供体脾细胞输注诱导小鼠移植耐受及其机理的研究

目的以持续供体脾细胞输注的方法建立异基因嵌合体动物模型,并探讨移植耐受形成的机制。方法BALB/c（H-2     

CTLA-4-FasL融合分子的构建及其生物学特性的鉴定

文章通过特异的引物分别扩增出CTLA 4和FasL胞外区的cDNA ,将它们拼接后 ,克隆入真核表达载体pcDNA3 1( + )中 ,进行表达、纯化 ,获得CTLA 4 FasL融合蛋白。Westernblot分析显示了该融合蛋白具有CTLA4 胞外区和FasL胞外区的抗原性。体外试验表明 ,该融合蛋白可以结合Jurkat细胞表面的Fas受体和Raji细胞表面的B7分子 ,表明了该分子双特异性的特点。该融合蛋白能够直接诱导Jurkat细胞发生凋亡 ,且此凋亡效应伴随Raji细胞的参与而增强 ,初步证实了该分子的免疫抑制效应 ,从而为进一步研究该融合蛋白特性及应用奠定了基础。     

供体骨髓细胞输注促进小鼠皮肤移植耐受及其机理的研究

目的　探索“细胞 +环磷酰胺 (cyclophosphamide ,CP)”系统联合抗H 2 b 单克隆抗体、供体骨髓细胞输注诱导移植耐受的作用及其机制。方法　第 0天 ,经尾静脉给C5 7BL/ 6 (H 2 b,B6 )小鼠注入 10 8BALB/c(H 2 d,B/c)来源的脾细胞 ,第 2天 ,腹腔注射环磷酰胺 2 0 0mg/kg ,第 3、5天 ,分别经尾静脉注入抗H 2 b 单抗 ,剂量为 40 0 μg/ 0 .5ml,第 8天进行皮肤移植。皮肤移植后 1周 (第 15天 ) ,输入 2× 10 7供体BALB/c来源的骨髓细胞。观察皮肤移植物存活时间 ,并于第 30天对耐受B6小鼠作混合淋巴细胞反应 (mixedlymphocytereaction ,MLR) ,迟发型超敏反应 (delayedtypehypersensitivity ,DTH)等确定耐受的状态。并通过过继转移实验、嵌合体检查及脾细胞中细胞因子mRNA的表达情况 ,进一步探讨耐受形成的机制。结果　采用此诱导方案 ,B6小鼠对BALB/c小鼠的皮肤移植物长期存活。耐受可以被过继转移 ;耐受小鼠胸腺内的嵌合程度与耐受的维持密切相关 ;TH1型细胞因子在耐受小鼠中明显降低 ,而TH2型细胞因子明显升高。结论　“细胞 +CP”系统联合H 2 b 单克隆抗体、供体骨髓细胞输注能够诱导异基因小鼠皮肤移植耐受。耐受机制与胸腺嵌合体的存在密切相关。克隆无能 (aner gy)、抑制细胞和TH1/TH2偏移在耐受中也     

CTLA-4 Ig腺病毒基因治疗联合供体细胞输注诱导混合嵌合体和大鼠心脏移植耐受

目的　在心脏移植手术中实施CTLA 4Ig腺病毒基因治疗并联合术后输注供体骨髓细胞 ,诱导异基因大鼠心脏移植耐受 ,并对相关机制进行研究。方法　将异基因DA大鼠的心脏移植给受体LEW大鼠 ,同时经门静脉输注供体DA的脾细胞 (SC ,3× 10 8)、CTLA 4Ig腺病毒 [( 1～ 5 )× 10 9PFU ml],第 4天由舌静脉输注DA的骨髓细胞 (BMC ,3× 10 8)。观察、记录心脏移植物的存活时间。并对皮肤移植的受体作同样处理 ,观察皮肤移植存活情况。通过MLR、IL 2逆转实验及嵌合体的测定 ,探讨耐受机理 ,并检测了CTLA 4Ig的体内表达、TH1 TH2型细胞因子的表达。结果　单用CTLA 4Ig腺病毒基因治疗 ,或CTLA 4Ig腺病毒基因治疗联合单独的供体脾细胞或骨髓细胞能不同程度地延长异基因心脏移植物的存活 ,但不能延长皮肤移植物的存活。脾细胞、CTLA 4Ig腺病毒和骨髓细胞(SC Ad BMC)处理组的心脏移植物存活时间明显超过其它各耐受诱导组 ,并且能够诱导皮肤耐受。RT PCR实验证明 ,在受体内不同的组织CTLA 4Ig基因的表达量有所不同 ,并且随着时间的推移表达下降。TH1和TH2型细胞因子的检测显示 ,耐受大鼠体内未发现这两类细胞因子的偏移现象。MLR证明耐受大鼠的免疫应答表现为供体特异性降低 ,IL 2逆转实验、嵌合体检测表明 ,该耐受可能与     

