环境对低氧缺血性脑损伤新生鼠海马GFAP表达的影响

目的 研究不同环境刺激对低氧缺血性脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage,HIBD）新生大鼠海马胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）表达的影响。方法按RiCC法制备7日龄sD大鼠HIBD模型,随机分为3组：丰富环境组（enriched environment,EE）、贫瘠环境组（impoverished environment,IE）和标准环境组（standard environment,SE）。另设假手术组（Sham）。各组大鼠于术后第1天开始分别给予不同环境刺激。术后第28天,通过穿梭箱实验测试学习记忆能力,免疫组织化学染色检测海马GFAP的表达。结果在学习记忆能力上,IE组明显差于Sham组、SE组和EE组（P〈0．01）,SE组差于Sham组和EE组（P〈0．01）,Sham组和EE组差异无统计学意义（P〉0．05）。海马GFAP免疫组织化学染色结果显示,Sham组GFAP阳性细胞数分别低于其它3组（P〈0．01）,而EE组分别高于SE组和IE组（P〈O．05）,IE组低于SE组,但差异无统计学意义（P〉0．05）。结论丰富环境刺激可以增加海马GFAP的表达,促进神经再生,改善学习记忆能力,而贫瘠环境刺激却使海马GFAP表达减少,阻碍神经再生,加重学习记忆能力的损害。     

环境刺激对缺氧缺血性脑损伤大鼠海马巢蛋白表达及学习记忆的影响

目的研究不同环境刺激对缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage, HIBD)新生大鼠海马巢蛋白(nestin)表达以及学习记忆能力的影响.方法按Rice法制备7日龄SD大鼠HIBD模型,随机分为3组:丰富环境组(enriched environment, EE)、贫瘠环境组(impoverished environment, IE)和标准环境组(standard environment, SE).另设假手术组.各组大鼠于术后第1天开始分别给予不同环境刺激.术后第28天,通过Morris水迷宫实验测试学习记忆能力,免疫组织化学染色检测海马nestin的表达.结果在学习记忆能力上,IE组明显差于假手术组、SE组和EE组,SE组差于假手术组和EE组,假手术组和EE组无显著差异.海马nestin免疫组织化学染色结果显示,EE组大鼠表达强于假手术组、SE组和IE组,SE组强于假手术组和IE组.结论丰富环境刺激可以增加海马nestin的表达,促进神经再生,改善学习记忆能力,而贫瘠环境刺激却使海马nestin表达减少,阻碍神经再生,加重学习记忆能力的损害.     

早期干预对未成熟大鼠脑损伤学习记忆及NMDA受体NR1亚单位表达的影响

目的 探讨早期干预对未成熟大鼠脑损伤后学习记忆及NMDA受体NR1亚单位表达的影响.方法 选2日龄SD大鼠制作未成熟大鼠脑损伤模型,随机分为丰富环境(EE)组、贫瘠环境(IE)组、标准环境(SE)组,每组20只.另选20只2日龄SD大鼠,仅分离左侧颈总动脉,不予结扎和缺氧,作为对照组(Sham).EE组于术后第3天行触摸和丰富环境干预,总干预时间为30d.标准环境组和对照组均饲养于标准环境中,不行早期干预.干预结束后行学习记忆能力检测,同时分别于生后第7、35天取各组大鼠海马脑组织免疫细胞化学检测NR1亚单位表达.结果 生后5周龄时,EE组学习记忆能力较SE组及IE组明显改善[逃避潜伏期(ELP):4.75±2.85与12.45±3.23、8.42±2.23比较,空间探索能力:61.36±8.12与50.24±8.29、40.12±7.99比较,P<0.05];且丰富环境组海马CA1区NR1阳性反应物着色最强,与标准环境组、贫瘠环境组及对照组比较差异有统计学意义(43.2±6.6与59.5±8.1、88.5±15.5、62.3±9.5比较,P<0.01).结论 早期干预可增强未成熟大鼠脑损伤的学习记忆能力,NMDA受体NR1亚单位表达增多可能是其机制之一.     

