大豆苷元对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的观察大豆苷元对乳鼠心肌细胞损伤的影响并探讨其机理。方法体外培养乳鼠心肌细胞,制备缺氧/复氧损伤模型,测定细胞存活率、上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、肌酸激酶(CK)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)含量。结果大豆苷元10~160μmol/L均能提高缺氧/复氧损伤心肌细胞的存活率和用MTT法测得的A570 nm值(P<0.01);抑制缺氧/复氧损伤引起心肌细胞的LDH和CK释放;减少MDA的生成,提高SOD的活性,抑制NOS活性,降低NO水平(P<0.05,P<0.01)。结论大豆苷元对乳鼠缺氧/复氧损伤的心肌细胞具有保护作用。     

高碘对原代培养的大鼠皮层神经元细胞凋亡影响的实验研究

目的研究高碘对原代培养的大鼠皮层神经元细胞凋亡的影响，并对其机制作初步探讨。方法采用体外新生大鼠皮层神经细胞培养法观察不同浓度的碘化钾对神经细胞凋亡及其一氧化氮（NO）含量及一氧化氮合酶（NOS）活性的影响。结果高碘可以诱发原代培养的大鼠皮层神经元细胞发生凋亡，细胞凋亡率随碘化物浓度的升高而升高，实验组细胞的NO含量及NOS活性较正常对照组增高。结论高碘可以诱导原代培养的大鼠皮层神经元细胞发生凋亡，并呈剂量依赖关系，其机制可能与NOS活性及NO含量增高有关。     

烟雾吸入伤大鼠肺组织抗氧化酶活性和谷胱甘肽含量变化

目的观察烟雾吸入伤大鼠肺组织抗氧化酶活性和谷胱甘肽含量变化.方法建立大鼠烟雾吸入伤模型,将60只Wistar大鼠随机分成正常对照组,烟雾吸入伤1、3、6、12h和24h组,分取肺组织测定过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽(GSH)含量.结果肺组织匀浆CAT活性在烟雾吸入伤后3、6h明显高于正常对照组(P<0.05、P<0.01),伤后12h、24h已低于正常对照组;GSH-PX活性伤后1h已明显高于正常对照组(P<0.01), 伤后3h达峰值,伤后12、24h明显低于正常对照组(P<0.05);SOD活性和GSH含量从烟雾吸入伤后1h开始明显低于正常对照组,一直持续到伤后24h(P<0.05,P<0.01).结论烟雾吸入伤后肺组织CAT、GSH-PX活性先增后减,而SOD活性和GSH含量持续降低,反映了肺内氧应激的强度和抗氧化物质的不同作用.     

依达拉奉对原代海马神经元缺氧复氧损伤的保护作用

目的:研究依达拉奉对原代培养海马神经元缺氧复氧损伤的保护机制.方法:建立离体海马神经元缺氧复氧的细胞损伤模型,实验分组为正常对照组、缺氧复氧组、依达拉奉干预组,其中依达拉奉干预浓度分为1、10、100和300 μmol/L.观察海马细胞四甲基偶氮唑盐(MTT)代谢率、丙二醛(MDA)含量及一氧化氮合酶(NOS)活性的变化,流式细胞仪观察细胞凋亡.结果:与缺氧复氧组相比,依达拉奉100μmol/L组和300 μmol/L组的MTT代谢率显著增高(P＜0.01),MDA含量降低(P＜0.05),NOS活性降低(P＜0.05),细胞凋亡率降低(P＜0.01).结论:依达拉奉能够有效地抑制脂质过氧化作用,降低MDA及NOS活性,减少细胞凋亡率,对缺氧损伤的神经元具有显著的神经保护作用.     

