异基因造血干细胞移植患者T细胞亚群数量与侵袭性真菌感染关系的临床研究

目的回顾性分析异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)患者T淋巴细胞亚群免疫重建与侵袭性真菌感染(invasive fungal infections,IFI)相关性。方法通过观察移植后T淋巴细胞亚群重建特点,比较真菌易感者与非易感者之间T淋巴细胞亚群数量间的差异,探讨移植后T淋巴细胞亚群数量与真菌易感性的关系。结果①移植后中位随访时间为29(5～45)个月。移植后出现IFI的患者57例(44.9%),首次IFI发生的中位时间为23(1～702)天;②CD8+T淋巴细胞重建明显早于CD4+T淋巴细胞;③真菌易感组与非易感组移植后12个月CD3+T淋巴细胞比例值间有统计学差异(P=0.034),但其预测真菌易感性却无统计学意义(P=0.072);移植后真菌易感组与非易感组间T淋巴细胞亚群绝对值均无统计学意义,考虑与病例数较少有关。结论①尽可能避免IFI各种高危因素,并采取积极有效的预防措施,减低IFI发生率及病死率;②移植后12个月CD3+T淋巴细胞比例值减少的患者易发生真菌感染,其可一定程度预测真菌易感性。     

淋巴细胞亚群变化在异基因造血干细胞移植中的意义

目的：探讨异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后患者T淋巴细胞亚群变化与疾病复发、急性移植物抗宿主病（aGVHD）发生的关系。方法：19例接受异基因造血干细胞移植患者,其中HLA配型同胞全相合8例,无关全相合2例,半相合9例。采用流式细胞术检测患者移植后20天、40天、60天和100天T淋巴细胞亚群比例,比较疾病复发与未复发患者、发生aGVHD与未发生aGVHD患者间T淋巴细胞亚群的差异。结果：19例患者移植后发生aGVHD10例,复发5例。移植后第40、60和100天,复发组与未复发组淋巴细胞亚群差异无统计学意义（P＞0.05）。移植后第20和60天,aGVHD组CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD25+亚群数量均高于无aGVHD组,差异有统计学意义（P＜0.05）;在移植后第100天,aGVHD组CD3+CD4+、CD3+CD25+亚群数量高于无aGVHD组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论：T细胞亚群的异常改变与移植后aGVHD的发生发展有关,动态监测淋巴细胞亚群有助于预判allo-HSCT患者aGVHD的发生。     

造血干细胞移植后的早期免疫重建

目的：探讨异基因造血干细胞移植（allogenic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT）和自体造血干细胞移植（autologous HSCT,auto-HSCT）患者早期免疫重建的异同。方法：收集2011年12月至2014年8月在北京大学第三医院血液科进行HSCT的恶性血液病患者31例,其中15例allo-HSCT,16例auto-HSCT;留取20名健康人外周血标本作为健康对照。采用四色流式细胞术检测两组患者移植后1年内外周血中淋巴细胞亚群的动态变化,并通过检测T细胞受体重排删除环（T cell receptor rearrangement excision circle,TREC）水平判断初始 T细胞功能。结果：移植后12个月内allo-HSCT组和auto-HSCT组患者CD4+T细胞、CD8初始T细胞、效应记忆性T细胞、CD4中枢记忆性T细胞、中期活化性T细胞以及DC重建与健康对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）,但两组患者间差异无统计学意义（P>0.05）,CD8+T细胞和NK细胞迅速恢复正常水平。移植后前3个月内B细胞重建在两组患者间差异无统计学意义（P>0.05）,均显著低于健康对照组（P<0.01）,但从第6个月起auto HSCT组显著快于allo-HSCT组患者（P<0.05）;移植后第6个月起allo-HSCT组晚期活化性T细胞表达显著高于auto-HSCT组（P<0.05）,而auto-HSCT组CD4初始T细胞和CD8中枢记忆性T细胞的表达高于allo-HSCT组（P<0.05）。移植后12个月内allo-HSCT和auto-HSCT组患者外周血CD3+T细胞中TREC水平显著低于年龄相近的健康对照组（P<0.05）,allo-HSCT组患者外周血CD3+T细胞中的TREC水平稍高于auto HSCT组患者,但差异无统计学意义（P>0.05）。结论：allo-HSCT和auto-HSCT患者早期免疫重建的速度和特点很相似,移植患者免疫重建主要不是由异源性移植物所决定,可能与胸腺功能受损后T细胞分化缓慢密切相关。     

