IL—1β、MMP—3在骨关节病中的表达及临床意义

目的:本文探讨IL-1β、MMP-3在OA中的表达及临床意义。方法:对37例膝关节骨关节炎患者,10例正常人关节液标本中的IL-1β、MMP-3进行了研究。IL-1β、MMP-3的检测均采用酶联免疫吸附法(ELISA法)。结果:OA关节液中IL-1β、MMP-3的水平均显著高于正常对照组。本研究结果还显示OA患者中IL-1β、MMP—3与病程成正相关。结论:OA患者关节液中IL-1β、MMP-3水平明显增高,它们与骨关节炎关节软骨退变有关。IL-1β、MMP-3在骨关节炎关节软骨退变的病理过程中发挥关键作用。     

p53在大鼠骨关节炎中的表达

目的:检测大鼠实验性骨关节炎(OA)关节软骨中的p53蛋白和mRNA在不同时期的表达,明确其在OA中的作用.方法:采用经典的Hulth法构建大鼠膝关节实验性OA的动物模型.免疫组化方法检测p53蛋白的表达.RT-PCR技术检测p53 mRNA的表达.结果:OA关节软骨逐渐变为淡黄白色,粗糙.HE染色见OA软骨细胞变得稀疏,集聚成簇.免疫组化表明OA模型侧关节软骨p53蛋白高表达.RT-PCR表明OA侧p53 mRNA高表达,而且随时间增加而表达持续上调.结论:本研究表明在OA关节软骨的p53蛋白和mRNA的高表达与OA进程密切相关,可能是OA的发病机制之一.     

IL-1β对兔关节软骨细胞MMP-1/-13mRNA表达和NO的影响

目的观察白介素-1β(IL-1β)对体外培养的兔关节软骨细胞基质金属蛋白酶-1/-13(MMP-1/-13)基因表达的调节作用和对一氧化氮(NO)的影响,以了解骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨损伤的机制。方法将体外培养的兔关节软骨细胞随机分为5组,每组有3个样本,第1组为空白对照组,第2,3,4,5组分别加入10ng/mL的IL-1β,作用时间分别为8,16,24,36h。采用实时荧光定量PCR(real-timePCR)的方法,观察兔关节软骨细胞MMP-1/-13基因的表达情况,以空白组为对照,比较不同时间段软骨细胞MMP-1/-13基因表达,并收取培养细胞上清液测定一氧化氮(NO)含量,比较各组变化。结果正常兔关节软骨细胞具有MMP-1/-13基因表达,但是表达量较低,而各实验组MMP-1/-13mRNA都明显增高。尤其是MMP-1mRNA增高明显,在36h内随着时间的延长逐渐增高,且各组间差异具有统计学意义(P<0.05);MMP-13mRNA增高后维持在高水平,但各组间无明显差异。NO的含量也随着时间的延长而逐渐增高。结论IL-β1随着时间延长,正向调节兔关节软骨细胞MMP-1/-13mRNA表达,并能促进NO的释放增加,从而使它们在OA软骨破坏的机制中发挥重要作用,但对MMP-1/-13具体调节机制不尽相同。     

程序化死亡基因5(PDCD5)在骨关节炎软骨中的表达及意义

目的：研究程序化死亡基因5(PDCD5)在正常及骨关节炎关节软骨中的表达规律，探讨PDCD5在骨关节炎发病中的作用。方法：取20例骨关节炎及10例股骨颈骨折行关节置换术时切除的关节软骨，分离软骨细胞，留取组织块制作石蜡切片。分别用流式细胞术、直接免疫荧光、激光共聚焦显微镜及RT-PCR检测PDCD5在正常及骨关节炎软骨细胞内的表达水平及部位，免疫组织化学检测PDCD5在关节软骨内的表达特征。结果：在骨关节炎软骨细胞中PDCD5表达上调，以细胞核内增强为主；在骨关节炎的组织切片中PDCD5表达增强，阳性细胞主要分布在表层及深层，而在股骨颈骨折中PDCD5阳性细胞主要分布在表层及中层。结论：PDCD5可能参与了骨关节炎软骨细胞的凋亡过程，在骨关节炎的发病中发挥作用。     

