Rho激酶在大鼠严重烧伤后肠黏膜通透性改变中的作用及机制研究

目的观察严重烧伤早期不同时相点大鼠肠黏膜通透性的变化，探讨Rho激酶在这一过程中的作用及机制。方法常规制备烧伤大鼠模型后取回肠末段，分为正常对照组、烧伤组和烧伤6h＋Y27632组，以荧光素标记法（FITC-D）检测大鼠肠黏膜在未烧伤1、2、6、12、24h等不同时相点通透性的变化指标；用Western blot法检测肠黏膜肌球蛋白轻链（myosin light chain，MLC）、磷酸化MLC（p-MLC）和Rho激酶蛋白水平的变化。结果严重烧伤后大鼠肠黏膜通透性明显增加，并呈时相依赖性变化，6～12h达到最高；p-MLC以及Rho激酶蛋白表达均明显增加。上述蛋白表达的增强可在加入Rho激酶特异性抑制剂Y27632后消失。结论严重烧伤后肠黏膜Rho激酶激活和p-MLC表达增加，是导致其通透性增加及屏障功能损害的分子机制之一。     

严重烧伤后肠黏膜肌球蛋白轻链磷酸化表达改变及其意义

目的探讨肌球蛋白轻链（myosin light chain，MLC）磷酸化在严重烧伤早期对肠黏膜屏障功能及细胞紧密连接相关蛋白变化的作用。方法健康成年SD大鼠48只，采用随机数字表法分为正常对照组及烧伤后1、2、6、12、24h组，用异硫氰酸荧光素．葡聚糖（FITC-Dextran）检测大鼠肠黏膜通透性，免疫荧光法检测肠黏膜细胞紧密连接相关蛋白ZO-1、F-肌动蛋白（F．actin）及磷酸化型MLC（phosphorylated MLC，p-MLC）的变化。结果烧伤后大鼠肠黏膜通透性明显增加，伤后6h达高峰，为对照组的3倍（P〈0．01）；烧伤后肠上皮通透性的增加伴随有紧密连接相关蛋白ZO-1的明显重分布、细胞紧密连接损害以及肠上皮细胞p-MLC表达的增加。结论MLC磷酸化可能在严重烧伤后肠黏膜屏障功能紊乱及通透性增加的发生机制中起着重要的调控作用。     

血管紧张素Ⅱ对大鼠肝星状细胞收缩及Rho-Rock通路的影响

目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对大鼠肝星状细胞(HSC)ROCk通路的影响机制.方法 采用HSC-T6细胞株,给予AngⅡμmol/L处理,聚硅酮膜法直观检测HSC的收缩性;另予AngⅡ 10 μmol/L处理,免疫印迹法检测肌球蛋白轻链(MLC)磷酸化的表达水平.观察AngⅡ 1型受体(AT-1受体)阻断剂伊贝沙坦和Rho激酶特异性抑制剂Y27632对磷酸化MLC表达水平的影响;逆转录聚合酶链反应检测Rock通路Rock2(Rho kinase 2)mRNA的表达.结果 AngⅡ可诱导磷酸化MLC蛋白水平的变化,并呈时间依赖性,15min达到峰值后逐渐减低.伊贝沙坦和Y27632处理组可抑制AngⅡ诱导的MLC蛋白磷酸化水平.AngⅡ处理组Rock2 mRNA的表达显著增强,伊贝沙坦和Y27632均可抑制Rock2 mRNA的表达.结论 AngⅡ可以通过Rock通路来诱导HSC的收缩.     

