银杏叶提取物对大鼠中脑原代细胞的作用

目的:观察银杏叶提取物(EGB761)对中脑原代培养细胞的作用.方法:采用大鼠胚胎中脑原代细胞培养法,培养了中脑神经细胞,再将细胞分为对照组、阳性对照组(神经生长因子,NGF组)、实验组(EGB761组),给予EGB761和NGF进行配组干预,然后观察细胞生长状况,同时运用MTT(四唑盐)比色法检测神经细胞活性;用抗酪氨酸羟化酶(TH)对多巴胺(DA)能免疫细胞化学染色,比较各组阳性神经元数目及突起的变化情况.结果:实验组细胞生长旺盛,轴突延长明显.MTT法测得细胞A值,实验组0.677及免疫细胞化学TH阳性细胞数(实验组61.90)与空白对照组(A值0.596,TH阳性细胞数50.88)相比差异显著(P<0.05),但与阳性对照组比较二者均无统计学意义(P>0.05).结论:EGB761对中脑原代培养细胞有一定的保护作用.     

银杏叶提取物对MPP+诱导的中脑多巴胺能神经细胞损伤的保护作用

目的：探讨银杏叶提取物（EGB761）对1-甲基4-苯基吡啶离子（MPP^＋）诱导的帕金森病细胞模型是否具有保护作用．方法：采用胚胎大鼠中脑原代细胞培养法，分离培养中脑神经细胞，随后进行EGB761及MPP^＋处理，最后通过3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）微量比色法，酪氨酸羟化酶（TH）免疫细胞化学，研究EGB761对MPP^＋损伤后的中脑原代培养细胞及DA能神经细胞活性的影响，同时进行iNOS免疫细胞化学法，了解iNOS的表达情况．结果：在MPP^＋诱导的中脑原代细胞凋亡中，MPP^＋组TH阳性细胞数及细胞存活率均显著低于各EGB761组及阳性对照组（P〈0．01）．而iNOS的表达则显著多于各EGB761组（P〈0．01）．结论：EGB761对MPP^＋诱导的胚胎大鼠中脑原代培养细胞损伤具有保护作用，且此作用有随剂量的增大而增加的趋势．     

MPP+对体外培养的中脑多巴胺能神经元活性的影响

目的　探讨 1 甲基 4 苯基吡啶 (MPP+ )对体外培养的中脑多巴胺能神经元的影响。方法　将不同浓度的MPP+ 加入体外培养的中脑多巴胺能神经元培养液中 ,分别测定 [3H]多巴胺和 [3H]胆碱摄取能力及细胞内的多巴胺含量 ,并进行酪氨酸羟化酶(TH)免疫细胞化学染色。结果　MPP+ 对体外培养的中脑多巴胺能神经元的 [3H]多巴胺摄取力有明显的抑制作用 (P <0 0 5 ) ;但对[3H]胆碱摄取力无抑制作用 (P >0 0 5 ) ;这种抑制作用在未抑制胶质细胞组明显强于抑制胶质细胞组 (P <0 0 5 ) ;加用MPP+ 后中脑多巴胺能神经元细胞内的多巴胺含量明显减少 (P <0 0 5 ) ,TH阳性细胞明显减少 (P <0 0 5 )。结论　MPP+ 对体外培养的中脑多巴胺能神经元活性有明显的抑制作用     

caspase-3在神经毒素1-甲基-4-苯基吡啶离子诱发多巴胺能神经元凋亡中的表达

目的:探讨caspase-3在1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium , MPP+)诱发多巴胺能神经元凋亡中的表达.方法:建立MPP+诱发中脑神经细胞凋亡模型,通过免疫组织化学染色及RT-PCR检测方法,检测原代培养的16 d胎鼠的中脑多巴胺能神经元中caspase-3的表达.结果:在正常组和细胞凋亡组(MPP+组)的caspase-3在蛋白质和基因水平均有表达,但在细胞凋亡组中表达强度明显高于正常对照组,二者差异具有显著性.caspase-3的蛋白酶抑制剂Ac-DEVD-CHO可降低caspase-3的表达.结论:caspase-3参与MPP+诱发的多巴胺能神经元的凋亡过程,并起关键作用,以MPP+为诱导剂建立的中脑神经细胞凋亡模型可用于研究与帕金森病(Parkinson disease, PD)有关的细胞凋亡的调控机制和筛选抗PD药物.     

