基于生物信息学分析PKM2在肺腺癌中的表达及临床意义

目的：通过生物信息学方法分析M2型丙酮酸激酶（Pyruvate kinase M2, PKM2）在肺腺癌（lung adenocarcinoma，LUAD）中的表达及临床意义。方法：利用Oncomine和TCGA数据库荟萃分析PKM2 mRNA在LUAD组织和正常肺组织中的表达差异，验证HPA数据库中PKM2蛋白表达；分析该基因与LUAD患者生存的关系；LinkedOmics和Metascape平台做PKM2与LUAD临床病理特征及KEGG通路分析；String-DB网站构建PPI网络。结果：LUAD组织中PKM mRNA表达水平是正常肺组织的1.95倍（P<0.05）。免疫组化结果显示PKM2蛋白在LUAD组织中高表达。PKM2表达与LUAD的病理分级、Ｔ分期和Ｎ分期呈正相关（均P<0.05），且高表达者总生存率低于低表达者（P<0.001，HR=2.56）。PKM2共表达基因主要与糖酵解、癌症中央碳代谢、HIF-1等信号通路有关。结论：PKM2在LUAD组织中高表达，且与LUAD患者不良预后相关，有望成为LUAD诊断和治疗的有效生物标志物。     

丙酮酸脱氢酶激酶在恶性肿瘤中的研究进展

正常细胞能量代谢以线粒体的氧化磷酸化为主,而癌细胞则以有氧糖酵解为主。这种代谢特征的偏移与丙酮酸脱氢酶激酶及其相关蛋白密切相关。因此本文通过介绍该激酶功能及相关蛋白、抑制剂研究等以阐述其在恶性肿瘤发生发展等方面的研究进展,进一步深入了解其在临床中的应用价值。     

癌痛的中医药治疗

癌痛是恶性肿瘤的常见症状之一,严重影响患者的生活质量。目前癌痛的西医治疗方法主要是在抗肿瘤治疗基础上加药物三阶梯止痛法、生物治疗、神经阻滞治疗等。尽管如此,经过常规治疗仍有50%的癌症患者忍受的疼痛程度足以影响他们的日常生活。临床上中医药治疗癌痛多采用内服、外敷、针灸等手段,疗效肯定,且有持续性、无成瘾性、无耐药性等特点。但中医药治疗癌痛的机制尚不明确,有关中药治疗癌痛的实验研究及药物安全性评价报道较少,有待运用现代科学技术加以研究论证。     

人参皂苷Rg3含量的变化

目的:建立经真菌转化前后三七中人参皂苷Rg3的含量测定方法。方法:采用HPLC法,色谱柱为Phenomex C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水,梯度洗脱;柱温30℃,检测波长为203nm,流速1.0mL/min,进样量为20μL。结果:人参皂苷Rg3的回归方程:Y=35672013X-2413,r=0.99992,在0.0019～0.2488 mg/mL范围内有良好的线性关系,平均回收率为99.56%,RSD=1.48%(n=8)。结论:该方法简便、快捷、准确、重复性好,可用于三七发酵产物中人参皂苷Rg3的含量测定。     

