加味小陷胸汤对接种人胃癌SGC- 7901裸鼠移植瘤生长及Wnt/β- catenin信号通路相关蛋白表达的影响

目的 观察加味小陷胸汤抑制人胃癌细胞株SGC- 7901裸鼠皮下移植瘤生长作用,以及对Wnt/β- catenin信号通路相关蛋白和基因表达的影响,探讨加味小陷胸汤抗胃癌侵袭转移作用的分子机制。方法 构建人胃癌细胞SGC- 7901裸鼠皮下移植瘤模型。药物连续干预4周动态观察移植瘤体积变化,4周后剖取瘤组织称质量,采用Western blot法检测瘤组织β- 连环蛋白（β- catenin）、糖原合成酶激酶- 3（glycogen synthase kinase- 3,GSK- 3β）、原癌基因蛋白（cellular- myelocytomatosis viral oncogene,c- Myc）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）蛋白表达水平;采用RT- qPCR检测β- catenin、GSK- 3β mRNA表达水平。结果 与模型组比较,加味小陷胸汤各剂量组可显著降低SGC- 7901胃癌移植瘤模型裸鼠皮下移植瘤体积和质量（P<0.05）,能显著抑制移植瘤组织β- catenin、c- Myc、VEGF蛋白和β- catenin mRNA表达（P<0.05）,上调GSK- 3β蛋白和mRNA的表达水平（P<0.05）,降低基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）- 2、MMP- 9含量（P<0.05）。结论 加味小陷胸汤能够有效抑制人胃癌细胞SGC- 7901裸鼠皮下移植瘤的生长,并且可以调控与胃癌侵袭转移密切相关Wnt/β- catenin通路的过度激活。     

抑制糖原合酶激酶活性对老龄大鼠内皮祖细胞增殖的作用机制

【摘要】 目的 探讨抑制糖原合酶激酶3β（GSK3β）活性对老龄大鼠内皮祖细胞（EPC）增殖的作用机制。 方法 密度梯度离心法分离培养老龄大鼠骨髓源性EPC，取对数生长期的EPC，分别加入表达催化GSK3β失活的GSK3β KM基因的重组缺陷型腺病毒pMSCV GSK3β KM（基因转染组）或空病毒pMSCV GFP（对照组）。采用镜下计数法及四氮唑溴盐比色法（MTT）测定EPC增殖能力，荧光激活细胞分离仪（FACS）分析各组EPC细胞周期变化。采用蛋白印迹法测定Wnt信号通路中磷酸化糖原合酶激酶3β（pGSK 3β）、β 连环蛋白（β catenin）及细胞周期蛋白D1(cyclinD1)的蛋白表达。 结果 与对照组比较，基因转染组EPC数量显著增加(P＜001）；MTT法检测基因转染组EPC在490 nm 吸光度值与对照组比较差异有统计学意义（P＜001）；FACS分析显示基因转染组细胞周期S期比例较对照组显著增加（P＜001）；蛋白印迹法测定显示，与对照组比较，基因转染组pGSK 3β、β catenin及cyclinD1的蛋白表达显著增加（P＜001）。 结论 抑制EPC的GSK 3β活性可通过激活Wnt信号通路促进老龄大鼠EPC的增殖能力。     

茯苓酸抑制TRIM29表达通过Wnt信号通路调控宫颈癌细胞存活和凋亡

【目的】观察茯苓酸对宫颈癌细胞Caski存活、凋亡的影响及潜在作用机制。【方法】采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察茯苓酸处理或转染的Caski细胞生存能力,流式细胞术观察茯苓酸处理或转染的Caski细胞凋亡情况,实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测茯苓酸处理或转染的Caski细胞三基序蛋白29(TRIM29)mRNA的表达,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测茯苓酸处理或转染的Caski细胞TRIM29、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Caspase-9)、细胞周期调节蛋白Cyclin D1及Wnt通路蛋白β-连环蛋白(β-catenin)、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、c-Myc的表达。【结果】茯苓酸能够降低Caski细胞存活率,促进细胞凋亡,升高Caspase-9、β-catenin表达量,降低Cyclin D1、GSK-3β、c-Myc表达量,抑制TRIM29的mRNA和蛋白表达。沉默TRIM29可降低Caski细胞存活率,促进细胞凋亡,促进Caspase-9表达,抑制Cyclin D1表达。过表达TRIM29可通过上调Wnt通路活性部分逆转茯苓酸对宫颈癌Caski细胞存活和凋亡的作用。【结论】茯苓酸通过抑制TRIM29表达下调Wnt通路活性从而抑制宫颈癌Caski细胞存活,促进细胞凋亡。     

