核转录因子NF—κB在血管内皮细胞组织因子表达中的作用

目的：探讨核转录因子NF－κ在肿瘤坏死因子α（TNF－α）,血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导血管内皮细胞组织因子（TF）表达中的作用。方法：用发色底物法测定血管内皮细胞表面TF活性。分别采用凝胶电泳迁移率改变法（EMSA）和Western 鲩迹法检测血管内皮细胞核转录因子NF－κB的DNA结合活性和含量。结果：100U／ml TNF-α,^-6mol/l Ang II作用下,内皮细胞表面TF活性明显增高。分别较对照增高1＝65倍和1．61倍,TNF－α,AngⅡ处理后细胞核内NF－κB含量明显增加,分别为正常对照组的1．77倍和1．52倍。结论：TNF－α,AngⅡ可增强内皮细胞TF活性,这可能与其促进内皮细胞核转录因子NF－κB的核转位和DNA结合活性有关,进一步证实NF－B在内皮细胞TF诱导表达中的重要作用。     

川芎嗪抑制肿瘤坏死因子诱导人脐静脉血管内皮细胞组织因子表达

[摘要]　目的 探讨川芎嗪（TMP）抑制肿瘤坏死因子 （TNF ）诱导人脐静脉血管内皮细胞组织因子（TF）表达的胞内信号转导机制。 方法　胰酶消化法分离培养人脐静脉血管内皮细胞,以一期凝固法、ELISA、RT-PCR分别测总的细胞促凝活性、TF抗原和 mRNA;放射免疫法测PKC（蛋白激酶C）活性;免疫组织化学染色观察NF－κB的变化。 结果 TMP和Staurosporine（Sta）可显著减少PMA与TNF 刺激的TF活性、抗原及mRNA的表达（P<0.01）; PMA、TNF 使胞浆中PKC活性明显降低(P<0.05),胞膜PKC活性显著增高(P<0.01),而TMP与Sta均能降低胞膜PKC活性(P>0.05);TNF 引起内皮细胞NF-κB从胞浆移入核内,TMP及吡咯二硫氨基甲酸酯（PDTC）均可抑制NF-κB的活化。 结论 TNF 诱导HUVEC TF的表达中,PKC及NF-κB的活化发挥着重要的作用;TMP通过影响PKC途径及NF-κB的活化而抑制TNF 诱导 TF的表达     

川芎嗪抑制肿瘤坏死因子α诱导人脐静脉血管内皮细胞组织因子表达的机制研究

目的探讨川芎嗪(TMP)抑制肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导人脐静脉血管内皮细胞组织因子(TF)表达的胞内信号转导机制。方法胰酶消化法分离培养人脐静脉血管内皮细胞,以一期凝固法、ELISA、RT-PCR分别测总的细胞促凝活性、TF抗原和mRNA;放射免疫法测PKC(蛋白激酶C)活性;免疫组织化学染色观察NF-κB的变化。结果TMP和Staurosporine(Sta)可显著减少PMA与TNFα刺激的TF活性、抗原及mRNA的表达(P<0.01);PMA、TNFα使胞浆中PKC活性明显降低(P<0.05),胞膜PKC活性显著增高(P<0.01),而TMP与Sta均能降低胞膜PKC活性(P>0.05);TNFα引起内皮细胞NF-κB从胞浆移入核内,TMP及吡咯二硫氨基甲酸酯(PDTC)均可抑制NF-κB的活化。结论TNFα诱导HUVEC TF的表达中,PKC及NF-κB的活化发挥着重要的作用;TMP通过影响PKC途径及NF-κB的活化而抑制TNFα诱导TF的表达。     