Rho-Rock通路在血管紧张素Ⅱ诱导肝星状细胞收缩中的作用

目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)促进肝星状细胞(HSC)收缩时Rho激酶介导的非Ca2+依赖性信号转导通路的作用机制.方法 采用HSC-T6细胞系,给予AngⅡ 10 μmol/L处理,聚硅酮膜法直观检测HSC的收缩性;蛋白质印迹法检测肌球蛋白轻链(MLC)和磷酸化MLC表达水平.观察ArtsⅡ1型受体阻断剂伊贝沙坦、蛋白激酶C特异性抑制剂stauro、Rho激酶特异性抑制剂Y27632、肌球蛋白轻链激酶特异性抑制剂ML-7对磷酸化MLC表达水平的影响;逆转录聚合酶链反应检测Rho-Rock通路RhoA激酶2(Rock2)、RhoAGTP、Rho鸟核苷酸转化因子(RhoGEF)mRNA的表达.结果 AngⅡ可诱导HSC收缩;还可诱导磷酸化MLC蛋白水平的变化,并呈时间依赖性,15 min达到峰值后逐渐减低.AngⅡ+伊贝沙坦组和AngⅡ+Y27632组诱导的MLC蛋白磷酸化水平均低于AngⅡ组(1.12±0.09、1.22±0.10 vs 1.33±0.06,P=0.003);而AngⅡ+ML-7+stauro组磷酸化MLC蛋白水平(1.43±0.09)高于AngⅡ+Y27632组(P=0.003);AngⅡ+Y27632+ML-7+stauro组水平较低(0.64±0.04,P=0.000).Ang Ⅱ组Rock2、RhoAGTP、RhoGEF mRNA的表达均高于相应对照组(0.36±01vs0.12±0.01、0.80±0.01 vB 0.40±0.02、0.65±0.11 vs 0.33±0.09,均P＜0.05),AngⅡ+伊贝沙坦组3种元件的表达均低于Ang Ⅱ组.Ang Ⅱ+Y27632组Rock2与RhoGEFmRNA的表达(0.15±0.01、0.28±0.08)较Ang Ⅱ组低,RhoA GTP的表达(1.14±0.02)则较高.AngⅡ+ML-7+stauro组3种元件的表达均高于对照组,AngⅡ+Y27632+ML-7+stauro 3组3种元件的表达(0.23±0.01、0.83±0.02、0.69±0.08)均高于AngⅡ+ML-7+stauro组(均P＜0.05).结论 Ang Ⅱ可以通过Rho-Rock通路来诱导HSC的收缩.     

醛固酮诱导人肾小管上皮细胞胶原Ⅰ、Ⅲ表达的研究

目的：探讨Rho激酶对醛固酮（ALD）诱导的人肾小管上皮细胞胶原Ⅰ、Ⅲ（COL Ⅰ、Ⅲ）表达的影响。方法将人肾小管上皮细胞 HK‐2培养于含15％胎牛血清（FBS）的RPMI‐1640培养液中,ALD受体拮抗剂依普利酮（10μmol／L）和Rho激酶抑制剂Y27632（1μmol／L）预处理细胞30 min后,100 nmol／L ALD作用 HK‐2细胞24 h ,实时定量 PCR法检测各组细胞中COLⅠ、Ⅲ mRNA的表达,酶联免疫吸附试验测定培养上清液中COL Ⅰ、Ⅲ及Rho激酶蛋白表达水平。结果 ALD可上调HK‐2细胞中COL Ⅰ、Ⅲ mRNA的表达,并增加培养上清液中Rho激酶、COL Ⅰ、Ⅲ蛋白表达水平,Rho激酶抑制剂Y27632及ALD受体拮抗剂依普利酮可拮抗上述效应。结论 ALD可活化 HK‐2细胞Rho激酶信号传导通路,并通过Rho激酶诱导 HK‐2细胞COL Ⅰ、Ⅲ的表达而加速肾小管间质纤维化的进展。     

Rho激酶信号转导通路对醛固酮诱导的人肾小管上皮细胞间质转分化的影响?

