RNA沉默HMGN5基因对肺癌A549细胞增殖的影响及意义

目的 通过RNA干扰技术(RNAi)沉默HMGN5基因,探讨其对肺癌A549细胞增殖的影响.方法 培养人肺癌A549细胞株,HMGN5基因合成慢病毒载体感染A549细胞,RT-PCR和Western blot检测A549细胞中HMGN5沉默率;设阴性对照组及RNA干扰组,MTT法检测A549细胞的增殖能力;Brdu法检测沉默HMGN5的表达;流式细胞仪检测其细胞周期.结果 与对照组比较,RNA干扰组HMGN5基因的mRNA及蛋白表达均降低,差异有统计学意义(P＜0.05);A549细胞的增殖能力明显下降,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05);细胞增殖率为29.70％,较对照组降低,差异有统计学意义(P＜0.05);G1期细胞为53.50±0.30,高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 采用RNAi能够沉默HMGN5基因,人肺癌A549细胞增殖能力显著降低,HMGN5基因可能参与肺癌的发生、发展、增殖过程.     

siRNA沉默TRIM65基因对脑胶质瘤细胞增殖、迁移侵袭、凋亡及STAT3信号通路的影响

目的探讨siRNA沉默三结构域蛋白65（TRIM65）基因对脑胶质瘤细胞增殖、迁移侵袭、凋亡及STAT3信号通路的影响。方法采用qRT-PCR、Western Blot检测TRIM65在正常脑胶质细胞HEB及胶质瘤细胞株U251、TJ861、A172中的表达;转染siRNA NC、siRNA TRIM65,STAT3信号通路激活剂SD19处理胶质瘤细胞株U251,采用MTT法检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞侵袭、迁移能力,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率。结果与正常脑胶质细胞HEB比较,胶质瘤细胞株U251、TJ861、A172中TRIM65的mRNA及蛋白水平显著升高（P<0.05）。与siRNA NC组比较,siRNA TRIM65组U251细胞24、48、72 h增殖抑制率、凋亡率显著升高（P<0.05）,侵袭和迁移数目显著降低（P<0.05）;U251细胞中TRIM65、cyclin D1、MMP-2、p-Jak2、p-STAT3蛋白水平显著降低（P<0.05）,Caspase-3蛋白水平显著升高（P<0.05）。与siRNA TRIM65组比较,siRNA TRIM65+SD19组U251细胞中p-Jak2、p-STAT3蛋白水平显著升高（P<0.05）。结论 siRNA沉默TRIM65基因表达可降低脑胶质瘤细胞增殖率、侵袭和迁移能力,诱导细胞凋亡,其作用机制可能与调控STAT3信号通路有关     

Tmub1沉默提高Akt蛋白活性促进肝细胞增殖

目的 探讨Tmub1沉默对Akt磷酸化和肝细胞增殖及生长能力的影响.方法 应用RNAi技术对BRL-3A细胞株Tmub1基因进行沉默,采用qRT-PCR和Western blot分别检测Tmub1、Akt、p-Akt、Cyclin D1、c-myc等基因的mRNA和蛋白表达水平;采用平板集落形成实验和CCK-8检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期.结果 与对照组相比,Tmub1基因沉默后,Cyclin D1和c-myc基因mRNA表达增强(P＜0.05),p-Akt磷酸化水平以及Cyclin D1和c-myc蛋白的表达增高(P＜0.05);BRL-3A细胞的增殖及生长能力增强(P＜0.05);且处于细胞周期S+G2/M期的细胞比例明显增加(P＜0.05).通过MK2206抑制Akt磷酸化后,可显著抑制上述基因的mRNA及蛋白的表达水平,细胞的增殖及生长能力明显降低(P＜0.05),且处于S+ G2/M期的细胞比例下降(P＜0.05).结论 Tmub1沉默通过增加Akt蛋白的磷酸化及Cyclin D1、c-myc的表达水平从而促进BRL-3A细胞的增殖和生长.     