mm—LDL对内皮细胞转录因子NF—kB活性的影响

目的 研究轻微修饰低密度脂蛋白（mm-LDL）激活内皮细胞转录因子NF－kB的信号传导途径以及NF－kB对血小板源性生长因子B链（PDGFb）表达的调控作用。方法 以FeSO4修饰法制备mm-LDL,以正常LDL（n-LDL）作对照,作用于培养内皮细胞后提取核蛋白,用凝胶阻滞实验检测转录因子NF－kB停车场 及结合活性的变化。观察自由基清除剂probucol及PDTC对mm-LDL激活内皮细胞转录因子NF－kB的影响。通过检测报告基因探讨核因子诱导激酶（NIK）和核因子－kB抑制亚基激酶（IKK）在激活内皮细胞转录因子NF－kB的信号传导途径中的作用以及mm-LDL激活的NF－kB对PDGFb基因启动子的作用。结果 mm-LDL能激活培养内皮细胞转录因子NF－kB,自由基清除剂probucol和PDTC对mm-LDL激活内皮细胞转录因子NF－kB还能增加带有PDGFb基因上游调控序列（－189／＋43)的报告基因荧光素酶的活性。Slot blot结果显示变异型NIK能显著减少受mm-LDL刺激的内皮细胞PDGFb mRNA含量。结论 mm-LDL可通过NIK－IKK途径激活内皮细胞转录因子NF－kB并促进PDGFb基因表达。     

肉桂酸对肿瘤坏死因子诱导血管内皮细胞组织因子表达的作用及其机制

目的:观察肉桂酸(CINN)对TNF-α诱导人脐静脉血管内皮细胞株ECV304表达组织因子(TF)的影响,并探讨其作用的细胞内信号传导机制。方法:内皮细胞培养采用RPMI-1640完全培养基;一期凝固法测总的细胞促凝活性(PCA):TFmRNA采用RT-PCR的方法检测;用免疫组织化学染色法观察NF-κB的变化;Western-blod方法检测胞浆中I-κB的变化。结果:(1)与对照组相比,TNF-α(1000u／ml)引起ECV304的PCA增加(P<0.01),但可以被TF单抗阻断,其阻滞作用随TF单抗的增加而增加(P<0.05),由此证明血管内皮细胞的PCA来自于TF。在给予TNF-α之前30min用不同浓度的CINN预处理ECV304细胞,可以明显抑制TNF-α(1000u／ml)刺激内皮细胞表达TF的作用,具有显著的量效关系(r=-0.953,P<0.05)。在500μg/ml时,CINN有轻度抑制TF基础表达的效应;但以CINN预处理ECV304,可使TNF-α刺激TF的活性下降90％(P<0.001);CINN也可显著降低受刺激的ECV304TFmRNA表达。(2)Western-blot发现TNF-α作用45min胞浆中I-κB减少最明显,CINN预处理后,I-κB的减少不明显;免疫组织化学染色发现TNFα作用1h可引起内皮细胞NF-κB从胞浆移入核内,CINN可抑制NF-κB的活化。结论:CINN抑制血管内皮细胞对TNFα诱导的TF表达,它是通过影响NF-κB的活化发挥作用的。     

NO对内毒素诱导的肺泡巨噬细胞核因子-κB活化和TNF -α的调节

目的 探讨一氧化氮对内毒素（lipopolysaccharide,LPS）诱导肺泡区噬细胞核因子－κB（NF－κB）活化及肿瘤坏死因子α（TNF－α）基因表达的调节。方法 用支气管肺泡灌洗法收集肺泡巨噬细胞（pulmonary alveolar Macrophages,PAM）进行培养，分正常对照组，LPS组，NO＋LPS组。用凝胶电泳迁移率改变分析（EMSA）法和ELISA法分别检测核提取物中NF－κB活性和细胞培养上清中TNF－α含量。结果 LPS组NF－κB活性和TNF－α含量在刺激24h后明显高于正常对照组（P＜0.01）；NO＋LPS组NF－κB活性和TNF－α含量均显低于LPS组（P＜0.01）。结论 LPS诱导PAM的NF－κ活化，导致TNF－α基因表达增强；NO可抑制NF－κB活化而减少TNF－α的释放。     