自体造血干细胞移植治疗重症/难治性自身免疫病的淋巴细胞亚群演变

目的 研究自体造血干细胞移植（HSCT）治疗重症／难治性自身免疫病（AID）的淋巴细胞亚群免疫重建规律。方法 以2003年4月-2005年4月在我院行HSCT的13例AID患者和40例正常对照者为研究对象,采用流式细胞学技术分别于动员前、后,移植后2周,1、3、6、12及18个月共8个时间窗监测受试者体内的淋巴细胞、T细胞（CD3＋）、B细胞（CD19＋）、NK细胞（CD3-CD16＋CD56＋）、Th细胞（CD3＋CD4＋）、Tc细胞（CD3＋CD8＋）、纯真T细胞（CD4＋CD45RA）、记忆T细胞（CD4＋CD45RO）和CD4／CD8比值的变化。结果 13例AID患者中,系统性红斑狼疮（SLE）8例,类风湿关节炎（RA）4例,原发性干燥综合征（pSS）1例。动员前SLE组的淋巴细胞各亚群均明显低于正常人和RA组（P均〈0．01）。B细胞在移植后18个月内从0恢复至正常。NK细胞和T细胞亚群未恢复至正常,NK细胞恢复较快,维持低水平;T细胞亚群中的CD4＋T细胞恢复迟于CD8＋T细胞,纯真T细胞恢复迟于记忆T细胞。结论 SLE患者外周血中淋巴细胞、T细胞及各亚群、B细胞、NK细胞异常较RA患者更明显。AID患者体内和移植物的T／B细胞去除有效,非清髓性处理可能成为AID复发隐患,CD4＋T细胞的长期受抑可能与AID患者移植后病情缓解相关。     

异基因骨髓干细胞移植后重建NOD小鼠T淋巴细胞亚群比值的研究

目的：探讨骨髓干细胞移植对NOD小鼠免疫系统重建和预防糖尿病发生的机制。方法：①21只6周龄NOD雌性鼠接受9．5cGy全身照射后随机分为两组,移植组10只,对照组11只;②每周监测血常规和血糖的变化;③小鼠饲养至发生糖尿病时或至30周龄时处死,摘取脾脏分离淋巴细胞,通过流式细胞术检测移植鼠与非移植鼠脾脏CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋、CD4^＋／CD8^＋淋巴细胞;采用ELISA法测定血清中IFN-γ水平;吉姆萨染色法计数小鼠骨髓分裂相中Y染色体所占比例,检测嵌合程度并作为细胞植活标记。结果：①移植后NOD受鼠经骨髓细胞的性别染色体检测显示均植入成功;②实验组糖尿病发病率显著低于对照组（P〈0．05）,且发病时间与对照组比较明显延缓（P〈0．05）;③实验组和对照组CD3^＋T细胞、CD4^＋T细胞比较差异无统计学意义（P〉0．05）,但实验组CD8^＋T细胞显著高于对照组（P〈0．05）。实验组的CD4^＋／CD8^＋比值显著低于对照组（P〈0．05）,血清IFN7数值也显著低于对照组水平（P〈0．01）。结论：NOD鼠在通过异基因骨髓干细胞移植后,能降低糖尿病的发生率和延缓糖尿病的发生,可能与移植后免疫重建,下调CD4^＋／CD8^＋T细胞的比值,使Th1／Th2极化向Th2偏移等机制相关,异基因骨髓干细胞移植可能成为防治1型糖尿病的新途径。     