超时间窗溶栓治疗对大鼠急性脑梗死后自由基活性和 Caspase-3表达的影响

目的研究急性脑梗死超时间窗溶栓治疗对大鼠脑组织一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性及Caspase-3表达的影响。方法采用大鼠自体血栓制作大脑中动脉梗死模型,将144只SD大鼠随机分为对照组、梗死组、6 h溶栓组,各48只。采用比色法和羟胺法分别检测梗死脑组织中NO、MDA含量,NOS、SOD活性;采用HE染色观察神经元形态变化;采用免疫组化法检测脑组织神经元型一氧化氮合酶(n NOS)和Caspase-3的表达。结果与梗死组相比,6 h溶栓组NO、MDA含量、诱导型一氧化氮合酶(i NOS)活性在各时间点均明显降低(P<0.05),SOD活性升高(P<0.05),n NOS、Caspase-3的表达明显减少(P<0.05)。结论超时间窗溶栓治疗可通过降低自由基活性,增加SOD活性,减轻梗死后氧化应激反应,减少凋亡分子的表达。     

葛根素在新生鼠缺氧缺血性脑损伤中的神经保护作用

目的:建立新生大鼠缺氧缺血脑损伤(HIBD)模型,观察新生鼠缺氧缺血后脑组织一氧化氮(NO)和NO合成酶(NOS)及神经元凋亡的变化及葛根素对HIBD的保护作用及机制.方法:用7日龄SD大鼠制备HIBD模型,治疗组在缺氧缺血(HI)后早期腹腔注射葛根素50 mg/kg两次. 在HI后不同时间测定脑组织匀浆NO和NOS含量以及神经元凋亡数量.结果:HIBD组在HI后24 h脑组织NO,NOS明显高于对照组(P＜0.05) ;HI后6 h海马CA1区凋亡细胞增多,24 h达高峰;葛根素组24 h脑组织NO,NOS较HIBD组相比, 显著下降(P＜0.05),同时海马CA1区的凋亡细胞数在24 h较HIBD组明显减少(P＜0.05).结论:葛根素可通过抑制NOS的表达,减少NO的过量生成,从而减轻HIBD后的神经元凋亡,表明葛根素对新生大鼠HIBD有保护作用.     

内皮祖细胞对氧糖剥夺／复氧损伤神经元的保护作用

目的:研究内皮祖细胞(EPCs)共培养对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)损伤神经元是否有保护作用。方法:分离培养新生小鼠的海马神经元,利用缺氧培养室建立神经元OGD/R模型。分离培养小鼠骨髓源性EPCs,采用Transwell小室建立EPCs与OGD/R损伤神经元的共培养系统。将神经元随机分为4组,即对照组、OGD/R组、EPCs共培养组及EPCs共培养并加入一氧化氮合酶(e NOS)抑制剂(L-NAME)组。神经元凋亡率用TUNEL荧光法检测。用Western blot法检测神经元caspase 3及内皮型e NOS活性。结果:OGD/R组神经元的细胞凋亡率和caspase 3活性较对照组显著增加。与OGD/R组相比,EPCs共培养组神经元凋亡情况显著降低(P<0.05),且e NOS磷酸化水平明显增高(P<0.05)。而与EPCs共培养组相比,EPCs+LNAME组神经元凋亡情况明显增加(P<0.05),且e NOS磷酸化水平也明显下降(P<0.05)。结论:与EPCs共培养可以通过提高神经元e NOS的活性来保护OGD/R损伤的神经元。     

还原型谷胱甘肽对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤LDH、MDA的影响

目的研究乳鼠心肌细胞缺氧/复氧(A/R)损伤后乳酸脱氧酶(LDH)及丙二醛(MDA)的变化及还原型谷胱甘肽(GSH)对其影响。方法乳鼠心肌细胞随机分为5组:A组为正常对照组;B组为A/R组(缺氧2h,复氧1h);C、D、E组为GSH处理组,即首先加入GSH,分别使其终浓度为40、80、160mg.L-1,然后进行A/R,于复氧后测定各组培养液中LDH水平及细胞内MDA含量和细胞活性。结果与正常对照组相比,A/R组LDH、MDA水平均显著升高(P<0.01),细胞活性显著降低(P<0.01)。与单纯A/R组比,D、E组上述变化均明显减轻(P<0.01)。结论GSH对乳鼠心肌细胞A/R损伤具有保护作用,并具有浓度依赖性。     