WTX基因对结肠癌细胞增殖和凋亡的作用

目的 WTX基因转染结肠癌Lovo细胞株,分析WTX基因对结肠癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 将结肠癌Lovo细胞株分为WTX基因转染组和对照组,WTX基因转染组给予WTX质粒转染,对照组给予空载质粒转染.观察WTX基因转染组和对照组WTX基因的表达情况,两组Lovo细胞株结肠癌细胞的增殖情况、凋亡情况及细胞周期变化.结果 WTX基因转染组结肠癌细胞WTX蛋白表达明显高于对照组(P＜0.05);WTX基因转染组结肠癌转染后4、7d光密度值均明显低于对照组(P＜0.05);WTX基因转染组G1期细胞比例明显高于对照组(P＜0.05),WTX基因转染组G2期和S期细胞比例明显低于对照组(P＜0.05).结论 WTX基因抑制结肠癌细胞的增殖,影响结肠癌细胞周期,对结肠癌细胞凋亡没有影响.     

MiRNA-146a通过NF-κB依赖的途径促进血管平滑肌细胞增殖

目的观察miRNA-146a对血管平滑肌细胞增殖的作用并研究其机制。方法原代培养大鼠血管平滑肌细胞,分成抑制组、对照组和正常组,采用脂质体2000分别转染miRNA-146a抑制剂(50nmol/L)、错义链(50nmol/L)、PBS,使用real time PCR方法测定转染后miRNA-146a水平,CCK8法检测转染后血管平滑肌细胞增殖,transwell法检测转染后血管平滑肌细胞迁移程度,western blot检测转染后血管平滑肌细胞核因子κBp65(NF-κBp65)与增殖细胞核抗原蛋白(PCNA)水平。结果转染48 h后,抑制组血管平滑肌细胞的miRNA-146a水平明显低于对照组和正常组(P<0.01);其增殖和迁移比例显著低于对照组和正常组组(P<0.01);其NF-κBp65、PCNA蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论 miRNA-146a可以促进血管平滑肌细胞的增殖和迁移,其机制与增加NF-κBp65表达相关。     

环孢素A对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：观察环孢素A（CsA)对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响，以探讨钙调神经磷酸酶（CaN)依赖的信号通路在血管平滑肌细胞增殖中的作用。方法；以体外培养的大鼠主动脉平滑肌细胞为模型，实验分为三组：（1）AngⅡ组，（2）CsA AngⅡ组，（3）对照组。检测细胞增殖活度（MTT法），增殖细胞核抗原（PCNA）表达（免疫组化定量技术），细胞数目（直接计数法）的变化。结果：AngⅡ组血管平滑肌细胞增殖活度（吸光度表示），PCNA表达水平（光密度值表示）和细胞数目明显高于对照组（P＜0．01或P＜0．05），CsA＋AngⅡ组血管平滑肌细胞增殖活度，PCNA表达水平和细胞数目较AngⅡ组明显降低，差异显著（P＜0．01或P＜0．05）。结论：环孢素A可显著阻滞血管紧张素Ⅱ刺激的血管平滑肌细胞增殖，这种作用可能通过抑制CaN活性，阻断CaN介导的信号传导通路所致。     

超抗原SEB及MBP诱导活化的淋巴细胞凋亡

目的 :探讨超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素 B(SEB)及髓磷脂碱性蛋白 (MBP)是诱导静息成熟的淋巴细胞凋亡 ,还是诱导活化的淋巴细胞凋亡。方法 :采用 3H- Td R掺入法、Brd U掺入及其免疫组化法动态观察了小鼠脾脏和肠系膜淋巴结中淋巴细胞的增殖反应及其 Brd U阳性细胞的形态学变化。结果 :SEB、MBP注射 2 d时淋巴细胞增殖明显 ,Brd U阳性的细胞多数是核大的淋巴母细胞 ;注射 4d时淋巴细胞增殖明显减弱 ,Brd U阳性的细胞多数是核浓缩或核断裂的凋亡细胞。而SEB、MBP和对照组中的 Brd U阴性细胞核大小基本均匀一致 ,并且对照组淋巴细胞无明显的增殖反应。结论 :SEB、MBP是诱导活化的淋巴细胞凋亡     

G蛋白偶联受体激酶4对氧化低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的研究G蛋白偶联受体激酶4(GRK4)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响。方法以大鼠胸主动脉平滑肌细胞株(A10细胞)为靶细胞,检测在不同浓度的ox-LDL(10、20、30、40、60、80 mg/L)刺激下A10细胞的增殖情况;观察ox-LDL(40 mg/L)刺激下A10细胞GRK4表达变化;用siRNA干扰A10细胞GRK4表达后,检测ox-LDL对A10细胞增殖的影响。Western blot检测GRK4蛋白表达,CCK-8检测细胞增殖活力。结果用不同浓度ox-LDL刺激A10细胞,发现ox-LDL(40 mg/L)刺激下细胞增殖幅度可达78.3%(P<0.05),且细胞GRK4蛋白表达增加[实验组(0.367 9±0.049 1),对照组(0.193 0±0.038 5),P<0.05];与对照组相比,用siRNA干扰A10细胞GRK4表达后ox-LDL对A10细胞增殖的影响明显减弱[对照组(1.050 1±0.302 9),ox-LDL刺激组(1.929 1±0.390 0),siRNA组(1.403 2±0.164 4),P<0.05]。结论 ox-LDL可增强GRK4表达,干扰细胞GRK4表达后可减弱ox-LDL诱导的大鼠平滑肌细胞的增殖。     