血清miRNA-181a在帕金森病中神经保护作用及机制分析

目的:探讨miRNA-181a对l-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenyl-pyridinium,MPP+)诱导的帕金森病（Parkinson’s disease,PD）多巴胺能神经元损伤的影响及其相关机制。方法：采用胎龄12.5 d的C57BL/6小鼠胚胎中脑进行多巴胺能神经元原代培养,依据不同处理方法分为4组：①空白对照（Control）组;②PD模型（MPP+）组;③阴性对照（miRNA-NC+MPP+）组;④miRNA-181a+MPP+组。酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxlase,TH)可以选择性标记多巴胺能神经元,因此采用荧光显微镜对各组TH染色阳性神经元数目、初级突触分枝及最长突触长度进行观察,分析各组之间的差异。结果：Control组多巴胺能神经元细胞体积较大,呈圆形或三角形,胞体发出1个、2个或多个长的分枝以及轴突发出的次级突起,胞体和轴突表面光滑,形态完整,神经元分枝之间相互交织呈网络,联系密切。miRNA-NC+MPP+组经MPP+作用后多巴胺能神经元的数量减少,绝大多数表现为胞体存在,分枝数目及最长突触长度明显减少,网状交织稀少,表面不光滑,有的呈串珠样肿胀或轴突中断、丢失,仅存胞体,少数也表现为胞体空虚、丢失,仅存突起。miRNA-181a+MPP+组较miRNA-NC+MPP+组多巴胺能神经元数目有所增加,胞体形态较好,分枝数目与最长突触长度较miRNA-NC+MPP+组有所改善,且表面较光滑,神经元死亡程度较低。结论：miRNA-181a对MPP+所致多巴胺能神经元损伤起到神经保护作用。     

表没食子儿茶素没食子酸酯的多巴胺能神经元保护作用

目的 研究绿茶多酚的主要单体成分表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）的多巴胺能神经元保护作用。方法利用1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四羟吡啶（MPTP）及其代谢产物1-甲基-4-苯基吡啶（MPP＋）分别造成选择性多巴胺能神经元损伤动物模型和细胞模型．给予不同剂量EGCG，免疫组织化学染色方法标记酪氨酸羟化酶（TH）阳性细胞作为多巴胺能神经元标志，通过体视学方法观察不同剂量EGCG对阳性细胞数目的影响，同时利用膜抗原CD11b标记小胶质细胞，观察EGCG对小胶质细胞激活的作用。结果在MPP＋诱导的原代培养中脑腹侧多巴胺能神经元损伤模型中，预先给予EGCG1μmol／L-100μmol／L可显著减轻MPP＋诱导的多巴胺能神经元减少，保护率为22．2％～80．5％。在体情况下，1mg／kg剂量EGCG腹腔注射对MPTP模型小鼠A9区TH免疫阳性细胞丢失的保护率为71．7％．对中脑区域总TH免疫阳性细胞数丢失的保护率为50．9％，5mg／kg和10mg／kg剂量组中脑各区域TH阳性神经元数量均较模型组高（P〈0．05），同时，EGCG对MPTP所致的中脑部位小胶质细胞的激活具有抑制效应。结论本研究结果提示EGCG在一定剂量范围内对多巴胺能神经元具有显著的保护作用，具有潜在治疗帕金森病的价值，EGCG对多巴胺能神经元的在体保护作用可能与其抑制小胶质细胞的激活密切相关。     

脂多糖对大鼠中脑原代培养细胞的神经损伤作用

目的:观察脂多糖(LPS)对大鼠中脑原代混合细胞多巴胺能神经元的损伤作用.方法:取孕14 d的SD大鼠胚胎中脑原代培养.①将细胞分为正常对照组和不同剂量LPS(0.01、0.10、1.00和10.00 mg/L)组,体外培养7 d后,实验组加入不同浓度的LPS,持续作用72 h后,经酪氨酸羟化酶(TH)免疫细胞化学染色...     

