顺铂干预对A549中干细胞因子Nanog表达及侵袭力的影响

目的研究顺铂干预肺癌细胞系A549 72 h后检测Nanog在细胞中的表达及侵袭力的变化,探讨干细胞因子Nanog和肺癌顺铂耐药之间的相关性,试图解释临床上化疗耐药的原因。方法肺癌细胞系A549顺铂干预72 h后通过RT-PCR和免疫细胞化学检测干预前后细胞中Nanog在mRNA和蛋白的水平表达情况,通过Transwell体外侵袭实验检测顺铂干预前后侵袭力的改变。结果肺癌细胞系A549顺铂干预72 h后干细胞基因Nanog mRNA和Nanog蛋白表达增高,顺铂干预后穿膜细胞数[(66±9)个]高于干预前[(40±6)个],差异有统计学意义(P<0.05),侵袭力增强。结论低浓度顺铂只能杀死普通癌细胞,不能杀死癌干细胞,此可能是癌细胞生长增殖、耐药和侵袭转移的主要原因。解释了传统化疗只能短暂控制肺癌的发展,而不能根治肺癌,用药不久出现耐药、癌细胞以更快的速度生长、侵袭转移这些现象。     

热休克蛋白B1在U251细胞株及其干细胞中的差异性表达对肿瘤细胞凋亡的影响

目的探讨热休克蛋白B1(heat shock protein B1,HSPB1)在U251细胞株及其干细胞中差异性表达对肿瘤细胞凋亡的影响。方法采用无血清培养基培养U251细胞,获得U251干细胞;应用细胞免疫荧光染色法检测CD133和nestin鉴定胶质瘤干细胞;应用iTRAQ技术对U251细胞株及其干细胞进行HSPs差异性分析;应用MTT法、Western blot和RT-PCR观察经卡莫司汀干预后,肿瘤细胞凋亡与HSPB1蛋白、基因表达变化的关系。结果在未经卡莫司汀干预的胶质瘤与胶质瘤干细胞的HSPB1的蛋白比值为0.523;经卡莫司汀干预U251及其干细胞后,HSPB1蛋白含量分别升高了1.4、3.3倍,HSPB1 mRNA分别升高1.5、3.6倍,经相同浓度的卡莫司汀干预后的U251细胞生长受到抑制,而U251干细胞无明显抑制。结论 HSPB1参与U251胶质瘤干细胞化疗抵抗过程,对肿瘤细胞增殖、凋亡起着重要的调控作用。     

胶质瘤细胞系U251中Nanog基因的研究

目的 Nanog作为全能性或多能性干细胞标志物,在胶质瘤细胞系中的研究甚少。本研究通过免疫组织化学来探讨Nanog基因在U251胶质瘤细胞系中的表达情况,以及全反式维甲酸(ATRA)对胶质瘤细胞系U251的诱导分化情况。方法采用免疫组织化学染色法从蛋白质水平检测U251胶质瘤细胞系Nanog的表达情况,以及应用化疗药物全反式维甲酸(ATRA)作用前以及作用后1、2、3d Nanog蛋白的表达情况。结果 ATRA作用前免疫组化结果显示大量细胞表达Nanog蛋白,主要位于胞浆内,胞核内有少量表达,少数细胞完全不表达;ATRA作用1、2、3d后的的细胞爬片结果显示有些许细胞变圆,少量的细胞漂浮于培养基内,Nanog蛋白的表达情况同ATRA作用前相比有了减少,并且随着作用时间的延长表达愈来越少。结论 Nanog基因在胶质瘤细胞系U251中表达,诱导分化剂ATRA能够降低Nanog的表达,并且随着作用时间的延长表达越来越少。     

胶质瘤组织和细胞系中 Nanog 基因启动子区甲基化检测

目的：检测胶质瘤组织和细胞系中 Nanog 基因启动子区甲基化状态与 Nanog 基因的表达,并探讨其在胶质瘤发展中的作用。方法采用甲基化特异性 PCR(MSP)法分别检测正常脑组织、胶质瘤组织、胶质瘤癌旁组织、胶质瘤细胞系 U87和 U251中 Nanog 基因启动子区甲基化状态,实时定量 PCR(RT-PCR)法检测相应组织和细胞系中 Nanog 表达情况。结果 MSP 法检测胶质瘤组织 Nanog 基因启动子区呈非甲基化状态,且非甲基化检出率(58．82%)高于癌旁组织(13．63%),差异有统计学意义(χ2=14．852,P <0．01)。对MSP 法检测结果行灰度值分析,高级别胶质瘤中 Nanog 基因启动子区非甲基化程度高于低级别组。 U87和 U251细胞系中 Nanog 基因启动子区呈非甲基化状态。 RT-PCR 结果显示高级别胶质瘤中 Nanog mRNA 相对表达量高于低级别组, U87和 U251细胞系中 Nanog mRNA 的转录明显增多。结论胶质瘤中 Nanog 基因启动子区呈非甲基化状态,且可能促进 Nanog 基因的转录,影响胶质瘤的发生与发展。     

