炎症促进清道夫受体基因敲除小鼠主动脉脂质积聚的分子机制

目的 探讨炎症促进清道夫受体A和CD36双敲(SR double knockout,SR DKO)C57BL/6J小鼠主动脉固醇调节元件结合蛋白2(sterol regulatory element binding protein2,SREBP2)表达,加重主动脉脂质异常积聚的分子机制.方法 13只SR DKO雄性小鼠,按体质量大小,采用完全随机的方法,分为炎症组(n=6)和对照组(n=7).喂养高脂饮食14周,检测血清炎症因子和脂质水平;油红O染色观察主动脉脂质积聚;实时定量PCR和免疫组织化学染色,分析主动脉低密度脂蛋白受体(LDLr)、调控其转录的SREBP2及SREBP2裂解激活蛋白(SCAP)mRNA和蛋白表达水平.结果 炎症组血清淀粉样蛋白A(SAA)水平比对照组明显增高[(10.32±2.88)ng/ml vs (5.50±2.67)ng/ml,P<0.05];主动脉切片油红O染色结果发现,炎症组比对照组脂质积聚明显增加;炎症组主动脉的SREBP2、SCAP和LDLr mRNA和蛋白表达水平比对照组明显增高(P<0.05).结论 SR DKO小鼠在炎症状态下,促进主动脉胆固醇敏感器SCAP和SREBP2表达,上调LDLr,使胞内摄入胆固醇增加,加重主动脉脂质的异常积聚.     

炎症诱导SCAP功能失调促进ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的分子机制

目的 探讨炎症诱导胆固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(sterol regulatory element binding proteins cleavage-activating protein,SCAP)功能失调促进ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化形成的分子机制.方法 24只8周龄雄性ApoE-/-小鼠(C57BL/6遗传背景,体质量18～24 g)随机分组为高胆固醇饮食组(n=12,对照组)和高胆固醇饮食+炎症组(n=12,炎症组).炎症组小鼠给予隔日皮下注射10％酪蛋白,非炎症组小鼠给予隔日皮下注射生理盐水,共14周.双抗夹心ELISA法检测ApoE-/-小鼠血清炎症指标(serum amyloid A,SAA)和TNF-α水平,HE染色观察ApoE-/-小鼠主动脉结构及局部炎症细胞浸润情况,油红O染色观察ApoE-/-小鼠主动脉斑块形成情况,Real-time PCR法与免疫组织化学法检测ApoE-/-小鼠主动脉LDLr、SREBP2、SCAP、α-甘露糖苷酶Ⅰ及α-甘露糖苷酶ⅡmRNA与蛋白表达.结果 炎症组小鼠血清SAA[(529 ±23)ng/mL]与TNF-α[(37 900 ±3 100)ng/mL]水平显著高于对照组小鼠血清SAA[(248±27) ng/mL]与TNF-α[(1 789±219) ng/mL]水平(P＜0.01),表明ApoE-/-小鼠炎症模型建立成功.炎症组小鼠较对照组小鼠主动脉粥样硬化性病变更为严重(P＜0.01),其LDLr、SCAP及α-甘露糖苷酶ⅡmRNA及蛋白表达、细胞核内NSREBP2水平明显高于对照组(P＜0.05).结论 炎症通过增加血管壁细胞内胆固醇敏感器SCAP的表达,并通过增强高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ对SCAP的糖基化修饰,促进ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的发生和发展.     

SCAP/SREBP2/LDLr通路在LPS诱导人血管平滑肌细胞泡沫化中的作用

目的：研究炎症介质——脂多糖（LPS）是否通过扰乱固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白-固醇调节元件结合蛋白2（SCAP-SREBP2）复合物介导的低密度脂蛋白受体（LDLr）负反馈调控,增加人血管平滑肌细胞对天然低密度脂蛋白胆固醇（LDL）摄取,导致泡沫细胞形成。方法：人血管平滑肌细胞在无血清培养基中培养24 h后,分为对照组（继续无血清培养）;高脂组（加入LDL负荷,终浓度为25μg/ml）;高脂加LPS组（加入LDL负荷,终浓度为25μg/ml,同时加入LPS,终浓度400 ng/ml）;高脂加LPS加肝素组（加入LDL负荷,终浓度为25μg/ml,加入LPS,终浓度400 ng/ml,加入肝素,终浓度5 mg/ml）,以上各组细胞培养24 h后收获。酶化学法检测细胞内胆固醇浓度,油红O染色法检测细胞内脂质水平,Real time PCR法检测LDLr、SREBP2表达水平,细胞免疫化学法检测SCAP蛋白表达,激光共聚焦检测SCAP在内质网与高尔基体间的转位情况。结果：细胞内胆固醇测定及油红O染色发现,LPS通过增加人血管平滑肌细胞对非修饰LDL摄取,导致人血管平滑肌细胞转变为泡沫细胞。在LPS不存在时,25μg/ml LDL减少LDLr mRNA水平（P〈0.05）。然而,LPS增加LDLr mRNA水平,逆转25μg/ml LDL对LDLr的抑制效应,不恰当的增加了血管平滑肌细胞对LDL摄取（P〈0.05）,LPS刺激也导致了SCAP蛋白表达增加和SREBP2的mRNA水平升高（P〈0.05）,同时促进了SCAP从内质网转移到高尔基体。这些结果提示LPS通过增加SCAP/SREBP2复合物从内质网到高尔基体转位,干扰了胆固醇介导的LDLr负反馈调控,使非修饰LDL在血管平滑肌细胞内堆积,导致泡沫细胞形成。结论：本研究提示,在LPS刺激条件下,SCAP/SREBP2/LDLr通路可能是血管平滑肌细胞泡沫化的另一条通路。     

