丙戊酸钠对阿霉素肾病大鼠的肾保护作用

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂丙戊酸钠（VPA）干预对阿霉素肾病大鼠的肾脏保护作用。方法20只雄性SD大鼠随机分为正常对照组（n=6）和阿霉素肾病组（经阴茎静脉注射阿霉素造模,n=14）,后者造模后随机分为模型组和VPA干预组,每组7只。造模8周后,代谢笼留取尿液,腹主动脉采血后处死动物并取肾脏组织,观察各组大鼠血清肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）、三酰甘油（TG）、总胆固醇（Tc）、谷草转氨酶（GOT）、谷丙转氨酶（GPT）、白蛋白（Alb）和尿微量白蛋白与尿肌酐比值（UACR）的变化。天狼星红染色光学显微镜（光镜）下观察大鼠肾小管间质和。肾小球胶原改变;免疫组织化学方法检测肾脏组织α平滑肌肌动蛋白（α—SMA）表达;采用Real-TimePCR技术检测大鼠肾脏组织中Ⅰ型胶原（ColⅠ）、ColⅢ、α-SMAmRNA的表达。结果与正常对照组比较,阿霉素肾病组大鼠SCr、BUN、TG、TC、UACR均显著升高（P〈0．05或P〈0．01）,Alb明显降低（P〈0．01）,肾小球及。肾间质中胶原和α—SMA表达增多;三组大鼠GOT和GPT的差异无统计学意义（P〉0．05）。与模型组比较,VPA干预组SCr、BUN、TC、UACR均显著降低（P〈0．05）,肾小球及。肾间质中胶原和α-SMA表达减少,Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和α-SMAmRNA表达下调。结论VPA能显著改善阿霉素肾病大鼠的。肾功能,减轻肾脏组织纤维化程度,延缓病情的进展。     

肾小球硬化大鼠血、尿液生化及肾脏病理学改变

摘要： 目的 观察肾小球硬化（GS）大鼠血、尿液生化及肾脏病理学改变。方法 40只Wistar雄性大鼠随机分为假手术组和模型组，每组均为20只。采用单侧肾切除加1周后尾静脉注射阿霉素(5mg/kg)的方案建立大鼠GS模型，造模后12周末处死。检测血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)及24小时尿蛋白（24hUPr）。苏木素-伊红（HE）染色观察肾脏病理改变，计算GS指数。免疫组织化学方法检测肾组织Ⅳ型-胶原（Col-Ⅳ）和纤维连接蛋白（FN）的表达水平。结果 （1）模型组24hUPr和血清SCr、BUN显著高于假手术组，而血清TP、Alb则明显降低。（2）GS大鼠肾小球肥大，球囊粘连，囊壁增厚，局灶节段性肾小球硬化，GS指数显著高于假手术组；肾小管萎缩或坏死，可见大量蛋白管型；肾间质增宽，可见大量炎症细胞浸润。（3）GS大鼠肾组织Col-Ⅳ和FN阳性面积比显著高于假手术组，以肾小球表达增高为主。结论 采用单侧肾切除加1周后尾静脉注射阿霉素(5mg/kg)在术后12周可以成功建立GS模型，具体表现为大量蛋白尿、低蛋白血症和明显的肾功能损害，肾脏病理显示GS合并Col-Ⅳ、FN表达普遍增高。     

