直接多肽结合试验组合人细胞系活化试验预测皮肤致敏物的探讨

目的 建立直接多肽结合试验（DPRA）和人细胞系活化试验（h-CLAT）的皮肤致敏组合检测方法，对化学品及植物提取物的致敏性进行初筛。方法 选择12种化学品和7种植物提取物为受试物，把不同受试物分别与两种肽（半胱氨酸肽和赖氨酸肽）共孵育24 h，采用高效液相色谱法分析反应后多肽消耗。同时将不同浓度的受试物与体外培养的人急性单核细胞白血病细胞（THP-1）共孵育24 h，通过流式细胞仪检测暴露后细胞表面标志物CD86和CD54的变化。再进一步比较DPRA和h-CLAT预测结果的一致性。结果 DPRA方法和h-CLAT方法准确区分了12种化学品的皮肤致敏性，其中2种判定为阴性，10种判定为阳性，两种方法检测结果一致。DPRA对植物提取物致敏性的预测中，除绿茶提取物无法判定外，其余6种均为皮肤致敏疑似物质。h-CLAT预测中，除绿茶提取物、马齿笕提取物和人参果提取物为非致敏物，其余4种植物提取物为致敏物。DPRA与h-CLAT预测的一致性为0.57。结论 DPRA与h-CLAT的简单组合可以实现对单一化合物的准确预测，对于复杂混合物可实现初步预测，确认需要进一步组合其他方法。     

基于ARE-Nrf2的皮肤致敏体外检测方法及其在样品检测中的应用

目的建立基于ARE-Nrf2荧光素酶的皮肤致敏体外检测方法,并对化学品及混合物样品进行皮肤致敏性检测。方法构建含有选择性质粒的稳转HaCaT细胞株(DSens),不同浓度受试物与细胞共孵育48 h,通过荧光的读取检测细胞荧光素酶的表达量,从而判断物质的致敏潜力。对16种已知皮肤致敏化学物质和6种混合物样品进行皮肤致敏性预测。结果使用DSens的方法可准确区分16种参考物质的皮肤致敏性,6种混合物样品中,5种预测结果与其他检测方法预测结果一致,另一种未知样品预测为阳性。结论 DSens体外检测方法可以代替部分动物测试,用于可溶性皮肤致敏物质的预测。     

皮肤致敏试验替代方法的研究进展

皮肤致敏(过敏性接触性皮炎)是皮肤接触某些小分子化合物而引起的迟发性超敏反应。经典的检测化学物接触致敏性的方法是通过动物试验来检测,鉴于欧盟于2013年颁布全面禁止化妆品动物试验的规定,替代试验将来是化学品/化妆品致敏研究的主要趋势,本文综合近年的国内外文献,对现行的通过OECD认证的和正在开展研究的皮肤致敏替代试验,如LLNA、DPRA、Keratino SensTM、h-CLAT试验等进行综合论述和评估,为未来体外替代试验能够客观、公正的对致敏结果评估提供参考。     

一种皮肤致敏体外替代方法介绍-人细胞系激活试验

过敏性皮炎是由过敏原引起的皮肤病,主要是指人体接触到某些过敏原而引起皮肤红肿、发痒、脱皮等皮肤病症。目前,化学物致敏性评价主要依赖于动物实验。近年来,在动物福利和政府监管的推动下,采用体外培养细胞代替动物模型进行化学物致敏性的研究已成为趋势。人细胞系激活试验主要通过检测人THP-1细胞接触化学物后细胞表面标志物以及信号通路的变化判断其是否具有致敏性。该试验方法已被欧美和日本的多个实验室验证其可行性,但目前其临床应用价值还未被完全认可。随着研究的逐步深入,新的标志物和评定方法也在不断被开发和验证。     

冷烫液皮肤刺激性和致敏性试验研究

目的 检测冷烫液皮肤接触后对皮肤的刺激性和致敏性，以评估其使用的安全性。方法采用新西兰家兔进行急性皮肤刺激性试验，用白化豚鼠进行皮肤变态反应试验。结果44份烫发液的88个受试物中，有6份的第1剂和2份第2剂显示为轻刺激性，其余均为无刺激性，88份受试物均未发现有皮肤致敏性。结论所检冷烫液均无致敏性，大多数属无刺激性，仅少量有轻刺激性，均为合格产品。     