六味地黄方通过上调肠道雌激素受体改善绝经后ApoE-/-小鼠脂代谢异常研究

目的?应用双侧卵巢去势的ApoE-/-小鼠建立绝经后脂代谢异常模型,探究六味地黄方(LW)能否通过调节肠道雌激素受体改善绝经后脂代谢异常。方法?正常饮食的C57/B6小鼠为对照组(n=6),高脂饮食并接受假手术的ApoE-/-小鼠为假手术对照组(n=6),高脂饮食并接受双侧卵巢去势的的ApoE-/-小鼠为模型组(n=6),模型小鼠接受4.5?g/kg (n=6)或9.0?g/kg (n=6)的六味地黄方治疗90?d。生化法检测小鼠血清中总胆固醇（TC）、甘油三酸酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）及高密度脂蛋白（HDL-C）水平,HE染色检测小鼠肝脏脂质损伤,油红染色检测小鼠肝脏脂质堆积,免疫荧光染色检测小鼠空肠雌激素受体α（ERα）、雌激素受体β（ERβ）、ABCG5、ABCG8、PI3K p110β及p-AKT的表达水平,免疫化学染色检测小鼠空肠NPC1L1的表达水平,Western blot法检测小鼠空肠NPC1L1、ABCG5及ABCG8的表达水平。结果?六味地黄方可降低模型小鼠血清TC、TG及LDL-C水平,升高HDL-C水平（P<0.05~0.01）;同时,六味地黄方可显著降低模型小鼠的肝脏脂质损伤和脂肪堆积（P<0.05~0.01）。六味地黄方显著增加模型小鼠空肠内降低的ERα和ERβ水平（P<0.05~0.01）。六味地黄方显著降低模型小鼠空肠中NPC1L1的表达水平（P<0.05）,并上调ABCG5和ABCG8的表达水平（P<0.01）。六味地黄方显著增加模型小鼠空肠内PI3K p110β及p-AKT的表达水平（P<0.05~0.01）。结论?六味地黄方可以显著改善绝经后ApoE-/-小鼠脂代谢异常,其机制与六味地黄方调节肠道胆固醇的吸收和外排有关。上调肠道雌激素受体表达和肠道PI3K/AKT信号可能是六味地黄方调节肠道胆固醇吸收和外排的机制。      