黄芪对IgA肾病大鼠肾组织α-SMA和FN的影响

目的：探讨黄芪对IgA肾病大鼠肾组织α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、纤维连接蛋白（FN）表达的影响,以观察黄芪对对IgA肾病的治疗作用及抗肾间质纤维化的机理。方法：复制IgA肾病大鼠模型,并给予黄芪治疗,分析肾脏病理改变,采用免疫组织化学技术检测各组大鼠肾组织中α-SMA、FN的表达情况。结果：IgA肾病模型组大鼠肾小球系膜区、肾小管、肾间质病理损害较正常对照组和黄芪治疗组明显加重,模型组大鼠肾小球系膜区IgA免疫荧光明显增强,与正常对照组（P〈0．001）和黄芪治疗组（P〈0．001）比较均有统计学意义。正常组肾组织有少量α-SMA和FN的表达,而IgA肾病模型组大鼠肾组织中α-SMA和FN表达明显增强,与正常对照组和黄芪治疗组α-SMA（P〈0．05）和FN（P〈0．05）比较差别有统计学意义。结论：黄芪可以抑制IgA肾病大鼠肾组织中α-SMA和FN的表达,从而干预肾间质纤维化,减轻肾脏病理改变,延缓IgA肾病的发生发展。     

尿毒清对慢性肾功能衰竭大鼠肾脏纤维化的影响

目的    探讨尿毒清对慢性肾功能衰竭大鼠肾脏纤维化的影响。方法    36只大鼠随机分为3组,正常对照组、手术对照组及尿毒清组。除正常对照组外,余均采用左侧肾脏切除加尾静脉重复注射阿霉素的方法制作慢性肾功能衰竭大鼠模型。术后1周正常对照组和手术对照组每天灌胃同体积生理盐水,尿毒清组给予尿毒清混悬液3g/（kg·d）灌胃,共给药8周。于第4、8周测量24h尿蛋白定量、肾功能,第8周光镜下观察肾脏病理变化,应用免疫组织化学SABC法测定肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原Ⅳ（COLIV）的表达。结果    与正常对照组比较,手术对照组24 h尿蛋白、血尿素氮（Bun）、血清肌酐（SCr）明显升高(P＜0.01),肾组织α-SMA、COLIV的表达较高(P＜0.01)。尿毒清组尿蛋白、Bun、Scr均较手术对照组明显下降,肾组织α-SMA和COLIV的表达低于手术对照组(P＜0.01)。结论   尿毒清可减少蛋白尿的排泄,改善肾功能,抑制肾小管上皮细胞表型转化,延缓肾脏纤维化。     

UUO模型大鼠肾间质纤维化动态进展及α-SMA、TGF-β1和VDR表达变化

目的 观察单侧输尿管梗阻（UUO）模型大鼠肾小管间质纤维化动态进展,研究该病理过程中肾脏纤维化相关蛋白表达的变化.方法 32只清洁级SD大鼠随机分为假手术组（n=16）和UUO模型组（模型组,n=16）.两组大鼠分别于术后（模型组建模后）第2、5、9、14天分批（n=4）处死,留取手术侧（模型组梗阻侧）肾脏组织.分别采用HE和Masson染色、免疫组织化学染色及Western blotting等方法,评价肾小管间质纤维化损伤程度并检测肾脏组织α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、纤维连接蛋白（FN）、维生素D受体（VDR）及转化生长因子β1（TGF-β1）等相关蛋白的表达.结果 肾脏组织形态学观察显示,随着输尿管梗阻时间的延长,肾小管间质纤维化程度逐步加重.免疫组织化学染色显示,模型组大鼠建模后各时间点肾间质α-SMA和FN阳性面积百分比均显著高于假手术组（P＜0.05）,且随着梗阻时间的延长逐渐升高,至建模后第14天时达到高峰.Western blotting分析表明,模型组大鼠建模后各时间点α-SMA和TGF-β1相对表达量均显著高于假手术组（P＜0.05）,而VDR相对表达量显著低于假手术组（P＜0.05）;建模后第2天,模型组大鼠肾脏组织α-SMA相对表达量已显著增加;建模后第14天,模型组α-SMA和TGF-β1相对表达量分别增高至假手术组的12.7倍和8.8倍,而VDR相对表达量下降至假手术组的3%.结论 UUO模型大鼠建模后第14天可出现显著的肾间质纤维化;建模早期肾间质中α-SMA表达增加提示肾间质成纤维细胞的活化;VDR表达的进行性减少提示其与肾间质纤维化有关.     