目的：探讨Rho激酶对醛固酮( ALD)诱导的人肾小管上皮细胞间质转分化的影响。方法人肾小管上皮细胞( HK-2)培养于含15%FBS的 RPMI-1640培养液中,依普利酮(10μmol/L )和 Rho激酶抑制剂Y27632(1μmol/L)预处理细胞30 min后,100 nmol/L ALD作用HK-2细胞24或48 h, ELISA法测定培养上清液中Rho激酶蛋白的含量,实时定量PCR检测细胞α-SMA、E-cadherin mRNA的表达,Western blot测定细胞α-SMA、E-cadherin蛋白的表达。结果 ALD显著上调HK-2细胞Rho激酶蛋白的表达及α-SMA mRNA和蛋白的表达,减低E-cadherin mRNA和蛋白的表达。 Rho激酶抑制剂Y27632及依普利酮可拮抗上述效应。结论ALD可激活HK-2细胞Rho激酶的活化,并通过Rho激酶诱导HK-2细胞间质转分化而加速肾小管间质纤维化的进展。     

高糖对体外培养人脐静脉内皮细胞通透性及肌球蛋白轻链磷酸化的影响

目的：探讨高糖对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）通透性及肌球蛋白轻链（MLC）磷酸化的影响。方法：分别以不含、含dnRhoA或Y27632的常规M199培养基（对照组、dnRhoA组、Y27632组）,以及不含、含dnRhoA或Y27632的高糖M199培养基（高糖组、高糖＋dnRhoA组、高糖＋Y27632组）培养HUVECs,在transwell系统中使其生长为单层内皮结构,观察该结构葡聚糖跨内皮转移率和THP-1跨内皮迁移细胞数,测定细胞MLC磷酸化水平。结果：高糖组葡聚糖跨内皮转移率和THP-1跨内皮迁移细胞数较对照组增加（ P＜0．05）。 dnRhoA组、Y27632组和高糖＋dnRhoA组、高糖＋Y27632组葡聚糖跨内皮转移率、THP-1跨内皮迁移细胞数及MLC磷酸化水平均较高糖组降低（ P均＜0．05）。结论：高糖刺激可能通过激活RhoA-ROCK信号转导通路,上调MLC磷酸化水平,增加内皮通透性。     

大鼠烧伤后肠粘膜上皮细胞凋亡及其相关调控因子变化的研究

目的探讨大鼠烧伤后肠粘膜上皮细胞凋亡情况及相关调控因子变化的关系.方法 Wistar大鼠按随机数字表法分为烧伤组与正常对照组.动物于伤后6、12 h、1、3、5 d处死,流式细胞仪检测肠粘膜上皮细胞凋亡数,TUNEL法检测细胞凋亡形态学变化,RT-PCR法检测肠粘膜bcl-2 mRNA表达的变化,荧光法检测肠上皮细胞caspase-3酶活性.结果烧伤后6 h至5 d肠上皮凋亡细胞数较正常组明显增加;TUNNEL检测显示:烧伤后6 h阳性细胞数较正常组即有增加,伤后1 d表达最强,以后稍有减弱,但仍强于伤前;肠粘膜bcl-2 mRNA表达在伤后12 h开始低于正常,至伤后5 d仍低于正常,烧伤后大鼠肠上皮细胞caspase-3的活性在伤后1 d明显升高,伤后3 d到峰值,然后迅速下降至正常范围内.caspase-3活性变化与细胞凋亡数呈显著的正相关(r=0.56,P<0.05);烧伤后bcl-2 mRNA的表达与细胞凋亡数呈显著负相关(r=-0.72,P<0.05).结论烧伤后肠粘膜上皮细胞凋亡增加,尤以伤后1、3 d最为明显, caspase-3,bcl-2参与了烧伤后肠粘膜上皮细胞凋亡的调控.     