丰富环境干预对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠海马神经元影响的研究

目的 通过检测早期环境干预后缺氧缺血性脑损伤(HIBD)大鼠脑海马区存活神经元数目的 改变,探讨早期环境干预对于促进缺血缺氧的脑组织恢复及神经网络重建的可能机制.方法 7日龄Sprague-Dawley(SD)新生大鼠,采用Rice法建立HIBD模型,随机分为3组:干预组、非干预组及正常组,于建模后24h进行早期抚触和丰富环境干预,干预28d后,应用Morris水迷宫测试大鼠学习记忆能力,测量体质量,HE染色观察海马病理形态学改变,尼氏染色计数海马区存活神经元数目.结果 HE染色见干预组患侧海马轻度异常;非干预组左侧海马明显异常;正常组左侧海马无异常.神经元尼氏染色计数显示,干预组患侧海马神经元存活数目明显多于非干预组(P<0.001),与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 (1)丰富环境可减少海马区神经细胞的丢失,因此对HIBD新生鼠的神经元具有保护作用;(2)早期环境干预能显著改善HIBD大鼠的远期学习记忆功能,提示早期环境干预对保护远期学习记忆功能有重要意义.     

腺病毒载体介导血管内皮生长因子165基因治疗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤

目的 研究腺病毒介导血管内皮生长因子(VEGF)165基因转移对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的治疗作用.方法 采用细菌内同源重组技术构建腺病毒重组载体Ad-VEGF.7日龄SD大鼠随机分成3组:假手术组(20只)、HIBD(20只)、Ad-VEGF移植组(Ad-VEGF组,20只),Ad-VEGF移植组在HIBD后3 d于大鼠左侧感觉运动皮层区(坐标AP:+0.3mm,ML:-2 mm,DV:-1.5 mm)立体定位注射2μl重组体腺病毒悬液.移植后7 d采用免疫组织化学法检测鼠脑VEGF蛋白;采用原位缺口末端标记法(TUNEL法)检测鼠脑神经元凋亡情况;大鼠3～4周龄时采用T迷宫觅食实验及足错误、姿势反射、肢体放置实验对其学习记忆、空间能力和感觉运动功能等行为学进行评估;采用尼氏染色法检测鼠脑海马CAl区和皮层单位面积内神经元数目.结果 免疫组织化学法结果 显示皮层与海马Ad-VEGF组VEGF阳性细胞数均明显多于HIBD组(68.09±3.37比24.65±3.37,68.37±3.17比25.14±1.86,均P<0.05).TUNEL结果 显示Ad-VEGF组鼠脑神经元凋亡数目明显低于HIBD组(151.4±21.7比264.4±16.3,P<0.05);行为学检测结果 显示Ad-VEGF组的各项行为学测试成绩均较HIBD组有明显改善(均P<0.05),尼氏染色结果 显示Ad-VEGF组鼠脑海马CAl区和皮层单位面积内神经元数日明显多于HIBD组(70.6±2.3比55.3±2.1,95.1±2.8比70.1±2.7,均P<0.05).结论 腺病毒载体介导的VEGF165基因治疗可增加VEGF蛋白的表达,减少脑细胞凋亡、改善脑损伤后的远期行为学功能,减轻缺氧缺血后的脑损伤,具有神经保护作用.     

人骨髓基质细胞脑移植改善大鼠缺氧缺血性脑损伤

目的观察人骨髓基质细胞(BMSCs)移植对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的保护作用,探讨BMSCs脑移植治疗HIBD的可行性.方法36只新生大鼠随机分为对照组、HIBD组和移植组(均n=12).HIBD组和移植组大鼠7日龄时结扎左侧颈总动脉后吸入8%氧气2h制成HIBD模型.对照组仅分离左颈总动脉,不予结扎和缺氧.分离培养人BMSCs,损伤后3 d将BMSCs立体定位脑移植到移植组大鼠左侧感觉运动皮层.3～4周龄时,观察大鼠行为学和组织学的改变,并用免疫荧光检测移植细胞的存活情况.结果缺氧缺血后3周,HIBD组海马DG区和皮层单位面积内神经元数目较正常组减少[海马DG区:(39.2±5.6)个vs(51.1±3.9)个,P＜0.001;皮层:(12.3±3.0)个vs(17.8±3.0)个,P＜0.001].BMSCs移植后海马DG区和皮层单位面积内神经元数目[海马:(44.9±3.1)个,皮层:(17.5±3.1)个]较HIBD组增加(P＜0.01).与对照组比较,HIBD组在T迷宫、感觉运动功能测试中表现出明显的不足.BMSCs脑移植组各项行为学测试成绩较HIBD组均有明显改善.免疫荧光显示移植后3周,BMSCs在脑内存活.结论BMSCs脑移植可以改善新生鼠HIBD.     

