转化生长因子-β1及Bax在犬慢性胰腺炎发病过程中的表达及其意义

目的：观察转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA及Bax在慢性胰腺炎发病过程中的表达和分布。探讨其在犬慢性胰腺炎形成过程中的作用及意义。方法：通过制作犬慢性胰腺炎模型。采用原位杂交(ISH)法对。TGF-β1 mRNA和免疫组化法对Bax在慢性胰腺炎形成过程不同时期组织中的表达和分布进行研究。结果：TGF-β1 mRNA主要表达于间质的纤维组织、成纤维细胞、巨噬细胞及血管内皮细胞。Bax主要表达于胰腺腺泡细胞。TGF-β1 mRNA及Bax在慢性胰腺炎形成过程表达较强且持续存在。结论：TGF-β1持续性高表达是造成慢性胰腺炎形成过程成纤维细胞增殖旺盛、细胞外基质过度沉积及胰腺组织进行性纤维化的重要因素。而Bax是引起胰腺炎腺泡细胞发生凋亡的主要因素。     

转化生长因子-β_1对子宫内膜上皮细胞增殖和转分化的影响

目的探究转化生长因子-β_1(TGF-β_1)对子宫内膜组织上皮细胞数目和转分化的影响。方法收集2017年6月1日—12月1日河北工程大学附属医院手术获取的正常子宫内膜组织并分离其上皮细胞。将细胞分为正常对照组(只加培养液)和实验组(培养液和不同浓度的TGF-β_1),采用噻唑蓝染色检测活细胞的数量;用酶联免疫法检测各组细胞悬液中Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)和纤黏连蛋白(FN)的分泌情况;免疫印迹法比较各组细胞胞质中的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和钙黏附蛋白-E(E-cadherin)的含量。结果经TGF-β_1作用后,子宫内膜上皮细胞增殖明显,且浓度越大,时间越长,增殖率越高;5 ng/ml TGF-β_1组细胞悬液中Col-Ⅰ和FN的分泌量显著高于正常对照组,差异有统计学意义(t=10.784、16.974,P<0.01);与正常对照组比较,实验组胞质中表达的E-cadherin含量降低,而α-SMA含量增高,且随TGF-β_1浓度增高,E-cadherin、α-SMA含量呈梯度降低/升高,差异有统计学意义(F=171.149、204.618、P<0.01)。结论 TGF-β_1能刺激子宫内膜组织上皮细胞数目增加,诱导其向肌成纤维细胞转变。     

TGF-β1和α-SMA在实验性肝纤维化中的动态变化及其意义

目的 探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在肝纤维化过程中的变化及其意义。方法异种动物血清诱导大鼠肝纤维化模型,免疫组织化学法测定肝组织中TGF-β1和α-SMA,同时进行肝组织化学检查。结果 TGF-β1和α-SMA在肝纤维化过程中逐渐升高,与肝纤维化程度成正相关。结论 TGF-β1与肝纤维化程度正相关,具有间接反映病情活动、病情进展的临床实用价值。α-SMA可间接表明肝贮脂细胞的增殖活化程度。     

糖尿病大鼠肾间质TGF-β1和α-SMA的表达与细胞外基质沉积的关系

目的：观察糖尿病大鼠肾小管间质中转化生长因子(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达与纤维连接蛋白(FN)和胶原Ⅲ型(ColⅢ)沉积的关系。方法：大鼠随机分为正常对照组(A组)，糖尿病1周组(B组)，特尿病2周组(C组)，糖尿病1月组(D组)和糖尿病2月组(E组)。用免疫组化方法检测肾间质TGF-β1、α-SMA、FN和ColⅢ，PAS染色观察肾组织形态学改变，生化法测定大鼠血糖、血脂、血尿肌酐以及尿蛋白。结果：糖尿病2周开始肾小管见TGF-β1表达，并随病程进展而逐渐增多。糖尿病1月肾间质中见FN和ColⅢ沉积开始增多，2月时更多，且可见肾问质中有α-SMA表达；FN和ColⅢ增多与TGF-β1、α-SMA呈正相关。结论：TCF-β1刺激α-SMA的表达，从而促进糖尿病大鼠肾小管问质FN和ColⅢ的沉积。     