线粒体超离子与血管紧张素Ⅱ介导肾间质细胞外基质纤维化的研究

目的 探索线粒体超氧离子(superoxides, O-₂)是否参与血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)介导的细胞外基质纤维化。方法 培养大鼠肾脏成纤维细胞(NRK-49F),AngⅡ刺激24h后进行活细胞线粒体荧光染色(mitosox)以检测细胞内的线粒体O-₂;采用酶标仪和流式细胞术检测线粒体超氧离子含量和分布;利用Real-time PCR、Western blot及免疫荧光检测AngⅡ对细胞外基质胶原蛋白-Ⅰ(collagen-Ⅰ, Col-Ⅰ)、胶原蛋白-Ⅲ(collagen-Ⅲ, Col-Ⅲ)和纤维连接蛋白(fibronectin, FN) 表达的影响;并进一步检测NADPH氧化酶抑制剂罗布麻宁(apocynin, APO)对下游超氧离子合成以及ColⅠ、 ColⅢ和 FN表达的影响。结果 Ang Ⅱ明显促进大鼠肾脏成纤维细胞O-₂的生成以及细胞外基质Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和FN 的表达。Apo可显著抑制AngⅡ所引起的肾成纤维细胞中O-₂表达,而AngⅡ诱导的Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和FN 的合成作用亦被APO阻断。结论 线粒体O-₂介导了Ang Ⅱ诱导的肾脏成纤维细胞的细胞外基质蛋白的合成,采用APO抑制O-₂的表达,可使纤维化程度减轻。     

氧化苦参碱通过抑制CHK1/2磷酸化改善糖尿病大鼠肾组织的纤维化和炎症

目的 探讨氧化苦参碱（OMT）抗炎抗纤维化是否是通过影响细胞周期检测点激酶1/2（CHK1/2）来发挥。方法 SD大鼠采用完全随机设计分为正常对照组（NC）、糖尿病模型组（DM）和氧化苦参碱治疗组（OMT）,6只/组,尾静脉注射链脲佐菌素（STZ）（55 mg/kg）复制糖尿病模型。HE、Masson染色观察病理组织形态学变化;免疫组织化学染色观察CHK1、CHK2、p-CHK1、p-CHK2的表达部位;ELISA检测肾组织上清中IL-6和IL-1β的含量;Western blot检测CHK1、CHK2、p-CHK1、p-CHK2、 Ⅲ型胶原（Col-Ⅲ）、Ⅳ型胶原（Col-Ⅳ）、纤维连接蛋白（FN）蛋白的表达水平;NRK-52E细胞按处理方式分为正常糖对照组（NG组）、高糖模型组（HG组）、正常糖用药组（NG+OMT组）、高糖用药组（HG+OMT组）、正常糖空载组（NG+con组）、正常糖敲低组（NG+siCHK1/2）、高糖空载组（HG+con组）、高糖敲低组（HG+siCHK1/2）,Western blot检测CHK1、CHK2、p-CHK1、p-CHK2、Col-Ⅲ、Col-Ⅳ、FN蛋白的表达水平。结果 OMT可降低大鼠血糖、血肌酐和24 h尿蛋白（P<0.05）;DM组大鼠肾脏已出现炎性细胞浸润和纤维化表型,OMT组有所改善;OMT有明显抗炎作用（P<0.05）;CHK1/2主要表达在肾小管胞浆及胞核,DM组CHK1/2磷酸化水平高于NC组、OMT组;大鼠肾组织和NRK-52E细胞中经OMT治疗后p-CHK1、p-CHK2、Col-Ⅲ、Col-Ⅳ、FN蛋白表达含量均明显下降（P<0.05）;敲低CHK1/2后p-CHK1/2、Col-Ⅲ、Col-Ⅳ、FN蛋白表达均明显下降（P<0.05）。结论 OMT在糖尿病大鼠肾脏中发挥抗炎、抗纤维化的作用机制可能是通过影响CHK1、CHK2的表达从而影响其磷酸化水平,减少下游炎症介质的释放,减轻细胞外基质的分泌和沉积。     