黄芪甲苷通过抑制细胞凋亡减轻缺氧缺糖/复氧复糖HT22细胞损伤的研究

目的探讨黄芪甲苷对缺氧缺糖/复氧复糖小鼠海马神经元细胞系HT22细胞凋亡的影响。方法取对数生长期的HT22细胞,随机分为4组:正常对照组(Control)、缺氧缺糖/复氧复糖(oxygen and glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)组(Model)、黄芪甲苷组(AS-IV)、溶剂对照组(DMSO)。除正常对照组外,其余各组细胞均在缺氧缺糖6 h后进行复氧复糖。倒置显微镜观察细胞形态,CCK-8法检测细胞活力,LDH法检测细胞损伤情况,Bax、Bcl-2免疫荧光染色及流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 Control组细胞呈两极或多极,突起明显,突起之间相互交织成网状,胞体折光性强;Model组细胞胞体突触减少,细胞皱缩、变圆,胞质凝聚,细胞间连接大量减少;AS-IV组细胞损伤情况较Model组显著缓解。与Control组比较,Model组细胞活力显著降低,LDH漏出率、Bax/Bcl-2值及凋亡率显著升高(P0.05);与Model组比较,AS-IV组细胞活力显著升高,LDH漏出率、Bax/Bcl-2及凋亡率显著降低(P0.05),DMSO组无差异(P 0.05)。结论黄芪甲苷可能通过抑制细胞凋亡发挥对缺氧缺糖/复氧复糖HT22细胞的保护作用。     

丹皮酚对原代培养的大鼠皮质和海马神经元缺糖缺氧再灌损伤的保护作用

目的 研究丹皮酚对大鼠神经元缺糖缺氧再灌损伤的保护作用,并探讨其作用机制.方法 建立原代培养的新生大鼠神经元缺糖缺氧再灌损伤模型,随机分组为:对照组;模型组;丹皮酚组:建立模型,每个再灌时间点均经0.2&#215;10-6,1&#215;10-6,5&#215;10-6 mol&#183;L-13个浓度药物处理;MK-801阳性对照药组.倒置相差显微镜下进行一般形态学观察,用MTT法测定神经元存活率.通过放射配基结合实验测定N-甲基-D-天门冬氨酸受体(NMDA受体)结合力,采用荧光法测定细胞内游离钙离子([Ca2+]i)浓度及应用试剂盒测定一氧化氮(NO)含量及一氧化氮合酶(NOS)活性.结果 丹皮酚可显著降低大鼠皮质和海马神经元缺糖缺氧再灌损伤时细胞死亡率,减弱NMDA受体结合力,降低神经细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)及NO含量、NOS活性的升高.结论 丹皮酚对离体培养的大鼠神经元缺糖缺氧再灌损伤具有明显保护作用,其作用机制可能与抗氧化及减弱NMDA受体结合力有关.     

人参首乌方对缺氧复氧诱导的皮质神经细胞凋亡的影响

目的 探讨人参首乌方(RSSW)降低缺血性脑损伤、保护神经元的作用及机制.方法 原代培养大鼠皮质神经元,Na2 S2 O4造成缺氧/复氧损伤模型,分为正常组、模型组、依达拉奉阳性药组、RSSW高、中、低剂量组,通过Hoechst 33258染色及流式细胞术测定细胞凋亡率,生化测定细胞内内源性超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、活性氧(ROS)、过氧化产物丙二醛(MDA)和线粒体膜电位(MMP)及细胞培养上清液乳酸脱氢酶(LDH)水平,ELISA检测细胞内凋亡蛋白Caspase-3,9的活力,Western blot检测其抗凋亡蛋白Bcl-2的表达.结果 RSSW能升高细胞SOD活性,提高GSH及MMP水平,减少细胞内ROS、MDA生成和LDH漏出,抑制Caspase-3,9的活性,具有显著的抗氧化活性,上调Bcl-2蛋白的表达,剂量依赖性抑制神经细胞元凋亡.结论 RSSW对氧化应激损伤诱导的神经细胞凋亡有保护作用,其机制可能与其增加细胞内源性抗氧化剂、改善Bcl-2蛋白的表达及抑制Caspase-3和Caspase-9的活性相关.     