脐带间充质干细胞移植治疗狼疮性肾炎的疗效与机制

［摘要］目的　观察脐带间充质干细胞（hUC-MSC）移植对狼疮性肾炎患者的临床表现、血清因子变化，探讨其疗效和机制．方法（1）随机、双盲、平行、安慰剂对照观察12例LN患者，分为治疗组，对照组．2组病人基础治疗相同，治疗组病人在基础治疗上增加hUC-MSC治疗．观察治疗前和治疗后2、6月的临床症状和不良反应；（2）检测治疗前和治疗后2、6月血清中肾损伤标记物（抗C1Q、骨桥蛋白（OPN）），炎症相关的细胞因子（IL-4、IL-6、IL-10、IL-18、INF- γ、TGF-β1）的变化；T细胞亚群 （CD3/CD4/CD8）的变化．结果（1）2组患者症状和体征治疗后2月、6个月均有改善，治疗组缓解例数大于对照组，但2组间，差异无统计学意义（P＞0.05）；（2）SLIDAI评分:2组间分数治疗6个月前后比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；（3）治疗机制:治疗前、治疗后2月、6月2组INF-γ、IL-4、IL-10、IL-6，IL-18，抗C1q、OPN均有变化，但2组间，差异无统计学（P＞0.05）．T细胞亚群: CD4+T、CD8+T细胞治疗组、对照组，治疗前、治疗后2月、6月组内比较，差异有统计学意义（P＜0.05）．而组间比较，差异无统计学意义（P＞0.05）．结论（1）脐带间充质干细胞移植治疗狼疮性肾炎2组病人临床症状和实验室检查，均有改善，但目前暂无明显差异；（2）2组间炎症因子及肾损伤因子治疗前后比较变化无统计学差异， Huc-MSC治疗LN的机制需更多的临床数据探索；（3）Huc-MSC是否能够重建T细胞亚群平衡需进一步探索．     

TRAb在预测Grave's病复发的研究

采用酶免疫法（EIA）和单克隆抗体法测定42例Grave’s病人血清TSH受体抗体（TRAb）和外周血T淋巴细胞亚群在用丙基硫氧嘧啶治疗过程中的变化并对病人停药后随诊一年的结果表明：①丙基硫氧嘧啶治疗时间与甲亢复发呈负相关；②治疗一年后TRAb持续高水平和T淋巴细胞亚群无明显变化者易复发。     

济生肾气汤联合骨髓间充质干细胞移植对肝硬化大鼠T淋巴细胞亚群及红细胞免疫功能的影响研究

目的 探讨济生肾气汤联合骨髓间充质干细胞（BMSCs)移植对肝硬化大鼠T淋巴细胞亚群及红细胞免疫功能的影响。方法 2014年10-12月,采用随机数字表法将造模成功的30只肝硬化大鼠分为对照组和实验组,每组各15只。对照组采用单纯BMSCs移植治疗,实验组采用济生肾气汤联合BMSCs移植治疗。治疗前及治疗后1、2、3、4周检测两组大鼠T淋巴细胞亚群和红细胞免疫功能指标。结果 CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比较,治疗方法与时间存在交互作用（P＜0.05）;组间比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;时间间比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。其中,治疗前和治疗后1、2周对照组大鼠CD4+、CD8+、CD4+/CD8+与实验组比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）;治疗后3、4周对照组大鼠CD4+、CD8+、CD4+/CD8+与实验组比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）;对照组和实验组大鼠治疗后2、3、4周CD4+、CD8+、CD4+/CD8+与治疗前比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。红细胞C3b受体花环率（RBC·C3bRR）、红细胞免疫复合物花环率（RBC·ICR）比较,治疗方法与时间存在交互作用（P＜0.05）;组间比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;时间间比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。其中,治疗前和治疗后1、2周对照组大鼠RBC·C3bRR、RBC·ICR与实验组比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）;治疗后3、4周对照组大鼠RBC·C3bRR、RBC·ICR与实验组比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）;对照组和实验组大鼠治疗后3、4周RBC·C3bRR、RBC·ICR与治疗前比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 与单纯BMSCs移植相比,济生肾气汤联合BMSCs移植可明显改善肝硬化大鼠的T淋巴细胞亚群和红细胞免疫功能的相关指标。     