脐带间充质干细胞外泌体对大鼠肾间质纤维化的抑制作用

目的: 探讨人脐带间充质干细胞来源的外泌体（human umbilical cord mesenchymal stem cell derived exosomes,hucMSC-Ex）对单侧输尿管梗阻（unilateral ureteral obstruction, UUO）所致大鼠肾小管间质纤维化的修复作用。方法: 分离培养hucMSC并从培养上清液中提取hucMSC-Ex。采用单侧输尿管结扎法构建肾间质纤维化模型,将大鼠随机分为假手术组、UUO组和hucMSC-Ex组,每组6只,hucMSC-Ex组大鼠在术后24 h 尾静脉注射250 μg hucMSC-Ex。7 d后收集肾脏组织,观察各组肾脏大体观。蛋白质印迹检测肾组织纤维化相关蛋白TGF-β1、E-钙黏蛋白和波形蛋白,并对肾脏组织切片进行HE染色、Masson染色和免疫组织化学染色,观察大鼠梗阻侧肾脏病理结构变化、炎症细胞浸润情况及肾纤维化程度,综合评价hucMSC-Ex对大鼠肾脏纤维化的抑制效果。结果： 与假手术组相比,UUO组大鼠肾脏炎性细胞浸润显著增加,组织结构严重破坏,广泛胶原沉积;hucMSC-Ex干预后组织形态结构部分恢复,胶原沉积减少,炎性细胞浸润减少。同时,UUO组大鼠肾脏α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、TGF-β1和波形蛋白表达升高,E-钙黏蛋白表达降低;但hucMSC-Ex输注后能够抑制α-SMA和TGF-β1的表达,逆转上皮间质转化。结论： hucMSC-Ex可以减轻大鼠肾组织病理损伤,延缓大鼠肾间质纤维化的进程。     

miR-150-5p在枸杞多糖缓解小鼠肾脏纤维化中的作用研究

目的 探讨miR-150-5p在枸杞多糖(LBP)抑制小鼠肾脏纤维化过程中的作用。方法 21只雌性的Balb/c小鼠随机分成假手术组(只暴露左侧输尿管,不结扎)、模型组(结扎左侧输尿管)和LBP干预组(在模型组的基础上灌胃0.1 mg/g LBP)。通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测胶原蛋白Ⅰ(Col-Ⅰ)、胶原蛋白Ⅲ(Col-Ⅲ)、纤连蛋白(FN)和平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的变化;通过RT-qPCR检测肾脏组织中miR-150-5p的表达;通过生物信息学数据库预测miR-150-5p的靶基因并用RT-qPCR进行验证。结果 与假手术组相比,模型组小鼠肾脏湿重以及肾脏指数均显著减小,Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、FN及α-SMA的mRNA表达水平显著升高,miR-150-5p的表达水平显著降低;LBP干预后,小鼠肾脏指数和肾脏湿重均有明显增加,Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、FN及α-SMA的mRNA表达水平显著降低,miR-150-5p的表达水平显著上升。通过Targetscan数据库预测miR-150-5p的靶基因,筛选出与肝脏纤维化相关的靶基因总共有2个,分别是Mtmr1和Pri...     

糖尿病大鼠肾间质TGF-β1和α-SMA的表达与细胞外基质沉积的关系

目的：观察糖尿病大鼠肾小管间质中转化生长因子(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达与纤维连接蛋白(FN)和胶原Ⅲ型(ColⅢ)沉积的关系。方法：大鼠随机分为正常对照组(A组)，糖尿病1周组(B组)，特尿病2周组(C组)，糖尿病1月组(D组)和糖尿病2月组(E组)。用免疫组化方法检测肾间质TGF-β1、α-SMA、FN和ColⅢ，PAS染色观察肾组织形态学改变，生化法测定大鼠血糖、血脂、血尿肌酐以及尿蛋白。结果：糖尿病2周开始肾小管见TGF-β1表达，并随病程进展而逐渐增多。糖尿病1月肾间质中见FN和ColⅢ沉积开始增多，2月时更多，且可见肾问质中有α-SMA表达；FN和ColⅢ增多与TGF-β1、α-SMA呈正相关。结论：TCF-β1刺激α-SMA的表达，从而促进糖尿病大鼠肾小管问质FN和ColⅢ的沉积。     