TRIP13通过Wnt/βcatenin信号通路促进非小细胞肺癌细胞的增殖与侵袭

目的 探讨甲状腺激素受体因子（TRIP13）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及其相关作用机制。方法 通过免疫组化法对比105例NSCLC组织与癌旁肺组织中TRIP13的表达差异，分析其表达与临床病理特征的关系。利用脂质体瞬时转染技术将si-TRIP13转染入人肺癌细胞系H1299，并将转染si-TRIP131与si TRIP13-2的细胞设为实验组，转染siRNA对照组的细胞设为阴性对照组（si-NC）组，未经任何处理的H1299细胞设为正常对照组。利用RT PCR与Western blot法检测siRNA转染效果；利用MTT、Transwell检测实验组与阴性对照组的细胞增殖与侵袭能力，最后利用Western blot检测实验组与阴性对照组细胞内Wnt/βcatenin信号通路关键蛋白β catenin及其下游相关靶蛋白cyclin D1和survivin的表达水平。结果 与癌旁肺组织相比，TRIP13在NSCLC组织中表达明显增高，且TRIP13阳性表达率与肿瘤分化程度、有无淋巴结转移及TNM分期有显著相关性（均P＜0.05）； 肺癌细胞系H1299在转染siRNA后，实验组细胞中TRIP13的mRNA与蛋白表达显著低于阴性对照组与正常对照组（P＜0.05）；与阴性对照组相比，实验组细胞的增殖、侵袭能力均显著降低，且Wnt/βcatenin信号通路中的β catenin、cyclin D1、survivin蛋白表达水平亦明显下降（均P＜0.05）。结论 TRIP13可能通过Wnt/β catenin信号通路调控NSCLC细胞的增殖、侵袭能力，从而促进NSCLC的发生、发展。     

Dishevelled-1，3影响肺癌细胞侵袭机制的研究

 目的　散乱蛋白（Dvl）亚家族成员在非小细胞肺癌中均存在过表达,但不同亚型对肺癌细胞侵袭能力的影响和可能的机制尚不清楚。方法　检测转染Dvl-1和Dvl-3后肺癌细胞系T细胞转录因子（T-cell factor,Tcf）转录活性的改变,β-连环蛋白（β-catenin）和p120连环蛋白（p120ctn）的表达,以及对细胞侵袭能力的影响。结果　Dvl-1和Dvl-3过表达后,肺癌细胞中p120ctn蛋白水平均上调,但Dvl-3可明显上调p120ctn mRNA水平。同时,Dvl-1过表达后Tcf 转录活性明显上调,而Dvl-3未明显影响其Tcf 转录活性。应用β-catenin和p120ctn抗体抑制β-catenin和p120ctn蛋白作用后,可分别显著抑制由Dvl-1和Dvl-3增强的细胞侵袭能力。结论　Dvl-1可能主要通过经典Wnt通路中的β-catenin,而Dvl-3则可能主要通过与非经典Wnt通路相关的p120ctn影响肺癌细胞的生物学行为。     

异丙酚通过上调 miR-520a-3p抑制Wnt/β-catenin信号通路调控乳腺癌细胞

【摘要】目的 探讨异丙酚（PROP）对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及潜在的分子机制。方法 将不同浓度的PROP处理乳腺癌MCF-7细胞分为2.5 μmol/L PROP组、5.0 μmol/L PROP组、10.0 μmol/L PROP组和20.0μmol/L PROP组;以不加PROP的为对照组（NC组）;PROP+转染组分为PROP miR-con组、PROP anti-miR-con组、PROP miR-520a-3p组、PROP anti-miR-520a-3p组。MTT法测定MCF-7细胞存活率,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,qRT-PCR检测miR-520a-3p的表达,Western blot检测细胞中Cyclin D1、MMP-2、MMP-9和β-catenin蛋白表达水平。结果 与NC组比较,PROP组可抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭且呈显著的剂量依赖趋势,促进miR-502a-3p的表达,抑制β-catenin蛋白表达;与miR-con组比较,上调miR-520a-3p 可下调Cyclin D1、MMP-2和MMP-9,抑制MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭;与PROP+anti-miR-con组比较,抑制miR-520a-3p表达可部分逆转PROP对MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭及Wnt/β-catenin信号通路蛋白β-catenin蛋白表达的影响。结论 异丙酚通过上调miR-520a-3p抑制Wnt/β-catenin信号通路,进而抑制MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭。异丙酚对乳腺癌具有潜在抑制作用。     