原代人脐静脉内皮细胞分泌IL-1的研究

为探讨内皮细胞作为抗原提呈细胞（APCs）的功能，培养原代人脐静脉内皮细胞（HUVEC），观察了其在某些因素影响下，分泌白细胞介素1（IL-1）的情况。结果表明，细菌脂多糖（LPS）可诱导HUVEC释放IL－1，增加LPS的浓度或延长其诱导时间，可提高IL-1的释放活性。γ干扰素（IFNγ）可协同LPS促进HUVEC释放IL－1。协同诱导的动力学表明：IFNγ对LPS诱导HUVEC释放IL－18h之前无明显效应，24h后，协同促进效应明显提高。     

IL－10对大鼠佐剂性关节炎的治疗及免疫机理探讨

形成佐剂性关节炎（ＡＡ）的动物模型，研究ＩＬ－１０的抗炎作用及其机理。结果表明，经腹腔注射ＩＬ－１０后能改善ＡＡ大鼠病情，用ＩＬ－１０治疗取得显效后，ＡＡ大鼠血清及关节液内炎症细胞因子ＩＬ－１，６，８，ＴＮＦ水平均明显下降，腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞分泌细胞因子的能力均受到抑制。表明ＩＬ－１０是通过抑制炎症细胞因子的产生而发挥治疗作用的。此项研究为用ＩＬ－１０治疗人风湿性关节炎（ＲＡ）等难治性炎症性疾病提供了理论和实验依据     

替尼泊苷和卡莫司汀对脑胶质瘤的治疗作用及耐药的研究

目的研究联合应用替尼泊苷、卡莫司汀对脑胶质瘤细胞的杀伤作用及联合用药的耐药机制.方法测定单独或联合应用替尼泊苷、卡莫司汀两种药物对20例胶质瘤细胞的体外敏感性,检测各标本中多药耐药基因(mdr-1)表达的情况.结果①替尼泊苷、卡莫司汀的敏感性为20%、15%,联合用药为45%,经统计学分析联合应用明显优于单独用药(P<0.05);②联合用药的耐药情况(8/20)与mdr-1基因表达(7/20)符合良好(P<0.05).结论亚硝脲类和鬼臼毒衍生物联合应用对胶质瘤有较好的治疗作用,联合用药的耐药性与mdr-1的表达有关.     

rTNF_(-α)、IFN_(γ)对人脐静脉内皮细胞表达粘附分子的影响

为了研究细胞因子ｒＴＮＦ α、ＩＦＮγ对内皮细胞表达粘附分子的影响,及ｒＩＦＮγ对ＴＮＦ α的协同效应。采用ｒＴＮＦ α、ＩＦＮγ诱导培养的人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）,以Ｃｅｌ ＥＬＩＳＡ法检测粘附分子ＩＣＡＭ １、ＥＬＡＭ １和ＶＣＡＭ １的表达。结果表明,ｒＴＮＦ α以浓度和时间依赖的方式诱导ＨＵＶＥＣ表达ＩＣＡＭ １、ＥＬＡＭ １和ＶＣＡＭ １,ＩＦＮγ促进ｒＴＮＦ α诱导的ＶＣＡＭ １表达。ＩＦＮ α对ｒＴＮＦ α诱导效应无影响。提示ｒＴＮＦ α可诱导ＨＵＶＥＣ表达粘附分子,而ＩＦＮγ可促进ｒＴＮＦ α诱导的ＨＵＶＥＣ表达ＶＣＡＭ １。