冬虫夏草菌丝对糖尿病大鼠肾脏DKK1、β-catenin表达的影响

目的研究冬虫夏草菌丝对糖尿病大鼠肾脏纤维连接蛋白(FN)、Dickkopf-1(DKK1)及β-连环蛋白(β-catenin)表达的影响,探讨其作用效果及机制。方法 Wistar大鼠40只,随机取12只为对照组,28只用链脲佐菌素造模。24只建模成功,随机分为非治疗组(n=12)和虫草菌丝治疗组(n=12)。12周末处死各组大鼠,测定血糖、尿白蛋白肌酐比(UACR)和内生肌酐清除率(Ccr);应用免疫组化、实时荧光定量PCR观察大鼠肾脏DKK1、β-catenin和FN表达的变化;应用Western blot检测DKK1的表达。结果与对照组相比,非治疗组和虫草菌丝治疗组大鼠UACR和Ccr明显升高(P<0.05)。免疫组化和PCR结果显示,FN、DKK1 mRNA及蛋白表达明显上调(P<0.05)。与非治疗组相比,治疗组大鼠UACR和Ccr显著降低(P<0.05),FN、DKK1 mRNA及蛋白表达减少(P<0.05)。非治疗组β-catenin蛋白表达较对照组明显减少(P<0.05),治疗组β-catenin蛋白表达明显高于非治疗组(P<0.05)。结论冬虫夏草对糖尿病大鼠肾脏FN表达具有抑制作用,其机制可能与抑制DKK1、稳定β-catenin有关。     

小鼠肝纤维化肝脏细胞上皮-间质转换的研究

目的探讨小鼠肝纤维化（hepatic fibrosis,HF）时,肝细胞发生的上皮-间质转换（epithelial-mesenchymal transitions, EMT）的变化。方法建立小鼠CCl4诱导HF模型,随机分为模型组与正常对照组,每周2次,分别于第2、4、6、8、10、12周分批处死大鼠。用密度梯度离心和贴壁培养相结合的方法分离培养小鼠肝细胞,免疫荧光方法对细胞表型进行鉴定,采用H．E及Massion染色等观察E-钙粘附素（E-cadherin,E-cad）、成纤维细胞特异性蛋白-1（ fibroblast specific protein-1, FSP-1 ）、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscleactin,α-SMA）的表达。用免疫荧光显微镜及激光共聚焦定位分析观察EMT蛋白[FSP-1、白蛋白（albumin）、α-SMA、波形蛋白（vimentin,VM）、胶原I（collagen I）、纤维连接蛋白（fibronectin,FN）、N-钙粘附素（N-cadherin,N-cad）、E-cad]表达情况。结果小鼠HF时,肝细胞存在EMT现象。H-E、Massion染色及免疫荧光均显示,随着HF的程度加重,小鼠肝上皮细胞标志（E-cad、Albumin）逐渐减低,肝间质细胞标志（N-cad、FSP-1、VM、Collagen I、FN及α-SMA）逐渐升高（P〈0．05）。结论实验性小鼠HF的进程中,肝细胞发生EMT现象。     