竹节参醇提物对小鼠酒精性脂肪肝的影响

[目的] 观察竹节参醇提物对急性酒精性脂肪肝的保护作用并初步探讨其作用机制。[方法] 将48只ICR小鼠随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组(多烯磷脂酰胆碱胶囊 0.27 g·kg-1)、竹节参低剂量组(0.1 g·kg-1)、竹节参中剂量组(0.2 g·kg-1)、竹节参高剂量组(0.4 g·kg-1)。小鼠高脂饲料喂养,以红星二锅头酒梯度稀释液为造模试剂,连续灌胃8周,复制酒精性脂肪肝模型,同时各给药组以相应药物进行干预。以全自动生化仪检测血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)、谷草转氨酶(aspertate aminotransferase,AST)水平;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察肝组织损伤程度;油红O染色法观察肝脏脂肪沉积情况;以试剂盒测定肝组织匀浆超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平;免疫印迹法测定小鼠肝脏胰岛素诱导基因1编码蛋白(insulin induced gene 1,Insig1)、低密度脂蛋白受体(low-density lipoprotein receptor,LDLR)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(peroxisome proliferator-activated receptor α, PPARα)、胆固醇调节元件结合蛋白1(sterol-regulatory element binding proteins 1,SREBP1)、甾醇调节因子结合蛋白裂解激活蛋白(sterol cleavage-activating protein,SCAP)、磷酸化氨基末端蛋白激酶(phosphorylated amino terminal protein kinase,p-JNK)蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,Real-time qPCR)检测肝脏Insig1、LDLR、PPARα、SREBP1、SCAP基因表达。[结果] 竹节参醇提物能下调小鼠体质量及肝脏指数,明显改善小鼠血清ALT、AST水平(P＜0.05,P＜0.01),各剂量组间TC、TG水平差异无统计学意义(P＞0.05)。HE染色显示,竹节参中、高剂量组肝细胞饱满,无炎性浸润细胞;油红O染色显示,竹节参中、高剂量组能明显改善小鼠肝脏脂肪累积。竹节参中剂量组明显提升肝脏SOD活性(P＜0.05),低、高剂量组能明显降低肝脏MDA水平(P＜0.05)。竹节参中、高剂量组能够显著降低Insig1、SCAP蛋白表达(P＜0.01),各剂量组均能显著降低SREBP1、P-JNK/JNK蛋白相对表达水平(P＜0.01),显著提升LDLR、PPARα蛋白相对表达水平(P＜0.05,P＜0.01)。此外,竹节参中、高剂量组还能显著降低Insig1、SCAP、SREBP1的mRNA 基因相对表达水平(P＜0.05,P＜0.01),显著提升LDLR、PPARα mRNA基因相对表达水平(P＜0.05,P＜0.01)。 [结论] 竹节参醇提物对酒精性脂肪肝具有保护作用,该作用可能与改善肝脏胆固醇转运及合成,抑制脂质过氧化有关。     

高磷环境下胆固醇敏感器SCAP功能失调促进巨噬细胞内胆固醇蓄积

目的 观察高磷环境对巨噬细胞内胆固醇蓄积的影响及其分子机制.方法 将人单核细胞株(THP-1)源性巨噬细胞分为对照组(磷1.0 mmol/L)、高磷处理组(磷3.0 mmol/L)、磷甲酸钠(PFA)处理组(磷1.0 mmol/L加PFA 1.0 mmol/L)以及高磷联合PFA处理组(磷3.0 mmol/L加PFA 1.0mmol/L),按不同要求分别处理各组细胞.培养24 h后,油红O染色观察细胞内中性脂质的分布,酶催化比色法定量测定细胞内的胆固醇含量,qPCR检测细胞内羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGCoAR)、低密度脂蛋白受体(LDLR)、固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SCAP) mRNA的表达,蛋白质印迹法测定细胞内SCAP、LDLR、HMGCoAR及核内固醇调节元件结合蛋白2(N-SREBP2)的蛋白水平,激光共聚焦法检测SCAP从内质网向高尔基体的移位情况.结果 与对照组相比,高磷处理组巨噬细胞内中性脂质明显聚集,细胞内总胆固醇与胆固醇酯的含量增加(P＜0.05),LDLR、HMGCoAR mRNA与蛋白的表达增高(P＜0.05,P＜0.01),细胞核内N-SREBP2的蛋白表达水平增加(P＜0.05),SCAP从内质网向高尔基体的移位增加;PFA处理(高磷联合PFA处理组)可阻断高磷引起的上述作用(P＜0.05,P＜0.01).高磷处理组巨噬细胞内SCAP的蛋白水平相比对照组增高(P＜0.05),PFA处理能抑制高磷导致的SCAP蛋白水平增高,但SCAPmRNA的表达在各组间差异均无统计学意义(P＞o.05).结论 高磷环境下,钠磷转运体介导磷离子进入巨噬细胞内,通过基因转录后机制增加SCAP的蛋白水平,诱导其功能失调并促使其异常转运SREBP2至高尔基体裂解释放N-SREBP2,后者转位入核促进HMGCoAR和LDLR的表达,促使细胞内源性胆固醇合成和外源性LDL经LDLR摄入的增加,最终导致细胞内胆固醇异常蓄积.     