复方牡蛎根管充填糊剂的皮肤致敏性观察

目的 评价一种新型根管充填糊剂--复方牡蛎糊剂潜在的皮肤致敏性.方法 采用豚鼠最大剂量试验方法,选用健康白色豚鼠40只,随机分为阴性对照组、粉剂组、混合物组、阳性对照组(各10只),分别于皮内注射9 g/L氯化钠溶液、材料粉剂浸提液、材料混合物浸提液、50 g/L 甲醛溶液与完全弗氏佐剂的乳化液,进行初次致敏,1周后进行二次致敏,于二次致敏后第14天进行激发接触,分别于24、48、72 h后观察注射处皮肤有无红斑、水肿现象,并计算致敏率.结果 阴性对照组、粉剂组与混合物组动物均无明显致敏反应,阳性对照组出现明显红斑、水肿现象.粉剂组致敏率10%,混合物组的致敏率为0.结论 复方牡蛎糊剂作为根管充填糊剂无潜在的皮肤致敏性.     

“洗四方”袋泡剂皮肤刺激性与致敏性的实验研究

目的：研究“洗四方”袋泡剂对实验动物的皮肤刺激性与致敏性，为临床安全用药提供依据。方法：SD大鼠8只应用同体左右侧自身对比法，采用大鼠单次、多次给药皮肤刺激性实验，作皮肤刺激性强度评分，取大鼠皮肤进行组织学检查；30只白化豚鼠，随机分为阴性对照组、阳性对照组、受试药物组，每组10只，作过敏性实验，记录过敏反应评分，计算过敏反应发生率，综合评价“洗四方”袋泡剂的用药安全性。结果：“洗四方”袋泡剂对大鼠皮肤单次给药无刺激性，多次给药对完整皮肤无刺激性，对破损皮肤有轻度刺激性，与同区蒸馏水部位相比评分差异无统计学意义（P〉0．05）；“洗四方”袋泡剂对白化豚鼠无致敏作用，而2，4-二硝基氯苯过敏率为100％。结论：在实验条件下，受试品“洗四方”袋泡剂对大鼠正常皮肤无刺激性，对白化豚鼠无致敏性，符合外用制剂的安全性要求，可供熏洗、湿敷外用给药；对大鼠破损皮肤有轻度刺激性，应慎用或避免用于破损皮肤。     

肿瘤抗原致敏DC诱导T淋巴细胞增殖及杀伤效率

目的:探讨胃癌细胞抗原致敏的树突状细胞(DC)诱导T淋巴细胞(T lymphocyte)增殖和杀伤胃癌细胞的效率.方法: 应用淋巴细胞分离液分离人外周血单个核细胞,经重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组人白细胞介素4(rhlL-4)和肿瘤坏死因子α(TNF-α),体外诱导培养获取成熟DC,流式细胞术检测DC表面CD83,CD80,CD86及HLA-DR表型;同时经重组人白细胞介素2(rhlL-2)诱导扩增T淋巴细胞,检测CD3,CD4,CD8及CD56表型.以人胃癌OCUM-2MD3细胞株冻融抗原致敏DC,然后刺激T淋巴细胞,得到肿瘤抗原特异的细胞毒性T淋巴细胞(CTL).MTT法检测致敏DC对T淋巴细胞增殖的影响和致敏DC活化的特异性CTL对胃癌细胞的体外杀伤效率.结果: 体外诱导人外周血单个核细胞,可获得大量形态典型、具备强烈刺激增殖能力、且高表达CD80,CD86的DC及高表达CD3的T淋巴细胞;MTT法检测结果发现胃癌细胞抗原致敏DC组刺激T淋巴细胞增殖指数显著高于未致敏DC组和对照组(P<0.01);流式细胞术检测结果发现胃癌细胞抗原致敏DC主要刺激T淋巴细胞增殖为CD8 的CTL(60.58±8.43)%,经胃癌细胞抗原致敏DC刺激后,对胃癌细胞的杀伤效应显著增加,致敏DC组对胃癌细胞杀伤活性(71.57±4.83)%,较未致敏DC组(12.53±1.62)%和单纯T淋巴细胞组(10.45±1.40)%作用更为显著(P<0.01),而且随着效靶比增加,其杀伤效应亦显著增加.结论: 胃癌细胞抗原致敏DC可显著刺激T淋巴细胞增殖为CD8 CTL,进而发挥其高效杀伤胃癌细胞的作用.     