黄芪对小鼠哮喘模型肺组织α SMA及FN的抑制作用

目的探讨黄芪对哮喘平滑肌肌动蛋白 α及纤维连接蛋白的影响。方法随机将BALB/C小鼠60只分为对照组（A组）、哮喘组（B组）、黄芪治疗组（C组）各20只。以腹腔注射0.02%鸡卵清蛋白（OVA）和1%OVA雾化吸入建立慢性哮喘模型。治疗组在每次激发前给予黄芪干预。将右肺分离固定,用石蜡包埋切片,并用免疫组化染色技术染色,用LEICA QWIN V3分析系统,计算表达阳性结果,把左肺置于液氮中保存,采用逆转录聚合酶链反应（RT PCR）测定肺组织中平滑肌肌动蛋白 α(α SMA)及纤维连接蛋白(FN)中信使核糖核酸（mRNA）含量,用AlphaImager 2?200半定量分析系统分析。结果哮喘组α SMA及FN阳性表达结果显著高于对照组（P＜0.01）,α SMA mRNA及FN mRNA的表达上调(P＜0.01);黄芪治疗组的α SMA及FN的阳性表达、α SMA mRNA及FN mRNA的表达均显著低于哮喘组(P＜0.01)。结论FN及α SMA为气道重构的重要标志物,黄芪可抑制慢性哮喘模型小鼠肺组织中α SMA及FN表达,推测抑制α SMA及FN的表达可能是黄芪抑制哮喘气道重构的重要机制之一。     

缬沙坦对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响

目的探讨血管紧张素ⅡⅠ型受体拮抗剂(AT1RA)缬沙坦对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化(RIF)的影响及其可能机制。方法35只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和缬沙坦组(n=10),建立大鼠UUO模型,于术后4周检测血清肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、血浆血管紧张素Ⅱ(AngⅡ),尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)、尿β2-微球蛋白(β2-MG);取梗阻侧肾组织,以H-E、Masson染色观察肾小管间质病变,免疫组织化学染色观察α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)、纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)、转化生长因子β1(TGF-β1)及肝细胞生长因子(HGF)在肾间质的阳性染色,并进行半定量分析。结果与假手术组相比,模型组大鼠SCr、BUN、血浆AngⅡ,尿NAG、β2-MG水平以及α-SMA、FN、PAI-1、TGF-β1表达均显著升高(P<0.01)。与模型组相比,缬沙坦组大鼠SCr、BUN,尿NAG及β2-MG水平差异无统计学意义(P>0.05),但血浆AngⅡ及肾间质α-SMA、FN、PAI-1、TGF-β1表达均显著降低,HGF表达则显著增高(P<0.01)...     

TGF-β1/ILK/FSP1信号通路在环孢素诱导肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的通过体外特异阻断试验,探讨转化生长因子-β1/整合素连接激酶/成纤维细胞特异蛋白1（TGF-β1/ILK/FSP1）信号通 路在环孢素A致肾小管上皮细胞转分化中的作用。方法构建并鉴定ILK-RNAi慢病毒表达载体ILKshRNA。将NRK52E细 胞培养分为5组,分别为空白对照组;环孢素诱导组：细胞培养液加环孢素A1 mg/L;TGF-β1干预组：阻断剂（SB431542）10 μmol/L 加环孢素A1 mg/L;ILK干预组：阳性转染ILKshRNA后加入环孢素A1 mg/L;阴性对照组：阴性转染ILKshRNA后加入环孢素 A1 mg/L。实时荧光定量PCR检测TGF-β1、ILK和FSP-1 mRNA的表达,Western blot检测TGF-β1、ILK、FSP-1的蛋白表达。免 疫组化检测细胞爬片α-SMA阳性表达细胞数。结果与空白对照组比较,环孢素诱导组细胞TGF-β1、ILK、FSP-1基因及蛋白表 达量均显著增加（P<0.05）;TGF-β1 干预组经SB431542 处理后,TGF-β1、ILK 和FSP1 水平较环孢素诱导组降低（P<0.05）;经 ILKshRNA沉默后,ILK和FSP1水平较环孢素诱导组降低（P<0.05）。α-SMA阳性细胞数经SB431542和ILKshRNA处理后较 环孢素诱导组降低（P<0.05）。结论TGF-β1/ILK/FSP1信号通路激活是环孢素A诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化的重要机制 之一,ILK参与环孢素A诱导大鼠肾小管上皮细胞间充质转分化过程。     