197例带状疱疹患者外周血T淋巴细胞亚群的测定

目的：了解带状疱疹患者T淋巴细胞亚群变化情况。方法采用流式细胞仪技术检测197例带状疱疹患者T淋巴细胞亚群的分布情况。结果与健康对照比较,带状疱疹患者外周血CD3＋T淋巴细胞和CD4＋T淋巴细胞明显降低,CD8＋T淋巴细胞升高,CD4＋/CD8＋比值下降,差异均有统计学意义（P＜0．05）,老年带状疱疹患者下降更为明显;不同年龄组的患者间存在CD4＋T淋巴细胞、CD8＋T淋巴细胞、CD4＋/CD8＋比值的差异;不同性别组、不同视觉模拟评分组患者之间T淋巴细胞亚群值差异无统计学意义（ P＞0．05）。结论带状疱疹患者T淋巴细胞免疫功能下降,T淋巴细胞免疫功能下降可能与带状疱疹的发病有关。     

重症肺炎患者的病原学特点及预后相关因素分析

目的 探讨重症肺炎患者的病原学特点及淋巴细胞亚群、降钙素原（procalcitonin，PCT）、中性粒细胞/淋巴细胞比值（neutrophil/lymphocyte ratio，NLR）、急性生理和慢性健康评分系统Ⅱ（acute physiological and chronic health evaluation scoring system Ⅱ，APACHEⅡ）等指标与疾病预后的关系。方法 选取2018年1月至2022年1月在郑州大学第二附属医院住院的重症肺炎患者85例，根据治疗1个月内的情况，将患者分为预后不良组和预后良好组。采集患者的气道深部痰液标本进行病原菌检测，分析重症肺炎的病原菌分布，同时采集患者的血液标本，比较两组患者的淋巴细胞亚群、淋巴细胞计数（lymphocyte count，LYM）、PCT、NLR、APACHEⅡ评分等，并采用Pearson相关法分析上述指标与APACHEⅡ评分的相关性。结果 ①重症肺炎患者治疗1个月内，预后不良发生率为55.29%。②85例患者痰液标本中共检出病原菌101株，其中革兰阴性菌69株，革兰阳性菌27株，真菌5株。③不同预后组间的革兰阴性菌和鲍曼不动杆菌比较差异有统计学意义（P<0.05），两组间的其他病原菌比较差异无统计学意义（P>0.05）。④预后不良组患者的PCT、NLR、APACHEⅡ评分均高于预后良好组患者（P<0.05），两组患者的年龄、性别、C反应蛋白（C-reactive protein，CRP）、D-二聚体（D-dimer，D-D）差异无统计学意义（P>0.05）；与预后良好组比较，预后不良组患者的LYM、T、CD4+T淋巴细胞均降低，B淋巴细胞升高，差异有统计学意义（P<0.05），两组患者的CD8+T、NK细胞差异无统计学意义（P>0.05）。⑤血清PCT、NLR、B淋巴细胞与APACHEⅡ评分呈正相关，LYM、T、CD4+T淋巴细胞与APACHEⅡ呈负相关（P<0.01）。结论 ①重症肺炎的病原学特点以革兰阴性菌为主，主要是鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌。②淋巴细胞亚群及炎性指标的变化对疾病严重程度和预后评估具有重要指导意义。     

