尼美舒利对人结肠癌细胞生长及细胞周期分布的影响

目的探讨尼美舒利对体外培养的结肠癌细胞生长及细胞周期分布的影响。方法以人结肠癌细胞株HT-29、HCT-116为对象，用体外药物敏感实验（MTT）法检测尼美舒利对肿瘤细胞的增殖抑制效应，流式细胞术检测肿瘤细胞周期分布变化情况。结果（1）尼美舒利对人结肠癌细胞株生长的抑制作用呈时间、剂量依赖性效应，且对HT-29细胞作用强于HCT-116细胞；（2）尼美舒利可改变结肠癌细胞株细胞周期的分布，明显降低增殖指数。结论尼美舒利可通过抑制COX2酶活性而抑制肿瘤细胞的分裂和增殖，诱导其凋亡，干预结肠癌的发展。     

鹅去氧胆酸诱导HCT-116细胞凋亡及其作用机制研究

目的 研究鹅去氧胆酸(CDCA)对结肠癌细胞HCT-116的影响,并探讨其作用机制.方法 采用体外细胞培养、四甲基偶氮唑蓝(MTT法)、苏木素-伊红染色(HssssE染色)、吉姆萨染色(Giemsa染色)、吖啶橙/溴化乙锭染色(AO/EB染色)和流式细胞术检测经CDCA诱导处理对结肠癌HCT-116细胞的存活率、形态学变化、细胞周期、线粒体膜电位和细胞凋亡率的影响.结果 试验结果表明,CDCA作用于结肠癌细胞HCT-116细胞株48 h的半抑制浓度为0.304 mmol/L.0.800 mmol/L CDCA处理48 h后细胞抑制率达88.4％,且表现出细胞体积缩小、细胞核固缩和染色质凝聚等凋亡特征性的形态学改变.流式细胞仪检测结果显示,经CDCA诱导处理后,细胞株细胞周期被阻滞于G2/M期,线粒体膜电位降低,0.400 mmol/L CDCA处理48 h后HCT-116细胞凋亡率达54.5％.结论 CDCA对人结肠癌HCT116细胞株的抑制作用与其剂量有依赖性,并可能通过线粒体途径诱导人结肠癌细胞HCT-116细胞株凋亡.     

ATR抑制剂VX-970对CPT诱导的结肠癌细胞生长的影响

目的:探讨ATR特异抑制剂VX-970对喜树碱抑制的结肠癌细胞HCT-116生长,促进结肠癌细胞HCT-116凋亡的影响。方法:采用克隆形成、MTS、流式细胞术等实验分别检测单独使用VX-970,CPT以及联合VX-970和CPT用药处理对细胞生长、细胞周期及凋亡等影响,蛋白免疫印迹检测DNA损伤关键蛋白p-ATR,p-Chk1,γH2AX等的表达。结果:VX-970增强CPT对HCT-116细胞生长和增殖的抑制作用,促进细胞凋亡和减弱细胞周期G2/M期的阻滞。结论:VX-970能显著增强CPT抑制HCT-116细胞生长,诱导细胞凋亡和提高细胞对CPT药物的敏感性。     

奥曲肽抑制肝癌生长的实验研究

目的研究生长抑素类似物奥曲肽在体外、体内对肝癌生长及凋亡的影响.方法采用3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法、DNA末端原位标记染色(TUNEL)及流式细胞技术检测奥曲肽对体外培养的肝癌细胞生长影响及凋亡的诱导作用.利用SMMC-7721肝癌细胞株建立裸鼠肝癌原位种植瘤模型,实验组皮下注射奥曲肽100μg@kg-1@d-1;对照组予生理盐水20μg@d-1;共给药8周.结果培养细胞经不同浓度的奥曲肽作用48h后,对肝癌细胞的生长具有明显的抑制作用,且肝癌细胞3H-TdR掺入值与奥曲肽的浓度呈负相关(r=-0.97,P<0.01).TUNUL显示,1×10-6mol/L的奥曲肽作用24h后,肝癌细胞凋亡率为15.2%±2.4%;流式细胞检测可见明显的凋亡峰.奥曲肽治疗组裸鼠肝癌原位种植瘤重量明显低于对照组(0.27±0.05vs0.85±0.37,P<0.01).结论体内及体外实验表明,奥曲肽能有效抑制肝癌生长,其机制可能与抑制肝癌细胞DNA合成及诱导肝癌细胞凋亡有关.     