瑞舒伐他汀对胶质瘤U87细胞迁移、侵袭的抑制作用

目的探讨瑞舒伐他汀对胶质瘤细胞U87迁移、侵袭的抑制作用及相关机制。方法 0、5、10、20μmol/L的瑞舒伐他汀作用U87细胞24、48、72 h,CCK-8法检测细胞活力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Western blot检测基质金属蛋白酶MMP2、MMP9及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,5μmol/L组、10μmol/L组、20μmol/L组U87细胞活力降低(P0.01),呈时间及剂量依赖性,细胞迁移及侵袭能力降低(P0.01),MMP2、MMP9、Wnt1、Wnt3a、Wnt7a、β-catenin表达量下调(P0.01)。结论瑞舒伐他汀能显著抑制胶质瘤细胞U87迁移及侵袭能力,可能与阻断Wnt/β-catenin信号通路有关。     

蛇床子素对Ⅱ型胶原蛋白诱导的关节炎大鼠软骨损伤的改善及免疫调节作用

目的：研究蛇床子素对Ⅱ型胶原蛋白诱导的关节炎大鼠软骨损伤的改善及免疫调节作用。方法：用牛Ⅱ型胶原诱导构建类风湿性关节炎大鼠模型,在造模完成1周后以不同浓度（10、20、40 mg/kg）蛇床子素灌胃给药。每4 d测定大鼠的爪子体积并评定关节炎指数。30 d后,称重测定脾脏指数和胸腺指数,HE染色观察软骨损伤情况,ELISA检测白细胞介素（IL）?1β、IL?6和肿瘤坏死因子α（TNF?α）含量,qRT?PCR检测基质金属蛋白酶（MMP）?1、MMP?3和MMP?13 mRNA表达,Western blot检测Ki67、PCNA、Caspase?3、Caspase?9、MMP?1、MMP?3、MMP?13、Wnt1、β?catenin和LRP5表达。结果：与模型组相比,各给药组大鼠的爪子体积、关节炎指数、脾脏指数和胸腺指数均降低,软骨细胞排列紊乱程度减轻,炎性细胞数量减少,Ki67和PCNA表达均上调,Caspase?3和Caspase?9表达均下调,IL?1β、IL?6和TNF?α 含量降低,MMP?1、MMP?3、MMP?13、Wnt 1、β?catenin和LRP5表达均下调,其中以40 mg/kg组的作用最显著（P < 0.01）。结论：蛇床子素能够减轻类风湿性关节炎大鼠的软骨损伤、炎症反应及关节软骨基质胶原的破坏,该作用可能是通过抑制Wnt信号通路的激活来实现的。     

W nt／β-连环蛋白信号通路在诱导气道平滑肌细胞外基质蛋白沉积中的作用

目的探讨Wnt／β‐连环蛋白信号通路在TGF‐β1诱导人气道平滑肌细胞（HASMC）细胞外基质（ECM ）蛋白沉积中的作用。方法将原代培养的 HASMC用于实验。用Western blot的方法来分析蛋白表达量,用实时荧光定量PCR的方法来分析ECM蛋白的基因表达。结果用TGF‐β1刺激体外培养的 HASMC ,可以引起胶原蛋白Ⅰα1（P＜0．01）及ECM 蛋白mRNA （包括胶原蛋白Ⅰα1、纤连蛋白、多功能蛋白聚糖、层粘连蛋白α2及核心蛋白多糖）表达增加（P＜0．01）。TGF‐β1可以引起β‐连环蛋白（P＜0．05）及其mRNA表达显著增加（P＜0．01）。TGF‐β1通过抑制糖原合酶激酶3（GSK3）β活化（P＜0．01）而引起非磷酸化的β‐连环蛋白表达增加（P＜0．01）。此外,用Wnt信号通路药理学抑制剂PKF115‐584可以明显抑制TGF‐β1诱导的胶原蛋白Ⅰα1（P＜0．01）及ECM蛋白（包括胶原蛋白Ⅰα1、纤连蛋白及多功能蛋白聚糖）的基因表达（P＜0．01）。结论 HASMC中Wnt／β‐连环蛋白信号通路的活化,参与了TGF‐β1诱导的ECM蛋白沉积。     