黄芪注射液对大鼠胰腺纤维化及TG F-β1、 M M P-1、TIMP-1蛋白表达的影响

目的：探讨黄芪注射液对慢性胰腺炎大鼠胰腺组织中TGF-β1、MMP-1、TIMP-1蛋白表达的影响。方法：通过胰管内注射2%三硝基苯磺酸建立大鼠慢性胰腺炎纤维化模型。30只雄性SD大鼠随机分成三组：正常组、模型组、黄芪干预组,每组10只。4周末应用免疫组化法和图像分析技术定量检测大鼠慢性胰腺炎胰腺组织中TGF-β1、MMP-1、TIMP-1的表达情况,同时胰腺组织行HE染色,观察病理形态学改变。结果：与对照组比较,模型组发生明显的胰腺纤维化,TGF-β1及TIMP-1的表达明显升高（P〈0.01）。干预组纤维化程度及TGF-β1、TIMP-1的表达低于模型组（P〈0.05）,而MMP-1在正常胰腺组织与模型组及干预组中的表达无显著性差异（P〉0.05）。结论：黄芪注射液抑制大鼠胰腺纤维化组织的形成可能与其降低TGF-β1及TIMP-1蛋白表达有关。     

Mfn2、miRNA-101调控转化生长因子-β1参与肝泡型包虫病肝纤维化的研究

目的 探讨Mfn2、miRNA-101通过TGF-β1调控肝泡型包虫病肝纤维化的潜在作用。方法 收集2020年7月-2020年10月青海省人民医院确诊的20例肝泡型包虫病患者术后切除的肝组织,采集距肝脏病灶边缘2 cm以外正常肝组织、距肝脏病灶边缘2 cm以内肝组织。行HE、Masson染色,将不同标本纤维化分级,通过免疫组化、RT-qPCR检测Mfn2、TGF-β1、α-SMA、miRNA-101在不同级别纤维化组织中的表达。结果 Mfn2、TGF-β1、α-SMA、miRNA-101在不同级别纤维化组织中的差异表达均具有统计学意义（P＜0.05）。Mfn2与TGF-β1、α-SMA表达量均呈负相关（P＜0.05）,miRNA-101与TGF-β1、α-SMA表达量均呈负相关（P＜0.05）,TGF-β1与α-SMA表达量呈正相关（P＜0.05）,Mfn2与miRNA-101表达量无显著相关性（P＞0.05）。结论 Mfn2、miRNA-101可能抑制肝泡型包虫病肝纤维化,并且可能通过抑制TGF-β1发挥抗纤维化作用     

阿魏酸哌嗪对TGF-β1诱导肾成纤维细胞表型活化的影响

目的 观察阿魏酸哌嗪对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导肾成纤维细胞表型活化的影响,探讨其抗肾间质纤维化的可能机制.方法 体外培养正常大鼠肾脏成纤维细胞(NRK-49F),利用MTT观察阿魏酸哌嗪对TGF-β1诱导细胞活力的影响;免疫细胞化学法观察阿魏酸哌嗪对TGF-β1诱导细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、结缔组织生长因子(CTGF)蛋白表达的影响;实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(real time RT-PCR)检测阿魏酸哌嗪对TGF-β1诱导细胞α-SMA及CTGF mRNA表达的作用,双抗体夹心ABC-ELISA法检测阿魏酸哌嗪对TGF-β1诱导细胞上清Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)、纤维连接蛋白(FN)表达的影响.结果 TGF-β1可以显著增加大鼠肾脏成纤维细胞活力,上调细胞α-SMA、CTGF蛋白和mRNA的表达以及Col Ⅰ、FN的表达.与TGF-β1刺激组相比,阿魏酸哌嗪能部分抑制TGF-β1诱导的细胞活力增加、α-SMA、CTGF的表达和细胞外基质(ECM)的合成.结论 阿魏酸哌嗪可以在一定程度上拮抗TGF-β1诱导的肾纤维化效应.     