CREB参与胶质瘤细胞多药耐药分子机制的研究

目的 分析CREB基因参与胶质瘤U251细胞系多药耐药的形成及可能存在的机制. 方法 免疫组化法检测各级别脑胶质瘤标本中CREB水平差异;分布诱导法建立胶质瘤U251耐药细胞系U251/TR;Crispr/cas9特异性敲除耐药株的CREB基因,流式细胞分析术(FCM)检测药物干预下细胞凋亡情况;Western blotting、rt-PCR检测ABCG2、MGMT、MRP及P-gp基因表达水平. 结果 成功培养出稳定的脑胶质瘤耐药细胞系U251/TR,耐药倍数为7.特异性敲除耐药株CREB基因获得U251/RC细胞系,TMZ干预下U251/RC凋亡水平远高于U251/TR.Western及rt-PCR测定结果显示,U251/RC的ABCG2、MGMT、MRP及P-gp表达水平均明显降低. 结论 CREB通过多种机制参与调控下游ABCG2、MGMT、MRP及P-gp的表达水平,参与胶质瘤细胞多药耐药性的产生与发展.     

胶质瘤U251细胞及其干细胞抗凋亡与多重耐药基因的关系

目的利用培养成功的U251胶质瘤干细胞,探讨其抗凋亡和耐药基因的表达差异。方法WST-8法检测胶质瘤干细胞增殖活性,实时荧光定量RT-PCR技术检测Livin、Livinα、Livinβ、Survivin和MRP1、MRP3 mRNA的表达。结果单层培养的U251细胞比胶质瘤干细胞表现出更强的增殖活性;U251胶质瘤干细胞Livin、Livinα、Livinβ、Survivin和MRP-1 mRNA表达量较U251单层培养细胞表达量都有不同程度的升高,而MRP-3 mRNA表达量降低。结论U251胶质瘤干细胞抗凋亡和MRP-1 mRNA表达量较U251单层培养细胞表达量有不同程度的升高,提示胶质瘤干细胞比较其同源的肿瘤细胞具有更强的耐药性,这可能是肿瘤耐药的机制。     

过表达缝隙连接蛋白Cx43与人脑胶质瘤细胞U251侵袭性的研究

目的 通过上调脑胶质瘤细胞U251的Cx43表达水平,检测其对U251侵袭能力的影响,为抑制肿瘤的恶性浸润提供新的治疗途径.方法 通过构建缝隙连接蛋白Cx43真核表达重组质粒,并转染U251细胞,过表达U251细胞缝隙连接蛋白Cx43,RT-PCR及Weston-blot检测Cx43 mRNA及蛋白表达水平变化.用Traswell细胞培养板结合MTT法测定U251细胞侵袭能力的改变.结果 (1)成功构建pCMV-Cx43 cDNA重组质粒.(2)成功转染U251细胞并筛选稳定转染过表达Cx43细胞株.(3)Traswell细胞培养板结合MTT法,检测到过表达Cx43后U251细胞侵袭能力较正常组下降.结论 过表达缝隙连接蛋白Cx43能抑制人脑胶质瘤细胞U251侵袭能力.     