间充质干细胞在致敏受者造血干细胞移植中的作用

【目的】 本实验拟研究骨髓间充质干细胞(MSC)在致敏受者造血干细胞移植中的作用?【方法】 体外分离BALB/c小鼠骨髓细胞,通过贴壁培养方法获得MSC,应用流式细胞仪检测细胞表面分子标记?通过异基因脾细胞输注方法建立致敏动物模型;绿色荧光染料标记骨髓MSC,分别移植到非致敏及致敏受者体内,并于移植后不同时间点检测MSC的归巢情况?致敏BALB/c小鼠经照射预处理,联合应用同基因MSC与异基因骨髓细胞移植,每日观察小鼠的生存情况?【结果】 体外培养第4代MSC表现为长梭形,阴性表达造血细胞表面分子而阳性表达粘附分子?动物体内实验发现移植后第48小时,MSC在非致敏受者体内主要归巢于骨髓,而在致敏受者体内主要归巢于脾脏?造血干细胞移植实验中,致敏小鼠接受同基因骨髓MSC与异基因骨髓细胞移植,结果发现致敏小鼠在移植后第12 ~ 16天全部死亡,生存中位数时间是14 d?【结论】 成功培养小鼠骨髓MSC;移植后MSC在致敏受者体内主要归巢于脾脏组织;联合应用MSC移植并不能有效促进异基因造血干/祖细胞在致敏受者体内植入?     

防霉防蛀布生物学评价

目的 采用动物对防霉防蛀布进行安全性评价和防霉、防蛀的效果评价。方法 依据ISO10993-10方法通过家兔皮肤刺激试验和豚鼠致敏试验进行生物学评价。依据行业标准FZ／T20004-91和DA／T26-2000进行防霉药效和防蛀检测。结果 试验样品原发性刺激指数为0．0，在整个试验期，临床观察正常，未观察到致敏的证据。试样织物失重保护率为99．18％，织物受损害程度均为0，7日内未见霉斑。结论 试验样品无皮肤刺激作用，无迟发性致敏作用，防霉防蛀药效合格。     

Oral Cadmium Intake Enhances Contact Allergen-induced Skin Reaction in Rats

ObjectiveThe effect of oral cadmium (Cd) intake to influence contact skin allergies was examined, since it is known that Cd is a heavy metal that affects many tissues, including the skin, in which it disturbs homeostasis, thus resulting in inflammation and injury.MethodsMale rats were evoked with experimental contact hypersensitivity reaction (CHS) to hapten dinitrochlorobenzene (DNCB), after prolonged (30 day) oral exposure to an environmentally relevant Cd dose (5 ppm). The ear cell population was analyzed with flow cytometry. Cytokine production by ear skin cells and the activity of skin-draining lymph node (DLN) cells were measured using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).ResultsOrally acquired Cd (5 ppm) increased CHS intensity only in Dark Agouti (DA) rats by affecting inflammatory responses in both the sensitization (an increase of IFN-γ and IL-17 cytokine production) and challenge (an increase of CD8⁺ and CD4⁺ cell number and TNF, IFN-γ and IL-17 cytokine production) phases. An increased CHS reaction was seen in Albino Oxford (AO) rats only at a high Cd dose (50 ppm), during the challenge phase (an increase of CD8⁺ and CD4⁺ cell number and TNF, IFN-γ and IL-17 cytokine production).ConclusionThese novel data indicate that oral Cd intensifies the skin response to sensitizing chemicals such as DNCB.     

豚鼠主动全身过敏试验两种阳性物质选择的探讨

目的 比较两种阳性物质人血白蛋白、卵白蛋白对豚鼠主动全身过敏作用,为过敏性试验提供较好的阳性对照。方法 将豚鼠随机分为14组,以人血白蛋白、卵白蛋白(2、10、100 mg/只)、0.9%氯化钠注射液等受试物为对照,研究不同致敏剂量、激发剂量、激发时间等条件下,豚鼠全身主动过敏的反应情况。结果 在2~100 mg/只剂量范围内,人血白蛋白、卵白蛋白豚鼠主动全身过敏反应的发生率为100%。在2~10 mg/只剂量范围内,过敏症状发生程度随致敏剂量、激发剂量的增加而增加,相同剂量的卵白蛋白较人血白蛋白反应程度更强。结论 豚鼠主动全身过敏试验,阳性对照推荐使用卵白蛋白,剂量为2 mg/只。     

肿节风浸膏溶液对鼻咽癌细胞系CNE-2的放射增敏作用

目的：探讨肿节风浸膏对鼻咽癌细胞系CNE-2的细胞毒性作用以及对放射敏感性的影响。方法：应用克隆形成方法,观察不同浓度的肿节风浸膏对CNE-2的细胞杀灭效应,求得IC50,选择合适浓度的肿节风浸膏配合照射和单纯照射对细胞的杀伤作用,计算细胞存活率,用多靶单击数学模型进行曲线拟合作图。结果：与照射配合的肿节风浸膏的合适浓度为10mg／L。单纯照射组D0值为3．096Gy,照射加肿节风浸膏组D0值为2．441Gy,放射增敏比（SER）为1．268（3．096／2．441）。结论：肿节风浸膏具有一定的放射增敏作用。     