p53在骨关节炎软骨组织中的表达及与关节软骨细胞自噬的关系研究

目的:研究p53在骨关节炎软骨组织中的表达及与关节软骨细胞自噬的关系。方法:对20例骨关节炎患者(OA组)及10例正常膝关节软骨组织(对照组),用实时定量PCR(real-time PCR)、免疫组化等方法检测p53及Beclin1在膝关节软骨中的表达与分布,并对两者进行相关性分析。结果:p53在OA组的表达明显高于正常对照组(P0.05),OA组关节软骨组织中Beclin1的表达量明显低于正常对照组(P0.01),p53与Beclin1在软骨组织中表达呈负性相关(r=-0.629,P0.05)。结论:骨关节炎中p53的高表达能够抑制软骨细胞自噬,从而减弱软骨细胞对凋亡抵抗能力,促进软骨细胞凋亡。     

绿原酸对颞下颌关节软骨细胞增殖、凋亡和炎症因子释放的影响及作用机制研究

目的探讨绿原酸对颞下颌关节骨关节炎的保护作用机制。方法采用10ng/ml的白细胞介素1β（IL-1茁）诱导大鼠颞下颌关节软骨细胞损伤,同时使用不同浓度绿原酸对软骨细胞进行干预。采用CCK-8法检测软骨细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,qRT-PCR法检测软骨细胞中肿瘤坏死因子琢（TNF-琢）、IL-6、基质金属蛋白酶3（MMP-3）、MMP-13、Wnt-5A和Ror2mRNA的表达水平,Westernblot法检测Wnt-5A和Ror2蛋白的表达水平。结果不同浓度绿原酸干预IL-1β诱导的颞下颌关节软骨细胞损伤后,绿原酸能够促进软骨细胞增殖,抑制软骨细胞凋亡,抑制TNF-琢、IL-6、MMP-3和MMP-13mRNA的表达水平,同时抑制Wnt-5A/Ror2信号通路中Wnt-5A和Ror2的表达。结论绿原酸或通过抑制Wnt-5A/Ror2信号通路调控IL-1茁诱导损伤的颞下颌关节软骨细胞增殖、凋亡和炎症因子释放。绿原酸或可作为治疗颞下颌关节骨关节炎的药物。     

复元胶囊对实验性兔骨关节炎白介素1及转化生长因子β2的调节作用

目的:观察复元胶囊对实验性兔早、中、晚期骨关节炎软骨中白介素1β、转化生长因子β2及病理形态学的影响.方法:选用健康新西兰大白兔54只(2.3kg±0.2kg),随机分为5组:(1)正常组6只,不给予任何处理;(2)模型组12只,ACTL造模后用生理盐水10ml/d灌胃;(3)实验组即复元胶囊组:又分为低、中、高剂量组.每组各12只.ACTL造模后分别用复元胶囊灌胃.于给药4周、8周及12周各处死4只,正常组处死2只.比较各组股骨内髁关节软骨大体、光镜下的病理变化.电镜观察软骨细胞及基质的变化.免疫组化法检测兔膝关节软骨中白介素1β和转化生长因子β2蛋白水平.采用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)的方法检测股骨内髁内侧及胫骨平台退变软骨中转化生长因子β2的mRNA表达.结果:实验组软骨退变程度较模型组明显减轻,实验组软骨细胞中白介素1β的表达低于模型组(P＜0.05);实验组的转化生长因子β2的蛋白和mRNA的表达明显高于模型组(P＜0.01).结论:复元胶囊能明显抑制OA软骨中白介素1β的蛋白表达,提高骨关节炎软骨中转化生长因子β2的蛋白和mRNA的水平,稳定二者水平,提示对软骨退变有一定的预防作用.     

USP49抑制IL-1β诱导的软骨退行性改变

目的 了解USP49对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡及细胞外基质降解的影响。方法 首先基于数据库了解USP49在骨关节炎患者中的表达水平。原代培养软骨细胞并鉴定,使用不同浓度的IL-1β预处理软骨细胞,检测USP49基因表达与蛋白水平后,选择合适的IL-1β浓度模拟骨关节炎。使用IL-1β处理构建的USP49过表达软骨细胞,检测软骨细胞凋亡,测定USP49、β-catenin及软骨降解相关蛋白MMP-1、MMP-13表达。结果 较正常人样本,USP49在骨性关节炎患者中表达显著降低。原代软骨细胞经不同浓度IL-1β预处理后,USP49表达明显抑制,且随浓度增加,抑制作用增强。USP49过表达可显著减弱IL-1β诱导的细胞凋亡,抑制β-catenin、MMP-1、MMP-13表达。结论 USP49可能通过Wnt/β-catenin通路抑制软骨细胞凋亡及细胞外基质降解,减轻IL-1β诱导的软骨退变。     