脑发育不同阶段丰富环境刺激对大鼠海马MAP-2表达的影响

目的 探讨脑发育不同阶段丰富环境(EE)刺激对缺氧缺血性脑损伤(HIBD) 新生鼠神经可塑性的影响及机制.方法 7日龄 SD大鼠通过结扎左侧颈总动脉,吸入8%氧氮混合气,制成 HIBD 模型,分为早期干预组、晚期干预组、非干预组,另设假手术组.早期干预组于脑发育关键期内,即建模后第2天开始进行EE干预.晚期干预组于脑发育关键期后,即建模后第 23天(日龄30d)开始进行EE干预.两组干预条件一致,总干预时间为20d.各组大鼠饲养至日龄100d时用免疫组织化学法检测患侧海马微管相关蛋白-2(MAP-2)的表达水平.结果 早期干预组患侧海马MAP-2的表达明显高于晚期干预组和非干预组(P<0.01),早期干预组与假手术组差异无统计学意义(P>0.05),晚期干预组MAP-2的表达高于非干预组(P<0.05).结论 EE干预可增强神经可塑性.MAP-2在海马表达的变化,可能参与了脑发育不同阶段 EE对 HIBD神经可塑性的影响机制.     

丰富环境干预对小鼠梨状皮层锥体神经元兴奋性的影响

目的 探讨丰富环境干预下的小鼠梨状皮层锥体神经元兴奋性的变化特点.方法 选用15日龄的C57BL/6小鼠30只,随机分为丰富环境组( EE组)15只和常规环境组(SE组)15只,EE组采用丰富环境刺激饲养3周,SE组则在正常实验室环境下饲养3周.全细胞电流钳模式下记录小鼠梨状皮层锥体神经元的各电生理指标,锥体神经元的兴奋性指标包括动作电位间距( ISI)、能障( Vts-Vr)和绝对不应期(ARP).结果 与常规环境组比较,丰富环境干预下的小鼠梨状皮层神经元的ISI减小(P＜0. 05),Vts-Vr降低(P＜0.05),ARP缩短(P＜0.05).结论 丰富环境干预可提高梨状皮层锥体神经元的兴奋性,提示丰富环境可能有助于梨状皮层锥体神经元的发育成熟.     

丰富环境对慢性脑低灌注大鼠认知功能的恢复及脑血流代偿的影响

目的:观察脑微血管新生在丰富环境改善认知功能中的作用。方法:随机将大鼠分为假手术(sham)组、双侧颈总动脉结扎手术+标准环境(2VO+SE)组和2VO手术+丰富环境(2VO+EE)组。采用物体识别试验、Morris水迷宫、Western-blot及免疫组织化学法分别检测大鼠的认知、VEGF蛋白表达水平及微血管密度(MVD)。结果:2VO+SE组大鼠识别新物体能力下降,丰富环境可以缓解这种下降。2VO+SE组大鼠Morris水迷宫中逃避潜伏期延长,丰富环境自第3天起可以缩短大鼠的逃避潜伏期。2VO术后大鼠海马及皮层VEGF蛋白表达水平增加,2VO+EE组增加更显著。MVD测定提示2VO术后大鼠海马及皮层MVD增加,2VO+EE组增加更显著。结论:丰富环境可能增加慢性脑低灌注大鼠海马及皮层区微血管的代偿性增生,提高其血流恢复的代偿能力,进而改善认知功能。     