奥曲肽对人胃癌细胞SGC-7901增殖及P-糖蛋白表达的影响

目的：观察不同浓度的奥曲肽(octreotide)单药或联合氟尿嘧啶(Fu)对人胃癌细胞SGC-7901生长的影响及能否阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡；同时探讨其对P-糖蛋白(P-gp)表达的影响。方法：分别或联合应用奥曲肽或Fu作用于SGC-7901细胞，应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察细胞生长抑制，应用流式细胞技术检测细胞周期、凋亡及P-gp的表达。结果：奥曲肽可抑制SGC-7901细胞生长，其抑制作用呈浓度和时间依赖性，并具有饱和性；各浓度组奥曲肽均未引起细胞周期阻滞和凋亡；联合用药产生拮抗作用；奥曲肽能显著下调SGC-7901细胞P-gp的表达。结论：奥曲肽可能通过非凋亡途径抑制SGC-7901细胞增殖，由于拮抗作用因而不主张与Fu合用，奥曲肽有可能通过下调肿瘤细胞P-gp的表达而逆转耐药。     

雷公藤红素对结肠癌细胞株HCT-116生长的影响及其作用机制

目的探讨雷公藤红素（CSL）对人结肠癌细胞株HCT-116生长的影响及可能的作用机制。方法采用不同浓度的CSL处理HCT-116细胞,MTT法检测细胞生长的抑制率;流式细胞术（FCM）检测细胞周期;透射电镜观察细胞凋亡形态变化;荧光底物法检测细胞蛋白酶体活性;Westernblot检测p27、Bax的表达变化。结果CSL明显抑制HCT-116细胞生长,呈现时间、剂量依赖性;流式细胞术显示CSL可阻止细胞周期于G0/G1期;电镜下观察部分细胞具有典型的凋亡细胞形态特征;CSL对HCT-116细胞糜蛋白酶活性具有明显的抑制作用,其效应呈现浓度依赖性;CSL干预后细胞内p27、Bax蛋白表达明显增加。结论CSL具有抑制结肠癌HCT-116细胞的生长、阻滞细胞周期、诱导凋亡的作用,其分子机制可能与其抑制细胞内蛋白酶体活性,导致p27、Bax蛋白降解受阻有关。     

氟尿嘧啶联合渥曼青霉素对人结肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨氟尿嘧啶(Fu)联合渥曼青霉素(wortmannin)对人野生型及突变型p53结肠癌细胞株（HCT-116和SW-480）增殖和凋亡的影响,阐明p53对人结肠癌细胞增殖和凋亡的作用。方法：将处于对数生长期的 HCT-116和SW-480人结肠癌细胞株分为空白对照组、氟尿嘧啶组、氟尿嘧啶联合渥曼青霉素组和氟尿嘧啶联合渥曼青霉素及p53抑制剂（PFT-α）组,分别给予氟尿嘧啶、渥曼青霉素及PFT-α,采用噻唑盐比色法(MTT)、Annexin V-FITC流式细胞术（FCM）检测各组细胞12、24和48 h的存活率和细胞凋亡率。结果：与氟尿嘧啶组比较,渥曼青霉素联合氟尿嘧啶组HCT-116和SW-480细胞存活率显著降低（P<0.05）,并随时间延长而逐渐降低;流式细胞术（FCM）检测,各组细胞凋亡率随时间的延长而增高（P<0.05）;与渥曼青霉素联合氟尿嘧啶组比较,氟尿嘧啶联合渥曼青霉素及PFT-α组HCT-116细胞存活率及细胞凋亡率无明显变化（P>0.05）,而SW-480细胞48 h的存活率显著降低（P<0.05）,凋亡率显著增高（P<0.05）。结论：渥曼青霉素能显著增强氟尿嘧啶对人结肠癌细胞增殖的抑制作用并促进结肠癌细胞凋亡;抑制p53表达能进一步增强渥曼青霉素联合氟尿嘧啶对p53突变型SW-480细胞增殖的抑制作用并促进细胞凋亡。
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奥曲肽联合特异性COX-2抑制剂对肝癌细胞的抑制作用