TGF－β1和bFGF在膝骨关节炎患者关节软骨和骨赘中表达分布的分析研究

目的：探讨TGF－β1和bFGF在膝骨关节炎患者骨赘中和关节软骨表达和分布的情况。方法：取12例诊断为膝骨关节炎且在影像学上可有明显的骨赘形成并行全膝置换患者的膝关节软骨以及骨赘,采用免疫组化对TGF－β1和bFGF表达以及分布情况进行分析。结果：免疫组化链菌素亲生物素蛋白－过氧化酶连接法证实在12例标本的关节软骨和骨赘中TGF－β1和bFGF均有表达;TGF－β1在骨赘的浅层有高强度阳性表达,在深层未有表达;而在退变软骨的浅层只有弱强度阳性表达,深层为阴性表达;而且TGF－β1在骨赘中的表达强度要强于关节软骨。而bFGF在骨赘和软骨的整个层面均有阳性表达。结论：TGF－β1和bFGF参与了骨赘的形成和软骨退变,对骨关节炎的进展有着重要的影响,TGF－β1和bFGF这种表达的差异性,表明这2种生长因子在骨关节炎患者骨赘形成中对骨与软骨代谢起着不同的作用,TGF－β1相比bFGF似乎与骨赘的形成更加相关。     

骨碎补总黄酮治疗兔膝骨关节炎的实验研究

目的:探讨中药骨碎补总黄酮对兔膝前交叉韧带切断(ACLT)骨关节炎模型的作用机制.方法:新西兰大白兔30只,随机分为5组,即假手术组、ACLT 4周组、ACLT 8周组、骨碎补总黄酮4周组和骨碎补总黄酮8周组,每组6只.按照前交叉韧带切断法建立兔膝骨关节炎模型.于实验第4、8周处死动物,用ELISA法检测血清IL-1β及PGE2水平,用硝酸还原酶法测定关节液中NO含量,并切取关节软骨,用RT-PCR方法测定诱导型一氧化氮合酶(the inducible nitric oxide synthase,iNOS)的表达.结果:前交叉韧带切断各组IL-1β、PGE2、NO及iNOS表达量较假手术组明显增高(P＜0.05),并随着造模时间的延长,其表达量持续增加(P＜0.05).骨碎补总黄酮组较ACLT组表达明显降低(P＜0.05).结论:IL-1β、PGE2、NO在骨关节炎的病理过程中起重要作用,并随着造模时间的延长,其表达量持续增加.中药骨碎补总黄酮对上述因子有抑制作用,并能下调关节软骨iNOS的表达,从而能够达到防治、治疗骨关节炎的作用.     

细胞因子IL-1β和TNF-α在骨关节炎软骨中mRNA表达的变化及意义

目的探讨IL-1β和TNF-α mRNA在大鼠实验性骨关节炎软骨表达的变化和意义。方法采用Hulth法制作大鼠膝关节0A动物模型，于术后8周取标本并观察关节软骨形态，RT—PCR技术检测mRNA表达。结果0A模型侧关节软骨的IL-1β和TNF-α mRNA表达均高于对照侧。结论OA软骨中存在IL-1β和TNF-α mRNA表达的上调，可能是OA的发病机制之一。     