下瘀血汤及其组分对蛋氨酸-胆碱缺乏饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝炎的干预作用

目的:探讨下瘀血汤及其组分对蛋氨酸-胆碱缺乏(MCD)饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的治疗作用及潜在机制。方法:40只C57/BL6J雄性小鼠随机分为对照组、模型组、下瘀血汤全方组(3.03 g/kg)、下瘀血汤组分组(乙酸乙酯部位萃取液,0.65 g/kg)及吡格列酮组(10 mg/kg),每组8只。对照组小鼠给予蛋氨酸-胆碱充分(MCS)饲料,其他组小鼠给予MCD饲料诱导NASH模型,连续6周。造模第4周起,各药物组灌胃给予相应药液,连续3周。末次给药后,收集肝组织,分离血清。试剂盒检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平以及肝组织三酰甘油(TG)含量。HE染色和油红O染色分别观察肝组织形态学变化及脂滴沉积。PCR检测肝组织脂质代谢[二酰甘油酰基转移酶(Dgat)1、Dgat2、脂滴包被蛋白2(PLIN2)、诱导细胞凋亡的DFF45样效应因子C(CIDEC)、白细胞分化抗原簇36(CD36)、脂肪酸转运蛋白3(FATP3)、脂酰辅酶A氧化酶(ACO)、长链脂酰辅酶A脱氢酶(LCAD)]、炎症[F4/80、CD11b、CD11c、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)]、血管新生[血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)、血管性血友病因子(vWF)、血小板/内皮细胞黏附分子(PECAM-1/CD31)、CD34、内皮糖蛋白(ENG/CD105)、E-选择素(E-sele)、血管细胞黏附分子(VCAM)]相关因子的mRNA表达水平。结果:(1)与对照组相比,模型组小鼠血清ALT、AST水平及肝脏TG含量显著增加(P0.05,P0.01);HE染色发现,模型组小鼠肝组织可见肝细胞脂肪变,大量脂肪空泡,肝细胞气球样变以及炎症细胞浸润,且NAS积分4分;油红O染色发现,模型组小鼠肝细胞内有大量红色脂滴沉积。与模型组相比,下瘀血汤组分组小鼠血清ALT水平显著下降(P0.05),下瘀血汤全方组及组分组小鼠血清AST水平及肝组织TG含量均显著降低(P0.05,P0.01),两组肝组织脂肪变、炎症浸润以及脂滴沉积明显改善,且NAS积分和油红O染色阳性表达面积占比均显著降低(P0.01)。组分组ALT和AST水平、全方组AST水平较吡格列酮组明显降低(P0.05,P0.01)。(2)与对照组相比,模型组小鼠肝组织脂质代谢相关基因Dgat1、PLIN2、CIDEC、CD36、FATP3的mRNA表达水平明显升高(P0.01),而ACO与LCAD的mRNA表达水平显著降低(P0.05,P0.01);炎症相关基因F4/80、CD11b、CD11c、TNF-α及TGF-β的mRNA表达,以及血管新生相关基因VEGF、VEGFR2、vWF、CD31、CD34、E-sele、VCAM的mRNA表达均显著上调(P0.05,P0.01)。与模型组相比,脂质代谢方面,下瘀血汤全方组与组分组Dgat1、Dgat2、PLIN2、CIDEC、CD36及FATP3的mRNA表达显著降低(P0.05,P0.01),LCAD的mRNA表达显著上调(P0.01);下瘀血汤全方组ACO mRNA表达亦明显升高(P0.01);炎症方面,下瘀血汤全方组及组分组F4/80、CD11b、CD11c及TNF-α的mRNA表达显著降低(P0.05,P0.01),组分组TGF-β mRNA表达亦明显下调(P0.01);血管新生方面,下瘀血汤全方组及组分组VEGF、VEGFR2、vWF、CD31、CD34、E-sele、VCAM、CD105的mRNA表达均显著降低(P0.05,P0.01)。结论:下瘀血汤及其乙酸乙酯部位组分可有效治疗MCD诱导的小鼠NASH,其作用机制可能与改善肝脏脂质代谢、炎症反应及血管新生有关。     

炎症上调SREBP-1致C57BL/6J小鼠肝脏脂质积聚

目的：研究炎症是否通过影响核转录因子固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)而致C57BL/6J小鼠肝脏脂质的异常聚集。方法：将8周龄C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组(n=6)和炎症组(n=6)组,两组均喂以高脂饮食,炎症组小鼠皮下注射酪蛋白建立慢性炎症模型,对照组注射相应量磷酸盐缓冲液,18周后处死,测定血清中炎症介质水平及肝脏中的脂质水平,油红O染色观察肝脏脂质沉积情况,实时定量PCR和Western blotting检测肝脏炎症因子TNF-α、MCP1及脂肪酸合成相关基因SREBP1、ACCα、FAS的基因和蛋白水平。结果：与对照组相比,炎症组血清中的炎症因子IL-6和SAA水平以及肝脏中炎症因子MCP1 和 TNF-α的mRNA和蛋白水平均显著上升(P<0.05)。炎症状态下,肝脏甘油三酯和游离脂肪酸含量显著高于对照组(分别为0.21?0.07 vs 0.40?0.14mg/mg,P<0.05;3.80?0.58 vs 5.38?1.38nmol/mg,P<0.05)。油红O结果显示,炎症使脂质积聚更显著。SREBP1及其下游与脂肪酸和甘油三酯合成相关的基因ACCα,FAS的mRNA和蛋白水平在炎症组均显著上升(P<0.05)。结论：炎症可能通过上调SREBP1,加重脂质在肝脏的聚集。     