蒺藜皂苷对缺氧-复氧诱导大鼠皮层神经元凋亡的影响

目的：观察蒺藜皂苷（Tribulus terrestrisL．saponion，TTLS）对大鼠皮层神经元经缺氧一复氧后细胞凋亡的影响，并探讨其可能的作用机制。方法：离体培养大鼠皮层神经元，先用95％N：与5％CO2混合气体造成细胞缺氧3h，再给予95％O2。与59／6CO2混和气复氧12h，建立缺氧复氧损伤的皮层神经元凋亡模型。中药组于缺氧-复氧时均加入TTLS进行干预。AnnexinV—FITC／碘化丙啶（propidiumiodide，PI）双染，流式细胞仪定量分析细胞凋亡百分率；JC-1荧光染色，激光扫描共聚焦显微镜观察细胞线粒体膜电位的变化，荧光酶标仪测定神经元胞浆内caspase-3／7的活性，并采用免疫细胞化学法观察细胞Bax蛋白表达情况。结果：细胞缺氧3h复氧12h后，凋亡率明显增加，线粒体膜电位显著降低，胞浆内caspase-3／7活性增多，Bax蛋白大量表达（P〈0．01）。TTLS能抑制缺氧-复氧损伤的皮层神经元线粒体膜电位的降低，减少caspase-3／7活性，并可降低Bax蛋白的表达，从而抑制细胞凋亡的发生。结论：缺氧一复氧可以诱导皮层神经元的凋亡。TTLS可降低缺氧-复氧诱导细胞凋亡的发生，其机制与维持线粒体膜电位的稳定，抑制caspase酶活性，降低Bax蛋白表达有关。     

低(无)糖、缺氧和缺氧/复氧对培养鼠脑胶质细胞活力及致损的影响

目的 :研究氧、糖剥夺和缺氧 /复氧单一或联合因素对培养鼠脑星形胶质细胞活力和引起损伤的影响及其时效反应。方法 :培养的鼠脑星形胶质细胞分为 3组 :无糖组 (D Hanks液 )、低糖组 (DMEM中含 2 .75mmol葡萄糖 )和正常糖组 (DMEM中含 5 .4 9mmol葡萄糖 ) ,各组分别进行不同时间的缺氧和 /或缺氧 /复氧。通以 5 %CO2 +95 %N2 混合气造成缺氧 ,以乳酸脱氢酶 (LDH)漏出率作为细胞受损指标 ,噻唑蓝 (MTT)降解率评测细胞活力。结果 :①在正常氧培养 2 4h ,低糖和无糖培养的细胞LDH漏出率和MTT降解率并不出现明显变化 ;② 3组二项指标在缺氧培养的各时间点依次出现明显变化 ,无糖组为 8h(P <0 .0 5 ) ,低糖组和正常糖组为 12h(P <0 .0 5 ) ,2 4h(P <0 .0 1) ;③缺氧 /复氧引起 3组二项指标出现明显变化 ,其时间点分别为无糖组缺氧 4h +复氧 12h(P <0 .0 5 ) ;低糖组缺氧 8h +复氧 12h (P <0 .0 5 ) ;正常糖组缺氧 8h +复氧 2 4h (P <0 .0 5 ) ;④在同一缺氧和缺氧 /复氧时间点 ,指标值变化程度为无糖组 >低糖组 >正常糖组 ;且两项指标的变化具有时间依赖性 ,呈反变关系。结论 :①氧、糖剥夺和缺氧复氧能引起培养的鼠脑星形胶质细胞的损伤 ;②氧、糖剥夺和缺氧 /复氧联合作用时能增加对培养的鼠脑星形胶质细胞     