初级纤毛相关基因KIF3A通过Hedgehog信号通路影响口腔鳞状细胞癌增殖研究

[目的]探讨初级纤毛相关基因KIF3A通过Hedgehog信号通路对口腔鳞状细胞癌增殖能力产生的影响.[方法]选择人舌鳞癌Tca8113细胞株作为研究对象,分为KIF3A-siRNA转染组和对照组.采用蛋白印迹实验和实时荧光定量实验检测各组KIF3A、Shh、Gli1蛋白及mRNA的相对表达水平;利用MTT细胞增殖实验观察Tca8113细胞增殖能力的变化.[结果]蛋白印迹实验结果显示,与对照组比较,KIF3A-siRNA转染组KIF3A、Shh、Gli1蛋白表达水平均明显下调(P<0.05);实时荧光定量实验结果显示,与对照组比较,KIF3A-siRNA转染组KIF3A、Shh、Gli1 mRNA表达水平均明显下调(P<0.01);MTT细胞增殖实验结果显示,细胞培养24 h时两组细胞增殖间差异无统计学意义(P>0.05),细胞培养48、72 h时KIF3A-siRNA转染组增殖率较对照组明显降低(P<0.01).[结论]沉默初级纤毛相关基因KIF3A可能通过调控Hedgehog信号通路抑制口腔鳞癌的增殖能力.     

siRNA沉默YKL-40对支气管哮喘小鼠气道平滑肌增殖及迁移的影响

目的探讨小干扰核糖核酸（siRNA）沉默人软骨糖蛋白39（YKL-40）对支气管哮喘小鼠气道平滑肌增殖及迁移的影响。方法20 只健康雌性BALB/c 小鼠随机分为健康组（ n=10）和哮喘组（n =10）,采取腹腔注射抗原和雾化吸入卵蛋的方式复制哮喘模型,健康组小鼠处理与哮喘组相同,只是将致敏物换成生理盐水,留取气管和支气管进行细胞培养,两组小鼠气道壁平滑肌细胞根据转染物不同分为siRNA-YKL-40 组、阴性对照组和空白对照组,MTT法检测不同转染组小鼠气道壁平滑肌细胞增殖情况,Transwell 法检测不同转染组 小鼠气道壁平滑肌细胞迁移能力,实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测不同转染组小鼠气道壁平滑肌细胞中YKL-40、白细胞介素4（IL-4）和干扰素-γ（IFN-γ）基因和蛋白表达。结果哮喘组中siRNA-YKL-40组48～96h时细胞吸光度A值均低于阴性对照组和空白对照组,哮喘组中siRNA-YKL-40 组、阴性对照组和空白对照组48～96 h 时细胞吸光度A 值均高于健康组,差异有统计学意义（p <0.05）;哮喘组中siRNA-YKL-40 组迁移细胞数（86.38±8.61）个,低于阴性对照组和空白对照组,哮喘组迁移细胞数均高于健康组,差异有统计学意义（p<0.05）;哮喘组和健康组中siRNA-YKL-40 组-40 基因和蛋白相对表达量均低于阴性对照组和空白对照组（ p<0.05）,哮喘组中siRNA-YKL-40 组-4 基因和蛋白相对表达量均低于阴性对照组和空白对照组,而-γ基因和蛋白相对表达量与IFN-γ/IL-4均高于阴性对照组和空白对照组（p <0.05）,与健康组比较,哮喘组中siRNA-YKL-40 组、阴性对照组和空白对照组-4 基因和蛋白相对表达量均升高,而- 基因和蛋白相对表达量和IFN-γ/IL-4均降低,差异有统计学意义（p <0.05）。结论靶向-40 基因沉默能抑制气道壁平滑肌细胞增殖及迁移,可能与调节IL-4/IFN-γ失衡状态而减少气道炎症反应有关。     