DUSP9对高脂喂养胰岛素抵抗C57小鼠胆固醇、糖异生的影响

目的探讨DUSP9基因对高脂喂养诱导的胰岛素抵抗C57小鼠胆固醇、糖异生的影响。方法将成功构建的pEGFP-DUSP9裸质粒注射随机选取的高脂喂养小鼠(HD组,n=10),以空载pEGFP-N1注射的高脂喂养小鼠为对照(HE组,n=10),普食喂养的为阴性对照(NC组,n=10),质粒注射48h后分别取各组小鼠血清、肝组织,检测总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、空腹血糖(FBG),空腹胰岛素(FINS)等指标;实时荧光定量PCR(QPCR)法检测各肝组织中DUSP9、脂代谢相关基因固醇元件结合蛋白2(SREBP2)、低密度脂蛋白受体(LDLr)、糖异生关键酶-磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPCK)mRNA表达的变化,Western blot法检测DUSP9蛋白表达水平。结果 HD、HE组小鼠FBG、FINS、TC、LDL-C水平较NC组明显升高(P<0.01);HD组小鼠肝脏中DUSP9mRNA、蛋白表达水平均较HE组显著升高(P<0.01),SREBP2、LDLr mRNA表达水平均显著增加(P<0.01),PEPCK mRNA表达水平明显下调(P<0.01);HD组小鼠48h血清TC、LDL-C水平与HE组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 DUSP9可能通过上调SREBP2、LDLr水平改善高脂喂养胰岛素抵抗C57小鼠的胆固醇代谢,减少PEPCK mRNA的表达水平从而导致肝糖输出减少,FBG水平降低。     

高脂诱导非酒精性脂肪性肝病小鼠肝脏Chemerin及其受体的表达

目的研究高脂饮食诱导非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)小鼠肝脏Chemerin及Chemerin受体(CMKLR1)的表达情况。方法22只C57BL/6小鼠随机分为对照组(n=10)和高脂组(n=12),对照组给予基础饲料喂养,高脂组给予高脂饲料喂养,连续喂养18周后进行腹腔注射葡萄糖耐量试验(IPGTT)和胰岛素耐量试验(ITT),检测血清游离脂肪酸(FFA)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、谷丙转氨酶(ALT);ITT结束后第3天处死小鼠,测肝脏TG含量,并做HE染色观察肝脏形态变化;采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞因子Chemerin、CMKLR1及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA水平的表达。结果高脂组与对照组相比,胰岛素的敏感性下降(P<0.05),肝脏HE染色存在明显的炎症及肝细胞脂肪变,肝脏的TG含量升高(P<0.05),血脂紊乱及肝功能损伤,肝脏Chemerin的mRNA水平下降(P<0.05),CMKLR1及TNF-α的mRNA水平表达上升(P<0.05)。结论经高脂喂养18周后小鼠NAFLD造模成功并伴有胰岛素抵抗,在这种模型中肝脏Chemerin及CMKLR1的表达改变可能与NAFLD的发病有关。     

CD36基因缺失通过上调PTP1B基因表达降低小鼠肌肉胰岛素敏感性

目的 探讨在正常饮食状态下，CD36基因缺失对小鼠肌肉胰岛素信号通路的影响及作用机制。方法 野生型小鼠（WT）和CD36基因敲除小鼠（CD36-/-）给予正常饮食喂养14周（n=12）。小鼠禁食4 h，腹腔注射胰岛素（1 U/kg）进行胰岛素耐量实验。Real-time PCR检测小鼠肌肉胰岛素受体(IR)、胰岛素受体底物1/2（IRS1/2）、蛋白酪氨酸磷酸酶1B（PTP1B）基因表达。Western blot检测小鼠肌肉蛋白激酶B(AKT)、IR、IRS1/2和PTP1B的蛋白表达。免疫共沉淀（Co-IP）检测肌肉IR和IRS1的酪氨酸磷酸化程度。染色质免疫共沉淀（ChIP）技术检测肌肉PTP1B启动子组蛋白乙酰化水平。结果 在正常饮食状态下，与WT小鼠相比，CD36-/-小鼠的胰岛素耐量显著增强（P<0.05），血清胰岛素浓度升高（P<0.01），胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)升高（P<0.05）。在肌肉组织中，CD36-/-小鼠与WT小鼠相比，p-AKT/AKT蛋白表达比值显著降低（P<0.01）。Real-time PCR和Western blot结果表明，肌肉组织IR，IRS1，IRS2的mRNA和蛋白水平在WT和CD36-/-小鼠间无显著差异（P>0.05）。Co-IP实验显示IR和IRS1的酪氨酸磷酸化水平在CD36-/-小鼠中显著降低（P<0.05）。CD36-/-小鼠肌肉中PTP1B mRNA和蛋白表达均高于WT小鼠（P<0.05），ChIP实验显示PTP1B基因启动子的组蛋白乙酰化水平显著升高（P<0.01）。腹腔注射PTP1B的抑制剂可改善CD36-/-小鼠的胰岛素敏感性。结论 在正常饮食条件下，CD36基因对于维持生理肌肉胰岛素敏感性十分重要，小鼠CD36基因缺失通过上调PTP1B基因表达，诱导IR、IRS1去酪氨酸磷酸化而使肌肉胰岛素信号传导受损。     