目的:研究特异性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂NS-398和生长抑素类似物奥曲肽联合使用对人肝癌细胞系SMMC-7721增殖、凋亡的影响。方法:采用四氮唑盐比色法(MTT法)观察细胞增殖活力改变,流式细胞仪检测细胞凋亡百分率。结果:(1)MTT法显示NS-398和奥曲肽均在一定范围内呈浓度和时间依赖性地抑制SMMC-7721细胞的增殖;联合用药组抑制率显著高于单用NS-398或奥曲肽组(P<0.01),金正均方法显示q>1.15,提示两药联合应用有协同抑制肝癌细胞增殖效应,并随着作用时间延长而增强。(2)流式细胞仪测定显示,NS-398、奥曲肽和两药联合作用于SMMC-7721细胞24 h后,联合用药组细胞凋亡率显著高于单一用药组(P<0.01)。结论:NS-398和奥曲肽呈剂量、时间依赖性地抑制SMMC-7721细胞增殖,促进SMMC-7721细胞凋亡,两者联合应用具有协同作用。     

靶向抑制livin基因后结肠癌细胞对伊立替康敏感性的变化

目的 观察靶向抑制livin基因后结肠癌细胞HCT116对伊立替康敏感性的变化.方法 采用脂质体包裹方法将载体介导的靶向livin基因的短发夹干扰RNA(a short hairpin RNA, shRNA)转入结肠癌细胞HCT116,48 h后蛋白印迹方法检测RNA干扰的生物学效应,应用伊立替康0.01、0.1、1、10 μg/mL梯度浓度作用于结肠癌细胞,24 h 后MTT方法检测抑制livin基因表达后结肠癌细胞对伊立替康的敏感性变化,分光光度法检测结肠癌细胞内凋亡相关因子caspase-3活性的改变.结果 靶向livin的shRNA有效地抑制了结肠癌细胞HCT116内livin基因的表达,抑制livin基因表达后结肠癌细胞对伊立替康的敏感性得到明显提高,细胞内的caspase-3活性显著增强.结论 靶向抑制livin基因表达后能够激活细胞凋亡信号通路,增强伊立替康的抗结肠癌作用.     

槲皮素联合奥曲肽对人乳腺癌细胞株MCF-7增殖的影响

目的研究槲皮素联合奥曲肽对人乳腺癌细胞增殖的影响.方法槲皮素联合奥曲肽作用于体外培养的人乳腺癌细胞株MCF-7,MTT法检测细胞增殖状况,流式细胞仪测定细胞周期分布和凋亡率,免疫细胞化学法检测生长激素、胰岛素及端粒酶的表达.结果槲皮素与奥曲肽在较高浓度水平联用抑制MCF-7细胞增殖.结论槲皮素联合奥曲肽对MCF-7细胞增殖具有抑制作用,其机制与阻滞细胞周期,抑制生长激素、胰岛素及端粒酶的表达有关.     

奥曲肽联合NSAIDs对结肠癌细胞生长的影响及作用机制

目的研究奥曲肽与非甾体类抗炎药物(NSAIDs)塞来昔布联合用药对人结肠癌细胞生长的影响及作用机制。方法 CCK-8法测定塞来昔布、奥曲肽单用及两者联合应用对人结肠癌细胞SW480增殖的影响;流式细胞技术检测细胞周期变化及细胞凋亡率的变化;Western blot检测未折叠蛋白反应(UPR)的标志分子BiP蛋白的表达。结果奥曲肽与塞来昔布联合应用与各自单用相比,细胞增殖减少,凋亡增加(P<0.05),各细胞时相的比例G2M期无明显变化(P>0.05),G0G1期增加(P<0.05),S期减少(P<0.05)。0、20、40、60、80μmol/L塞来昔布作用后细胞BiP表达量逐渐增加,80μmol/L塞来昔布与0、0.25、0.5、1、2mg/L奥曲肽作用后细胞BiP的表达量均减少。结论奥曲肽与塞来昔布联合应用能增强塞来昔布的抗肿瘤作用,其作用机制与奥曲肽抑制塞来昔布引起的UPR相关。     

索拉非尼联合顺铂抑制卵巢癌H08910细胞生长的体外研究

目的对索拉非尼联合顺铂抑制卵巢癌H08910细胞生长进行体外研究。方法探讨索拉非尼、顺铂单用以及索拉非尼与顺铂联合应用对卵巢癌H08910细胞增殖的抑制率、细胞凋亡率、细胞周期影响。检测细胞增殖的抑制率采用四甲基偶氮唑蓝方法,检测细胞凋亡率、细胞周期应用流式细胞仪。结果联合用药组对卵巢癌H0-8910细胞增殖抑制率明显高于单独用药组,两者能够诱导细胞凋亡及阻滞细胞周期,在联合应用时表现出协同作用趋势。结论索拉非尼能够将患者对化疗药物的敏感性提高,降低化疗药物应用剂量及毒副作用,可能成为化疗药物良好辅助用药。     