活化单倍相合异基因造血干细胞治疗晚期难治性肾癌的疗效观察

目的：探讨活化单倍相合异基因造血干细胞（haplo—HSCs）治疗晚期难治性肾癌的安全性和有效性。方法：10例晚期肾癌患者入组,均接受1个疗程的haplo—HSCs治疗,分别通过影像学检查、生活质量（KPS评分）以及外周血淋巴细胞亚群、细胞因子变化情况来评估临床疗效和免疫学反应。结果：（1）10例患者中,2例部分缓解（PR）,6例疾病稳定（SD）,2例疾病进展（PD）,有效率（CR＋PR）为20％,临床获益率（CR＋PR＋SD）为80％。中位随访时间21个月,中位达进展时间（mTTP）为5．7个月,中位生存时间为16个月,1年生存率为70％。（2）治疗后患者的CD3^＋、CD4^＋、CD4^＋／CD^8＋．CD3^-CD16^＋56^＋（NK）均明显升高（P〈0．05）,而CD8^＋、CD4^＋CD25^＋（Tregs）明显降低（P〈0．05）;TNF—α、IFN-γ等Th1类细胞因子明显升高（P〈0．01）,而TGF-β明显下降（P〈0．05）。（3）除一过性的发热、乏力外,未出现其他不良反应。结论：晚期难治性肾癌患者,采用活化haplo—HSCs治疗可以增强自身免疫功能,提高生存率和生活质量,并且有良好的耐受性。     

昆明山海棠提取物预防急性移植物抗宿主病的实验研究

目的观察昆明山海棠（THH）提取物在急性移植物抗宿主病（aGVHD）中的作用及其可能的作用机制。方法建立aGVHD模型,BALB/c受鼠清髓性预处理后分别用生理盐水、环孢素A（CsA）、THH及CsA＋THH混合物灌胃。观察移植后受鼠aGVHD、生存时间、CD4^＋/CD8^＋比率、CD4^＋CD25^＋T细胞比率及脾细胞Foxp3 mRNA水平。结果生理盐水组出现典型aGVHD,20天内全部死亡。其余3组aGVHD临床、病理表现及生存时间均改善,组间无差异;CD4^＋/CD8^＋比率、受鼠CD4^＋CD25^＋T细胞比率及脾Foxp3 mRNA表达较生理盐水组升高,以联用组明显。结论THH可减轻小鼠aGVHD,延长其生存时间。机制可能与增加CD4^＋CD25^＋T细胞比率,上调Foxp3 mRNA表达,调节CD4^＋/CD8^＋比率有关。THH和小剂量CsA联合有协同作用。     

抗人T淋巴细胞兔免疫球蛋白预防异基因造血干细胞移植中急性移植物抗宿主病的临床研究

目的探讨异基因造血干细胞移植中抗人T淋巴细胞兔免疫球蛋白（ATG）联合环孢霉素A（CsA）、霉酚酸酯（MMF）、甲氨蝶呤（MTX）对促进移植植入和预防急性移植物抗宿主病（aGVHD）的作用。方法15例恶性血液病及5例重型再生障碍性贫血（SAA）患者实施血缘相关供者异基因造血干细胞移植,其中8例为人类白细胞抗原（HLA）配型全相合,12例HLA配型为单倍体相合。在移植前5d至前2d应用ATG 10．0mg／kg。供者应用重组人粒细胞集落刺激因子（rhG—CSF）5μg／（kg·d）,连续应用5d后采集外周血干细胞,单个核细胞（MNC）计数中位数为5．3×10^8／kg,CD34^＋细胞计数中位数为6．0×10^6／kg。结果移植后所有受者均获得造血重建,中性粒细胞（ANC）≥0．5×10^9／L和血小板（Plt）≥20×10^9／L中位时间分别为12d和14d。出现aGVHD7例,其中Ⅰ度皮肤aGVHD 3例;Ⅱ度肠道aGVHD 2例;Ⅲ度及Ⅳ度肠道aGVHD各1例。结论ATG在促进造血干细胞的植入,预防aGVHD的发生和降低其严重程度方面具有明显的效果。     

乙型肝炎外周血T淋巴细胞上CD28分子表达与病毒载量的关系

目的：分析HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者、HBeAg阳性乙肝病毒携带者外周血T淋巴细胞上CD28表达情况及其与HBV病毒载量的关系。方法采集健康人、HBeAg阳性乙肝病毒携带者、HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者的外周血,抗体标记,采用流式细胞技术检测CD4^＋、CD8^＋、CD4^＋CD28^＋、CD8^＋CD28^＋T淋巴细胞,同时检测肝功能HBV DNA。结果慢性乙型肝炎组、乙肝病毒携带组CD4^＋CD28^＋T细胞、CD8^＋CD28^＋T细胞百分率明显低于健康对照组（P〈0.05）;HBV DNA≥107组CD8^＋CD28^＋T细胞百分率低于HBV DNA＜107组（P〈0.05）。结论乙型肝炎病毒感染者CD8^＋T细胞上CD28的低表达与高病毒载量有关。     