Ad-VEGF-GFP-CD/TK双自杀基因系统对大肠癌的生长抑制作用及微环境中细胞因子活性的影响

目的评价重组腺病毒介导的Ad-VEGF-GFP-CD/TK双自杀基因系统对大肠癌Balb/c小鼠移植瘤的治疗作用及其引起的相关细胞因子的变化。方法Balb/c小鼠皮下接种CT26细胞,成瘤后给予双自杀基因系统治疗,计算肿瘤体积抑瘤率的动态变化,治疗结束后检测IL-2、IL-10、TNFα、IFNγ这4种细胞因子的表达水平。结果CD/TK双自杀基因系统对大肠癌的生长抑制作用明显;治疗后小鼠4种细胞因子水平均有升高,与对照组有显著差异(P<0.05)。结论重组腺病毒介导的CD/TK双自杀基因系统对荷大肠癌Balb/c小鼠的移植瘤有明显的抑瘤作用,其所导致的细胞因子的变化可能有助于加强其抗肿瘤效应。     

脂蛋白脂肪酶基因敲除小鼠糖脂代谢与脂肪组织内质网应激研究

目的研究脂蛋白脂肪酶(LPL)基因敲除小鼠糖脂代谢特点及脂肪组织内质网应激情况。方法以LPL基因敲除杂合子小鼠(LPL+/-组,n=8)和野生型(WT)C57小鼠(对照组,n=8)作为实验对象,两组再分为16周龄组(n=4)和50周龄组(n=4)。测定血清三酰甘油(TG)和游离脂肪酸(FFA)水平;腹腔注射葡萄糖耐量试验(IPGTT)监测血糖变化,计算葡萄糖曲线下面积(AUCg)和稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),评价胰岛素敏感性及胰岛β细胞功能;采用Real-Time PCR技术检测皮下脂肪和内脏脂肪组织中内质网应激相关因子(Bip、ATF4、ATF6和CHOP)的表达。结果 50周龄LPL+/-组小鼠血清TG和FFA水平均显著高于50周龄对照组小鼠,血清FFA水平明显高于16周龄LPL+/-组小鼠(P<0.05)。IPGTT结果显示:50周龄LPL+/-组小鼠IPGTT30、60 min血糖及AUCg均显著高于50周龄对照组(P<0.05),且IPGTT15～120 min血糖和AUCg均显著高于16周龄LPL+/-组(P<0.05)。与16周龄LPL+/-组比较,50周龄LPL+/-组小鼠HOM...     

Exo-1基因对端粒酶缺陷小鼠造血干细胞植入效率的影响

目的 利用不同的造血干细胞移植方式,探讨Exo-1基因缺失对端粒酶基因敲除小鼠的造血干细胞植入效率的影响.方法 以CD45.1小鼠的骨髓细胞或骨髓造血干细胞为供体,以端粒酶基因敲除小鼠或Exo-1基因和端粒酶基因双敲除小鼠为受体,在给予不同剂量X线照射或不照射的情况下,重复进行静脉注射全骨髓细胞或分选的骨髓造血干细胞(c-kit<''+>、Sca-1<''+>、lineage<''->,KSL),于移植后1个月取外周血,流式分析嵌合率.结果 未经X线照射及1 Gy、2 Gy照射情况下,端粒酶基因缺陷受体小鼠的外周血中供体来源的细胞嵌合率较低;6 Gy照射后,供体来源的外周血细胞嵌合率仍低于50%,而且端粒酶基因缺陷受体小鼠在移植后1个月内死亡较多;3 Gy照射可形成较高嵌合率,Exo-1基因缺失对端粒酶缺陷小鼠的造血干细胞植入效率的影响不显著.结论 以端粒酶缺陷小鼠作为衰老模型研究造血干细胞植入效率时,3 Gy X线照射能够有效地形成较高的外周血供体细胞的嵌合率,但是Exo-1基因没有进一步提高造血干细胞在端粒酶敲除小鼠的植入效率.     