Rho激酶抑制剂用于脑损伤治疗的初步实验研究

目的:探讨Rho激酶抑制剂Y-27632对神经干细胞增殖分化的影响。方法:分离培养大鼠神经干细胞并进行鉴定,设置对照组、LPA组、Y27632组,连续培养2周,观察细胞单克隆个数、单克隆形成率、Ki67和GFAP的基因表达量及蛋白质表达水平。结果:分离培养的神经干细胞经免疫荧光检测Nestin、CD133均为阳性;软琼脂实验发现,LPA组单克隆个数及单克隆形成率较对照组及Y27632组显著升高(P<0.05),而Y27632组的单克隆个数及单克隆形成率与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);荧光定量及Western blotting结果显示,与对照组相比,LPA组GFAP基因表达量没明显变化(P>0.05),Ki67基因表达量升高(P<0.05),而Y27632组GFAP基因表达水平显著升高(P<0.05),而Ki67基因表达无变化(P>0.05)。结论:Rho激酶抑制剂Y27632可提高体外培养神经干细胞的GFAP表达水平,对于损伤神经细胞的修复具有重要作用。     

腺苷蛋氨酸对过度激活的Rho-ROCK通路介导的糖尿病肝损伤的改善作用

目的探讨腺苷蛋氨酸对过度激活的Rho-ROCK通路介导的糖尿病肝损伤的改善作用。方法 40只清洁级Wistar大鼠依据随机数字表法为4组:对照组、2型糖尿病组、Y27632干预组及腺苷蛋氨酸干预组,各10只。对照组大鼠给予正常饲粮,自由饮水;糖尿病组、Y27632干预组及腺苷蛋氨酸干预组大鼠每日给予高糖高脂饲料,自由饮水,并于第35日时一次性腹腔注射链脲佐菌素(35 mg/kg,腹膜内);Y27632干预组于第9~12周给予Y27632 10 mg/kg进行治疗。腺苷蛋氨酸干预组于第9~12周给予腺苷蛋氨酸10 mg/kg进行治疗。分析各组大鼠胰岛素抵抗系数、血脂水平及Rho A、ROCK1/2和基质金属蛋白酶的表达变化。同时分析各组大鼠肝脏组织细胞凋亡相关蛋白胱天蛋白酶(caspase)-3及caspase-9的表达变化。结果糖尿病组、Y27632干预组和腺苷蛋氨酸干预组大鼠的胰岛素抵抗指数稳态模型、血糖、低密度脂蛋白胆固醇较对照组明显升高(P<0.01);糖尿病组、Y27632干预组和腺苷蛋氨酸干预组大鼠的总胆固醇高于对照组(P<0.01);糖尿病组、Y27632干预组和腺苷蛋氨酸干预组大鼠的高密度脂蛋白胆固醇低于对照组(P<0.01);糖尿病组、Y27632干预组和腺苷蛋氨酸干预组大鼠的羟脯氨酸高于对照组(P<0.01)。糖尿病组大鼠肝脏组织的Rho及ROCK1/2蛋白的表达、MMP-2及MMP-9的表达及促凋亡蛋白相关蛋白caspase-3和caspase-9的表达较对照组明显升高(P<0.01),而Y27632干预组和腺苷蛋氨酸干预组上述异常表达得到一定的恢复(P<0.01)。结论腺苷蛋氨酸通过抑制肝脏组织中过度激活的Rho/ROCK信号转导通路改善小剂量SZT合并高糖高脂饮食复制的2型糖尿病大鼠肝脏组织损伤。     

烧伤大鼠血清对肠上皮细胞E-钙粘附蛋白表达的影响

目的　探讨烧伤血清对肠上皮细胞 E-钙粘附蛋白 (ECD)表达的影响及其意义。方法　培养大鼠肠上皮细胞株 IEC- 6 ;采用激光共聚焦及流式细胞术定量分析等技术 ,动态观察烧伤血清刺激培养的 IEC- 6细胞ECD的变化。结果　肠上皮细胞经烧伤血清作用后早期 ECD表达呈进行性下降 ,细胞通透性增加。结论　烧伤后肠上皮细胞细胞 ECD表达降低 ,细胞粘附连接损伤     

Roles of Rho/Rock Signaling Pathway in Silica-induced Epithelial-mesenchymal Transition in Human Bronchial Epithelial Cells