肺岩宁方对肿瘤坏死因子α诱导的人肺癌细胞系核转录因子κB基因表达的影响

目的：探讨中药肺岩宁方含药血清对肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor—α,TNF—α）诱导的人肺癌细胞系A549核转录因子KB（nuclearfactor—κB,NF—κB）基因表达的影响。方法：制备肺岩宁方含药血清,以肺癌细胞系A549为靶细胞,确定肺岩宁方含药血清用药浓度。将A549细胞分为对照血清组、TNFα组、肺岩宁方含药血清组和综合治疗组。观察用药前后A549细胞大体形态变化;四唑单钠盐法测定肺岩宁方含药血清对细胞增殖的影响;蛋白印迹法检测肺岩宁方含药血清对TNF-α诱导的细胞核NF-κ及抑制性核转录因子（inhibitorxBa,IκBα）表达的影响;将人NF-κB重组质粒用脂质体转染法导入A549细胞24h后,用肺岩宁方含药血清治疗24h,采用双荧光素酶报告基因系统测定肺岩宁方含药血清对TNF—α诱导的细胞核NF-κBp65转录活性的影响。结果：与对照血清比较．15％和20％肺岩宁方含药血清对A549细胞具有明显的增殖抑制作用（P〈0．05,P〈0.01）。1μg／L TNF—α能够明显提高NF—κB基因的表达,与肺岩宁方含药血清共同作用后,能够显著抑制它的表达（P〈0．01）,而细胞内IκBα的表达差异无统计学意义（P〈0．05）;肺岩宁方含药血清能够显著降低A549细胞经NF—κB重组质粒转染后的转录活性（P〈0．01）。结论：肺岩宁方含药血清可抑制人肺癌细胞系增殖,可能是通过对TNF-α诱导的NF-κB基因活性的抑制作用实现的。。     

高渗状态下肾脏COX2表达的基因调控

目的本研究旨在阐明核转录因子C／EBPβ和NFκB是否协同作用影响高渗状态下COX2的基因表达。方法体外培养肾髓间质细胞（RMICs），通过病毒转导或质粒转染技术将体外构建的COX2基因突变载体转入培养细胞，经高渗培养不同时间后．采用免疫印迹、荧光素酶报告基因活性检测等方法观察培养细胞COX2蛋白表达及活性的改变，同时应用染色质免疫沉淀分析法观察COX2基因与C／EBPβ、NFκB结合能力的改变。结果免疫印迹显示．高渗刺激能明显提高对照组COX2蛋白表达，应用突变序列IκBm阻断NFκB活性后COX2表达明显下降，应用突变序列C／EBPβ-P20阻断C／EBPβ亦能显著降低COX2表达．但同时运用突变序列C／EBPβ-P20和IκBm无法使COX2表达进一步下降。然而，将野生型、含NFκB或C／EBPβ结合位点突变的COX2启动子萤火虫荧光素酶报告基因的重组质粒转染至RMICs，高渗培养24h后显示：高渗刺激能显著增加野生型组COX2荧光素酶的活性，NFκB位点突变无法阻断该作用，而C／EBPβ结合位点突变却能完全抑制COX2高活性。进一步应用染色质免疫沉淀分析研究显示．高渗刺激能显著增加NhB（P65）或C／EBPβ与COX2基因的结合，并呈时间依赖性；NFκB结合位点突变不能消除高渗诱导的NFκB（P65）与COX2基因的结合增强，但在NFκB和C／EBPβ结合位点同时突变组该作用被阻断。结论在NFκB活化COX2基因转录过程中需要另一个核转录因子C／EBPβ的参与，C／EBPβ途径在高渗诱导肾脏内髓间质细胞表达COX2过程中具有重要作用。     

