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1.
目的 观察胆固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(sterol regulatory element binding proteins cleavage-activating protein,SCAP)功能失调对THP-1源性巨噬细胞脂质代谢及IL-1β、MCP-1表达的影响,探讨SCAP的促炎作用是否依赖于其介导的胆固醇稳态调节功能.方法 采用基因转染方法在THP-1源性巨噬细胞中过表达SCAP或沉默SCAP,结合使用炎症刺激剂LPS(1μg/mL)或SCAP转位抑制剂Betulin(3μmol/L)处理THP-1源性巨噬细胞,将细胞分为对照组、过表达SCAP组、沉默SCAP组、LPS组、沉默SCAP+ LPS组、Betulin组以及过表达SCAP+Betulin组,RT-PCR法检测过表达SCAP或沉默SCAP对HMGCoAR、pro-IL-1β、MCP-1基因表达水平的影响.油红O染色观察不同组别细胞内中性脂质沉积的变化.酶法定量测定胞内胆固醇含量.Western blot法检测SCAP、pro-IL-1β以及培养上清中IL-1β的蛋白水平.结果 ①过表达SCAP组与对照组比较,其HMGCoAR、MCP-1、pro-IL-1β基因表达水平升高(P<0.01),细胞内pro-IL-1β及细胞培养上清中IL-1β蛋白含量均上升(P<0.05),且细胞内总胆固醇(total cholesterol,TC)及胆固醇酯(cholesterol ester,CE)含量上升(P<0.01).②沉默SCAP组与对照组比较,HMGCoAR、MCP-1、pro-IL-1β基因表达水平下降(P<0.05),细胞内pro-IL-1β及培养上清中成熟IL-1β蛋白含量均降低(P<0.05),且细胞内中性脂质蓄积减少,TC及CE含量下降(P<0.05);沉默SCAP+ LPS组与LPS组比较,MCP-1、pro-IL-1β基因表达下调(P<0.05),成熟IL-1β蛋白水平下降(P<0.05).过表达SCAP+ Betulin组与过表达SCAP组比较,HMGCoAR基因表达水平下降(P<0.05),其细胞内,TC及CE含量亦下降(P<0.05),但MCP-1、pro-IL-1β基因表达水平差异无统计学意义(P>0.05),培养上清中成熟IL-1β蛋白含量差异也无统计学意义(P>0.05).结论 胆固醇敏感器SCAP功能失调促进THP-1源性巨噬细胞内炎症因子IL-1β、MCP-1表达,增加成熟IL-1β的生成及其向细胞外分泌;SCAP这一新发现的功能不依赖于其介导的胆固醇稳态调节功能.  相似文献   
2.
中晚期原发性肝癌 (以下称肝癌 )大多采用经肝动脉插管栓塞化疗药物治疗 ,但患者常无法耐受化疗药物的毒副反应。笔者应用32 P 玻璃微球 (GMS)治疗中晚期肝癌 2 1例 ,取得了较好的疗效 ,现报道如下。一、资料与方法1.临床资料。 2 1例原发性肝癌患者 ,均经临床、生化、B超、CT或病理学检查确诊 ,其中男 16例 ,女 5例 ,年龄 33~6 8岁 ,平均 5 4岁。肿瘤直径 6 .5~ 18cm ,5例伴门静脉癌栓 ,19例合并有不同程度的肝硬变。 2 1例患者甲胎蛋白(AFP)为 (2 99.4 3± 16 5 .79) μg L ,其中 15例AFP >4 0 0 μg L ,1例 15 0 μ…  相似文献   
3.
目的 探讨胆固醇调节原件结合蛋白裂解激活蛋白(sterol regulatory element binding proteins cleavage-activating protein,SCAP)功能失调促进THP-1源性巨噬细胞炎症小体活化及IL-1β成熟的分子机制.方法 采用基因转染方法在THP-1源性巨噬细胞中过表达SCAP,结合使用P2X7受体(P2X7 receptor,P2X7R)激动剂ATP(5 mmol/L)或抑制剂A438079(100 μmol/L)处理THP-1源性巨噬细胞,将细胞分为:①对照组、②ATP处理组、③A438079处理组、④ATP+A438079组、⑤过表达SCAP组、⑥过表达SCAP+ATP组、⑦过表达SCAP+ A438079组、⑧过表达SCAP+ATP+A438079组.RT-PCR检测过表达SCAP以及激动或抑制P2X7R对P2X7R、pro-IL-1β、NLRP3、pro-caspase-1基因表达水平的影响.流式细胞术检测细胞表面P2X7R的表达.Western blot检测SCAP、pro-IL-1β、NLRP3、caspase-1(p20)以及培养上清中IL-1β的蛋白水平.同一实验在细胞水平重复4次.结果 ①过表达SCAP组与对照组比较,其pro-IL-1β、P2X7R基因表达水平显著升高(P<0.01),细胞表面P2X7R表达明显上调.②P2X7R激动剂ATP与抑制剂A438079对THP-1源性巨噬细胞SCAP及P2X7R mRNA表达无影响(P>0.05).P2X7R激动剂ATP能够显著促进THP-1源性巨噬细胞pro-IL-1β mRNA表达(P<0.05),在过表达SCAP基础上激动P2X7R能够进一步激活pro-IL-1β基因转录(P<0.01),同时显著促进细胞内pro-IL-1β剪切成熟并向细胞外分泌(P<0.01),抑制P2X7R活性并不影响过表达SCAP致pro-IL-1β表达上调的作用,但将减少上清中成熟IL-1β的含量.过表达SCAP并不影响NLRP3及caspase-1表达(P>0.05),但在过表达SCAP基础上充分激动P2X7R将显著上调NLRP3及caspase-1基因及蛋白水平(P<0.01),上述变化能够被P2X7R抑制剂A438079抵消.结论 胆固醇敏感器SCAP功能失调能够促进THP-1源性巨噬细胞内pro-IL-1 β表达,同时通过上调细胞表面P2X7R表达激活NLRP3炎症小体,促进pro-IL-1β成熟及其向细胞外分泌.  相似文献   
4.