ObjectiveTo investigate the roles of Rho/Rock signaling pathway in silica-induced Epithelial-mesenchymal transition (EMT) in human bronchial epithelial cells (BEC) in vitro.MethodsHuman BEC were incubated with silica with various concentrations for indicated times. Cell viability was assayed by MTT test. Morphologic Changes were observed by microscope. Mesenchymal marker α-smooth muscle actin (α-SMA), vimentin (Vim), and epithelial marker E-cadherin (E-cad) were analyzed by Western Blot. The pull-down assay was used to measure Rho activity. In the prevention experiments, the specific inhibitor for Rho effector ROCK (Y27632) was used to inhibit the activity of Rho.ResultsHuman BEC stimulated with silica were converted from a “cobblestone” epithelial structure into an elongated fibroblast-like shape structure. Incubation of human BEC with silica induced de novo expression of α-SMA and Vim, and loss of E-cad. Also, silica treatment resulted in Rho activation in human BEC. Y27632 up-regulated the E-cad expression but attenuated α-SMA and Vim expression in silica-stimulated cells.ConclusionThe activation of Rho/ROCK signaling pathways is most likely involved in Silica-induced EMT in human bronchial epithelial cells.     

MCP-1诱导的肾小管上皮-间充质细胞转化与整合素连接激酶表达变化的关系

目的探讨单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）诱导体外培养的肾小管上皮细胞转分化的作用及其与细胞整合素连接激酶（ILK）表达变化的关系。方法体外培养的HKC,以未处理的HKC为阴性对照,以8ng／mlTGF-81处理的HKC为阳性对照,以不同浓度的MCP-1（0．1、1．0、10、100ng／m1）处理细胞,或以同一浓度的MCP-1（1ng／ml）在不同时间点（0h、12h、24h、36h、48h、72h）处理细胞。用半定量RT-PCR方法测定各组HKC细胞α—SMA mRNA的表达,Western blot方法测定各组HKC细胞α-SMA及ILK表达。在上述实验基础上进一步观察MEK抑制剂（PD98059,10μmol／L）,p38MAPK抑制剂（SB203580,5／μmol／L）和ROCK抑制剂（Y27632,500μmol／L）对HKC细胞ILK表达的影响。结果MCP-1（0．1、1．0ng／m1）作用后HKC细胞α-SMA mRNA和α—SMA、ILK蛋白表达显著高于阴性对照组（P＜0．01）,但低于阳性对照组（P＜0．01）;其中以1．0ng／ml MCP-1组作用后α—SMAmRNA和α—SMA、ILK蛋白表达水平增高更为显著（P＜1．001）。1．0ng／ml MCP-1作用后细胞α-SMA mRNA和α-SMA、ILK蛋白表达在0-48h内逐渐增加,48h达最高峰（P＜0．01）,72h时呈下降趋势。分别加入阻断剂PD98059、SB203580和Y27632后,HKC细胞ILK蛋白表达水平与MCP-1单独作用无显著性差异（P＞0．05）。结论MCP-1可诱导肾小管上皮细胞转分化并呈时间浓度依赖性,该作用可能与MCP-1上调ILK的表达有关;本研究未发现MCP-1上调ILK的信号传导途径与MEK1、p38MAPK、ROCK途径有关。     