缬沙坦对慢性病毒性心肌炎小鼠Th17/Treg免疫平衡的影响

目的观察血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB)缬沙坦对慢性病毒性心肌炎(VMC)小鼠Th17与CD4+CD25+Treg细胞的平衡状态及心肌病变的影响,探讨ARB对慢性VMC的作用及其机制。方法以柯萨奇病毒(CVB3)重复增量感染(第1、14、28天剂量分别为0.20、0.25、0.30 mL)BABL/c组小鼠建立慢性VMC模型(n=36),对照组(n=6)同期腹腔注射等体积生理盐水。42 d将慢性VMC模型组存活小鼠随机分为慢性VMC组和缬沙坦组,干预28 d后,处死各组小鼠。处死前测量各组小鼠血压、心脏质量和体质量;脾脏中提取淋巴细胞,采用流式细胞术检测Th17和CD4+CD25+Treg细胞比例;采用Real Time-PCR法检测Foxp3和IL-17的mRNA在心肌中的表达;心肌行HE和Masson染色;心脏超声检查小鼠心脏功能。结果各组小鼠血压水平无显著性差异(P>0.05)。慢性VMC组小鼠心脏质量/体质量比(HW/BW)大于缬沙坦干预组和对照组(P<0.01),慢性VMC组小鼠脾脏中Th17细胞的比例、IL-17、病理积分明显高于缬沙坦组和对照组(P<0.01),而CD4+CD25+Treg细胞的比例、Foxp3低于缬沙坦组和对照组(P<0.05)。缬沙坦组小鼠心功能较慢性VMC组明显改善。结论病毒性心肌炎小鼠外周血中存在Th17/Treg失衡,且与心肌病变有相关性,缬沙坦可通过调节Th17/Treg平衡,减轻慢性VMC自身免疫损伤,避免向扩张型心肌病进展。     

清道夫受体CD36基因缺陷对正常高值血压患者动态血压节律及代谢指标的影响研究

背景　处于正常高值血压阶段的患者，随着动脉血压的节律和绝对值的改变，以及受代谢因素的影响，仍然有发生动脉粥样硬化性心血管疾病的风险，而清道夫受体CD36基因缺陷与多种动脉粥样硬化性心血管疾病的发生有关，有必要揭示两者之间的内在联系。目的　对比清道夫受体CD36基因缺陷的正常高值血压患者与清道夫受体CD36基因正常者24 h动态血压指标及代谢指标是否存在差异，以探讨清道夫受体CD36基因缺陷对正常高值血压患者的血压和代谢是否产生影响。方法　选取2018年10月-2019年4月在武汉市武昌医院心内科门诊就诊的200例初诊正常高值血压患者为研究对象。均行24 h动态血压监测，抽取空腹静脉血检测相关代谢指标及清道夫受体CD36基因缺陷情况。以清道夫受体CD36基因缺陷的正常高值血压患者为观察组，以清道夫受体CD36基因正常的正常高值血压患者为对照组。正常高值血压患者CD36基因缺陷影响因素采用多因素Logistic回归分析。结果　200例初诊正常高值患者共检出31例清道夫受体CD36基因缺陷，检出率为15.5%。观察组体质指数（BMI）、24 h平均舒张压（24 hDBP）、夜间平均收缩压（nSBP）、24 h平均动脉压（24 hMAP）、非杓型血压发生率、三酰甘油（TG）、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）高于对照组（P<0.05）。多因素Logistic回归分析，结果显示：BMI〔OR=5.649，95%CI（4.235，14.376）〕、24 hMAP〔OR=5.836，95%CI（4.459，15.132）〕、非杓型血压〔OR=6.228，95%CI（5.876，16.812）〕、TG〔OR=4.348，95%CI（2.247，10.168）〕、HOMA-IR〔OR=4.134，95%CI（1.630，5.245）〕是正常高值血压患者清道夫受体CD36基因缺陷独立影响因素（P<0.05）。结论　正常高值血压患者清道夫受体CD36基因缺陷发生率达15.5%，血压和代谢可能对正常高值血压患者的清道夫受体CD36基因缺陷产生影响。     

Knockout of the tumor necrosis factor α receptor 1 gene can up-regulate erythropoietin receptor during myocardial ischemia-reperfusion injury in mice