通络化痰胶囊和熊去氧胆酸对MPP+诱导的小鼠中脑神经细胞的保护作用研究

目的探讨通络化痰胶囊对1-甲基-4-苯基吡啶离子（1-Methyl-4-Phenylpyridinium ion,MPP+）导的小鼠中脑多巴胺能神经元的保护作用。方法采用FRAP法测定通络化痰胶囊（TLHT）和熊去氧胆酸（ursodeoxycholic acid,UDCA）的抗氧化能力。原代培养小鼠中脑神经细胞,于对数生长期进行药物处理,分为空白组、模型组（MPP+诱导）、TLHT治疗组（6.25,25,100 μg/mL）与UDCA治疗组（3.75,15,60 μM）共8组。药物处理48 h后,进行酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH）免疫组织化学染色,观察多巴胺能神经元形态、数量及轴突长度的改变,采用MTT法检测细胞存活率,采用Griess法检测NO释放量。结果FRAP法显示,TLHT与UDCA均具有抗氧化活性,其中25 μg/mL的TLHT和15 μM的UDCA抗氧化能力最显著。经MPP+诱导损伤后,与空白组相比,多巴胺能神经元形态略有肿胀,表面不光滑,细胞核缩小,神经突起数量减少,长度变短;MTT显示总细胞存活率下降;Griess法检测发现NO释放量明显增加。经过TLHT与UDCA处理后,与模型组比较,各药物治疗组的多巴胺能神经元形态均有所改善,数量增加,神经突起数量增加,长度增长,细胞增殖,存活率明显增加,NO释放量减少。其中TLHT与UDCA的中剂量对各项改善作用最为明显,差异具有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。TLHT与UDCA各相应浓度对各项的改善趋势一致,TLHT略优于UDCA,但差异无统计学意义。结论通络化痰胶囊对小鼠中脑的多巴胺能神经元具有保护作用,机制可能与减少NO的释放、抗氧化应激有关。     

丙戊酸体外对小鼠多巴胺能神经元的保护作用

目的:观察丙戊酸(VPA)对6-羟多巴胺(6-OHDA)诱导的帕金森病体外细胞模型中的多巴胺能神经元的保护作用.方法:体外原代培养孕14 d大鼠胚胎中脑神经元,6-OHDA(50 μmol/L)在体外建立多巴胺能神经元损伤细胞模型.实验分成6组:正常对照组,6-OHDA组,6-OHDA+VPA(0.3、0.6、0.9和1.2 mmol/L)组.应用酪氨酸羟化酶(TH)免疫细胞化学染色方法检测多巴胺神经元,观察不同浓度VPA对6-OHDA诱导多巴胺能神经元损伤的形态及数量的影响.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力.结果:6组TH阳性细胞数及细胞活力比较,差异有统计学意义(F=303.907和138.524,P均<0.001).与正常对照组比较,6-OHDA组TH阳性细胞数少(P<0.05),活力低(P<0.05).与6-OHDA组比较,6-OHDA+VPA组TH阳性数增多(P<0.05),突起变长,活力增加(P<0.05).结论:VPA可能是通过减少细胞凋亡,增加细胞活力,对体外培养的多巴胺能神经元发挥保护作用.     