丰富环境结合水疗对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的干预效应

目的 探讨丰富环境刺激及水疗对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxia-ischemia brain damage,HIBD)的干预效应及可能机制.方法 新生7 d龄SD大鼠分为干预组、非干预组及假手术组,干预组又分为丰富环境组、水疗组、丰富环境 水疗组.干预组在HIBD第2天分别予相应干预治疗,持续28 d.以免疫组织化学法检测不同时相点海马CA1区NMDA受体NR1亚单位的表达,并于干预结束后利用Morris水迷宫测试各组学习记忆能力,透射电镜观察海马突触结构.结果 干预28 d,干预组海马CA1区NR1的蛋白表达及学习记忆能力明显高于非干预组,其中丰富环境组、丰富环境 水疗组与假手术组比较无显著性差异(P＞0.05),水疗组仍明显低于假手术组(P＜0.05).透射电镜下,干预组大鼠海马突触后膜致密物(postsynaptic density,PSD)较多,非干预组海马PSD最少,结构疏松.结论 丰富环境刺激及水疗有助于新生大鼠HIBD的恢复,其中以丰富环境刺激、丰富环境刺激联合水疗干预效果显著,海马NMDA受体表达变化是其可能的影响机制之一.     

丰富环境对缺氧缺血性脑损伤大鼠海马突触超微结构及突触素表达的影响

目的探讨早期丰富环境干预对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠海马CA1区神经元突触超微结构和突触素(p38)表达的影响.方法按Rcie法制作HIBD新生动物模型,共计20只,随机分为干预组和非干预组.同时设假手术对照组10只.干预组大鼠于术后第2天开始给予丰富环境刺激,持续20 d.干预结束后用透射电镜观察各组海马CA1区锥体神经元超微结构,免疫组化和图像分析技术检测p38的表达.结果与对照组比较,非干预组海马CA1区锥体细胞见部分核膜消失、线粒体嵴模糊、神经元突触数量减少,突触间隙增宽,突触囊泡减少,突触后致密物变薄;干预组神经元和突触无明显异常.非干预组海马CA1区突出素光密度值明显低于干预组和对照组(P<0.01),而干预组和对照组之间无显著差异(P>0.05).结论阻止或减轻HI后突触超微结构的损伤、促进突触的重建可能是丰富环境发挥作用的物质基础.     

不同发育阶段丰富环境刺激对缺氧缺血性脑损伤大鼠学习记忆的影响

目的探讨在不同发育阶段丰富环境刺激对缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)新生大鼠学习记忆能力的影响。方法7日龄SD大鼠通过结扎左侧颈总动脉,吸入8%氧氮混合气,制成HIBD模型,分为干预组(intervention)、非干预组(non-intervention),同时设假手术对照组(sham)。其中干预组根据干预开始时间又分为早期干预组(断奶前开始干预)、晚期干预组(断奶后开始干预),分别在断奶前后(生后25d)开始给予丰富环境刺激,总干预时间为20d。3月龄时测定各组学习记忆能力(Morris水迷宫),海马CA1区存活锥体神经元计数评估脑损伤程度,比较不同发育阶段丰富环境干预的效果。结果早期干预组学习记忆能力和海马存活锥体神经元数明显高于晚期干预组(P<0.01)。早期干预组与假手术组差异无显著意义(P>0.05)。结论断奶前开始给予丰富环境干预较断奶后能明显改善HIBD大鼠学习记忆能力,减轻HI后海马病理损伤程度可能是其原因之一。     