静脉移植物中整合素α5β1的表达及其与再狭窄的关系

目的 检测人静脉移植物中整合素α5β1的表达.方法 应用免疫荧光组织化学技术对30个静脉移植物再狭窄标本中整合素α5β1和α-smooth muscle actin(α-SMA)的表达进行了检测,用激光共聚焦显微镜拍片,图片用SiliconGraphics Octane进行处理.结果 在正常静脉血管中,整合素α5β1在中膜平滑肌细胞和内皮细胞呈微弱表达;α-SMA在中膜平滑肌细胞表达;在病变静脉血管,整合素α5β1在中膜平滑肌细胞、内膜内皮细胞中的表达呈强阳性,在内膜平滑肌细胞中也有弱表达.α-SMA除在中膜平滑肌细胞表达外,在内膜平滑肌细胞也有表达.结论 静脉移植物整合素α5β1在中膜平滑肌细胞、内膜内皮细胞表达显著上调,提示整合素α5β1参与静脉移植物再狭窄的形成.     

肝细胞生长因子对转化生长因子诱导肾小管上皮细胞转分化的影响

目的应用转化生长因子β1(TGF-β1)诱导肾小管上皮细胞肌纤维母细胞转分化,研究肝细胞生长因子(HGF)对肾小管上皮细胞的表型重塑的作用和机制。方法在正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E细胞株)培养液中分别加入TGF-β1及HGF,应用倒置相差显微镜、扫描电镜观察细胞形态变化;免疫组织化学方法检测肌纤维母细胞特异性标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;ELISA法分析测定培养细胞上清液中纤维连结蛋白(FN)的含量;RT-PCR检测结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达。结果1TGF-β1诱导肾小管上皮细胞从原有典型的上皮细胞形态转变为长梭形肌成纤维细胞样形态;α-SMA的表达、上清液FN含量、细胞CTGFmRNA表达明显增加(P<0.05)。2单纯HGF对细胞形态学、α-SMA的表达及FN含量与空白对照组无明显影响;不同浓度HGF组的CTGFmRNA表达较空白对照组均增加(P<0.05)。3HGF能抑制TGF-β1诱导的NRK52E细胞形态学改变;α-SMA的表达、FN水平均比诱导组TGF-β1明显下降(P<0.05);HGF抑制了TGF-β1诱导的CT-GFmRNA表达(P<0.05)。结论HGF能够负性调控TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞肌纤维母细胞转分化作用,减少FN分泌;HGF对TEMT的负性调节作用可能是通过减少CTGF表达来实现的。     

β-胡萝卜素对肝纤维化大鼠肝组织α-平滑肌肌动蛋白和转化生长因子-β_1表达的影响

目的探讨β-胡萝卜素对肝纤维化大鼠肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法将48只大鼠随机分为对照组、肝纤维化模型组和肝纤维化β-胡萝卜素干预组,SABC法免疫组织化学染色显示α-SMA及TGF-β1,HE染色显示肝的显微结构,透射电镜观察肝超微结构。结果肝纤维化模型组、对照组和β-胡萝卜素干预组α-SMA和TGF-β1表达的平均灰度值比较均有显著性差异(P<0.01)。电镜结果显示,对照组肝星形细胞内充满脂滴,其周围无明显胶原纤维沉积;肝纤维化组肝星形细胞内的脂滴较对照组减少;肝纤维化β-胡萝卜素干预组肝星形细胞内脂滴的量介于对照组与肝纤维化组之间。结论β-胡萝卜素抑制α-SMA和TGF-β1的表达,能降低由CC l4诱导的大鼠肝纤维化的程度,其作用途径与抑制肝脏星形细胞中的脂滴丢失有关。     