N-乙酰半胱氨酸对肺微血管内皮细胞核因子κB活性影响的体外研究

目的探讨N-乙酰半胱氨酸（NAC）对人肺微血管内皮细胞（HPMEC）核岗子κB（NF—κB）结合活性和环氧合酶-2（COX-2）表达的影响机制。方法体外培养HPMEC细胞株,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）检测NAC对HPMEC增殖活化的抑制作用,分别采用NAC（1mmol／L）处理1h,肿瘤坏死因子α（TNF-α）（100ng／mL）处理1h。NAC＋TNF-α联合处理。凝胶电泳移动抑制实验检测HPMECNF—κB的结合活性;免疫蛋白质印迹检测相应的HPMEC胞质内NF—κB抑制蛋白（IKB—α）的表达;免疫细胞化学观察HPMECNF—κB表达的核内转移;激光共聚焦检测NAC对HPMEC中COX-2表达的影响。结果NAC对HPMEC的增殖活化有明显抑制作用,NAC＋TNF-α联合处理组吸光度值明显低于TNF-α处理组,差异均有统计学意义（均P〈0．05）。TNF—α刺激后具有诱导HPMECNF—κB结合活性．且IKB-α表达明显减弱,NAC处理组IKB-α表达高于TNF—α处理组,差异有高度统计学意义（P〈0．01）。TNF—α处理1h后．HPMECNF—κB的主要表达从细胞质转移至细胞核内;NAC预处理后联合TNF—α刺激,HPMECNF—κB表达主要位于细胞质．出现核内转移极少。HPMEC经TNF-α处理后细胞内COX-2表达明显高于NAC＋TNF—α联合处理组以及正常对照组．差异均有统计学意义（均P〈0．05）;而NAC＋TNF-α联合处理组与正常对照组比较。差异无统计学意义（P〉0．05）。结论NAC可抑制HPMEC增殖活化;NAC可抑制HPMECNF—κB结合活性、减少核内转移发生和COX-2的表达。     

白鹤冲剂对TNF—α刺激的血管内皮细胞与嗜中性粒细胞黏附的影响

目的：观察白鹤冲剂对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）与人外周血嗜中性粒细胞黏附以及细胞间黏附分子－1（ICAM－1）和CD18表达及核转录因子NF—κB（NF—κB）的影响,探讨白鹤冲剂治疗血管炎的作用机制。方法：将细胞分为正常对照组、TNF－α组、TNF－α＋白鹤冲剂大剂量组、TNF—α＋白鹤冲剂小剂量组和TNF－α＋雷公藤内酯醇组,共五组。分别进行细胞黏附实验;以细胞ELISA法观察HUVEC的ICAM-1表达;以免疫细胞化学间接法检测CD18表达;间接免疫荧光法观察白鹤冲剂对HUVEC中NF—κB活化。结果：白鹤冲剂能抑制肿瘤坏死因子-α（TNF—α）刺激的HUVEC中ICAM-1表达和人外周血嗜中性粒细胞CD18表达（P〈0．05）,同时呈剂量依赖性抑制人外周血嗜中性粒细胞与HUVEC的黏附。结论：通过影响HUVEC中NF—κB活化从而抑制ICAM－1表达和嗜中性粒细胞CD18的表达,最终抑制嗜中性粒细胞与IIUVEC的黏附可能是白鹤冲剂治疗血管炎的作用机制。     

肝细胞核因子1B的研究进展

肝细胞核因子1B(HNF1B)转录因子由17q12染色质编码,其涉及包括肝、胰、肾等多个脏器的生长与发育。在肾脏的发育过程中,HNF1B主要调控肾小管的生长与发育。而其在胰腺发育的各个阶段均发挥不可或缺的作用,包括胰腺内外分泌细胞及导管发育。HNF1B转录因子编码基因易发生各种类型突变,并可造成HNF1B转录因子功能异常,从而引起多种疾病的发生与进展,包括糖尿病、肾功能不全以及多种恶性肿瘤。同时,HNF1B异常所致疾病症状广泛并同时累及多个系统,因此诊断困难且易发生误诊。