单核细胞趋化蛋白-1诱导肾小管上皮-肌成纤维细胞转化的作用及机制探讨

目的 探讨单核细胞趋化蛋白(MCP)-1诱导.肾小管上皮细胞发生上皮-肌成纤维细胞转化(EMT)的作用和细胞分子机制,主要是EMT过程中Erk1/2、P38MAPK、RhoA、RhoC、Snail表达水平的变化.方法 将HK-2细胞分为阴性对照组,阳性对照组(TGF-β1、5 μg/L),MCP-1作用组(0.1、1、10、100 μg/L),观察不同时间(12、24、48、72 h)MCP-1刺激与α-SMA表达水平之间的变化.用Western印迹方法检测肾小管上皮细胞PErk1/2、Erk1/2、P-P38MAPK、P38MAPK、RhoA蛋白水平的变化,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测RhoC、Snail基因水平的变化.此外,分别观察Erk、P38MAPK、Rho信号通路的阻断剂(PD98059、SB203580、Y27632)对MCP-1诱导EMT的影响.结果 在不同浓度MCP-1刺激下,HK-2细胞α-SMA mRNA及蛋白表达水平均明显增强,以1 μg/L刺激下表达最强;在1 μg/L MCP-1作用下,24、48、72 h α-SMA mRNA及蛋白表均达显著高于阴性对照组(均P＜0.05),48 h作用达到最高峰.在不同浓度(0.1、1、10、100 μg/L)MCP-1刺激5 min时,HK-2细胞(PErk1/2)/(Erk1/2)和(P-P38MAPK)/(P38MAPK)的比值均显著高于阴性对照组(均P＜0.05),并表现为剂量依赖性.不同浓度MCP-1刺激下RhoA蛋白水平和RhoC基因表达水平与阴性对照组比较差异均无统计学意义(均P＞0.05).PD98059可以部分阻断MCP-1诱导的肾小管上皮细胞α-SMA蛋白表达水平,与阳性对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05);而SB203580及Y27632均不能阻断MCP-1诱导的α-SMA蛋白表达,与阳性对照组比较差异无统计学意义(均P＞0.05).MCP-1(10、100 μg/L)刺激下Snail基因表达水平明显升高,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 MCP-1诱导体外培养的HK-2细胞发生EMT与上调Erk1/2信号转导通路有关,并可能与上调Snail转录因子水平有关,本研究未能证实该机制与P38MAPK信号通路及Rho信号转导通路有关.     

川芎嗪对脂多糖诱导的内皮细胞损伤的保护作用

目的:探讨川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)RhoA、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶2(Rho associated coiled coil forming protein kinase,ROCK2)、肌球蛋白轻链(myosin light chain,MLC)磷酸化及细胞骨架连接蛋白(ezrin-radxin-moesin,ERM)磷酸化水平的影响。方法:以体外培养的HUVEC为实验对象,分为对照组、LPS组和TMP组(0.5、1.0、1.5 mg/mL),荧光定量PCR测定内皮细胞RhoA、ROCK2和信使RNA(p-Ezr mRNA)的表达,Western blot法测定内皮细胞RhoA、ROCK2、p-MLC和p-ERM蛋白水平的表达。结果:与对照组比较,LPS组RhoA、ROCK2、p-MLC和p-ERM蛋白及RhoA、ROCK2和p-Ezr mRNA表达均显著升高(P<0.01);与LPS组比较,TMP 3组RhoA蛋白表达与mRNA表达差异均无统计学意义(P>0.05),ROCK2、p-MLC和p-ERM蛋白及ROCK2、p-Ezr mRNA表达均降低(P<0.05~P<0.01),且TMP 3组之间ROCK2、p-MLC和p-ERM的分子表达差异均有统计学意义(P<0.05~P<0.01)。结论:TMP对LPS诱导的HUVEC损伤的保护作用可能是通过抑制Rho/ROCK信号通路中ROCK2、p-MLC和p-ERM的表达,以减弱LPS对内皮细胞骨架的损伤。     