肺岩宁方对肿瘤坏死因子α诱导的人肺癌细胞系核转录因子κB基因表达的影响

目的：探讨中药肺岩宁方含药血清对肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor—α,TNF—α）诱导的人肺癌细胞系A549核转录因子KB（nuclearfactor—κB,NF—κB）基因表达的影响。方法：制备肺岩宁方含药血清,以肺癌细胞系A549为靶细胞,确定肺岩宁方含药血清用药浓度。将A549细胞分为对照血清组、TNFα组、肺岩宁方含药血清组和综合治疗组。观察用药前后A549细胞大体形态变化;四唑单钠盐法测定肺岩宁方含药血清对细胞增殖的影响;蛋白印迹法检测肺岩宁方含药血清对TNF-α诱导的细胞核NF-κ及抑制性核转录因子（inhibitorxBa,IκBα）表达的影响;将人NF-κB重组质粒用脂质体转染法导入A549细胞24h后,用肺岩宁方含药血清治疗24h,采用双荧光素酶报告基因系统测定肺岩宁方含药血清对TNF—α诱导的细胞核NF-κBp65转录活性的影响。结果：与对照血清比较．15％和20％肺岩宁方含药血清对A549细胞具有明显的增殖抑制作用（P〈0．05,P〈0.01）。1μg／L TNF—α能够明显提高NF—κB基因的表达,与肺岩宁方含药血清共同作用后,能够显著抑制它的表达（P〈0．01）,而细胞内IκBα的表达差异无统计学意义（P〈0．05）;肺岩宁方含药血清能够显著降低A549细胞经NF—κB重组质粒转染后的转录活性（P〈0．01）。结论：肺岩宁方含药血清可抑制人肺癌细胞系增殖,可能是通过对TNF-α诱导的NF-κB基因活性的抑制作用实现的。。     

通络散结凝胶对大鼠骨癌痛模型的镇痛作用研究

目的:建立大鼠Walker-256乳腺癌胫骨癌痛模型,予以通络散结凝胶外用并探讨其镇痛疗效。方法:取雌性Wistar大鼠40只,右后肢胫骨注射Walker-256乳腺癌细胞建立骨癌痛模型。将大鼠随机分成5组:空白凝胶组、扶他林乳剂组、通络散结凝胶Ⅰ组、通络散结凝胶Ⅱ组、通络散结凝胶Ⅲ组。每组8只,各组大鼠自造模后第1天开始给药,1 d/1次,连用21天。同时动态观察大鼠体重以及机械痛觉缩足阈值、热痛觉缩足潜伏期和自发痛评分。结果:1造模后第5天,空白凝胶组大鼠体重下降,中药组治疗后体重逐渐增加,其中通络散结凝胶Ⅲ组体重增加最为明显(P<0.001)。2与空白凝胶组比较,通络散结凝胶从第17天开始,能够显著提高大鼠机械痛阈值,以通络散结凝胶Ⅲ组为最佳。3造模后第18²0天,与空白凝胶组比较,通络散结凝胶能够提高大鼠热痛觉缩足阈值。4各组大鼠在造模5天后大鼠逐步有跛行现象,造模后第21天,与空白凝胶组比较,通络散结凝胶能够降低大鼠自发痛评分,其中通络散结凝胶Ⅲ组效果较好。结论:通络散结凝胶对骨癌痛具有一定镇痛效果,且药物浓度越高,止痛效果越佳。     

NK-104对人肝癌细胞凋亡及半胱氨酸蛋白酶3活性的影响

目的:研究日本新近研制的第三代3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A(3-hydroxy-3-methyl-glutaryl-CoA,HMG-CoA)还原酶抑制剂匹伐他汀(pitavastatin,NK-104)对人肝癌细胞凋亡及半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)活性的影响。方法:采用细胞培养技术,以肝癌细胞系HepG2为靶细胞,以不同浓度的药物处理细胞48 h后,利用WST-8法测定NK-104对细胞增殖的影响;利用荧光染料Hoechst 33258染色,荧光显微镜观察细胞核碎片;以流式细胞仪分析细胞周期的变化;采用半胱氨酸蛋白酶3比色法检测caspase-3活性。结果:NK-104(10μmol/L)对HepG2细胞有明显抑制作用,可诱导HepG2细胞凋亡,并能增强caspase-3基因的活性。结论:NK-104能够诱导HepG2细胞凋亡,其机制与caspase-3依赖性凋亡调节信号通路有关。     