成纤维细胞激活蛋白在小鼠肺纤维化模型中的表达

目的探讨成纤维细胞激活蛋白（FAP）在实验性小鼠肺纤维化组织中的表达,及其与α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、转化生长因子β1（TGF-β1）之间的相互关系。方法气管内滴入博莱霉素（7mg/kg）制备肺纤维化模型,采用免疫组化技术检测小鼠肺纤维化组织中FAP、α-SMA和TGF-β1的表达。结果正常肺组织无FAP表达;纤维化组FAP表达于细支气管和大血管周围的成纤维细胞,成纤维细胞灶中FAP、α-SMA和TGF-β1表达部位相似,但FAP比α-SMA的表达更广泛,比TGF-β1的表达更强。FAP、α-SMA和TGF-β1与小鼠肺纤维化程度均呈正相关（r值分别为0.795、0.766和0.628,P〈0.01）,且FAP与TGF-β1的表达呈正相关（r=0.706,P〈0.01）。结论 FAP特异性表达在小鼠肺纤维化组织的成纤维细胞灶中,与肺纤维化程度有关。FAP与TGF-β1可能在肺纤维化形成中起协同作用。     

人肾微血管内皮细胞转分化在移植肾间质纤维化形成中的作用

目的:探讨人肾微血管内皮细胞-间充质细胞转分化(endothelial-mesenchymal transition,EndMT)在移植肾间质纤维化形成中的意义及相关机制?方法:通过对南京医科大学第一附属医院25例慢性移植肾失功能(chronic allograft dysfunction,CAD)患者和25例正常人血生化指标进行分析,对移植肾组织标本和正常肾组织标本进行糖原(PAS)和马松三色(Masson)染色检查分析,观察两组肾功能?肾小管萎缩?肾小球塌陷及肾间质纤维化程度的差异?用免疫组织化学和间接免疫荧光双重染色方法检测两组肾组织标本中血管内皮细胞标志物CD34和肌成纤维细胞标志物α-平滑肌细胞肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)以及转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的表达和分布特点?进一步以原代人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)为体外研究对象,以TGF-β1(5 ng/ml)作用0~72 h,采用免疫印迹方法观察细胞中CD34和α-SMA的表达变化?结果:与正常人相比,CAD患者血清肌酐水平明显升高,PAS和Masson三色染色结果显示CAD患者移植肾组织中出现明显肾小管萎缩?肾小球塌陷及肾间质纤维化改变;半定量统计分析结果表明两者间存在统计学差异(P < 0.01)?免疫组织化学及间接免疫荧光染色结果表明,与正常组相比,CAD组中CD34阳性表达率降低而α-SMA及TGF-β1阳性表达率显著升高,CAD组中部分肾小球和间质微血管内皮细胞呈CD34和α-SMA双重染色阳性?体外研究显示,TGF-β1作用于HUVECs细胞后,随着时间延长,CD34表达逐渐降低而α-SMA表达逐渐增多,与对照组相比,具有统计学差异(P < 0.01)?结论:人肾微血管内皮细胞可能在TGF-β1介导下通过发生EndMT现象进而在移植肾间质纤维化形成中起重要作用?     

转化生长因子β_1及胶原酶-1在慢性胰腺炎发病过程中的表达及其意义

目的 :观察转化生长因子β1( TGF-β1)蛋白、TGF-β1m RNA及胶原酶 -1 ( MMP-1 )在慢性胰腺炎发病过程中的表达和分布 ,探讨其在慢性胰腺炎形成过程中的作用及意义。方法 :通过制作犬慢性胰腺炎模型 ,采用免疫组化 SP法对 TGF-β1、MMP-1及采用原位杂交 ( ISH)法对 TGF-β1m RNA在慢性胰腺炎形成过程不同时期组织中的表达和分布进行研究。结果 :TGF-β1及 TGF-β1m RNA主要表达于间质的纤维组织、成纤维细胞、巨噬细胞及血管内皮细胞 ,MMP-1主要表达于间质的胶原纤维及成纤维细胞。 TGF-β1及 TGF-β1m RNA在慢性胰腺炎形成过程表达较强且持续存在。结论 :TGF-β1持续性高表达是造成慢性胰腺炎形成过程成纤维细胞增殖旺盛、细胞外基质过度沉积及胰腺组织进行性纤维化的重要因素 ,并且抑制 MMP-1的产生。     