Rho激酶抑制剂对类风湿关节炎患者滑膜单核巨噬细胞分泌炎症因子的影响

目的 研究类风湿关节炎(RA)患者关节滑膜单核巨噬细胞Rho激酶(ROK)活化情况,并探讨该激酶抑制剂对滑膜单核巨噬细胞分泌炎症细胞因子的影响.方法 单核巨噬细胞分离采用Ficoll密度梯度离心法和黏附法;ROK活性用磷酸化MYPTl蛋白表达来表示,磷酸化MYPTl蛋白检测采用免疫印迹法,单核巨噬细胞活性检测采用MTT法,细胞因子水平采用ELISA检测.结果 新鲜分离的RA患者关节滑液单核巨噬细胞ROK活性显著高于自身配对的和正常对照组外周血单核细胞;新鲜分离的RA患者滑液单核巨噬细胞磷酸化MYPTl表达量与RA患者DAS28评分呈正相关关系(r=0.69,P<0.05),ROK抑制剂Y27632在抑制RA滑膜单核巨噬细胞ROK活性的同时,对肿瘤坏死因子(TNr)α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6等炎症细胞因子分泌也有显著抑制作用,但对抗炎细胞因子IL-10分泌没有影响.结论 RA滑液巨噬细胞中ROK处于异常活化状态,并与RA疾病活动有关.ROK特异性抑制剂对RA滑液巨噬细胞分泌多种炎症细胞因子均有抑制作用,提示ROK可能是治疗RA滑膜炎症的潜在靶点.     

丹参酮ⅡA通过 Rho/Rho激酶途径保护脂多糖诱导内皮细胞损伤

Objective： To test whether tanshinone ⅡA （Tan ⅡA）, a highly valued herb derivative to treat vascular diseases in Chinese medicine, could protect endothelial cells from bacterial endotoxin （lipopolysaccharides, LPS）-induced endothelial injury. Methods： Endothelial cell injury was induced by treating human umbilical vein endothelial cells （HUVECs） with 0.2 μg/mL LPS for 24 h. Y27632 and valsartan were used as positive controls. The effects of tanshinone Ⅱ A on the LPS-induced cell viability and apoptosis rate of HUVECs were tested by flow cytometry, cell migration by transwell, adhesion by a 96-well plate pre-coated with vitronectin and cytoskeleton reorganization by immunofluorescence assay. Rho/Rho kinase （ROCK） pathway- associated gene and protein expression were examined by microarray assay; quantitative real-time polymerase chain reaction and Western blotting were used to confirm the changes observed by microarray. Results： Tan ][ A improved cell viability, suppressed apoptosis and protected cells from LPS-induced reductions in cell migration and adhesion at a comparable magnitude to that of Y27632 and valsartan. Tan II A, Y27632 and valsartan also normalized LPS-induced actomyosin contraction and vinculin protein aggregation. A microarray assay revealed increased levels of fibronectin, integrin A5 （ITG A5）, Ras homolog gene family member A （RheA）, myosin light chain phosphatase, phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate 3-kinase （PI3K, or PIP2 in Western blotting）, focal adhesion kinase, vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor 2 in the damaged HUVECs, which were attenuated to different degrees by Tan ⅡA, Y27632 and valsartan. Conclusion： Tan ⅡA exerted a strong protective effect on HUVECs, and the mechanism was caused, at least in part, by a blockade in the Rho/ROCK pathway, presumably through the down-regulation of ITG A5.     

Rho在二氧化硅诱导的人支气管上皮细胞 α平滑肌肌动蛋白表达中的作用

目的：探讨Rho在二氧化硅（SiO2）诱导人支气管上皮细胞（HBECs）α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达中的作用。方法：以SiO2处理的HBE细胞为研究对象,免疫细胞化学及Western印迹检测α－SMA表达;GST pull down分析Rho的活化情况;干预实验中用Rho抑制剂Y27632处理细胞后,Western印迹检测SiO2对α-SMA表达的影响。结果：SiO2 (0,50,100,200,300 μg/mL)分别作用HBECs细胞72 h后,α-SMA表达增强,其中以200 μg/mL SiO2组α-SMA表达最强,为对照组的（5.09±1.98）倍（P＜0.01）;用200 μg/mL SiO2分别作用HBECs细胞1,2,6,12,24 h后,Rho明显活化（P＜0.01）;Rho抑制剂Y27632明显抑制了SiO2诱导的α-SMA表达,20和30 μmol/L的Y27632抑制率分别为68％和75％（P＜0.01）。结论：Rho参与介导SiO2诱导的HBECs中α-SMA的表达。