依达拉奉对脑缺血再灌注大鼠脑组织超氧化物歧化酶、一氧化氮、丙二醛水平的影响

目的探讨依达拉奉对局灶性脑缺血再灌注损伤的影响。方法用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,TUNEL法检测大鼠局灶脑缺血再灌注损伤及依达拉奉干预后海马CA1区原位凋亡情况,用试剂盒检测脑组织丙二醛(MDA)含量和一氧化氮合酶(NOS)活性。结果缺血再灌注损伤后,大鼠海马CA1区神经元细胞凋亡随时间延长而增加,脂质过氧化产物丙二醛含量和一氧化氮合酶活性增高,依达拉奉干预能显著减轻海马神经元凋亡,降低MDA含量和NOS活性。结论在脑缺血再灌注损伤后,依达拉奉能通过清除自由基而减轻细胞凋亡及脂质过氧化损伤。     

陈旧性坐骨神经损伤对大鼠腓肠肌组织一氧化氮、一氧化氮合酶和细胞凋亡的影响

目的:探讨陈旧性坐骨神经损伤对大鼠腓肠肌组织一氧化氮(NO)的含量、一氧化氮合酶(NOS)活性和肌细胞凋亡的影响。方法:切断大鼠右侧坐骨神经10mm的缺损。于术后1、3、6个月分别用硝酸还原法测定大鼠腓肠肌NO的含量;用化学比色法测定NOS的活性;原位缺口末端标记(TUNEL)法检测肌细胞凋亡指数(AI)的变化;透射电镜观察肌细胞超微结构的变化。结果:与正常组相比,1个月大鼠腓肠肌组织NO含量、NOS活性有所增加,AI变化不明显。3、6个月NO量显著上升、NOS活性显著增加、肌细胞AI增加(P均<0.01),超微结构显示细胞凋亡现象明显增多,且随神经损伤时间的延长而增加。结论:陈旧性坐骨神经损伤能导致肌细胞凋亡增加,其原因可能与NO的增多有关。     

氨基胍对大鼠脊髓压迫伤后后肢运动功能的影响

OBJECTIVE: To study the effects of aminoguanidine (AG), the inhibitor of inducible nitric oxide synthase (NOS), on the recovery of rat hindlimb motor function after spinal cord injury and explore the possible mechanism. METHODS: Thirty rat models of spinal cord compression injury were established according to Nystrom's method. AG therapy was administered for 4 times at 1 h before and 8, 24, 36 h after the injury, and 24 h after the completion of the therapy, spectrophotography was performed to measure the content of NO and activity of NOS in the injured spinal cord, followed by flow cytometry for determining the apoptotic rate 48 h later. The evaluation of the hindlimb motor function recovery was conducted by electrophysiological method and by measuring the behavior scores. RESULTS: AG significantly decreased the NO content (from 2.2714+/-0.4239 micromol/g.pro to 0.8466+/-0.0477 micromol/g.pro, P <0.05) and NOS activity (from 0.3408+/-0.0228 U/mg pro to 0.2702+/-0.0148 U/mg pro, P <0.05) in the injured spinal cord. The apoptotic rats were also reduced (from 7.88% +/-0.79% to 3.10% +/-0.66%, P <0.05). Four weeks after the therapy, the behavior score of the rats improved from 7.1+/-4.5 to 17.3+/-4.7 (P <0.01), and the latency and amplitude of the motor evoked potentials improved from 0 ms to 8.89+/-0.91 ms and from 0 mv to 1.99+/-0.48 mv respectively, showing significant therapeutic effect of AG (P <0.05). CONCLUSION: AG can improve motor functions of injured spinal cord in rats, possibly resulting from decreased apoptotic cells of the neurons in the spinal cord in the early stages of the injury.     