5.
目的 观察高磷环境对巨噬细胞内胆固醇蓄积的影响及其分子机制.方法 将人单核细胞株(THP-1)源性巨噬细胞分为对照组(磷1.0 mmol/L)、高磷处理组(磷3.0 mmol/L)、磷甲酸钠(PFA)处理组(磷1.0 mmol/L加PFA 1.0 mmol/L)以及高磷联合PFA处理组(磷3.0 mmol/L加PFA 1.0mmol/L),按不同要求分别处理各组细胞.培养24 h后,油红O染色观察细胞内中性脂质的分布,酶催化比色法定量测定细胞内的胆固醇含量,qPCR检测细胞内羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGCoAR)、低密度脂蛋白受体(LDLR)、固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SCAP) mRNA的表达,蛋白质印迹法测定细胞内SCAP、LDLR、HMGCoAR及核内固醇调节元件结合蛋白2(N-SREBP2)的蛋白水平,激光共聚焦法检测SCAP从内质网向高尔基体的移位情况.结果 与对照组相比,高磷处理组巨噬细胞内中性脂质明显聚集,细胞内总胆固醇与胆固醇酯的含量增加(P<0.05),LDLR、HMGCoAR mRNA与蛋白的表达增高(P<0.05,P<0.01),细胞核内N-SREBP2的蛋白表达水平增加(P<0.05),SCAP从内质网向高尔基体的移位增加;PFA处理(高磷联合PFA处理组)可阻断高磷引起的上述作用(P<0.05,P<0.01).高磷处理组巨噬细胞内SCAP的蛋白水平相比对照组增高(P<0.05),PFA处理能抑制高磷导致的SCAP蛋白水平增高,但SCAPmRNA的表达在各组间差异均无统计学意义(P>o.05).结论 高磷环境下,钠磷转运体介导磷离子进入巨噬细胞内,通过基因转录后机制增加SCAP的蛋白水平,诱导其功能失调并促使其异常转运SREBP2至高尔基体裂解释放N-SREBP2,后者转位入核促进HMGCoAR和LDLR的表达,促使细胞内源性胆固醇合成和外源性LDL经LDLR摄入的增加,最终导致细胞内胆固醇异常蓄积.  相似文献   
6.
血红素加氧酶(HO)是血红素降解的起始酶和限速酶,其主要功能是代谢血红素成为一氧化碳、胆绿素及铁离子。HO—1是HO的一种同工酶,为诱导型HO。HO-1及血红素代谢产物具有抗炎、抗氧化、抗凋亡、扩张血管等生理作用。HO-1作为一种重要的应激蛋白,在急性肾脏损伤、肾小球肾炎、肾间质纤维化等肾脏疾病的病理生理发展过程中发挥着重要的保护作用,有效地调控其表达有可能成为预防和治疗相关疾病的新策略。  相似文献   
7.
龚颖  李正荣  巫江  欧阳南  钟清 《江苏医药》2012,38(17):2049-2052
目的探讨终末期肾病(ESRD)透析患者血浆总丙二醛(tMDA)和游离丙二醛(fMDA)的浓度变化。方法 ESRD患者79例分为ESRD保守治疗(ESRD组,26例)、血液透析(HD组,30例)和腹膜透析(PD组,23例)三组;另设正常对照组30例。采用同位素稀释GC-MS法检测患者fMDA和tMDA浓度,计算结合丙二醛(bMDA)值(bMDA=tMDA-fMDA)。结果 ESRD组、HD组和PD组血浆tMDA和bMDA浓度均高于对照组[(6.94±1.50)μmol/L,(5.70±1.20)μmol/L和(4.40±1.00)μmol/L vs.(1.70±0.50)μmol/L和(6.49±1.70)μmol/L,(4.43±1.20)μmol/L和(3.21±1.00)μmol/L vs.(1.26±0.30)μmol/L](P<0.01)。PD组和HD组fMDA水平均高于ESRD组[(1.22±0.60)μmol/L和(1.31±0.60)μmol/L vs.(0.48±0.30)μmol/L](P<0.01)。多元统计分析结果显示,tMDA和bMDA水平与残余肾功能(γ=-2.160,P<0.05)和白蛋白水平(γ=-2.049,P<0.05)呈负相关。促红细胞生成素(EPO)剂量与fMDA水平呈负相关(γ=-2.178,P<0.05)。结论 fMDA浓度的变化可提示近期的肾脏损伤,而bMDA则可提示肾脏的陈旧损伤。ESRD未透析患者不能将bMDA从肾脏中清除;透析尤其是血液透析,加剧了患者肾脏的氧化损伤。  相似文献   
8.
临床营养作为临床治疗的一个重要组成部分,也是现代医院管理的综合措施之一.正确的营养支持及治疗能显著提高病人的治愈率,降低死亡率,加快病床周转率.  相似文献   
9.
本文介绍如何利用维生素C厂大量闲置设备生产“保得”系列微生物制剂,以解决我国部分停产维生素C厂转产问题。  相似文献   
10.
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