华蟾素抑制结肠癌细胞增殖转移的实验研究

目的:观察华蟾素对结肠癌细胞HCT116细胞增殖、迁移的影响,探讨其可能的作用机制。方法:常规体外培养结肠癌细胞HCT116细胞系,采用CCK-8法检测不同浓度华蟾素作用不同时间对HCT116细胞增殖的抑制作用,细胞划痕实验和Transwell小室法检测华蟾素对细胞迁移能力的影响,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-2、钙黏蛋白(E-Cadherin)的表达水平。结果:CCK-8法检测结果表明,华蟾素对HCT116细胞的生长有明显抑制作用,其抑制作用随药物浓度和作用时间的增加而增强(P0.05);细胞划痕实验和Transwell小室法结果显示,随华蟾素药物浓度的增加,HCT116细胞迁移能力下降(P0.05);Western blot结果表明,华蟾素能够明显抑制HCT116细胞MMP-9的蛋白表达并上调E-Cadherin的蛋白表达(P0.01),但对MMP-2蛋白的表达无显著影响(P0.05)。结论:华蟾素能够抑制人结肠癌细胞的增殖和转移,其机制可能与其抑制MMP-9和上调E-Cadherin的蛋白表达有关。     

人胶质瘤自杀基因细胞系的建立及其在胶质瘤治疗研究中的应用

目的 构建CD基因工程化人脑胶质瘤细胞并在此基础上进行胶质瘤治疗研究。方法 通过In-fusion基因克隆的方法,构建携带CD基因慢病毒载体;通过293T细胞体外包装获得慢病毒,并测定病毒效价;通过慢病毒体外感染细胞获得CD基因工程化人脑胶质瘤细胞;通过流式分选获得基因稳定表达细胞;通过CCK-8评价加入5-FC前药和(或)HSV-1后细胞存活率。结果 成功构建pLVX-CD-IRES-ZsGreen1慢病毒载体并体外包装获得相应慢病毒;慢病毒感染人脑胶质瘤U87细胞后获得携带CD基因的阳性细胞,并通过体外培养30天后流式分选获得稳定阳性细胞;加入前药5-FC和(或)HSV-1后对携带CD基因的U87细胞杀伤作用明显(P<0.01),其中5-FC联合HSV-1对胶质瘤细胞作用更加高效(P<0.01)。结论 成功获得携带CD基因的人脑胶质瘤细胞;前药5-FC联合HSV-1对胶质瘤细胞具有更加高效的杀伤疗效。     

三种鸡胚绒膜尿囊膜移植瘤模型对比分析

目的通过比较三种不同癌细胞株在鸡胚绒毛尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)上的生长情况,从中筛选最佳移植癌细胞株,建立移植瘤模型并观察生物学特性。方法分别将人肺癌A549株、舌鳞癌TCA8113株与人肝癌QGY7703株接种于7日龄鸡胚CAM上,对各自鸡胚成活率、瘤株成活、成瘤率和诱导血管生成情况等指标进行检测,并观察筛选移植瘤模型生长特性。结果与人肺癌A549株和肝癌QGY7703株接种组相比,舌鳞癌TCA8113株接种组成瘤率最高(P0.05),为最佳移植癌细胞株,最佳接种癌细胞数量为8.0×106/个,接种后瘤体最佳生长周期为4~8 d,最佳实验时间为接种后第7天。结论筛选建立了舌鳞癌TCA-CAM移植瘤模型,为深入研究肿瘤生长生物学特性、血管生成机制、侵袭转移机制和筛选抗肿瘤药物提供了良好的实验动物模型。     

普罗布考对oxLDL诱导的人单核细胞株THP-1粘附功能的影响

目的 :探讨普罗布考对氧化修饰低密度脂蛋白 (ox L DL )诱导的人单核细胞株 THP- 1粘附功能的影响。 方法 :分别应用流式细胞仪和β- N -乙酰氨基己糖苷酶比色法 ,观察不同浓度普罗布考对 ox L DL诱导的 THP- 1对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的粘附及粘附分子 CD11b和 CD5 4表达水平的影响。 结果 :普罗布考呈浓度依赖方式抑制 ox L DL诱导的 THP- 1对 HU VEC的粘附 ,并下调粘附分子 CD11b的表达 (P<0 .0 1) ,但对 CD5 4表达水平无明显影响。结论 :普罗布考除具有调脂作用外 ,尚可抑制循环血单核 -巨噬细胞与内皮细胞粘附聚集 ,具有抗炎作用