纳洛酮对离体人脑神经元缺氧损伤谷氨酸释放的影响

目的建立原代培养人脑神经元缺氧模型,探讨纳洛酮对神经元缺氧损伤中谷氨酸释放的影响.方法应用无血清原代培养人胚胎大脑神经细胞,经神经微丝染色证实可获得富含神经元的混合培养细胞.将神经元细胞随机分为对照组、缺氧组和给药组(纳洛酮终浓度分别为0.25、5、10 μg/ml).对照组为正常培养,缺氧组和给药组细胞进行缺氧结合无糖处理(氧糖剥夺)l h并继续复氧培养24h.于复氧24 h后观察细胞形态学变化,测定细胞外液乳酸脱氢酶(LDH)浓度,应用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)观察细胞存活率,应用高效液相色谱法测定细胞外液谷氨酸浓度.结果缺氧组细胞外液LDH、谷氨酸浓度显著高于对照组(P＜0.01),MTT法测得光密度(OD)值则显著低于对照组(P＜0.01);应用纳洛酮后,随药物浓度增加,各组细胞外液谷氨酸浓度与缺氧组比较呈现逐渐降低趋势(P＜0.05,P＜0.01),MTT法测得OD值呈现逐渐升高趋势(P＜0.01),至纳洛酮10μg/ml时恢复至对照组水平(P＞0.05).结论纳洛酮可以减少缺氧神经元的谷氨酸释放,减轻兴奋性神经毒性,对神经元缺氧损伤具有保护作用.     

温石棉对兔肺泡巨噬细胞合成一氧化氮及抗氧化酶活性的影响

为探讨一氧化氮及抗氧化酶在石棉致病中的作用 ,用改良 Myrvik法收集兔肺泡巨噬细胞 (AM)进行体外培养 ,采用硝酸还原酶法测定 U ICC温石棉处理后兔 AM培养液中亚硝酸根 (NO2 - )的含量 (NO的静态氧化形式 ) ,同时利用黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统测定 AM的细胞裂解液中 SOD的活性 ,和酶 -底物反应形成有色物质来测定 AM的细胞裂解液中 NOS和 GSH - Px的酶活性。结果显示 :随 UICC温石棉剂量的增加出现以下情况 :1 AM死亡率升高 ,细胞活性下降 ;2 AM培养液中的 NO- 2 含量增加 ,AM细胞裂解液中 SOD和 GSH - Px的活性降低 ,且以上均有剂量 -效应关系 (r1 =0 .6 1 1 4 ,P<0 .0 5 ;r2 =- 0 .5 1 2 6 ,P<0 .0 1 ;r3=- 0 .91 37,P<0 .0 1 ) ;3NOS在较低剂量组间呈剂量 -反应性增加 ,而在较高剂量组间呈剂量 -反应性降低 ,出现一个单峰曲线 ;4测得的NO的含量分别与 SOD和 GSH- Px活性呈负相关关系 (r1 =- 0 .71 2 5 ,P<0 .0 5 ;r2 =- 0 .8496 ,P<0 .0 5 ) ;5 NO和NOS在较低剂量组间呈正相关关系 ,在较高剂量组间呈负相关关系。以上提示 NO及其抗氧化酶在温石棉致病中具有一定作用     

诱导型一氧化氮合酶选择性抑制剂对大鼠免疫性肝损伤的影响

目的探讨大鼠免疫性肝损伤模型中一氧化氮（ＮＯ）的作用及诱生规律,诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）选择性抑制剂的作用机制。方法采用原位ＰＣＲ法对免疫损伤性肝细胞ＮＯＳ基因表达进行原位检测,并观察细胞培养上清中ＮＯ生成量及乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）活性的变化。结果用卡介苗（ＢＣＧ,１５、３０、５０ｍｇ／只静脉注射）单独投与或与炎性细胞因子配伍（ＣＭ,含白细胞介素１β,干扰素γ,肿瘤坏死因子α及细菌脂多糖）可引起培养上清ＮＯ浓度及ＬＤＨ活性明显升高（均Ｐ＜０．０５）,ＮＯ生成量与肝损伤程度成正比,而与ＢＣＧ剂量成反比;大鼠免疫损伤性肝实质细胞ＮＯＳ基因表达以可溶性胞浆型ｉＮＯＳ为主;ｉＮＯＳ选择性抑制剂氨基胍在明显抑制细胞培养上清中ＮＯ生成（８３．４％,Ｐ＜０．０５）的同时,减轻肝细胞损伤的程度（３６．０％,Ｐ＜０．０５）;而转录抑制剂放线菌素Ｄ则加重肝损伤（增加２５．５％,Ｐ＜０．０５）。结论在免疫刺激条件下诱导生成的ＮＯ主要参与肝损伤机制