下调Pygo2抑制脑胶质瘤U251细胞增殖、侵袭及其cyclin D1的表达

目的构建RNA干扰(RNAi)重组体抑制Pygo2的表达,并探讨其对脑胶质瘤U251细胞增殖、侵袭的影响及其机制。方法针对Pygo2cDNA序列设计并合成一对特异性的含有短发卡的寡核苷酸序列及其阴性对照序列,经退火后插入pSuper中构建重组体。经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定和DNA测序后,用脂质体2000将其转染脑胶质瘤U251细胞,采用实时定量PCR和蛋白质印迹方法检测Pygo2shRNA对U251细胞Pygo2mRNA和蛋白表达的干扰效果,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期分布,BrdU掺入法检测DNA合成,Transwell检测细胞侵袭。采用蛋白质印迹和免疫荧光法检测Pygo2shRNA对U251细胞cyclin D1、β-catenin蛋白水平和亚细胞定位的影响。结果双酶切和测序鉴定证实插入序列完全正确;Pygo2shRNA显著抑制了U251细胞Pygo2mRNA和蛋白的表达;Pygo2shRNA抑制U251细胞Pygo2表达后,细胞增殖显著降低,细胞更多地阻滞在G1期,且BrdU掺入显著减少,侵袭细胞数显著减少。此外,抑制Pygo2表达可显著下调U251细胞cyclin D1的表达但不改变其亚细胞定位。U251细胞β-catenin表达及其亚细胞定位无明显改变。结论成功构建了抑制Pygo2表达的重组载体。抑制Pygo2表达能有效地抑制脑胶质瘤U251细胞DNA合成,可能通过下调Wnt信号靶基因cyclin D1的表达,使细胞阻滞于G1期而抑制细胞增殖和侵袭。     

神经黏附分子NECL1抑制神经胶质瘤细胞的迁移、侵袭并诱导其分化

目的 在NECL1表达缺失的神经胶质瘤细胞系中探讨神经黏附分子NECL1恢复表达后对肿瘤细胞迁移及侵袭的影响.方法 在U251胶质瘤细胞系中,通过划痕及Transwell实验观察NECL1恢复表达后对肿瘤细胞迁移及侵袭的影响,通过对细胞外金属蛋白酶活性的检测证明NECL1恢复表达后对肿瘤侵袭能力的影响.利用不同培养密度的U251细胞,对NECL1恢复表达后细胞形态进行观察,并通过Western blot实验验证相关蛋白的表达.结果 在NECL1表达缺失的胶质瘤细胞系U251中,恢复NECL1的表达后,肿瘤细胞的迁移及侵袭受到了抑制. NECL1恢复表达的U251细胞有向星形胶质细胞分化的趋势,星形胶质细胞标志蛋白神经胶质纤维酸性蛋白的表达上调.结论 神经黏附分子NECL1作为一个潜在的胶质瘤抑制因子,对肿瘤细胞的迁移和侵袭能力均有不同程度抑制作用,同时,NECL1具有诱导神经胶质瘤U251细胞向星形胶质细胞方向分化的潜能.     

miR-638通过靶向调控Notch 4促进神经胶质瘤细胞的侵袭能力

目的 研究微小RNA-638(miR-638)在恶性胶质瘤中的表达,探讨miR-638在胶质瘤细胞侵袭过程中的作用及可能机制.方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测正常神经组织、胶质瘤组织、正常胶质细胞株、胶质瘤细胞株中miR-638的表达水平;Transwell实验检测分别转染miR-638模拟物和miR-638抑制物后U251细胞侵袭水平的改变;生物信息学预测和验证miR-638对Notch 4的靶向调控关系;构建Notch 4真核表达重组质粒(pCMV-Notch 4 cDNA)过表达U251细胞中的Notch 4表达水平,并检测U251细胞侵袭水平的改变.结果 miR-638在胶质瘤组织和细胞株中表达上调,而Notch 4在胶质瘤细胞中表达下调,两者表达呈负相关性;过表达miR-638使U251细胞的侵袭细胞数上升(P<0.01),而抑制miR-638表达后U251细胞的侵袭细胞数减少(P<0.01);miR-638在U251细胞中能直接靶向抑制Notch 4的表达,提升Notch 4在U251细胞中的表达能使侵袭细胞数减少(P<0.01).结论 miR-638在胶质瘤中高表达,其可能通过靶向抑制Notch 4的表达促进胶质瘤细胞的侵袭能力.     

siRNA沉默肿瘤坏死因子α诱导蛋白2表达对胶质瘤细胞侵袭及增殖的影响*

目的 探讨沉默肿瘤坏死因子α诱导蛋白2（TNFAIP2）表达对胶质瘤细胞侵袭及增殖的影响。方法 使用Lipofectamine 2000介导siRNA转染胶质瘤细胞U87和U251下调TNFAIP2 mRNA的表达;运用细胞划痕及Transwell实验检测沉默TNFAIP2表达对U87及U251细胞迁移、侵袭的影响;通过CCK-8实验检测沉默TNFAIP2表达对胶质瘤细胞U87及U251增殖的影响。结果 Lipofectamine 2000介导si-TNFAIP2转染U87及U251细胞可下调TNFAIP2 mRNA的表达;沉默TNFAIP2表达可降低胶质瘤细胞U87和U251迁移侵袭的能力;沉默TNFAIP2表达可抑制U87及U251细胞的增殖。结论 siRNA沉默TNFAIP2表达可抑制胶质瘤细胞的侵袭和增殖。     