中脑腹侧多巴胺能神经元对氧化应激反应的性别差异

目的研究中脑腹侧(VM)多巴胺能神经元对氧化应激反应的性别差异。方法原代培养不同性别Balb/c胎鼠的VM多巴胺能神经元,分为对照组(未处理)、鱼藤酮组(25 nmol/L鱼藤酮处理8 h)、雌激素+鱼藤酮组(用1×10-7mol/L的17β-雌二醇预处理1 h后,加25 nmol/L鱼藤酮处理8 h)。采用免疫组织化学法观察不同性别神经元的损伤程度;MTT法检测细胞存活率;W estern b lotting检测不同性别细胞酪氨酸羟化酶(TH)蛋白的表达。结果免疫组织化学检测结果显示:鱼藤酮组雄性细胞较雌性细胞损伤大,TH阳性细胞更明显。MTT检测结果显示:鱼藤酮组雄性细胞存活率为66%,雌性细胞存活率为75%,差异有统计学意义(P<0.05);雌激素+鱼藤酮组雄性细胞存活率为81%,雌性细胞存活率为86%,高于相同性别的鱼藤酮组(P<0.05)。W estern b lotting检测结果显示:鱼藤酮组雄性细胞的TH蛋白水平较雌性细胞明显下降(P<0.05);雌激素+鱼藤酮组TH蛋白水平高于相同性别的鱼藤酮组(P<0.05)。结论 VM多巴胺能神经元对氧化应激反应存在性别差异,雄性细胞对鱼藤酮的刺激较雌性...     

银杏叶提取物不同剂型对神经元损伤后保护作用的比较研究

目的观察不同制剂工艺生产的两种剂型银杏叶提取物（EGB）对神经元缺氧／复氧损伤的保护作用,探讨EGB在缺血性脑血管疾病中的应用价值,寻求最佳给药途径。方法原代培养新生SD大鼠皮层神经元,建立缺氧／复氧损伤模型。将细胞分为以下6组：正常培养组、缺氧／复氧组、EGB761低剂量组、EGB761高剂量组、EGB1212低剂量组和EGB1212高剂量组。后4组分别在神经损伤前24h给予相应药物处理,采用M丌法测定细胞存活率,乳酸脱氢酶（LDH）释放测定检测细胞毒作用,并观察神经元形态变化。结果缺氧／复氧损伤造成神经元细胞形态的改变,表现为轴突断裂、核固缩、细胞水肿。EGB761和EGB1212预处理可减轻神经元形态学改变。EGB761及EGB1212干预均能提高细胞存活率,减少LDH释放。且呈剂量依赖性。同等剂量下EGB1212对神经元的保护作用优于EGB761（P〈0．05）。结论EGB对缺氧／复氧造成的神经元损害有保护作用,新工艺剂型EGB1212比传统剂型EGB761保护作用更为突出。     

帕金森病体外实验细胞模型的建立

目的： 探讨1-甲基-4-苯基-四氢吡啶离子（MPP⁺ ）对小鼠胚胎中脑原代培养多巴胺能神经元的毒性作用及其机制。在体外建立帕金森病（PD）实验研究的细胞模型。方法：采用小鼠胚胎（孕14 d）中脑进行原代细胞培养，实验分为对照组和不同浓度(0.1、１、10和15 μmol•L^-1)MPP⁺药物实验组，应用酪氨酸羟化酶（TH）免疫化学细胞染色方法 和Hoechst33342荧光染色对多巴胺能神经元的损伤及凋亡进行测定。结果：对照组中多巴胺能神经元的数量为(875±23)个/孔。在0.1、１、10和15 μmol•L^-1 MPP⁺实验组，多巴胺能神经元的数量分别为(612±25)、(586±32)、(459±16)和(435±19)个/孔，与对照组比较，MPP⁺实验组多巴胺能神经元数量均明显降低（P<0.05）,多巴胺能神经元突起的数目和长度明显减少。Hoechst33342 染色发现，对照组中凋亡细胞数占总细胞数的(5.45±0.29)%,10 μmol•L^-1 MPP⁺药物治疗组细胞凋亡率为(26.97±1.36)%，显著高于对照组水平（P<0.05）。结论：0.1、１、10 和15 μmol•L^-1 MPP⁺均引起多巴胺能神经元的数量显著减少，随着药物浓度的增加，多巴胺能神经元减少的程度越显著。MPP⁺引起的多巴胺能神经元的变性死亡可能通过凋亡途径所诱导。     

