达。结果 PNS抑制U943细胞生长并呈时间和剂量依赖性;分别予100、200、400、800mg/L处理U937细胞48h,细胞凋亡率分别为（5.93±0.15）%、（7.43±0.70）%、（12.3±0.38）%和（20.4±0.91）%,对照组细胞凋亡率为（1.73±1.50）%（P〈0.01）,并诱导细胞G1期阻滞;Western-blot结果显示,PNS使Caspase-3蛋白表达上调。结论 PNS能抑制U937细胞增殖,并可能通过上调Caspase-3蛋白表达诱导细胞凋亡。     

苦参碱诱导U937细胞凋亡及其对Bcl-2表达的影响

目的:探讨苦参碱(Mat)抑制人淋巴瘤细胞(U937)增殖及诱导其凋亡的机制.方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察Mat对U937细胞增殖的影响;流式细胞术(FCM)检测细胞周期变化;Annexin V双标记染色结合FCM检测凋亡率;RT-PCR方法检测Bcl-2 mRNA表达.结果:Mat(0.2～0.5 g/L)作用24,48,72 h后对U937细胞均有增殖抑制作用(P<0.05或P<0.01),在该浓度范围内呈剂量和时间依赖性,其半数抑制浓度(IC50>)为0.4 g/L;Mat 0.2～0.5 g/L组作用U937细胞72 h后,s期细胞比例均增加,细胞发生S期阻滞(P<0.01);细胞凋亡率分别为3.25%,5.32%,8.17%,11.20%,与U937细胞对照组(1.84%)及Mat 0.1 g/L组(1.95%)相比较差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01).RT-PCR显示Bcl-2 mRNA表达明显减弱,且随剂量增加越明显.结论:Mat在一定浓度和时间对U937细胞具有增殖抑制作用,其机制可能是使细胞发生S期阻滞;Mat可以下调U937细胞Bcl-2表达,促进细胞凋亡.     

RNA干扰PNAS-2后U937细胞周期及相关蛋白表达的变化

目的 研究RNA干扰抑制细胞凋亡相关蛋白(PNAS-2)基因表达后,急性单核细胞白血病细胞株U937细胞周期及其相关蛋白表达的变化.方法 将已构建的靶向抑制PNAS-2的干扰组质粒和对照组质粒分别转染U937细胞.流式细胞仪分析两组细胞周期的变化;蛋白质芯片技术比较两组细胞周期相关蛋白表达水平的差异.结果 流式细胞仪检测结果显示,干扰组细胞出现G2/M期阻滞,与对照组比较差异有统计学意义;蛋白质芯片结果分析发现,有29条细胞周期相关蛋白表达变化,其中上调25条(cyclinA、cyclinE及相关调节因子p53蛋白等),下调4条.CyelinB表达水平无显著改变.结论 RNA干扰抑制PNAS-2表达后,U937细胞周期出现G2/M期阻滞,可能与细胞周期素A、p53蛋白表达上调,而细胞周期素B表达不变有关.     

RNA干扰PNAS-2后U937细胞周期及相关蛋白表达的变化

目的研究RNA干扰抑制细胞凋亡相关蛋白(PNAS-2)基因表达后,急性单核细胞白血病细胞株U937细胞周期及其相关蛋白表达的变化。方法将已构建的靶向抑制PNAS-2的干扰组质粒和对照组质粒分别转染U937细胞。流式细胞仪分析两组细胞周期的变化;蛋白质芯片技术比较两组细胞周期相关蛋白表达水平的差异。结果流式细胞仪检测结果显示,干扰组细胞出现G2/M期阻滞,与对照组比较差异有统计学意义;蛋白质芯片结果分析发现,有29条细胞周期相关蛋白表达变化,其中上调25条(cyclinA、cyclinE及相关调节因子p53蛋白等),下调4条。CyclinB表达水平无显著改变。结论RNA干扰抑制PNAS-2表达后,U937细胞周期出现G2/M期阻滞,可能与细胞周期素A、p53蛋白表达上调,而细胞周期素B表达不变有关。     

CpG ODN对急性单核细胞白血病细胞株U937化疗敏感性的影响及其机制研究

目的 观察CpG ODN对人急性单核细胞白血病细胞株U937化疗敏感性的影响，探讨增强急性白血病化疗效果的可能途径及其作用机制。〖HTH〗方法〖HTK〗 多柔比星（ADM）单药及联合应用CpG ODN与U937细胞共同孵育，采用CCK-8法检测U937细胞生长抑制率，Hoechst染色法和流式细胞仪Annexin V-PI双染法检测U937细胞的凋亡情况，RT-PCR检测分析凋亡相关基因Bcl-2和Bax的水平。 结果 ADM对U937细胞生长具有明显抑制作用，而且CpG ODN与其联合应用可进一步加强该作用。各浓度ADM+CpG ODN联合组对U937细胞的生长抑制率和诱导的早期凋亡率均显著高于ADM单药组（均P＜0.05）。ADM+CpG ODN联合组细胞内Bax基因的mRNA表达量较ADM单药组明显上升（P＜0.05），而Bcl-2 mRNA的表达无显著性差异（P＞0.05）。ADM+CpG ODN联合组较ADM单药组的Bcl-2/Bax值减小（P＜0.05）。 结论 CpG ODN可增强ADM对U937 细胞生长的抑制作用，加强ADM诱导白血病细胞凋亡的作用，从而增强U937对ADM的化疗敏感性。该作用可能是通过上调Bax基因的表达而实现。     

大肠埃希菌提取物和LPS对单核巨噬细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨不同浓度大肠埃希菌提取物（菌胞质蛋白）对单核细胞增殖和凋亡的影响。方法采用MTT法测定不同浓度的胞质蛋白和LPS作用72 h后,对U937细胞的细胞抑制率,并用流式细胞术检测胞质蛋白作用24 h U937细胞凋亡率。结果大肠埃希菌胞质蛋白对U937细胞增殖有显著抑制作用,并可诱导细胞凋亡。低浓度的LPS不能抑制U937细胞增殖,高浓度LPS可以明显抑制U937细胞增殖。结论大肠埃希菌提取物对单核巨噬细胞有显著的增殖抑制和诱导凋亡作用。     

培哚普利对U937泡沫细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的：研究培哚普利对氧化修饰的低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的U937泡沫细胞血管内皮生长因子（VEGF）mRNA、蛋白表达的影响。方法：U937细胞与80μg/mLox-LDL孵育48h,建立U937泡沫细胞模型,以不同浓度的培哚普利（0.01、0.10、1.00μmol/L）预处理U937细胞24h再加入80μg/mL的ox-LDL孵育48h,通过逆转录-聚合酶链式扩增反应（RT-PCR）和酶联免疫吸附试验（ELISA）分别检测U937细胞VEGF mRNA和蛋白的表达情况。结果：U937泡沫细胞组VEGF mRNA的表达较U937细胞对照组明显增加[（2.371±0.253）vs（0.954±0.245）（P〈0.01）],培哚普利干预后,随着浓度（0.01、0.10、1.00μmol/L）的增加,U937泡沫细胞的VEGF mRNA表达水平呈浓度依赖性下降[（2.168±0.270）vs（1.533±0.248）vs（1.022±0.189）（P〈0.01）];U937泡沫细胞组VEGF蛋白表达较U937细胞对照组明显增加[（1804.18±177.59）pg/mL vs（716.19±60.82）pg/mL（P〈0.01）],培哚普利干预后,随着浓度（0.01、0.10、1.00μmol/L）的增加,U937泡沫细胞VEGF蛋白表达呈浓度依赖性降低（1601.46±154.68）pg/mL vs（1377.09±110.36）pg/mL vs（1017.89±147.18）pg/mL（P〈0.01）。结论：培哚普利能够浓度依赖性地下调ox-LDL诱导的U937泡沫细胞VEGF mRNA、蛋白的表达。     

蟾酥注射液诱导肿瘤细胞凋亡和对bcl-2基因表达影响的研究

目的 观察蟾酥注射液体外诱导的肿瘤细胞凋亡,探讨其对凋亡相关基因bcl-2蛋白和mRNA表达的影响.方法 采用Giemsa染色、透射电镜技术、AI计数、DNA片段化电泳、DNA片段化定量和流式细胞术对蟾酥注射液诱导的肿瘤细胞凋亡进行观察.同时采用流式细胞术和逆转录PCR检测蟾酥注射液作用后肿瘤细胞凋亡相关基因bcl-2蛋白和mRNA表达水平的变化.结果 2.25×10-1mg/L蟾酥注射液处理48h的HL-60,K562,U937细胞出现典型的凋亡细胞形态特征和生化特征改变.2.25×10-1mg/L蟾酥注射液处理不同时间的HL-60、K562、U937细胞的凋亡指数、DNA片段化率、凋亡细胞率均高于对照组(P均<0.05).2.25×10-1mg/L蟾酥注射液处理的HL-60细胞bcl-2蛋白表达阳性率高于对照组(P<0.05),并且随着时间延长bcl-2蛋白表达有减少趋势.2.25×10-1mg/L蟾酥注射液处理的HL-60细胞bcl-2基因mRNA相对表达量随着时间延长,有下降趋势.结论 蟾酥注射液体外诱导肿瘤细胞HL-60,K56,U937发生细胞凋亡.诱导细胞凋亡可能是蟾酥注射液抗肿瘤的机制之一.蟾酥注射液在诱导肿瘤细胞凋亡时影响bcl-2基因mRNA和蛋白表达水平,提示bcl-2基因表达的改变可能是蟾酥注射液诱导细胞凋亡的机制.     

促红细胞生成素对高糖环境下系膜细胞凋亡的影响及其可能机制

目的探究促红细胞生成素（EPO）在高糖环境下对正常人肾小球系膜细胞凋亡的影响及其可能机制,为延缓糖尿病肾病（DN）进展寻找新的治疗方法。方法体外培养正常人肾小球系膜细胞。将培养后的正常人肾小球系膜细胞随机分为8组:空白对照（A）组（未加任何刺激物）,高糖（B）组(D-葡萄糖30 mmol·L-1),高渗（C）组(甘露醇25 mmol·L-1),EPO（D）组(EPO 20 U·mL-1),低浓度EPO干预（E）组(D-葡萄糖30 mmol·L-1+EPO 5 U·mL-1),中浓度EPO干预（F）组(D-葡萄糖30 mmol·L-1+EPO 10 U·mL-1),高浓度EPO干预（G）组(D-葡萄糖30mmol·L-1+EPO 20 U·mL-1),Y27632（H）组(D-葡萄糖30 mmol·L-1+Rho激酶抑制剂10μmol·L-1)。各组细胞均培养24 h。RT-PCR检测各组RhoA mRNA、ROCK1 mRNA的表达水平,流式细胞术检测各组的细胞凋亡。结果C、D、E 3组系膜细胞凋亡率与A组比较差异无统计学意义（P>0.05）。与B组比较,C、D、E、F、G 5组系膜细胞凋亡率、RhoA mRNA、ROCK1 mRNA表达水平均降低,H组系膜细胞凋亡率、ROCK1 mRNA表达水平均降低（均P<0.05）;与E组比较,F、G、H 3组系膜细胞凋亡率均升高,RhoA mRNA、ROCK1 mRNA表达水平均降低（均P<0.05）;与F组比较,G、H 2组系膜细胞凋亡率、ROCK1 mRNA表达水平均降低,G组RhoA mRNA表达水平降低、H组RhoA mRNA表达水平升高（均P<0.05）。Pearson相关性分析结果显示,B组及E、F、G 3组RhoA mRNA表达与ROCK1 mRNA表达均呈正相关（r=0.829、0.898、0.831、0.861,均P<0.05）。结论 EPO可抑制高糖诱导的正常人肾小球系膜细胞的凋亡,其作用机制可能与阻断RhoA/ROCK信号通路有关。     

伯舒替尼诱导急性髓系白血病细胞分化和细胞凋亡

目的 探讨伯舒替尼对人急性髓系白血病(AML)细胞株HL-60、THP-1和U937细胞分化和凋亡的影响及其作用机制.方法 伯舒替尼0～20 μmol/L处理HL-60、THP-l和U937细胞48 h,MTT法检测细胞增殖;伯舒替尼0～5 μmol/L处理HL-60、THP-1和U937细胞72 h,流式细胞仪检测细胞CDllb表达;伯舒替尼O～10 μmol/L处理HL-60、THP-1和U937细胞72 h,胱天蛋白酶(caspase)广谱抑制剂benzyloxy-carbonyl-Val-Ala-Asp-fluoromethyl-ketone (Z-VAD-FMK)预处理lh后加入伯舒替尼处理U937细胞48 h,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;不同浓度伯舒替尼(0～5 μmol/L)分别处理HL-60和U937细胞24 h后,Western印迹法检测细胞分化相关转录因子C/EBPβ、P21和c-Myc以及凋亡相关分子Mcl-1、Bax和Caspase 3蛋白表达的改变.结果 伯舒替尼剂量依赖性抑制AML细胞增殖.与空白对照组相比,不同浓度伯舒替尼处理AML细胞72 h后,细胞CDllb表达和细胞凋亡率均明显增加(P＜0.05或P＜0.01).伯舒替尼处理HL-60细胞有效上调C/EBPβ和P21的蛋白表达水平,引起U937细胞Mcl-1表达降低和Bax表达增强,并激活caspase 3,而Z-VAD-FMK预处理U937细胞显著抑制伯舒替尼诱导的细胞凋亡.结论 伯舒替尼可有效抑制AML细胞增殖,诱导细胞分化和促进其凋亡,可作为有效治疗AML的潜在药物.