替尼泊苷和卡莫司汀对脑胶质瘤的治疗作用及耐药的研究

目的研究联合应用替尼泊苷、卡莫司汀对脑胶质瘤细胞的杀伤作用及联合用药的耐药机制.方法测定单独或联合应用替尼泊苷、卡莫司汀两种药物对20例胶质瘤细胞的体外敏感性,检测各标本中多药耐药基因(mdr-1)表达的情况.结果①替尼泊苷、卡莫司汀的敏感性为20%、15%,联合用药为45%,经统计学分析联合应用明显优于单独用药(P<0.05);②联合用药的耐药情况(8/20)与mdr-1基因表达(7/20)符合良好(P<0.05).结论亚硝脲类和鬼臼毒衍生物联合应用对胶质瘤有较好的治疗作用,联合用药的耐药性与mdr-1的表达有关.     

LncRNA MEG3对人脑胶质瘤细胞增殖、侵袭及凋亡的影响

目的 应用靶向长链非编码RNA母系表达基因3(LncRNA MEG3)的过表达重组质粒来转染体外培养的人脑胶质瘤细胞,从而观察其对人脑胶质瘤细胞增殖、侵袭和凋亡的影响.方法 应用qRT-PCR法检测正常脑组织细胞(N)和胶质瘤细胞系U251中LncRNA MEG3 mRNA的表达情况.构建pCI-MEG3真核过表达载体,转染体外培养的人脑胶质瘤细胞系U251,作为pCI-MEG3过表达质粒组(pCI-MEG3组);空pCI质粒转染体外培养的人脑胶质瘤细胞系U251,作为空载体pCI组(pCI组);无质粒转染的人脑胶质瘤细胞系U251,作为空白对照组(Control组).采用qRT-PCR 分析LncRNA MEG3基因表达变化,Western blot法分析LncRNA MEG3相关蛋白MDM2和p53表达变化,MTT法和细胞克隆技术分析胶质瘤细胞增殖能力,Transwell技术分析胶质瘤细胞侵袭能力,流式细胞技术分析胶质瘤细胞凋亡率.结果 与正常脑组织细胞比较,胶质瘤细胞中LncRNA MEG3 mRNA表达水平降低.体外实验显示,与Control组和pCI 组比较,pCI-MEG3组 LncRNA MEG3 mRNA 及 p53蛋白表达水平均有上调(P＜0.05),MDM2蛋白表达下调(P＜0.05),细胞增殖能力受到抑制(P＜0.01),细胞侵袭能力也受到抑制(P＜0.01),细胞凋亡率升高(P＜0.01).结论 人脑胶质瘤细胞中LncRNA MEG3的表达水平低于正常人脑组织细胞,靶向LncRNA MEG3基因的过表达重组质粒能够增加人脑胶质瘤细胞内LncRNA MEG3的表达,从而抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭能力,同时增加其凋亡率.     

miRNA-210在人脑胶质瘤中表达的临床意义及其生物学效应的探究

目的:探究微小核糖核酸-210(miRNA-210)在脑胶质瘤患者组织中表达特征和其临床意义,以及其对胶质瘤细胞增殖侵袭能力的影响。方法:收集我院神经外科收治的42例脑胶质瘤及20例良性脑膜瘤患者病变组织,实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qPCR)检测患者组织中miRNA-210表达水平并采用Kaplan-Meier生存分析比较其与患者预后的关系。利用体外转染小干扰RNA(siRNA)技术干扰人脑胶质瘤细胞U251的miRNA-210表达,MTT法检测细胞增殖能力变化,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力变化。结果:miRNA-210在29例高级别脑胶质瘤中的表达高于13例低级别脑胶质瘤及20例良性脑膜瘤的表达(P<0.05);Kaplan-Meier生存曲线示高表达miRNA-210的患者预后较低表达的患者不良(P<0.05);成功转染siRNA至U251细胞中,干扰组U251细胞(U251simiR-210)miR-210表达相比对照细胞(U251control)显著下降,U251simiR-210细胞在72h时MTT溶液相对吸光度显著低于U251control细胞,U251simiR-210细胞穿透基质膜细胞数也显著少于U251control细胞。结论:miRNA-210的表达与脑胶质瘤恶性程度及患者预后密切相关,其可促进胶质瘤细胞的增殖侵袭能力,是脑胶质瘤中重要的促癌基因。     