机械应力促进炎性环境中软骨修复的机制研究

目的: 探索在炎性环境中施加机械应力对软骨修复的影响及机制。方法: 提取骨关节炎（OA）患者膝关节软骨中的软骨前体细胞（CPC）,培养扩增后在海藻酸构建的支架上三维培养,在IL-1β塑造的炎症环境中施加周期性静水压（IHP）,蛋白免疫印迹法检测MAPK信号通路的变化,CCK-8法检测细胞增殖,实时荧光定量PCR检测基质金属蛋白酶13（MMP-13）和解聚素与金属蛋白酶5（ADAMTS-5）基因表达的变化。切断大鼠的前交叉韧带构建膝关节OA模型,通过外固定支架牵开关节腔构建合适的机械应力,观察关节牵引能否促进软骨的修复及其机制。结果: 0.01 ng/mL IL-1β可以抑制CPC增殖,施加IHP后可以减少MAPK信号通路蛋白的表达,减少MMP-13、ADAMTS-5基因表达,促进炎性环境下的CPC增殖。切断前交叉韧带4周后,膝关节OA模型成功构建。OA大鼠经关节牵引后软骨的Mankin评分更低（P < 0.01）,软骨修复较对照组更佳。软骨标本的免疫组织化学染色发现关节牵引可减少P-p38、MMP-13及X型胶原的表达,减少细胞凋亡,促进OA软骨的修复。结论: 机械应力可以通过抑制MAPK信号通路,促进CPC增殖,减少基质降解酶表达,促进OA软骨修复。     

梓醇抑制骨关节炎发病机制的研究

目的 探讨梓醇(CAT)对白介素-1β(IL-1β)诱导的软骨细胞炎症模型以及大鼠骨关节炎(OA)关节退变的机制研究。 方法 为探讨CAT在骨关节炎中的作用及其特定的作用机制，随机选取12只SD大鼠膝关节软骨细胞进行原代培养，将培养后的软骨细胞随机分成4组，即对照组(Control组)、IL-1β刺激组、IL-1β+CAT 10 μg/mL组、IL-1β+CAT 50 μg/mL组。动物实验中随机选取12只大鼠分为3组，Sham组、OA组及OA+CAT组，每组4只，OA组行右侧前交叉韧带横断和半月板切除术，实验组即OA+CAT组在切除完右侧前交叉韧带横断和半月板后，给予CAT[5 mg/(kg·d)]腹腔注射，随机方法均采用抽签法。利用Western blotting方法、实时定量RT-PCR和免疫荧光染色检测软骨细胞的代谢、凋亡水平及相关信号通路。同时，应用番红-固绿染色和国际骨关节炎研究学会评分(OARSI)系统，对实验性大鼠软骨退变程度进行了评估。 结果 ①CAT可抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡；②CAT在软骨细胞中抑制IL-1β介导的分解代谢酶的释放，同时抑制IL-1β诱导的细胞外基质的降解；③CAT抑制IL-1β介导的NF-κB通路，同时减少IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的释放；④CAT在大鼠OA模型中可部分逆转软骨的退化。 结论 本实验结果提示，CAT能抑制NF-κB通路，减轻IL-1β诱导的大鼠软骨细胞的炎症反应和分解代谢水平，同时能抑制软骨细胞凋亡水平，所有的结果提示CAT具有治疗OA的作用。      

透骨消痛胶囊含药血清对退变关节软骨细胞表达TNF-α、IL-1β的影响

目的观察透骨消痛胶囊含药血清对体外培养的大鼠退变软骨细胞表达肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）的影响,探讨透骨消痛胶囊防治骨性关节炎的作用机制。方法 4周龄SD大鼠膝关节软骨建立体外培养的软骨细胞,采用Ⅱ型胶原原位杂交法对第3代软骨细胞进行鉴定。用10 ng.mL-1IL-1β干预第3代软骨细胞复制退变软骨细胞模型。模型复制成功后,随机分为模型组和透骨消痛胶囊含药血清组,分别在培养24、48、72 h后用TaqMan real-time PCR法检测各组mRNA表达。结果透骨消痛胶囊含药血清组TNF-αmRNA、IL-1βmRNA相对表达量随着干预时间的延长逐渐下降,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的部分作用机制是有效抑制退变软骨细胞TNF-α、IL-1β的表达。     

黄芪甲苷对人膝骨关节炎退变软骨细胞MMP-1和MMP-3 mRNA表达的影响

目的:观察黄芪甲苷对原代培养骨关节炎患者的膝关节软骨细胞的金属蛋白酶-1和金属蛋白酶-3mRNA表达影响,初步探讨黄芪甲苷防治膝骨关节软骨退变的作用机制。方法:原代培养骨关节炎患者的膝关节软骨细胞,用第三代细胞进行试验。将5个不同浓度的黄芪甲苷,分别作用于关节软骨细胞4、8、24、48、72h后,采用Real Time-PCR法检测细胞中金属蛋白酶-1(MMP-1)和金属蛋白酶-3(MMP-3)的mRNA表达。结果:黄芪甲苷浓度为25~100mmol/L,作用于退变关节软骨细胞24~72h时,软骨细胞MMP-1 mRNA的表达量与对照组比较显著降低。黄芪甲苷浓度为50~100mmol/L,作用于退变关节软骨细胞48~72h时,软骨细胞MMP-3 mRNA的表达量显著低于对照组。结论:黄芪甲苷可延缓膝骨关节炎关节软骨细胞的退变,抑制软骨细胞MMP-1和MMP-3mRNA的表达可能是其作用机制之一。     