肝细胞生长因子对转化生长因子诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞转分化的影响

目的:研究肝细胞生长因子(HGF)对转化生长因子β1(TGFβ-1)诱导肺泡上皮细胞转分化的影响。方法:应用TGF-β1诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞转分化。将人肺腺癌A549细胞株培养液分为4组:①对照组;②HGF组;③TGFβ-1组;④HGF+TGFβ-1组,应用倒置相差显微镜观察细胞形态变化;免疫细胞化学方法检测肌成纤维细胞特异性标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、肺泡上皮细胞特异性标志物肺泡表面活性蛋白A(SP-A)的表达。结果:①TGF-β1组肺泡上皮细胞从原来典型的上皮细胞形态转变为长梭形肌成纤维细胞样形态。②TGF-β1组的细胞α-SMA的表达明显增加,SP-A的表达明显减低。③HGF组的细胞形态学、α-SMA、SP-A的表达与对照组无明显差异。④HGF+TGFβ-1组,多数细胞保持原来肺泡上皮细胞的形态,α-SMA表达明显低于TGFβ-1组、SP-A表达明显高于TGFβ-1组。结论:HGF能够在一定程度上负性调控TGFβ-1诱导的肺泡上皮细胞的转分化。     

损伤气道上皮组织转化在气道重塑中的作用

目的：探讨损伤气道上皮表型向肌纤维母细胞转化的可能性，以及转化生长因子-β1(TGF-β1)在此过程中的影响。方法：用多聚左旋精氨酸(PLA)反复损伤气道上皮细胞系16HBE-14o，显微镜下实时观察形态学变化，免疫组化方法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达；以TGF-β1(10μg／L)刺激转染表达质粒VSMP8[含(α-SMA)启动子和氯霉素已酰基转移酶(CAT)报告基因]的16HBE-14o，ELISA法测定细胞裂解液中CAT相对活性。结果：①在气道上皮细胞系。16HBE-14o反复损伤、修复过程中，有部分细胞α-SMA表达阳性，其中有少数细胞形态呈现长梭形、多角形或星形；TGF-β1的刺激增加了α-SMA阳性细胞数，并延缓了损伤后16HBE-14o的修复。②TGF-β1刺激后24h CAT活性显著升高。结论：气道上皮细胞反复损伤、修复过程中，可能有部分细胞未能正常愈合而出现向肌纤维母细胞转化，进而可能参与哮喘气道重塑、气道高反应性的发生发展，提示TGF-β1可促进这种转化的病理生理过程。     

益气活血法对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

[目的]观察益气活血法中药方剂对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、果蝇MAD类似基因2/3(Smad2/3)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的调节,探讨其对肾小管上皮细胞转分化的影响。[方法]采用单侧输尿管结扎致肾间质纤维化大鼠模型。将30只大鼠随机分为6组:假手术组、模型组、中药大剂量组、中药中剂量组、中药小剂量组、西药组。术后14d,观察梗阻肾组织病理改变,用免疫组化方法检测肾组织TGF-β1、Smad2/3和α-SMA的表达。[结果]益气活血法能减轻肾间质纤维化程度,并能下调TGF-β1、Smad2/3和α-SMA的表达。[结论]益气活血法可通过下调TGF-β1、Smad2/3和α-SMA的表达,从而抑制大鼠肾小管上皮细胞转分化。     