The protective effect of EGB761 on vessels of denervated gastrocnemius in rats and its mechanism

This study investigated the protective effect of EGB761 on blood vessels of denervated gastrocnemius of rat and its possible mechanism.Fifteen male adult SD rats were randomly divided into three groups...     

银杏叶提取物对大鼠高糖高胰岛素下视网膜Muller 细胞的保护作用

目的：观察银杏叶提取物（extract of ginkgo bilobaleaf ,EGB761）在高糖高胰岛素作用下对视网膜Muller细胞活性的改变及其保护作用。方法用30mmol/L葡萄糖和（或）200U/L的胰岛素处理大鼠视网膜Muller细胞48小时,分为高糖高胰岛素组：200U/L胰岛素＋30mmol/L葡萄糖;高胰岛素组：200U/L 胰岛素;对照组：普通低糖型DMEM培养（含葡萄糖5mmol/L ）。提前0.5小时加入60μg/mL、120μg/mL的EGB761,观察对各组细胞的保护作用,48小时后用MTT 法测定视网膜Muller细胞的活性。结果高糖高浓度胰岛素处理后Muller细胞活性降低,与对照组相比差异有统计学意义（ P＜0.05）。而60或120μg/mL的EGB761能上调高浓度葡萄糖和高胰岛素处理后的视网膜Muller细胞的活力,且在单纯高胰岛素组中更佳,与无EGB761处理组相比差异有统计学意义（ P＜0.05）。结论高浓度葡萄糖和高胰岛素在短期内可使视网膜Muller细胞的活性降低,一定浓度的EGB761可减轻高糖高胰岛素对视网膜Muller细胞的损伤。     

Hyperbaric Oxygen and Ginkgo Biloba Extract Ameliorate Cognitive and Memory Impairment via Nuclear Factor Kappa-B Pathway in Rat Model of Alzheimer's Disease

Background:

Hyperbaric oxygen (HBO) and Ginkgo biloba extract (e.g., EGB 761) were shown to ameliorate cognitive and memory impairment in Alzheimer''s disease (AD). However, the exact mechanism remains elusive. The aim of the present study was to investigate the possible mechanisms of HBO and EGB 761 via the function of nuclear factor kappa-B (NF-κB) pathway.

Methods:

AD rats were induced by injecting β-amyloid 25–35 into the hippocampus. All animals were divided into six groups: Normal, sham, AD model, HBO (2 atmosphere absolute; 60 min/d), EGB 761 (20 mg·kg⁻¹·d⁻¹), and HBO/EGB 761 groups. Morris water maze tests were used to assess cognitive, and memory capacities of rats; TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling staining and Western blotting were used to analyze apoptosis and NF-κB pathway-related proteins in hippocampus tissues.

Results:

Morris water maze tests revealed that EGB 761 and HBO significantly improved the cognitive and memory ability of AD rats. In addition, the protective effect of combinational therapy (HBO/EGB 761) was superior to either HBO or EGB 761 alone. In line, reduced apoptosis with NF-κB pathway activation was observed in hippocampus neurons treated by HBO and EGB 761.

Conclusions:

Our results suggested that HBO and EGB 761 improve cognitive and memory capacity in a rat model of AD. The protective effects are associated with the reduced apoptosis with NF-κB pathway activation in hippocampus neurons.     