苦参碱对胰腺癌PC-3细胞凋亡及Bcl-2和bax表达的影响

目的探讨苦参碱对人胰腺癌PC-3细胞增殖和凋亡及凋亡相关基因Bcl-2和bax的影响,为苦参碱在抗肿瘤临床应用提供理论基础。方法应用MTT法检测苦参碱对人胰腺癌PC-3细胞增殖的影响,流式细胞仪检测苦参碱对PC-3细胞凋亡的影响,RT-PCR检测苦参碱对PC-3细胞Bcl-2和bax表达的影响。结果 MTT结果显示苦参碱对PC-3细胞的生长抑制作用呈现明显的浓度依赖性和时间依赖性（P〈0.01）。苦参碱能诱导PC-3细胞凋亡（P〈0.01）。苦参碱能明显的抑制PC-3细胞Bcl-2基因mRNA的表达;诱导bax基因mRNA的表达（P〈0.01）。结论苦参碱呈现浓度依赖性和时间依赖性抑制PC-3细胞的生长,诱导细胞凋亡,其作用与抑制PC-3细胞Bcl-2和bax基因mRNA的表达密切相关。     

奥曲肽诱导人胆管癌细胞凋亡过程中细胞内游离钙的变化

目的 探讨奥曲肽是否通过诱导人胆管癌细胞凋亡而抑制肿瘤生长，以及与细胞内游离钙的关系。方法 采用人胆管癌细胞SK－ChA-1，应用生长曲线，片段DNA琼脂糖凝胶电泳，Annexin V-FITC技术及激光共聚焦显微镜技术等方法进行检测和观察。结果 在奥曲肽作用下SK－ChA-1细胞生长受抑制。奥曲肽处理SK－ChA-1细胞后，Annexin V标记的凋亡细胞增多，DNA凝胶电泳显示典型的凋亡梯状图谱。细胞凋亡的同时细胞内游离钙浓度升高。结论 奥曲肽通过细胞内游离钙的变化，诱导人胆管癌细胞凋亡，是奥曲肽抑制胆管癌生长的机理之一。     

17-DMAG对肝癌HepG2细胞的作用研究

目的研究HSP90新型抑制剂17-二甲胺乙胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-dimethy-laminoethylamino-17-demethoxygeldanamycin,17-DMAG)对肝癌细胞株HepG2增殖及凋亡的影响,并对其机制进行初步探讨。方法 MTT比色法检测不同浓度的17-DMAG及5 mg/L的DDP对HepG2细胞的生长抑制率;Annexin V-FITC/PI双染法检测经17-DMAG及DDP作用后HepG2细胞凋亡率的变化。结果 MTT法显示17-DMAG能抑制肝癌HepG2细胞的增殖,且呈时间-剂量依赖性。250 nmol/L的17-DMAG低浓度水平较DDP组对HepG2细胞的抑制率明显增高(P<0.05)。光学显微镜观察17-DMAG作用48 h后HepG2细胞密度减低,细胞体积变小,随着药物浓度增大,细胞数目明显减少。Annexin-FITC/PI双染法检测结果显示,400 nmol/L 17-DMAG干预48 h后细胞早期凋亡率为(22.42±1.83)%,5 mg/L顺铂干预48 h后细胞早期凋亡率为(6.50±1.20)%,未干预组48 h后细胞早期凋亡率为(0.58±0.49)%,表明17-DMAG能诱导HepG2细胞凋亡,且17-DMAG组凋亡率明显高于5 mg/L顺铂组及未干预组(P<0.05)。结论热休克蛋白90抑制剂17-DMAG呈时间-剂量依赖性抑制肝癌HepG2细胞增殖,随着药物浓度的加大,作用时间的延长,细胞增殖能力逐渐下降,并且能诱导HepG2肝癌细胞的凋亡。17-DMAG抑制肝癌细胞的作用较DDP强。     