PDGF-induced proliferation of smooth muscular cells is related to the regulation of CREB phosphorylation and Nur77 expression

This study examined the relationship between PDGF-induced proliferation of vascular smooth muscle cells (VSMCs) and Nur77 expression and the effect of atorvastatin on VSMC proliferation and Nur77 in PDGF-treated VSMCs. Rat VSMCs were isolated and cultured. After incubation with atorvastatin or Nur77 siRNA, the cells were stimulated with PDGF and detected for BrdU incorporation to measure the proliferation of the VSMCs. Quantitative PCR and Western blotting were used to determine the Nur77 protein and the CREB phosphorylation level, to observe their relations with PDGF-induced VSMC proliferation. Our results showed that PDGF increased the BrdU incorporation in VSMCs, suggesting that it induced the proliferation of the cells. The VSMC proliferation was associated with increased Nur77 expression and elevated CREB phosphorylation. Atorvastatin inhibited the PDGF-induced VSMC proliferation, suppressed Nur77 expression. After silencing of Nur77 gene, the PDGF-induced VSMC proliferation was decreased. It was concluded that PDGF-induced VSMC proliferation was related to the Nur77 expression and CREB phosphorylation. Atorvastatin reduced the Nur77 expression and, at the same time, inhibited the VSMC proliferation.     

p27基因对血管平滑肌细胞中连接蛋白43表达的影响

目的 研究连接蛋白43(Cx43)在p27基因抑制血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中的作用.方法 以携带大鼠p27基因表达序列的复制缺陷型5型腺病毒载体(AdCMV-p27)转染VSMC后,应用免疫细胞化学染色检测p27和Cx43表达的变化;应用3H标记的胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入试验观察p27基因表达增强对VSMC增殖的影响.结果 (1)Ad-CMV-p27转染前,血小板衍化生长因子BB(platelet.derived growth factor,PDGF-BB)下调P27蛋白的表达,AdCMV-p27转染后,无论有无PDGF-BB刺激,VSMC中P27蛋白的表达均比转染前显著增高.(2)AdCMV-p27转染使VSMC中Cx43蛋白的表达基本恢复至有丝分裂原刺激前状态.(3)AdCMV-p27转染使VSMC的.H.TdR掺入量均较未转染组显著降低.结论 p27基因对Cx43表达的调控,使细胞间连接通讯得到维护,是其抑制VSMC增殖的重要机制之一.     

Caveolin-1与兔蛛网膜下腔出血模型基底动脉平滑肌增殖的关系

目的观察兔蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)模型基底动脉小窝蛋白-1(Caveolin-1)和血小板源性生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)随时间表达变化情况,分析caveolin-1与动脉中膜平滑肌细胞增殖的关系。方法采用随机数字表法将76只新西兰大白兔完全随机分为空白对照组、假手术组和SAH组,空白组(各8只)不施加任何因素干扰,SAH组通过枕大池2次注血模拟脑血管痉挛病理过程,假手术组以生理盐水代替自体动脉血。于2次注血完毕后第1、3、5、7、14天取材,进行基底动脉组织学观察;RT-PCR、Western blot检测caveolin-1及PDGF mRNA转录及蛋白表达的变化规律。结果 SAH组基底动脉中膜滑肌层第7天增厚最为明显(39.92±4.07)μm,较sham组(10.78±2.14)μm显著增厚(P<0.01),第14天恢复正常;SAH组caveolin-1 mRNA转录水平上调,第5天达峰(63.41±4.47)%,较sham组(11.75±1.84)%显著上调(P<0.01),蛋白表达则持续下降,第7天(13.78±0.59)%较sham组(37.63±0.85)%显著下调(P<0.01);SAH组PDGF mRNA转录水平第3天(64.45±4.00)%较sham组(11.13±1.20)%显著上调(P<0.01),蛋白表达于第7天达峰(40.67±0.81)%,较sham组(15.42±1.00)%显著上调(P<0.01);Cavelin-1蛋白表达与基底动脉中膜平滑肌层厚度呈显著负相关(r=-0.89,P<0.01)。结论 Caveolin-1蛋白在SAH后脑血管平滑肌细胞增殖过程中持续下调,可能是抑制血管痉挛平滑肌增殖反应的潜在靶点。     