肺岩宁冲剂对肺癌细胞移植瘤组织基因差异表达的影响

 目的 应用基因芯片技术研究肺岩宁冲剂对裸鼠人肺癌细胞移植瘤组织的基因表达谱的影响,初步探讨肺岩宁冲剂抗肺癌的分子机制。 方法 将人肺癌细胞H460皮下移植瘤裸鼠24只随机分为三组：空白对照组：0.9%氯化钠溶液0.4ml灌胃×14天;化疗组：第1、3、5天DDP溶液1ml(含DDP0.1mg)腹腔注射,0.9%氯化钠溶液0.4ml灌胃×14天;肺岩宁冲剂组：肺岩宁冲剂药液0.4ml（含生药0.6g）灌胃×14天。治疗后第15天提取各组移植瘤组织的总RNA并与人全基因组芯片杂交,经激光共聚焦扫描仪扫描及Lux Scan3.0 软件分析后比较各组中的差异表达基因。 结果 与对照组比较,化疗组共筛查出差异表达基因2187条,其中上调基因997条,下调基因1190条,功能未知基因326条。肺岩宁冲剂组共筛查出差异表达基因2093条,其中上调基因968条,下调基因1025条以及未知功能基因145条。按照基因功能可分为细胞周期相关基因、代谢相关基因、细胞信号转导分子、转录调控因子等。 结论 为明确肺岩宁冲剂抗肺癌的分子机制提供重要参考。     

低氘水对肺癌细胞增殖的抑制作用及其可能的机制

目的：初步探讨低氘水（deuteriumdepleted water,DDW）在体内外对人肺癌细胞增殖的抑制作用及其可能机制。方法：MTT法检测DDW对肺癌A549细胞和正常人胚肺成纤维细胞HLF1增殖的抑制作用,TUNEL法检测A549细胞凋亡情况,流式细胞仪检测细胞周期的变化。建立BALB/c裸鼠人肺癌H460细胞移植瘤模型,低氘水饮用60 d后观察裸鼠移植瘤的生长情况。结果：与对照组比较,培养10 h时体积分数为0.0025％、0.0050％和0.0105％的DDW对A549 细胞增殖具有显著抑制作用（P<0.05）,随后抑制作用消失,48 h后又逐渐出现抑制现象,72 h抑制作用显著（P<0.05）;相同条件下不同体积分数的DDW对正常人胚肺成纤维细胞HLF1无显著抑制作用。TUNEL染色显示,0.005%DDW作用后A549细胞出现凋亡,凋亡率显著高于对照组细胞\[（25.38±3.90）% vs (10.87±1.11)%), P<0.05\]。流式细胞仪检测显示,DDW作用后A549细胞S期细胞显著增加（P<0.05）。人肺癌细胞H460移植瘤裸鼠饮用DDW后,能够明显提高裸鼠的生活质量,抑瘤率达30.08%。结论：DDW对肺癌细胞增殖的抑制作用仅限于一定的剂量范围,且具有波动性和时段性的特点;其机制可能与诱导肺癌细胞S期阻滞和细胞凋亡有关。     

CaN/NFATc1通路与骨癌痛发生机制的研究进展

骨癌痛（cancer induced bone pain，CIBP）是由原发性或转移性骨肿瘤及抗癌治疗或合并症如关节炎、痛风、脊椎关节强直等引起的骨疼痛，是中晚期癌症常见的症状之一，目前多以局部放疗、双磷酸盐及三阶梯镇痛处理, 但尚缺乏更精准的靶向治疗方法。研究表明，钙调神经磷酸酶（Calcineurin，CaN）/活化T细胞核因子（Nuclear factor-activated T cell，NFAT）通路与骨吸收重建及骨微环境的改变密切相关，尤其是NFATc1作为OPG-RANK-RANKL系统下游的信号分子，其对破骨细胞的分化发挥着重要的转录调节作用，分化后的破骨细胞可实现骨吸收导致骨密度 降低，破坏骨结构，引起CIBP。本文就破骨细胞中CaN/NFATc1通路与CIBP发生机制的研究进展进行简要综述，为今后骨癌痛的治疗提供新的思路。