转化生长因子β诱导肿瘤微环境改变促进胃癌NCI-N87细胞上皮间充质转化

目的探讨微环境因子在转化生长因子β（TGF-β）诱导胃癌上皮-间充质转化（EMT）中的作用。方法建立了TGF-β诱导胃癌细胞发生EMT模型,利用实时定量PCR、免疫荧光染色技术检测了EMT相关指标的表达情况,采用Transwell迁移实验、侵袭实验、划痕修复实验检测了胃癌细胞的转移能力;同时,利用实时定量PCR（RT-qPCR）和ELISA检测了TGF-β诱导刺激后胃癌微环境因子的改变,并通过免疫印迹检测了其下游信号分子的活性。结果 TGF-β能诱导胃癌细胞NCI-N87发生EMT改变,促进癌细胞迁移和侵袭。进一步研究发现,TGF-β能诱导表皮生长因子（ EGF）和血管内皮生长因子（VEGF）表达上调,Dickkopf-1（DKK1）和分泌型卷曲受体蛋白1（SFRP1）表达降低,进而分别诱导PI3K/AKT和Wnt/β-连环蛋白（catenin）通路的激活。结论 TGF-β通过诱导胃癌微环境因子的改变促进胃癌NCI-N87细胞发生EMT。     

Sulindac通过抑制Wnt通路诱导SMMC-7721肝癌细胞凋亡

目的初步研究Wnt通路及蛋白激酶B（PKB）在非甾体类抗炎药sulindac诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡过程的作用。方法利用流式细胞仪检测肝癌细胞7721的凋亡,利用Western blot检测caspase-9、PARP（poly ADP-ribose polymerase）等凋亡相关分子的剪切,β连环蛋白（β-catenin）及糖原合酶激酶3β（GSK3β）与蛋白激酶B（PKB）磷酸化水平的变化,利用RT-PCR检测β-catenin及c-myc的mRNA水平。结果sulindac能够诱导SMMC-7721细胞凋亡,显著降低β-catenin的蛋白水平,抑制GSK3β9位丝氨酸的磷酸化,同时促使caspase-9、PARP等凋亡相关分子发生剪切;β-catenin的mRNA水平未见变化;PKB的磷酸化水平未见降低,反而略有增高。结论sulindac能够通过抑制Wnt通路,促进β-catenin的蛋白降解,降低其蛋白水平,诱导SMMC-7721细胞凋亡,且该作用不依赖PKB活性的抑制。     

miR-208a-3p靶向LZTFL1调控宫颈癌细胞的增殖和侵袭转移及其分子机制

【摘要】 目的 探讨miR-208a-3p靶向亮氨酸拉链转录因子样1（LZTFL1）对宫颈癌细胞增殖、侵袭转移的影响和分子机制。方法 收集2016年5月～2018年3月于湖北省中西医结合医院妇产科收治并经病理科确诊的40例宫颈癌患者手术标本。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和蛋白质印记（Western Blot）检测宫颈癌组织和与其对应的癌旁组织中miR-208a-3p和LZTFL1的表达。将将宫颈癌细胞Hela分为anti-miR-NC组（转染anti-miR-NC）、anti-miR-208a-3p组（转染anti-miR-208a-3p）、pcDNA组（转染pcDNA）、pcDNA-LZTFL1组（转染pcDNA-LZTFL1）。采用MTT法检测细胞活力,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭数目,western blot检测细胞周期素D1（CyclinD1）、基质金属蛋白酶2（MMP 2）和MMP 9蛋白的表达。〖HTH〗结果〖HTK〗〓相较于癌旁组织,宫颈癌组织中miR-208a-3p的表达显著升高,LZTFL1的表达显著降低（P＜0.05）。miR-208a-3p靶向LZTFL1并负性调控其表达。与anti-miR-NC组比较,anti-miR-208a 3p组Hela细胞活力、迁移侵袭能力、CyclinD1、MMP 2和MMP-9蛋白的表达显著降低,p21的表达显著升高,差异均有统计学意义（P ＜0.05）。与pcDNA组比较,pcDNA-LZTFL1组Hela细胞活力、迁移侵袭能力、CyclinD1、MMP-2和MMP 9蛋白表达显著降低,p21表达显著升高,差异均有统计学意义（P＜005）。与anti-miR-208a-3p+si-NC组比较,anti-miR-208a-3p+si-LZTFL1组Hela细胞活力、迁移侵袭能力、CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白的表达显著升高,p21的表达显著降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。 结论 宫颈癌中miR-208a-3p呈高表达,LZTFL1呈低表达。抑制miR-208a-3p通过上调LZTFL1可抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