亚低温添加拉莫三嗪对缺血缺氧性脑损害的神经保护作用

目的 研究亚低温添加拉莫三嗪（LTG）对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠的神经保护作用。方法 采用左侧颈总动脉离断并置入密闭缺氧箱，制备HIBD动物模型。将56只SD大鼠随机分为4组（每组14只）：常温组；亚低温组，缺血缺氧后立即诱导亚低温并持续12h；拉莫三嗪组，脑缺血后立即按20mg／kg剂量腹腔注射拉莫三嗪；亚低温添加拉莫三嗪组，脑缺血后按20mg／kg剂量腹腔注射拉莫三嗪，诱导亚低温并持续12h。用酶标法、免疫组化法，分别检测HIBD24h后血清神经元特异性烯醇化酶（NSE）浓度、皮层NSE阳性细胞数。结果 与亚低温组比较，亚低温添加拉莫三嗪组血清NSE的浓度显著降低，皮层NSE阳性细胞数显著增多。结论 亚低温添加拉莫三嗪对缺血缺氧性脑损害具有协同保护作用。     

Nogo-A蛋白在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的表达及意义

目的 探讨Nogo-A蛋白在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤脑组织中的表达规律及意义. 方法 将 7日龄新生Wistar大鼠96只随机分为对照组(n=48)和实验组(n=48),实验组制成缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型,根据处死动物的时间点不同再随机分为HIBD后1,4,7,10,14,21 d共6个亚组,每组8只;对照组也在相应的时间点取材,每个时间点8只;采用免疫组化法检测Nogo-A蛋白在不同时间点的表达. 结果 缺氧缺血后新生大鼠出现不同程度的行为异常.Nogo-A蛋白平均灰度值在实验组术后第1,4,7,10,14,21天较对照组均降低,同一时间点实验组与对照组差异均有统计学意义(P<0.05).且随着日龄的增加,Nogo-A蛋白平均灰度值呈逐渐降低的趋势. 结论 Nogo-A蛋白广泛表达于大脑皮层,缺氧缺血性脑损伤后其表达增强,且长时间持续于高水平,可能是造成新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后神经再生障碍的重要原因之一.     

人骨髓间充质干细胞脑内移植对大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用

目的:观察人骨髓间充质干细胞(hMSCs)移植对缺氧缺血性脑损伤幼年大鼠脑功能影响及其在脑组织中的迁移、分化过程,探讨hMSCs移植对缺氧缺血性脑损伤的保护作用,为后续研究奠定基础.方法:大鼠随机分为hMSCs移植组(n=18)、移植对照组(n=18)、模型组(n=6)和假手术组(n=6).前3组均建立幼年Wistar大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型,3 d后hMSCs移植组缓慢注射约5×105 个hMSCs至大鼠的左背侧海马,移植对照组注射等体积的磷酸盐缓冲液,假手术组和模型组未移植.其中hMSCs移植组和移植对照组又随机分为5组,分别于移植后0 d、3 d、1周、2周(均n=3)和4周(n=6)处死.模型组与假手术组均于造模后31 d(即移植后4周)处死.大鼠处死前均行交替电刺激Y迷宫行为学实验,处死后取脑组织行H-E染色观察病理变化;hMSCs移植组和移植对照组大鼠同时还行免疫组化染色检测hMSCs在脑内的分布.结果:免疫组化结果显示hMSCs移植后1周主要沿脑室系统迁移,部分沿胼胝体向对侧迁移,移植后4周细胞沿脑室向周围实质迁移,广泛分布于脑组织.Y迷宫实验显示hMSCs移植组总错误次数(TE)明显少于移植对照组(5.00±2.82 vs 12.67±3.72),差异有统计学意义(P<0.05),提示hMSCs移植组大鼠空间记忆能力显著优于移植对照组.H-E染色结果显示hMSCs移植组大鼠脑组织损伤较移植对照组及模型组轻.结论:hMSCs脑内移植后可在大鼠中枢神经系统内存活并迁移,且hMSCs移植能在一定程度上促进损伤脑组织和脑功能的恢复,值得进一步研究.     