外泌体环状RNA 30741在小鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的 探讨环状RNA在血管平滑肌细胞增殖过程中的作用。方法 在体外原代培养小鼠血管平滑肌细胞,采用不同浓度（10~50 ng/mL）的血小板源性生长因子-BB（PDGF-BB）诱导血管平滑肌细胞（VSMC）增殖。在给予PDGF-BB诱导48 h后,采用细胞计数和BrdU法检测血管平滑肌细胞增殖;同时采用高速离心法分离培养液中外泌体,提取外泌体中总RNA,利用Real-time PCR法检测外泌体中6种环状RNA（环状RNA 30741、1853、723、3069、1776、1092）的表达情况,在Circbase等数据库对环状RNA的靶小分子RNA进行生物信息学分析。结果 与对照组（Vehicle）相比,给予10 ng/mL PDGF-BB刺激后血管平滑肌细胞的数目和BrdU OD值没有明显变化（vs Vehicle, P>0.05）,20~50 ng/mL的PDGF-BB刺激后血管平滑肌细胞数目和BrdU OD值呈浓度依赖性增加（vs Vehicle, P<0.05）。在血管平滑肌细胞增殖过程中,环状RNA 1853、723、3069、1776、1092的表达水平无明显变化（P>0.05）,环状RNA30741的表达水平上调（P<0.05）,且环状RNA 30741的mRNA水平与VSMC的细胞数呈显著正相关性 (P<0.05)。生物信息学分析提示环状RNA 30741的靶小分子RNA包括小分子RNA-21等。结论 环状RNA 30741可能参与了血管平滑肌细胞的增殖过程。     

Geminin基因RNA干扰对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的以RNA干扰抑制血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)Geminin基因的表达观测VSMCs增殖情况及表型标志物。方法分别利用RT-PCR,Western blot检测VSMCs中Geminin基因、蛋白表达的变化,筛选出干扰效果最为显著的序列用于构建慢病毒包裹的稳定干扰模型。应用[3H]-TdR、EdU掺入试验检测VSMCs增殖的情况;同时使用Western blot分别检测干扰前后相关标志性基因的表达。结果①siRNA转染后,以第1亚组干扰效果最为显著,与另外2个阳性亚组及对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。②[3H]-TdR、EdU掺入实验显示:阳性干扰组的掺入量较两对照组明显升高(P<0.05)。③siRNA转染使Geminin基因表达减弱后,阳性组VSMCs合成型标志物骨桥蛋白(osteopontin,OPN)表达水平显著升高,收缩型标志物平滑肌肌动蛋白(smooth muscle actin,α-Actin)表达水平明显降低,与对照组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 RNA干扰介导的Geminin基因沉寂可显著增强VSMCs的增殖能力,并有助于VSMCs的表型由收缩型向合成型转化。     

缓激肽对血小板源性生长因子诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖中一氧化氮及其合酶基因表达的影响祆

目的 探讨缓激肽在对血小板源性生长因子（ＰＤＧＦ）诱导的培养的大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）增殖的影响中一氧化氮（ＮＯ）含量与诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）ｍＲＮＡ表达的变化。方法 取ＳＤ大鼠胸主动脉平没肌细胞进行培养,传至４～６代,分成以下几组：１．对照组;２．ＰＤＧＦ组（５０ｎｇ／ｍｌ）;３．ＰＤＧＦ＋缓激肽（１０＾－４ｍｏｌ／Ｌ组;４．ＰＤＧＦ＋缓激肽＋Ｈｏｅ１４０（１０＾－４ｍｏ     

茶多酚对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的　探讨茶多酚对离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响。方法　体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞 ,应用不同剂量的茶多酚作用 2 4 h后 ,采用 MTS/ PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态。应用流式细胞术测定细胞周期。结果　与对照组相比 ,茶多酚对血管平滑肌细胞增殖具有明显的抑制作用 (P<0 .0 0 1)。流式细胞术检测结果表明 ,茶多酚可以使血管平滑肌细胞大部分处于 G0 / G1 期 ,与对照组相比有明显差异 (P<0 .0 5 ) ,并且可以诱导其凋亡。结论　茶多酚可明显抑制离体大鼠血管平滑肌细胞的增殖。     