双荧光标记的胶质瘤原位移植瘤模型的建立

目的建立一种稳定、可实时监测的胶质瘤原位移植瘤裸鼠模型。方法用带有荧光素酶(luciferase-Luc)和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein-GFP)基因的慢病毒感染U251神经胶质瘤细胞,流式细胞仪筛选稳定表达GFP-Luc荧光的细胞系,并通过CCK-8实验、细胞周期实验、Transwell肿瘤迁移及侵袭实验等评价荧光细胞的增殖、迁移和侵袭能力是否改变;将细胞接种至裸鼠大脑尾状核,建立胶质瘤原位移植瘤模型,利用小鼠活体成像系统监测脑内肿瘤的生长情况,并通过石蜡切片,HE染色评价细胞在裸鼠脑内的病理特征及成瘤能力。结果成功构建稳定表达GFP荧光和luciferase荧光的U251胶质瘤细胞系及动物模型,慢病毒整合并未改变细胞的增殖、迁移及侵袭能力;模型生长周期适中,成瘤率高,瘤体在颅内生长稳定,HE切片符合人胶质瘤特征。结论双荧光标记的胶质瘤细胞相比于传统细胞更有利于胶质瘤动物模型的实验研究;U251-GFP-Luc胶质瘤细胞裸鼠模型,其肿瘤生长和病理特性与人胶质瘤相似,且可实时观察肿瘤生长,可作为胶质瘤实验研究的理想动物模型。     

RNA干扰抑制Aurora A表达对胶质瘤U251细胞化疗敏感性的影响

目的:采用RNA干扰技术抑制人脑胶质瘤U251细胞中Aurora A基因的表达,研究其对U251细胞化疗敏感性的影响。方法:设计并合成特异性针对Aurora A基因的siRNA,转染至U251细胞中,采用RT-PCR和Western blot检测Aurora A mRNA和蛋白表达情况,同时利用MTT试验和流式细胞仪检测在化疗药物尼莫司汀(ACNU)作用下转染Aurora A siRNA前后U251细胞增殖及凋亡情况的变化。结果:转染Aurora A siRNA后,U251细胞Aurora A mRNA表达受到抑制(P<0.01),蛋白表达水平降低。ACNU对转染Aurora A siRNA后U251细胞的增殖抑制作用明显增强(P<0.01),同时在ACNU作用下转染后U251细胞的凋亡率也显著增加(P<0.05)。结论:体外合成的针对Aurora A基因的特异性siRNA成功的抑制了U251细胞中Aurora A基因的表达,并能提高胶质瘤细胞的化疗敏感性。     

FOXP2调控PI3K/Akt信号通路抑制胶质瘤的侵袭

目的：探讨叉头框P2基因（FOXP2）对胶质细胞瘤细胞侵袭的影响。方法：采用荧光定量PCR技术与Western blot分别检测FOXP2在正常星型胶质细胞与胶质瘤细胞中的核糖核酸与蛋白表达水平。用携带FOXP2基因慢病毒质粒转染胶质瘤细胞U87和U251细胞系,通过划痕实验、Transwell侵袭实验和Western blot观察其对胶质瘤细胞侵袭性以及PI3K、Akt蛋白的影响。结果：FOXP2的表达在胶质瘤细胞U87和U251中明显低于正常星型胶质细胞。上调FOXP2后,胶质瘤细胞U87和U251细胞侵袭性明显降低,Akt与PI3K表达明显降低。结论：FOXP2通过调控PI3K/Akt通路可以在一定程度上抑制胶质瘤细胞的侵袭能力,从而延缓胶质瘤的发生发展。     

脂肪间充质干细胞培养上清对脑胶质瘤细胞凋亡、侵袭的影响

目的:了解脂肪间充质干细胞(ASC)的培养上清的抗胶质瘤特性。方法:使用ASC培养上清培养胶质瘤细胞U251、U87,采用CCK-8检测ASC的培养上清抑制胶质瘤细胞U251、U87的增殖能力。利用流式细胞仪检测Annexin-Ⅴ的表达分析U251、U87在ASC上清诱导培养后的凋亡程度。划痕试验、Matrigel侵袭试验检测ASC的培养上清降低U251、U87侵袭的能力。结果:脂肪间充质干细胞能抑制胶质瘤U251、U87细胞的增殖,Annxin-V和PI的凋亡检测表明ASC-CM能诱导U251、U87细胞凋亡。划痕实验和Metrigel实验显示U251、U87细胞的迁移性降低和侵袭能力减弱。结论:脂肪间充质干细胞培养上清均能有效诱导胶质瘤U251、U87细胞的凋亡,并且均能降低胶质瘤细胞迁移及侵袭能力。我们的发现提示ASC培养上清有良好的抗肿瘤的特性,并可能用于未来的胶质瘤的治疗。     