SOX21在胃癌中的表达和甲基化状态及对体外胃癌细胞的作用

【摘要】 目的 探讨性别决定区Y-BOX21(SOX21)在胃癌（GC）中的表达和甲基化状态及对体外胃癌细胞的作用。 方法 收集2016年4月~2017年5月于东莞市人民医院行胃癌根治术患者的癌组织及对应的癌旁组织各44例,以胃癌细胞株AGS和人胃粘膜上皮细胞株GES-1为进一步研究对象,将培养后的细胞分为空白对照组、NC组和SOX21组,甲基化特异性PCR检测SOX21甲基化状态;qRT-PCR、免疫组化（IHC）和Western blot检测SOX21和Wnt/β-catenin通路相关基因表达;CCK-8试剂盒和克隆形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell检测细胞迁移和侵袭能力。 结果 与癌旁组织相比,GC组织SOX21甲基化率明显升高（P＜0.001）,SOX21 IHC评分、mRNA表达和蛋白表达均明显降低（P＜0.05）。SOX21在GES-1细胞中呈去甲基化状态,而在AGS中呈完全甲基化状态。与GES 1细胞相比,AGS细胞中SOX21 mRNA和蛋白表达均显著降低（P＜0.05）。与NC组相比,SOX21组中SOX21 mRNA表达、蛋白表达和细胞凋亡率明显升高（P＜0.05）,细胞活力、克隆形成数、迁移和侵袭细胞数明显降低（P＜0.05）,β-catenin、c-myc、cyclinD1和MMP7蛋白表达明显降低（P＜0.05）。 结论 SOX21在胃癌组织中呈高 甲基化状态且表达降低,过表达SOX21可能通过抑制Wnt/β-catenin通路抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。     

lncRNA DLEU2通过调节miR-410-3p表达对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖及迁移、侵袭的影响

目的 研究长链非编码RNA（lncRNA）DLEU2对微小RNA（miR） 410 3p的调控作用及对类风湿关节炎（RA）滑膜成纤维细胞增殖、迁移、侵袭的影响。 方法 实时荧光定量PCR（qRT PCR）检测类风湿性关节炎患者滑膜组织中DLEU2和miR 410 3p的表达。LncBase Predicted v.2预测和双荧光素酶报告实验分析DLEU2和miR 410 3p的靶向关系。在RA滑膜成纤维细胞MH7A中转染si DLEU2或miR 410 3p,或共转染si DLEU2和anti miR 410 3p。噻唑蓝（MTT）、Transwell、Western blot检测RA滑膜成纤维细胞MH7A的增殖、迁移、侵袭及细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、p21、基质金属蛋白酶（MMP） 2、MMP 9蛋白表达。结果 RA患者滑膜组织中DLEU2表达量明显增加,miR 410 3p表达量显著减少（P＜0.05）。lncRNA DLEU2靶向调控miR 410 3p的表达。抑制DLEU2表达或miR 410 3p过表达明显降低RA滑膜成纤维细胞MH7A 24 h、48 h、72 h的OD值、迁移细胞数、侵袭细胞数、CyclinD1、MMP 2、MMP 9蛋白表达量,而显著提高p21蛋白水平（P＜0.05）。干扰miR 410 3p表达逆转了抑制DLEU2表达对RA滑膜成纤维细胞MH7A增殖、迁移侵袭的抑制作用。结论 lncRNA DLEU2在类风湿关节炎滑膜组织中表达上调,抑制其表达通过靶向miR 410 3p抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的增殖、迁移侵袭。     