三七总皂苷对大鼠血管平滑肌细胞增殖模型细胞周期相关蛋白表达的影响

目的研究三七总皂苷(TPNS)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖细胞周期相关蛋白表达的影响。方法以血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)诱导大鼠VSMC,观察含药血浆对VSMC增殖的影响,以免疫荧光流式细胞术测定增殖细胞核抗原(PCNA)及细胞周期相关蛋白的表达。结果血小板衍生生长因子(PDGF)剌激VSMC后,VSMC PCNA、VSMC细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)蛋白表达增强,细胞周期抑制因子P21蛋白表达下调。阿托伐他汀含药血浆和TPNS含药血浆均可抑制PDGF诱导的VSMC PCNA、cyclinD1和CDK4蛋白表达增强及P21蛋白表达下调。TPNS与阿托伐他汀比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PDGF剌激VSMC后,可促进细胞周期转化,细胞增殖加快。阿托伐他汀、TPNS可抑制PDGF诱导的VSMC增殖,其作用可能是通过抑制了细胞周期相关调节蛋白的表达,从而抑制了VSMC细胞周期转化和增殖。     

RNA干扰血管平滑肌细胞高血压相关基因FXYD5表达及其功能研究

目的：通过RNA干扰（RNAi）技术特异性沉默大鼠胸主动脉平滑肌细胞（CRL-1444）高血压相关基因FXYD5的表达,探索该基因在高血压发病机制中的作用.方法：设计并合成4个针对大鼠FXYD5基因的特异性siRNA片段（siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3、siRNA-4）,以含非特异性编码序列的siRNA-con为对照.将上述4个片段及阴性对照通过阳离子脂质体法转染进大鼠胸主动脉平滑肌细胞株（CRL-1444）内,采用CCK-8法检测FXYD5基因特异性沉默后对平滑肌细胞增殖的影响,采用划痕法（Woundhealing法）检测FXYD5基因特异性沉默后对细胞迁移力的影响,采用超微量Na＋-K＋-ATPase测试盒检测FXYD5基因特异性沉默后对细胞膜Na＋-K＋-ATPase活性的影响.结果：荧光实时定量PCR结果显示siRNA-1使FXYD5的mRNA表达与空白对照组相比下降86.71％（P＜ 0.01）;siRNA-2使FXYD5的mRNA表达与空白对照组相比下降90.17％（P＜ 0.01）;siRNA-con对照组与空白对照组FXYD5的mRNA表达差异无统计学意义（P＞ 0.05）.CCK-8法检测结果显示siRNA-1、siRNA-2两组与对照组间细胞增殖能力差异无统计学意义（P＞0.05）.划痕法检测细胞迁移力结果显示siRNA-1和siRNA-2两组平滑肌细胞迁移力低于siRNA-con对照组和空白对照组,差异有统计学意义（P＜ 0.01）.Na＋-K＋-ATPas活性检测结果显示siRNA-1和siRNA-2两组平滑肌细胞Na＋-K＋-ATPas活性低于siRNA-con对照组（P＜ 0.05）和空白对照组（P＜0.01）.结论：RNAi技术能特异性沉默大鼠胸主动脉平滑肌细胞的FXYD5基因的表达水平;特异性沉默FXYD5基因表达后血管平滑肌细胞的增殖能力无明显变化,而细胞迁移力和细胞膜的Na＋-K＋-ATPase活性明显降低.     

c-Fos基因RNA干扰对大鼠血管平滑肌细胞表型及迁移的影响

 目的以RNA干扰抑制血管平滑肌细胞（VSMC） c-Fos基因,探讨c-Fos基因表达抑制后c-Fos siRNA 对平滑肌细胞表
型转换及迁移的作用。方法设置正常对照组、阴性siRNA 组及阳性siRNA 转染组。应用RT-PCR半定量法检测VSMC
中c-Fos和α平滑肌肌动蛋白（α-SM-actin）mRNA 的水平,采用Western blot 检测琢-SM-actin、碱性成纤维细胞生长因子
（bFGF）、内皮素1（ET-1）蛋白活性的变化,应用免疫荧光染色检测平滑肌分化标志蛋白琢-SM-actin,同时应用Transwell 检测平
滑肌细胞迁移能力。结果c-Fos siRNA 转染后阳性siRNA转染组c-Fos基因表达水平降低,而正常对照组与阴性siRNA组比
较c-Fos基因表达水平无统计学差异。siRNA 转染使c-Fos表达减弱后,VSMC 中α-SM-actin mRNA 和蛋白表达较正常对照组及
阴性siRNA组显著上调,bFGF、ET-1 表达减弱,VSMC 迁移速度减慢。结论RNA 干扰介导的c-Fos基因沉寂可在诱导VSMC
分化的同时抑制VSMC 迁移。