川芎嗪对IL-1β诱导的兔原代软骨细胞iNOS表达和NO合成的影响

目的观察川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对IL-1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导的兔原代软骨细胞诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)表达及一氧化氮(NO)合成的影响。方法体外培养兔软骨细胞,用甲苯胺蓝染色检测蛋白多糖,免疫荧光检测兔原代软骨细胞Ⅱ型胶原;用IL-1β10 ng/ml和(或)不同浓度(5、10、15、20μg/ml)川芎嗪共培养兔原代软骨细胞48 h后,RT-PCR和免疫组化检测iNOS基因及蛋白表达;用硝酸还原法检测细胞培养上清液NO的表达。结果软骨细胞呈三角形或多角形,蛋白多糖表达于细胞质中,Ⅱ型胶原主要表达于细胞质,少见于细胞核。与对照组比较,IL-1β单独作用软骨细胞iNOS和NO的表达显著增加(P<0.01);IL-1β和川芎嗪联合作用后,软骨细胞iNOS和NO的表达较IL-1β单独作用显著降低(P<0.05,P<0.01),但仍显著高于对照组(P<0.01)。结论川芎嗪能有效抑制IL-1β诱导兔软骨细胞iNOS的表达和NO的合成。     

黄芪甲苷对人膝骨关节炎退变软骨细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖mRNA表达的影响

目的:观察黄芪甲苷对原代培养骨关节炎患者的膝关节软骨细胞的Ⅱ型胶原和蛋白多糖mRNA表达影响,初步探讨黄芪甲苷防治膝骨关节软骨退变的作用机制。方法:原代培养骨关节炎患者的膝关节软骨细胞,用第三代细胞进行试验。将5个不同浓度的黄芪甲苷,分别作用于关节软骨细胞4、8、24、48、72h后,采用Real Time-PCR法检测细胞中Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)、蛋白多糖基因(ACAN)的mRNA表达。结果:黄芪甲苷浓度为25~75mmol/L,作用于退变关节软骨细胞24~72h时,软骨细胞Col Ⅱ和ACAN mRNA的表达量均较对照组显著增加。结论:黄芪甲苷可延缓膝骨关节炎关节软骨细胞的退变,促进软骨细胞ColⅡ及ACAN mRNA的表达可能是其作用机制之一。     

吲哚美辛对大鼠骨关节炎模型关节软骨中IL-6表达的影响

目的研究环氧合酶-2(COX-2)抑制剂对大鼠骨关节炎模型关节软骨中白介素-6(IL-6)表达的影响。方法健康雄性Wistar大鼠30只,随机分为对照组、骨性关节炎组(OA组)和COX-2抑制剂(吲哚美辛)处理组,每组10只。利用膝关节注射4%的木瓜蛋白酶溶液的方法制作骨关节炎模型。采用关节炎评分法评定各组大鼠平均关节炎指数,Western blot方法检测关节软骨中IL-6蛋白的表达变化,RT-PCR方法检测关节软骨中IL-6 mRNA的表达变化。结果 OA模型组随着造模时间的延长,关节出现了重度红肿现象,对照组关节无任何异常变化;与OA模型组比较,吲哚美辛组的关节炎症反应呈现消退现象。术后8周检测关节软骨中IL-6蛋白及mRNA表达的变化,结果发现IL-6蛋白及mRNA在对照组大鼠关节软骨中仅有微量表达,而在OA组大鼠关节软骨表达则显著升高(P0.01);与OA组相比,吲哚美辛组大鼠关节软骨中IL-6蛋白表达显著降低(P0.01)。结论吲哚美辛可通过下调IL-6蛋白的表达参与骨关节炎的发病机制。