红景天甙对低氧诱导肾小管上皮细胞转分化的作用研究

目的 观察红景天甙(salidroside,Sal)对氯化钴(cobaltous chloride,CoCl_2·6H_2O,Co)诱导的低氧状态下正常大鼠近端肾小管上皮细胞(normal rat kidney tubular epithelia cell,NRK52E)转分化的影响并分析其可能的机制.方法 体外培养NRK52E细胞,分为正常对照组,氯化钴低氧组,10、50、100 μmol/L不同浓度红景天甙组.观察低氧标志蛋白低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible foctor-1α,HIF-1α)的表达.倒置相差显微镜观察细胞形态变化;荧光免疫及细胞免疫法检测NRK52E细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达情况;RT-PCR检测NRK52E细胞α-SMA、转化生长因子-β_1(transforming growth factor-β_1,TGF-β_1)mRNA的表达;Western blot蛋白印迹检测HIF-1α和α-SMA蛋白的表达;酶联免疫吸附法检测细胞上清液胶原Ⅰ(collagen Ⅰ,Col-Ⅰ)和纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)的含量.结果 100 μmol/L Co诱导NRK52E细胞表达HIF-1α.Co组细胞明显肥大、拉长,呈肌成纤维细胞外观.不同浓度Sal组细胞形态介于正常与Co组之间.CO组α-SMA基因、蛋白和TGF-β_1 mRNA表达量较对照组升高(P＜0.05),不同浓度Sal组α-SMA基因、蛋白和TGF-β1 mRNA表达量较Co组减少(P＜0.05).Co组细胞上清液Col-Ⅰ和FN的含量较对照组增加(P＜0.05),不同浓度Sal组Col-Ⅰ和FN的含量明显下降(P＜0.05),以高剂量组最为明显.结论 Sal可在一定程度上改善Co诱导的低氧状态和细胞转分化,减少细胞外基质的增加.其机制可能是通过抑制TGF-β_1和HIF-1α的表达实现的.     

三七改善慢性肾脏病大鼠肾脏纤维化的研究

目的 探讨三七及引经药介导的三七通过调控转化生长因子-β(TGF-β)的表达改善慢性肾脏病(CKD)大鼠肾脏纤维化的作用.方法 将雄性SD大鼠100只随机分为5组:正常组(NOR,n=20)、模型组(CKD,n=20)、三七组(RN,n=20)、三七肉桂组(RNC,n=20)、三七桔梗组(RNP,n=20).除NOR组外均采用腺嘌呤灌胃方法建立CKD大鼠模型,建模后NOR组和CKD组予以同等体积生理盐水灌胃,RN、RNC、RNP组予以相应药物灌胃,连续4周.4周后处死各组大鼠取血清检测肾功能[肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)],取肾脏组织做HE、Masson染色观察各组大鼠肾脏组织病理损伤程度,应用免疫组化法检测肾脏组织纤维连接蛋白(FN)、层黏连蛋白(LN)表达,用Westetn blot法检测肾脏组织转化生长因子-β(TGF-β)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达.结果 与NOR组相比,模型组肾功能能减退,Scr、BUN显著升高(P＜o.01),肾间质出现严重纤维化表现,胶原的沉积增多(P＜0.05),肾脏组织TGF-β、α-SMA、FN、LN表达显著升高.与模型组相比,各治疗组肾功改善,Scr、BUN明显降低(P＜0.01),肾间质纤维化程度降低,胶原的沉积减少(P＜0.05),肾组织α-SMA、TGF-β、FN、LN表达有所回降.其中RNC组作用强于RN组和RNP组.结论 三七及引经药介导的三七均能不同程度延缓腺嘌呤所致CKD大鼠肾间质纤维化的进程,其可能机制是降低TGF-β蛋白表达.