丹参注射液对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏的保护

目的 探讨丹参注射液对单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾间质纤维化的影响。方法 采用UUO致肾间质纤维化大鼠模型。24只雄性Wistar大鼠，随机分为假手术组、模型组和丹参组。术后第10d肾组织做HE、Masson染色及TGF—β1，α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫组化检测。结果 丹参组显著改善梗阻侧肾组织病理变化，下调转化生长因子-β1（TGF-β1）和α-SMA表达。结论 丹参注射液对梗阻性大鼠肾间质纤维化有保护作用。     

阿魏酸钠对TGF—β1诱导下肾脏成纤维细胞α-SMA、CTGF表达及细胞外基质合成的影响

目的观察阿魏酸钠（SF）对转化生长因子β1（TGF-β1）作用下肾成纤维细胞（NRK-49F）α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及结缔组织生长因子（CTGF）表达、细胞外基质（ECM）合成的影响,探讨其抗肾间质纤维化的效果及可能机制。方法体外培养NRK-49F细胞,利用MTT观察阿魏酸钠对TGF-β1诱导细胞活力的影响;实时荧光定量逆转录一聚合酶链反应（Real TimeRT—PCR）检测细胞α-SMA及CTGF mRNA的表达;免疫细胞化学法观察细胞α-SMA、CTGF蛋白表达的情况;ELISA法测定细胞上清Ⅰ型胶原（Col I）、纤维连接蛋白（FN）的表达。结果TGF-β1可以显著增加大鼠肾脏成纤维细胞活力、上调细胞α-SMA、CTGF在mRNA和蛋白水平的表达、增加ColI及FN的合成;阿魏酸钠能够减轻TGF-β1,的上述效应。结论阿魏酸钠可以在一定程度上抑制TGF-β1诱导的肾脏纤维化。     

Smads信号通路在转化生长因子-β1诱导气道上皮细胞转分化中的作用

目的:探讨Smads信号通路在rhTGF-β1体外诱导气道上皮细胞表型向肌成纤维细胞转分化中的作用.方法:用TGF-β1(10 μg/L)处理气道上皮细胞株16HBE,Western blot法检测刺激不同时间点细胞核蛋白内磷酸化Smad 2和Smad 3(30min、24h和48 h)的表达;脂质体法瞬时转染Smad 7表达载体pCDNA 3.0/Smad 7或空载体,转染20h后,加入TGF-β1处理,RT-PCR法检测刺激不同时间E-钙黏蛋白、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的基因表达,免疫荧光法检测α-SMA的蛋白表达. 结果:①正常对照组核内无磷酸化-Smad 2表达,Smad 3有微弱表达,TGF-β1刺激30min时表达量明显增加,随着刺激时间的延长,表达量进一步增加;②TGF-β1刺激24h,瞬时转染Smad 7组α-SMA表达量低于相应转染空载体组,E-钙黏蛋白表达量明显高于相应转染空载体组,TGF-β1刺激36h后Smad 7组α-SMA、E-钙黏蛋白表达量与相应空载体组相似;免疫荧光显示转染Smad 7组α-SMA阳性细胞数显著低于空载体组(P<0.05). 结论:Smads信号通路参与了TGF-β1诱导的支气管上皮细胞株16HBE向肌成纤维细胞转分化过程.     

卡维地洛抗肝纤维化的试验研究

目的研究β受体阻滞剂卡维地洛（CVD）对肝星状细胞TGF-β1、α-SMA表达的影响,从而探讨其抗肝纤维化的作用和部分作用机理。方法将传代培养的HSC-T6细胞分为6组,分别为空白对照组、血小板衍生生长因子（PDGF）组、模拟对照组、药物处理组3组,RT-PCR及Western-blot分别检测转移生长因子β1（TGF-β1）、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的水平。结果 CVD处理后,HSC-T6的TGF-β1、α-SMA的水平下降。结论 CVD具有一定抗肝纤维化的作用。