CD25抗体在HLA全相合同胞供者异基因造血干细胞移植中的应用

目的:探讨CD25单克隆抗体(巴利昔单抗)在HLA全相合同胞供者异基因造血干细胞移植中的应用价值。方法:对3例白血病患者进行HLA全相合同胞供者异基因外周血造血干细胞移植,应用巴利昔单抗预防aGVHD,增加了造血干细胞输入剂量,观察造血重建和aGVHD情况。结果:3例患者均顺利重建造血,红系恢复明显加快,无1例需要输血,无1例病人发生感染。3例均发生Ⅰ-Ⅱ度aGVHD,无严重aGVHD发生。结论:巴利昔单抗在HLA全相合同胞供者异基因造血干细胞移植中的应用是可行的,值得进一步加大病例数进行研究。     

CliniMACS系统进行CD^＋34造血干细胞阳性富集的应用评价

目的探讨CliniMACS系统进行CD^＋34造血干细胞阳性富集的有效性、安全性及应用效果。方法对39例实体瘤和自身免疫性疾病患者动员后采集的外周血干细胞进行了CliniMACS系统阳性富集的CD^＋34自体造血干细胞移植。结果阳性富集后CD^＋34细胞纯度平均可达89．8％,CD^＋34细胞平均回收率达78．9％,粒细胞-巨噬细胞集落形成单位（CFU—GM）数量为（15．0±7．0）×10^5／kg,阳性富集前、后细胞胎盘蓝拒染率比较差异无统计学意义,保持了细胞良好的生物学活性,移植后于2～3周内造血重建。结论应用CliniMACS系统进行CD^＋34造血干细胞阳性富集,可安全、有效地应用于造血干细胞移植。     

益肾康颗粒对慢性移植肾肾病患者T淋巴细胞亚群的影响

目的观察益肾康颗粒治疗慢性移植肾肾病（CAN）及对外周血T淋巴细胞亚群的影响。方法将120例确诊为早期CAN患者分为益肾康组和对照组,两组均维持常规治疗,益肾康组加服益肾康颗粒30g／d,观察治疗第4、8、12周后外周血中CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋水平,并计算出CD4^＋／CD8^＋的比值,分析益肾康颗粒对T淋巴细胞亚群的影响及与对照组的差异。结果治疗前两组水平相近（P〉0．05）;治疗后益肾康组的外周血CD4^＋、CD8^＋计数及CD4^＋／CD8^＋比值均明显高于对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）。益肾康组间各指标比较差异有统计学意义（P〈0．05）。治疗期间未见严重的副作用。结论益肾康颗粒能够提高T淋巴细胞亚群的水平,调节肾移植术后抗排斥和感染之间的矛盾,辅助治疗CAN。     

氟康唑与伊曲康唑预防造血干细胞移植真菌感染的效果

目的比较异基因造血干细胞移植患者应用氟康唑和伊曲康唑预防侵袭性真菌感染的疗效。方法回顾分析115例异基因造血干细胞移植患者,其中应用氟康唑60例,伊曲康唑55例,比较两组患者侵袭性真菌感染的发生转归情况。结果氟康唑组和伊曲康唑组侵袭性真菌感染的发生率分别为8.3%和5.5%,二者差异无统计学意义（P=0.719）,发生部位都以肺部为主,中位发生时间无明显差异;伊曲康唑副反应较大（P=0.038）。结论氟康唑与伊曲康唑预防异基因造血干细胞移植早期侵袭性真菌感染效果相近,氟康唑成本低、副作用少,更适合应用于异基因造血干细胞移植早期真菌感染的预防。