TKTL-1基因对神经胶质瘤细胞凋亡和迁徙的影响

目的:研究人转酮醇酶样蛋白1(TKTL-1)表达对神经胶质瘤细胞凋亡和迁徙的影响。方法:分别在神经胶质瘤组织、U87和U251神经胶质瘤细胞株中检测TKTL-1和mRNA表达水平。用RNA干扰方法(SiRNA)特异性抑制TKTL-1在U87和U251细胞株的表达。细胞增殖实验用于评估TKTL-1的迁徙侵袭能力,Annexin V/PI双染色法和流式细胞仪用于评估细胞的凋亡。结果:正常脑组织、低级别和高级别神经胶质瘤中TKTL-1 mRNA的表达水平分别为1.00±0.28、21.46±3.17和41.58±3.06。神经胶质瘤组织中TKTL-1 mRNA的表达水平高于正常脑组织(P<0.01)。高级别神经胶质瘤组织中TKTL-1 mRNA的表达水平高于低级别神经胶质瘤组织(P<0.05)。在高、低级别神经胶质瘤中,TKTL-1蛋白的阳性表达率分别为97.67%(42/43)和63.64%(14/22),高于正常脑组织(P<0.05)。流式细胞术分析显示,TKTL-1基因干扰可诱导U87和U251细胞系发生早期凋亡(P<0.05)。通过SiRNA特异性干扰TKTL-1表达后,U87和U251细胞的增殖活性降低(P<0.01)。克隆形成实验表明,通过抑制TKTL-1的表达降低了U251和U87细胞中肿瘤细胞克隆的形成(P<0.01)。蛋白质印迹分析显示SiRNA后神经胶质瘤细胞株(U251/U87)HIF-1α蛋白表达降低(P<0.01)。结论:TKTL-1在神经胶质瘤组织和细胞株中表达明显上升。特异性干扰TKTL-1的表达可减少细胞的迁徙,促进细胞凋亡。TKTL-1可作为神经胶质瘤基因治疗的潜在分子靶点,其表达水平可作为神经胶质瘤的预后指标。     

氯通道ClC-2反义寡核苷酸对顺铂作用下神经胶质瘤U251细胞侵袭力的影响

目的：探讨氯通道ClC-2 反义寡核苷酸(AON)抑制ClC-2基因表达对顺铂(DDP)作用下神经胶质瘤U251细胞侵袭力的影响,为ClC-2成为神经胶质瘤综合治疗的新基因靶点提供理论依据。方法：U251细胞按处理方法不同分为对照组（转染无义寡核苷酸）、AON组（转染ClC-2反义寡核苷酸）、DDP组（无义寡核苷酸与顺铂联用）和AON +DDP组（ClC-2反义寡核苷酸与顺铂联用）。应用RT-PCR检测相关基因ClC-2、cyclin D1 、MMP-2、MMP-9 mRNA表达;Transwell 小室侵袭实验检测各组细胞侵袭力;Transwell 小室迁移实验检测各组细胞迁移率。结果：与对照组比较,AON组、DDP组和AON +DDP组ClC-2、cyclin D1 、MMP-2、MMP-9 mRNA表达率降低（P＜0.05）;Transwell 小室侵袭实验中对照组、AON组、DDP组和AON +DDP组侵袭细胞数分别为81.00±4.58、42.01±4.36、48.33±2.52和12.67±5.13;与对照组比较,AON组、DDP组和AON +DDP组穿透细胞数明显降低（P＜0.05）。Transwell 小室迁移实验中AON 组、DDP组、AON +DDP组细胞迁移率（%）分别为72.40±2.20、51.48±1.29、37.87±1.50,与对照组比较均明显降低（P＜0.05）。结论：①转染ClC-2反义寡核苷酸能有效抑制ClC-2 mRNA表达;②抑制ClC-2 mRNA能降低U251细胞的迁移力和侵袭力;③ClC-2 mRNA表达降低可促进顺铂对U251细胞迁移力和侵袭力的抑制作用。