高压氧在新生鼠缺氧缺血性脑损伤神经修复中的作用机制

目的 探讨高压氧(hyperbaric oxygen,HBO)在新生鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)神经修复中的作用机制.方法 新生7日龄SD乳鼠30只,随机分为HIBD+HBO干预组、HIBD组和正常对照组,每组10只.干预组于建模后予以HBO治疗,连续7 d.采用免疫组化技术检测各组骨形态发生蛋白4(BMP-4)及神经巢蛋白(nestin)在海马的表达;采用原位杂交技术检测各组BMP-4及nestin mRNA在海马的表达;采用TUNEL方法 检测各组神经细胞凋亡.结果 3组中,干预组BMP-4蛋白在海马的表达最多,HIBD组BMP-4蛋白在海马的表达最少;干预组nestin蛋白在海马的表达最多,HIBD组nestin蛋白在海马的表达最少;干预组BMP-4 mRNA在海马的表达最多,HIBD组BMP-4 mRNA在海马的表达最少;干预组nestin mRNA在海马的表达最多,HIBD组nestin mRNA在海马的表达最少;HIBD组凋亡神经细胞最多.HBO干预组凋亡神经细胞与HIBD组差异有统计学意义(P<0.01).结论 HBO对HIBD具有神经修复作用,其作用机制可能与促进BMP-4及nesfin在海马的表达以及抑制神经细胞的凋亡有关.     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后脑组织上清液诱导骨髓基质细胞神经分化

目的:观察缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠不同时间点脑组织上清液对骨髓基质细胞(BMSCs)向神经细胞分化的影响.方法:7日龄新生SD大鼠结扎左颈总动脉制作HIBD 模型(n=15),另设 15只正常同日龄新生大鼠.两组分别在 HIBD后24h(8日龄)、72h(10日龄)及7d(14日龄)时处死(n=5).分别制备左、右脑组织上清液.将培养3～5代的SD大鼠BMSCs接种于预先置有盖玻片24孔板中,正常培养至细胞达到60%～70%融合后,分别加入上述时间点的脑组织上清液,另正常换液未加上清液组为未干预组.培养3d后行神经元特异性烯醇酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、少突胶质细胞前体细胞标记O4 的免疫荧光检测,计算阳性率.结果:未干预各组细胞仅有少量NSE,GFAP及O4的表达,正常大鼠各时间点左、右脑上清液共培养各组细胞NSE,GFAP及O4阳性率较未干预组增加(均P＜0.01),但左、右两侧比较差异无统计学意义(P＞0.05).HIBD后24h组、72h组左脑(损伤侧)上清液共培养组细胞NSE,O4的阳性率明显增加,分别与同时间点右侧及正常组同一时间点的左、右侧比较,差异有统计学意义(分别P＜0.05,P＜0.01),HIBD后7d左、右脑上清液共培养组细胞NSE,GFAP及O4的阳性率相近,分别与正常组同一时间点比较差异无统计学意义(P＞0.05).HIBD后24h组左脑上清液共培养组细胞NSE,O4的阳性率较HIBD后72h组及7d组左脑上清液共培养组细胞NSE,O4的阳性率高,差异有统计学意义(均P＜0.01).结论:正常鼠、HIBD鼠脑上清液均能诱导BMSCs发生神经分化,以HIBD后24h损伤侧脑上清液对BMSCs的神经分化率最高.     

Hemin对缺氧缺血性脑损伤新生鼠脑保护作用的研究

目的观察氯化高铁血红素(Hemin)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑组织中脑红蛋白(Ngb)表达的影响,探讨Hemin的脑保护作用及机制。方法将7 d龄新生SD大鼠90只随机分为假手术组、HIBD组、HIBD+Hemin组共3组。采用结扎左颈总动脉、低氧诱导(8%氧气,32℃)2 h方法建立HIBD模型。HIBD建模后2 h,HIBD+Hemin组腹腔注射Hemin(50 mg/kg),假手术组与HIBD组腹腔注射生理盐水。24 h后处死取脑,分别行脑梗死体积百分比测定、荧光定量(RT-PCR)检测Ngb mRNA表达、免疫组化分析Ngb表达。结果 HIBD组和HIBD+Hemin组脑梗死体积百分比、Ngb mRNA和Ngb表达均较假手术组显著上升(P<0.01);与HIBD组比较,HIBD+Hemin组Ngb mRNA和Ngb表达均增加,而脑梗死体积百分比明显减少,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 Hemin可减轻新生鼠的缺氧缺血性脑损伤,其机制可能是通过上调Ngb的表达发挥作用。