熊果酸对膀胱癌5637细胞的作用研究

目的观察熊果酸对高危浅表性膀胱癌5637细胞株的体外作用,为熊果酸用于膀胱癌治疗提供依据。方法体外常规培养5637细胞,取对数生长期细胞随机分为两组。实验组加入质量浓度为10、50、100、200 ug/mL的熊果酸分别处理24h、48h;对照组不加熊果酸。采用MTT法检测各组细胞生长抑制率;流式细胞仪检测凋亡率;western-bolt法检测survivin因子蛋白表达。结果熊果酸对5637细胞有明显的抑制增殖的作用,并对其有诱导凋亡的作用。结论 10～200 ug/mL熊果酸可有效抑制5637细胞增殖（P〈0.05）,抑制作用呈时间-剂量依赖性。作用48h时200 ug/mL的抑制率为47.38±4.69%,凋亡率为45.20±1.32%,与对照组比较,P均〈0.01;survivin因子蛋白表达随药物浓度增高而下降。     

反义端粒酶RNA与1,25-（OH）2D3抑制肝癌细胞增殖的协同作用

【目的】观察1,25-(OH2)D3对转染反义端粒酶RNA的肝癌细胞增殖的作用。【方法】经脂质体介导,将反义端粒酶RNA真核表达载体pBBS212-hTR导入维生素D3受体(VDR)阳性的肝癌细胞株SMMC7721细胞中培养。细胞克隆转移扩大培养,添加1,25-(OH)2D3分别作用于各实验组细胞后,采用四唑蓝比色实验(MTT)和平板克隆形成实验,检测细胞的存活和生长;TUNEL法检测细胞凋亡。【结果】转染组细胞和对照组细胞的端粒酶活性分别为0.686和1.685,说明反义端粒酶RNA可显著降低肝癌细胞端粒酶活性。10 nmol/L浓度的1,25-(OH2)D3对肝癌细胞的增殖具有明显的抑制作用;且较之于单独的1,25-(OH2)D3或转染反义端粒酶RNA对肝癌细胞增殖的抑制作用,在转染反义端粒酶RNA,降低肝癌细胞端粒酶活性后,1,25-(OH2)D3抑制肝癌细胞增殖的作用显著得到增强。各组细胞的凋亡率分别为3.4%、12.2%、8.8%、23.6%。经统计学处理,上述实验结果证实均存在显著的差异(P<0.01)。【结论】在转染反义端粒酶RNA、降低细胞端粒酶活性的基础上,1,25-(OH2)D3抑制肝癌细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用进一步得到增强。     

二甲双胍对人HER2阳性乳腺癌细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨二甲双胍对人HER2阳性乳腺癌细胞增殖与凋亡的影响。方法不同浓度的二甲双胍干预人HER2阳性乳腺癌细胞SK-BR-3后,采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,观察二甲双胍对HER2阳性乳腺癌细胞增殖与凋亡的影响。结果不同浓度的二甲双胍与SK-BR-3乳腺癌细胞共同培养后,随着二甲双胍浓度的逐渐增加,SK-BR-3细胞的增殖抑制也逐渐增加,细胞存活率逐渐下降。统计分析表明,不同浓度的二甲双胍处理组与对照组比较,差异均有显著性(P值均<0.05)。乳腺癌SK-BR-3细胞经二甲双胍处理后,细胞凋亡率(15.09%)明显高于对照组(3.21%),两者比较,差异有显著性(χ2=8.79,P=0.003)。结论二甲双胍对人HER2阳性乳腺癌细胞有增殖抑制及促凋亡作用,其分子机制有待进一步研究。     

三氧化二砷在体外抑制结肠癌细胞的研究

目的 在体外观察三氧化二砷(As2O3)对结肠癌细胞系HT-29的抑制作用,并探讨其作用机制,为其是否能作为结肠肿瘤的化疗药物提供理论基础.方法 将不同浓度As2O3作用于HT-29细胞不同时间后,用MTT检测细胞抑制率,光镜及透射电镜观察细胞形态学和超微结构的变化,通过流式细胞仪及共聚焦显微镜分析凋亡及自噬.结果 4.0μmol/L As2O3作用72h可明显抑制HT-29细胞增殖及诱发其凋亡,且抑制率与药物作用时间及浓度成正比.在凋亡早期细胞形态学变化在光镜下可见细胞缩小变圆,在电镜上可见细胞质浓缩、核固缩及自噬溶酶体.4.0μmol/L As2O3作用72h后HT-29细胞凋亡率为25%.结论 As2O3能明显抑制结肠癌细胞系HT-29的增殖,其作用机制与引起凋亡及自噬密切相关.