miR⁃552⁃3p通过抑制DACH1促进肝细胞性肝癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的：探讨miR?552?3p在肝细胞性肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）中的表达及其促进细胞增殖和迁移、侵袭的机制。方法：qRT?PCR检测HCC细胞系及人正常肝细胞系中miR?552?3p的表达情况;下载TCGA数据库中HCC样本的微阵列数据,分析miR?552?3p在HCC癌组织及癌旁组织中是否存在表达差异;miR?552?3p mimics以及miR?552?3p inhibitor转染HCC细胞,荧光素酶报告基因验证miR?552?3p与DACH1是否存在靶向关系,CCK?8及Transwell实验检测miR?552?3p及其与DACH1相互作用对于HCC细胞增殖、迁移、侵袭的影响。结果：TCGA数据库中HCC样本的分析结果表明,miR?552?3p在HCC中高表达,同时qRT?PCR显示miR?552?3p在HCC细胞系中的表达水平显著高于人肝细胞系L02;miR?552?3p的高表达促进HCC细胞的增殖、迁移和侵袭,而抑制miR?552?3p表达后则相反;荧光素酶报告实验证实miR?552?3p靶向作用于DACH1的3′?UTR,上调miR?552?3p可抑制DACH1的表达,而下调miR?552?3p则增加DACH1表达;DACH1的过表达可抑制HCC细胞增殖、迁移和侵袭,但同时过表达miR?552?3p后DACH1对于HCC细胞相关功能的抑制即可解除;miR?552?3p正向调控Wnt/β?catenin信号通路的激活。结论：miR?552?3p靶向作用于DACH1促进HCC细胞增殖、迁移和侵袭,并参与调控Wnt/β?catenin信号。可能为HCC的诊疗策略提供潜在靶点。     

华蟾素对Wnt/β-catenin通路抑制肾癌细胞增殖及侵袭的影响

目的 探讨华蟾素对肾癌细胞侵袭和迁移的影响,并探讨其对Wnt/β-catenin信号通路的调控机制。方法将肾癌细胞分为对照组（添加PBS）和华蟾素组（添加华蟾素）,CCK-8法检测细胞增殖力,Transwell侵袭和细胞迁移法检测细胞侵袭和迁移力,流式细胞检测细胞凋亡和细胞周期,免疫蛋白印迹法检测Wnt/β-catenin和上皮间质变（epithelial mesenchymal transition,EMT）信号通路相关蛋白表达。结果与对照组相比,华蟾素组可抑制肾癌细胞增殖,抑制细胞侵袭和迁移力,促进细胞凋亡,阻滞细胞周期 (P<005);E-cadherin蛋白表达上调(P<005),Wnt/β-catenin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达下调(P<005)。结论华蟾素可通过调控Wnt/β-catenin信号通路,逆转EMT,抑制肾癌细胞增殖和侵袭。     

白藜芦醇通过调节miR⁃21⁃5p/PDCD4通路抑制血管平滑肌细胞增殖与迁移

目的：探讨白藜芦醇治疗高血压的作用靶点及相关作用机制。方法：利用血管紧张素Ⅱ诱导大鼠胸大动脉平滑肌细胞A7r5模拟高血压时平滑肌细胞增殖细胞模型,并使用白藜芦醇与miR?21?5p mimic进行干预。利用CCK?8实验检测A7r5细胞活力;利用细胞划痕实验检测A7r5细胞的迁移能力;利用real?time PCR技术检测miR?21?5p的表达;利用Western blot技术检测细胞增殖相关蛋白PCNA、Cyclin D1、CDK4与细胞迁移相关蛋白MMP2、MMP9、PDCD4的表达。此外,选取对数生长期293T细胞,利用双荧光素酶报告基因检测技术验证miR?21?5p与PDCD4的靶向关系。结果：与正常对照组相比,模型组细胞活力、迁移能力及增殖和迁移相关蛋白PCNA、Cyclin D1、CDK4、MMP2、MMP9与miR?21?5p的表达水平显著上调,PDCD4蛋白的表达水平显著下降,且差异具有统计学意义（P < 0.01）;与模型组相比,白藜芦醇处理组的细胞活力、迁移能力及增殖和迁移相关蛋白PCNA、Cyclin D1、CDK4、MMP2、MMP9与miR?21?5p的表达水平显著下调,PDCD4蛋白的表达水平显著上调,且差异具有统计学意义（P＜0.001）;而miR?21?5p mimic转染后细胞活力、迁移能力及增殖和迁移相关蛋白PCNA、Cyclin D1、CDK4、MMP2、MMP9与miR?21?5p的表达水平显著上调,PDCD4蛋白的表达水平显著下降且差异具有统计学意义（P＜0.001）,双荧光素酶检测显示miR?21?5p可显著抑制野生型PDCD4 3''UTR报告基因载体的荧光素酶活性（P < 0.01）。结论：白藜芦醇通过调节miR?21?5p/PDCD4通路,抑制血管平滑肌细胞增殖与迁移,进而对高血压起到一定的治疗作用。     