银杏达莫注射液治疗突发性聋的临床研究

目的　对银杏达莫注射液治疗突发性聋的疗效进行临床观察。方法　将 77例 (1 0 1耳 )突发性聋患者按就诊顺序分成银杏达莫组即实验组 39例 (5 2耳 )和对照组 38例 (4 9耳 )。实验组用含银杏叶提取物和双嘧达莫 (Dipyridamole)的银杏达莫注射液治疗 ;对照组用低分子右旋糖酐治疗 ;另外两组同时加用地塞米松、丹参、ATP、肌苷、吸氧和B族维生素等 ,如有明确感冒受凉史则加用抗病毒药及干扰素。两组在治疗前和治疗后 4d开始每 3d用纯音电测听测试患者听力。结果　经治疗后 ,实验组 39例 (5 2耳 )中痊愈 1 7例 (2 5耳 ) ,显效 1 5例 (1 7耳 ) ,有效 5例 (7耳 ) ,无效 2例 (3耳 ) ,治愈率为 4 8.1 0 % ,有效率为 92 .30 % ;对照组 38例 (4 9耳 )中痊愈 7例 (9耳 ) ,显效 9例 (1 1耳 ) ,有效 1 5例 (1 9耳 ) ,无效 7例 (1 0耳 ) ,治愈率为 1 8.4 3% ,有效率为 6 1 .30 %。两组统计学处理差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论　银杏达莫治疗突发性聋的临床疗效肯定 ,按该组剂量未发现有明显副作用 ;对于银杏达莫注射液治疗突发性聋的详细机理有待进一步探讨     

银杏达莫治疗突发性耳聋的临床疗效观察

目的对银杏达莫注射液治疗突发性耳聋的疗效进行临床观察。方法将87例(114耳)突发性耳聋患者按就诊顺序分成银杏达莫组即实验组44例(59耳)和对照组43例(55耳)。实验组用含银杏叶提取物和双嘧达莫的银杏达莫注射液治疗,对照组用复方丹参治疗;另外两组同时加用地塞米松、ATP、肌苷和B族维生素等药物及高压氧治疗。两组在治疗前和治疗后4 d开始每3 d用纯音电测听测试患者听力。结果经治疗后,实验组44例(59耳)中痊愈20例(27耳),显效14例(18耳),有效5例(7耳),无效5例(7耳),治愈率为45.3%,有效率为88.4%;对照组43例(55耳)中痊愈8例(12耳),显效8例(13耳),有效14例(15耳),无效9例(15耳),治愈率为20.7%,有效率为72.1%,两组统计学处理差异有显著性(P<0.05)。结论银杏达莫治疗突发性耳聋的临床疗效肯定,按该组剂量未发现有明显副作用。     

MPTP对体外培养大鼠中脑多巴胺神经元毒性作用研究

本文研究１－甲基－４－苯基－１，２，３，６－四氢吡啶（ＭＰＴＰ）对体外培养大鼠中脑多巴胺（ＤＡ）神经元的毒性作用。取胚胎腹侧中脑，制成细胞悬液，常规体外培养。实验分为：正常对照组、高浓度ＭＰＴＰ（３０μｍｏｌ／ｍｌ）组、低浓度ＭＰＴＰ（３μｍｏｌ／ｍｌ）组和胆碱能神经元对照组。培养细胞定期抽出作免疫组化和荧光组化染色。高浓度ＭＰＴＰ组培养１０天，荧光组化阳性细胞已基本消失，此后酪氨酸羟化酶（ＴＨ）免疫反应的阳性细胞开始减少，至体外培养２周，每孔平均仅剩１４．５个，与正常对照组相比有显著性差异。残存的ＤＡ神经元突起缩短或消失。低浓度ＭＰＴＰ组培养２周后，大部分荧光组化阳性细胞消失，但对ＴＨ免疫反应阳性细胞的数量无明显影响。基底前脑胆碱能神经元体外生长不受ＭＰＴＰ干扰。实验结果提示ＭＰＴＰ对大鼠中脑ＤＡ神经元同样具有特异性损伤作用，其损伤程度与ＭＰＴＰ浓度有关。