Background Tumor necrosis factor a receptor 1 （TNFaR1） plays an important role in the signal pathway of apoptosis. The objective of this study was to investigate the effects of TNFaR1 knockout on the up-regulation of erythropoietin receptor （Epo-R） and the coordinated anti-apoptosis functions during myocardial ischemia-reperfusion injury in mice. Methods The ischemia-reperfusion injury model for cardiomyocytes was performed by ligating the left circumflex branch artery of TNFaR1 knockout （P55/） C17 B6 mice, as well as wild-type （P55^＋/^＋） C17 B6 mice. Triphenyltetrazolium chloride （TTC） staining was performed to observe the damaged area of the heart. TUNEL staining and DNA fragmentation were used to identify apoptosis. Mitochondrial Bcl-2 and Bax as well as expression of Epo-R and its downstream genes （Jak-2, stat-5, Akt, lkB-a, HIF-1a） were measured by Western blotting. The gene knockout mice were assigned into those undergoing the apoptosis surgical model group （KO group）, and those subjected to sham operation （KOs group）. Similarly, wild-type mice were either exposed to the surgical model （WT group） or subject to a sham operation （WTs group）. Results The myocardial damage ratio of the wild-type group after the operation was significantly higher than that of the knockout group, （50.5±6.4）% vs （36.9±6.9）%, P 〈0.01. Similarly, TUNEL positive ratio of the wild-type group was significantly higher than that of the knockout group, （63.1±5.6）% vs （42.1±4.7）%, P〈0.01. The gray value ratios of Epo-R, Jak-2, stat-5, Akt, IkB-a, HIF-1 and mitochondrial Bcl-2 in the KO group were significantly higher than those of the WT group, P 〈0.05; however, mitochondrial Bax was significantly lower than that of the WT group significantly （P 〈0.05）. Conclusions Using the ischemia-reperfusion injury model in mice, cardiomyocytes of TNFaR1 knockouts exhibited anti-apoptotic characteristics. This information could be used to coordinate the prevention of myocardial apoptosis by up-regulating and activating the Epo-R pathway.     

蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2特异性抑制剂PHPS1通过促进泡沫细胞形成加速apoE-基因敲除小鼠早期动脉粥样硬化进展

目的 研究酪氨酸磷酸酶SHP-2 （Src Homology 2 Containing Protein Tyrosine Phosphatase 2,SHP-2）特异性抑制剂苯肼基吡唑啉酮磺酸盐1(phenylhydrazonopyrazolonesulfonate1,PHPS1)对apoE基因敲除小鼠（apoE-/-小鼠）动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）的影响作用。 方法 1.25%胆固醇高脂饲料饲养apoE-/-小鼠28只4周构建早期AS模型,随机分为对照组和PHPS1组。观察降主动脉斑块大小和细胞成分,评估斑块内信号通路及清道夫受体(scavenger receptor,SR)蛋白及mRNA的含量变化情况。氧化低密度脂蛋白（oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL）和绿色荧光微球加或不加PHPS1干预骨髓来源的巨噬细胞（bone marrow-derived macrophage,BMDM）细胞16 h,观察BMDM内绿色荧光沉积情况。 结果 PHPS1组斑块内油红O面积、斑块大小、斑块内巨噬细胞含量比对照组显著增加,差异均有统计学意义（P＜0.01）。PHPS1组巨噬细胞内部绿色荧光强度比对照组显著增加,差异有统计学意义（P＜0.01）。PHPS1组白细胞分化抗原36（cluster of differentiation 36,CD36）和SR-A1的mRNA表达量比对照组显著升高,差异均有统计学意义（P＜0.01）。PHPS1组磷酸化细胞外信号调节酶（phosphorylated extracellular-regulated kinases,p-ERK）、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶（phosphorylated phosphatidylinositol 3-kinase,p-PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（phosphorylated protein kinase B,p-AKT）蛋白含量比对照组显著升高,差异均有统计学意义（P＜0.01）。 结论 PHPS1主要通过激活细胞外信号调节酶及磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路,影响SR的过表达从而增加了巨噬细胞对ox-LDL的吞噬能力最终促进了泡沫细胞的形成、促进AS进展。     

艾易舒注射液在乳腺癌术后辅助治疗中的应用及效果评价

目的: 评价艾易舒注射液对乳腺癌术后患者化疗后细胞免疫功能及毒副反应影响。方法:将70例Ⅰ～ⅢA期乳腺癌患者随机分为艾易舒加化疗组（36例）和单纯化疗组（34例）,检测治疗前后T淋巴细胞亚群及NK细胞活性,比较两组的毒副反应及生活质量改变。结果: 艾易舒加化疗组患者CD3、CD4、CD8水平和CD4/CD8比值及NK细胞活性高于单纯化疗组(P<0.05);艾易舒加化疗组患者白细胞减少程度明显小于单纯化疗组（χ²=7.44,P=0.006）,其他毒副反应差异无显著性（P>0.05）;艾易舒加化疗组36.11%（13/36）患者KPS提高幅度高于单纯化疗组（11.76%,4/34）（χ²=5.64,P=0.018）; 艾易舒加化疗组44.44%患者体重增加,高于单纯化疗组（17.65%）（χ²=6.66,P=0.036）。 结论: 艾易舒注射液可作为乳腺癌患者术后化疗的辅助用药,提高免疫能力,减轻化疗的毒副反应,提高患者的生活质量。