MMP14通过调节Wnt/β-catenin信号通路影响胃癌的发生、发展机制研究

目的 探讨基质金属蛋白酶-14(MMP14)对胃癌发生、发展的作用及其相关分子机制。方法 体外培养胃癌细胞和胃黏膜上皮细胞,检测MMP14基因表达差异的统计学意义;将胃癌SGC-7901细胞体外培养分为对照组(NC-shRNA)和实验组(MMP14-shRNA),分别进行转染实验;利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞技术检测细胞凋亡,黏附试验、Transwell试验分别检测细胞黏附、侵袭和迁移能力,蛋白印迹检测上皮-间质转化(EMT)和Wnt/β-catenin信号通路相关的蛋白表达。将体外转染的细胞接种于体内建立荷瘤裸鼠模型,观察和测量肿瘤体积和重量,蛋白印迹检测组织信号相关蛋白分子的表达。结果 与GSE-1细胞比较,胃癌SGC-7901、BGC-823和MKN45细胞的MMP14表达均显著性上调(P<0.01);与NC-shRNA组比较,体外结果表明MMP14-shRNA能够显著抑制SGC-7901细胞的增殖、黏附、侵袭和迁移能力,影响VEGF、E-cadherin、Vimentin和Wnt/β-catenin信号蛋白的表达(P<0.05);体内结果表明,MMP14-shRNA能够显著抑制肿瘤的生长,影响Wnt/β-catenin信号蛋白的表达(P<0.05)。结论 本研究表明MMP14可能通过调节Wnt/β-catenin信号通路活化影响胃癌的发生、发展。     

基因沉默整合素连接激酶对滋养细胞生物学功能的影响

目的：研究基因沉默整合素连接激酶（ILK）对人滋养细胞TEV-1细胞增殖、迁移和侵袭等的影响。方法：构建ILK-siRNA慢病毒载体后,转染人TEV-1细胞,分ILK基因沉默组（KD组）和空白质粒转染组（NC组）进行;qRT-PCR和Western blot检测mRNA和蛋白表达,MTT法、Transwell法和划痕实验等检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果：基因沉默ILK后,TEV-1细胞的ILK基因和蛋白的表达水平显著降低（P＜0.05）,证明干扰ILK表达成功。沉默ILK后,TEV-1细胞的增殖能力、侵袭能力、迁移能力均显著下降（P＜0.05或P＜0.01)。ILK-siRNA转染TEV-1细胞后,MMP-9和p-GSK3β mRNA和蛋白水平显著下降（P＜0.01）。结论：沉默ILK通过下调GSK3β和MMP-9的表达抑制人滋养细胞的增殖、迁移和侵袭。     

利多卡因调控miR 15a 5p对肝癌细胞生物学功能的影响及其机制

【摘要】目的 探讨利多卡因对肝癌细胞凋亡、迁移和侵袭的影响及其机制。 方法 使用不同浓度利多卡因作用于肝癌细胞HepG2,正常培养的HepG2细胞为对照组。流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法（Western blot）检测B细胞淋巴瘤/白血病 2（Bcl 2）、Bcl 2相关X蛋白（Bax）、E 钙黏蛋白（E cadherin）、基质金属蛋白酶 2（MMP 2）蛋白表〖JP2〗达,Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭,qPCR检测细胞中miR 15a 5p表达。在细胞中转染miR 15a 5p、anti miR 15a 5p〖JP〗及各自阴性对照的转染并使用01 mmol/L利多卡因处理细胞,观察其对HepG2细胞凋亡、迁移、侵袭的影响。 结果 与对照组相比,001、01和1 mmol/L利多卡因增加细胞凋亡率和Bax蛋白表达量（P＜005）,降低Bcl 2蛋白水平（P＜005）。01 mmol/L利多卡因明显降低迁移细胞数、侵袭细胞数和MMP 2蛋白表达量（P＜005）,升高E cadherin蛋白水平和miR 15a 5p表达量（P＜005）。过表达miR 15a 5p增加细胞凋亡率、Bax和E cadherin蛋白表达量（P＜005）,减少迁移细胞数、侵袭细胞数、Bcl 2和MMP 2蛋白表达量（P＜005）。 结论 利多卡因通过调控miR 15a 5p表达抑制肝癌细胞迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡。