热休克蛋白72肽结合区对肾小管上皮间质转分化的影响

目的 探讨热休克蛋白72肽结合区在肾小管上皮间质转分化(EMT)过程中的作用和可能机制.方法 应用质粒转染方法分别诱导热休克蛋白72(HSP72)野生型、肽结合区缺失型(HSP72-△PBD)和肽结合区(PBD)的表达.用转化生长因子β1(TGF-β1)刺激大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)48 h,Western印迹和免疫荧光染色检测细胞E-钙黏蛋白(cadherin),α-平滑肌肌动蛋白(SMA),HSP72和Smad3/磷酸化(p)-Smad3蛋白表达.结果 TGF-β1(10 μg/L)刺激NRK-52E细胞48 h后上调α-SMA和下调E-cadherin蛋白表达水平.Western印迹及细胞免疫荧光显示,过表达HSP72和PBD能明显减轻TGF-β1诱导的NRK-52E细胞E-cadherin蛋白表达下调和α-SMA蛋白表达上调,而过表达HSP72-△PBD不能改变上述蛋白的表达.此外,过表达HSP72和PBD显著抑制Smad3的磷酸化.结论 HSP72抑制Smad3活化和EMT的发生可能与PBD的功能有关.     

Numb基因在大鼠肾小管上皮细胞转分化过程中的作用

目的 探讨Numb在大鼠肾小管上皮细胞转分化过程中的作用。 方法 重组人转化生长因子β1（TGF-β1）刺激大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK52E细胞),不同浓度TGF-β1 （0、1、5、10、15、20 μg/L）作用48 h与TGF-β1 10 μg/L作用不同时间(0、24、48、72 h)后,采用RT-PCR、Western印迹和免疫荧光染色分别检测NRK52E细胞内E钙黏蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和Numb 的表达。采用RNA干扰技术下调Numb表达,Western印迹观察改变Numb水平对E-cadherin、α-SMA蛋白水平的影响。 结果 TGF-β1以剂量及时间依赖的方式诱导NRK52E细胞E-cadherin 蛋白表达下调,α-SMA 蛋白表达增高。Numb蛋白的表达随TGF-β1浓度的增加而增高,在5、10、15和20 μg/L时分别为0 μg/L时的1.33倍（P = 0.024)、1.39倍（P = 0.035）、1.45倍（P = 0.025）和1.51倍（P = 0.000)。而Numb蛋白和mRNA的表达亦随TGF-β1作用时间的延长而增高,作用24 h、48 h、72 h,Numb蛋白分别为0 h的1.48倍（P = 0.046)、1.54倍（P = 0.011）、1.79倍（P = 0.028）,Numb mRNA分别为0 h的1.56倍（P = 0.012)、1.82倍（P = 0.008）、1.82倍（P = 0.002）;同时Numb的分布也发生了改变,大量聚集在胞质中。下调Numb表达可以显著抑制TGF-β1诱导的α-SMA表达上调（为Numb表达正常时的18.1%,P = 0.004）、E-cadherin表达下调（为Numb表达正常时的2.19倍,P = 0.004）。 结论 Numb可以促进肾小管上皮细胞发生转分化。     

镉对离体肾小管上皮细胞的毒性及机理研究

为了进一步了解镉的肾毒性机理，作者采用放射免疫、细胞化学及生物化学分析的方法，观察了重金属镉对离体肾小管上皮细胞功能及代谢方面的直接作用。结果发现，经镉染毒后，肾小管上皮细胞对α－甲基－Ｄ－葡萄糖苷的摄取量明显减少，同时Ｋ离子外流增加，ｃ－ＡＭＰ含量降低，Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性明显受抑，在葡萄糖转运过程中，Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶所维持的电化学梯度对Ｎａ／糖转运起着极为重要的作用，肾小管上皮细胞内能源系统受损可能是镉致肾损伤的发病机理之一。此外，本研究尚检测了一组肾小管标志酶及功能酶（ＡＫＰ、γ－ＧＴ、ＬＤＨ、Ｇ－６－ＰＤ、ＮＡＧ）的变化，发现它们可很好地反应肾小管上皮细胞的损伤程度及代谢状态，具有较好的临床实用价值。     

不同固定剂在激光共聚焦荧光技术中的效果评价

【目的】 探讨3种不同的固定剂在激光共聚焦免疫荧光技术中对信号表达的影响。 【方法】 对培养的NRK-52E细胞分成胞浆,胞膜及胞核抗原3组,每组用4 g/L PFA,甲醇及丙酮分别固定后,完成免疫荧光实验;原代滑膜成纤维样细胞分两组用4 g/L PFA 固定后分别用TritonX-100 和预冷的甲醇进行打孔,完成免疫荧光实验之后,使用Confocal显微镜在条件同等的情况下观察并拍摄荧光图像,以证实不同的固定剂对信号表达的影响。【结果】 胞浆蛋白α-SMA用丙酮固定时信号清晰锐利,将Actin蛋白的丝状结构表达得非常充分;胞膜蛋白ZO-1用甲醇固定处理的信号最清晰;胞核蛋白磷酸化的Smad3用4 g/L PFA固定时p-Smad3信号与细胞核具有很好的共定位关系;原代滑膜成纤维样细胞用预冷甲醇打孔处理的细胞,其磷酸化的骨架相关蛋白(P-ERM)蛋白信号明显优于用TritonX-100打孔处理的细胞。 【结论】 针对不同抗原结构特点选用固定剂;有机溶剂固定剂用于细胞支架成分的固定,交联剂固定剂用于膜相关成分的固定,同时使用交联剂固定剂及有机溶剂打孔可较好的保存抗原而获得高质量的荧光图片。     

电化学免疫传感器测定Ag—Ab反应

利用电化学的免疫传感器测定Ａｇ－Ａｂ反应是一种最新的方法，该方法结合了多种现代技术，而且由于灵敏度高、特异性好等优点，在临床应用上有着广阔前景，本文以血型类免疫传感器为例，对免疫传感器的概念、原理及测试过程做一综述。     

尿胰蛋白酶原-2测定在急性胰腺炎诊断中的意义

目的探讨尿胰蛋白酶原-2的测定在急性胰腺炎诊断中的临床意义.方法收集69例急腹症病人血清和尿液标本,按最终诊断分为急性胰腺炎组(34例)和非急性胰腺炎组(35例),分别测定尿胰蛋白酶原-2、血清脂肪酶和血、尿淀粉酶,并将其结果进行比较.结果尿胰蛋白酶原-2试纸条检测对急性胰腺炎诊断的敏感性、特异性、准确度分别为85%、83%、84%;血清脂肪酶为82%、60%、71%;血淀粉酶为88%、54%、71%;尿淀粉酶为79%、54%、67%;结论尿胰蛋白酶原-2检测是诊断急性胰腺炎的一个非常有用的筛选指标,尤其是特异性较高.阴性结果可以在很大程度上排除急性胰腺炎.     

电化学免疫传感器测定Ag-Ab反应

利用电化学的免疫传感器测定Ag-Ab反应是一种最新的方法,该方法结合了多种现代技术,而且由于灵敏度高、特异性好等优点,在临床应用上有着广阔前景,本文以血型类免疫传感器为例,对免疫传感器的概念、原理及测试过程做一综述。     

干式化学法与比浊法检测脑脊液蛋白的比较

目的 比较干式化学法（Ａ法）与比浊法（Ｂ法）在测定脑脊液（ＣＳＦ）蛋白中的特点,指导临床选择合适的方法。方法 Ａ法和Ｂ法分别采用改良双缩脲法和磺基水杨酸－硫酸钠比浊法（即磺柳酸法）对ＣＳＦ进行测定,并对结果进行统计处理。结果 线性范围：Ａ法９为０．２～２．０ｇ／Ｌ,Ｂ法为０～２．４ｇ／Ｌ,批内变异系统（ＣＶ）Ａ法为２．１１％,Ｂ法５．９９％;批间ＣＶ;Ａ法为３。．６４％,Ｂ法炎１０７２％,平均回收     

干化学法与湿化学法检测血清胆红素的比较

目的了解干化学法与湿化学法在检测各类型黄疸患者的胆红素的差异。方法分别用干化学法和湿化学法对临床多型黄疸患者的血清进行了胆红素检测,并用SPSS6.0forWindows统计软件包对数据进行组间比较分析。结果总胆红素干湿两法结果无显著性差异(P＞0.05),但胆红素的其余指标两法间结果差异具高度显著性(P＜0.001)。结论干湿两种方法测定血清胆红素应建立各自的正常参考范围,提示干化学法未结合胆红素结果对阻塞性黄疸的诊断较湿化学法更具灵敏性。     

Rho激酶抑制剂对类风湿关节炎患者滑膜单核巨噬细胞分泌炎症因子的影响

目的 研究类风湿关节炎(RA)患者关节滑膜单核巨噬细胞Rho激酶(ROK)活化情况,并探讨该激酶抑制剂对滑膜单核巨噬细胞分泌炎症细胞因子的影响.方法 单核巨噬细胞分离采用Ficoll密度梯度离心法和黏附法;ROK活性用磷酸化MYPTl蛋白表达来表示,磷酸化MYPTl蛋白检测采用免疫印迹法,单核巨噬细胞活性检测采用MTT法,细胞因子水平采用ELISA检测.结果 新鲜分离的RA患者关节滑液单核巨噬细胞ROK活性显著高于自身配对的和正常对照组外周血单核细胞;新鲜分离的RA患者滑液单核巨噬细胞磷酸化MYPTl表达量与RA患者DAS28评分呈正相关关系(r=0.69,P<0.05),ROK抑制剂Y27632在抑制RA滑膜单核巨噬细胞ROK活性的同时,对肿瘤坏死因子(TNr)α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6等炎症细胞因子分泌也有显著抑制作用,但对抗炎细胞因子IL-10分泌没有影响.结论 RA滑液巨噬细胞中ROK处于异常活化状态,并与RA疾病活动有关.ROK特异性抑制剂对RA滑液巨噬细胞分泌多种炎症细胞因子均有抑制作用,提示ROK可能是治疗RA滑膜炎症的潜在靶点.