HTLV-1 Tax 蛋白对T细胞中HMGB1调控的影响

目的探讨人T淋巴细胞白血病1型病毒（human T-cell leukemia virus 1,HTLV-1）Tax蛋白对人高迁移率族蛋白1（ high mobility group box 1,HMGB1）基因转录调控的影响。方法提取TaxN和TaxP细胞总RNA和蛋白质,通过real-time PCR和Western blot分析HMGB1 mRNA和蛋白质的表达情况;利用脂质体介导方法,将6个含有不同长度HMGB1调控序列的pGL3-HMGB1-luc瞬时转染至TaxN 和 TaxP 细胞,观察 HMGB1基因在不同 T 细胞中的转录活性;pCMV-Tax 与 pGL3-HMGB1-luc瞬时共转染至Jurkat细胞,观察Tax蛋白对HMGB1基因的转录调控影响;染色体免疫共沉淀（ ChIP）找寻Tax蛋白影响HMGB1基因转录调控的区段。结果 TaxP细胞中HMGB1 mRNA和蛋白质表达水平高于TaxN细胞。 TaxN和TaxP细胞中HMGB1调控趋势基本相似,均表现出3号质粒（pHLuc3,含有-504～＋83 HMGB1区段）的相对荧光素酶活性（HMGB1/neo）最高,但是6号质粒（含有-1163～＋83 HMGB1区段）却表现出 TaxP 细胞 HMGB1的转录活性明显高于 TaxN 细胞。pCMV-Tax与pGL3-HMGB1-Luc报告基因共转染到Jurkat细胞也显示,6号质粒（pHLuc6）中Tax促进HMGB1基因的转录。 ChIP分析证实了Tax蛋白可能富集在HMGB1的-1163～-1043区段。结论-504～-383可能是HMGB1基因转录激活的关键启动子区,Tax蛋白可能富集在HMGB1的-1163～-1043区段促进HMGB1基因转录。     

血液保存液对ALT速率法检测结果影响的探讨

目的观察血样被血液CPD保存液稀释后对ALT速率法检测结果的影响,以评价采用血袋导管样本复检的可靠性。方法随机抽取3份ALT异常血样,用CPD血液保存液对血样进行梯度稀释,每个浓度检测20次;随机抽取献血者血清样本与相应血袋导管样本各50份,每份样本检测20次,对结果进行统计学分析。结果3个不同ALT浓度的血样检测结果变化曲线相似。混入CPD保存液>1.5%(1∶64)时检测结果变化有统计学意义(P<0.01),<1∶128时,检测结果无统计学意义(P>0.05)。献血者血清样本与相应血袋导管样本对比试验均有统计学意义。结论血液保存液混入血样,对ALT速率法检测结果存在显著影响,血袋导管样本结果不能完全真实地反映献血者的ALT水平。     

沉默LncRNA OIP5-AS1通过上调miR-34c-5p表达增加A549R细胞放射敏感性

目的 探讨LncRNA OIP5-AS1对非小细胞肺癌放射抗拒细胞A549R的放射敏感性影响及作用机制。方法 X射线6Gy照射5次A549细胞建立放射抗拒细胞A549R。qRT-PCR检测A549、A549R细胞OIP5-AS1和miR-34c-5p表达水平。转染OIP5-AS1抑制剂或miR-34c-5p模拟物至A549R细胞,OIP5-AS1过表达质粒至A549细胞。流式细胞仪检测细胞凋亡,克隆形成实验检测细胞放射敏感性,蛋白印记检测p-Chk2和p-ATM蛋白表达水平。双荧光素酶实验验证OIP5-AS1与miR-34c-5p之间关系。结果 与A549细胞比,A549R细胞中OIP5-AS1表达上调(1.97±0.11︰1.01±0.05,P<0.05),miR-34c-5p表达下调(0.43±0.02︰1.02±0.06,P<0.05)。沉默OIP5-AS1+6Gy组A549R细胞中p-Chk2和p-ATM蛋白水平低于沉默对照+6Gy组(0.43±0.03︰1.39±0.15和0.51±0.05︰1.21±0.11,P<0.05),但凋亡率增加[(13.29±1.25)%︰(28.47±2.31)%,P<0.05]。过表达OIP5-AS1+6Gy组A549细胞中p-Chk2和p-ATM蛋白水平高于过表达对照+6Gy组(1.23±0.13︰0.75±0.06和1.08±0.11︰0.59±0.04,P<0.05)。抑制miR-34c-5p表达逆转了沉默OIP5-AS1对A549R细胞存活分数影响,增敏比为1.42。OIP5-AS1负调控miR-34c-5p表达。结论 沉默OIP5-AS1通过上调miR-34c-5p表达增强A549R细胞放射敏感性,为放疗提供潜在的靶点。     

黑色素瘤抗原基因MAGE-A3 5′端CpG岛异常甲基化检测

目的研究黑色素瘤抗原基因MAGE-A3 5′端CpG岛异常甲基化状态,探讨其作为肝细胞肝癌(HCC)肿瘤标志物的可行性。方法利用重亚硫酸盐测序聚合酶链反应(BSP)分析HCC细胞株HepG2和健康对照者来源白细胞基因组中MAGE-A3基因5′端CpG岛异常甲基化状态,寻找HCC细胞MAGE-A3 5′端CpG岛去甲基化位点。结果 HepG2细胞和健康对照者来源白细胞基因组MAGE-A3 5′端CpG岛存在不同的甲基化状态,前者存在特异性去甲基化位点。结论 MAGE-A3 5′端CpG岛去甲基化位点的检测可用于HCC的早期诊断。     

线粒体基因突变与2型糖尿病研究进展

线粒体是细胞能量储存和供给的场所,可以将能量转化为驱动细胞反应的各种形式。线粒体基因突变通过影响细胞内能量转化而导致2型糖尿病发生。近年来线粒体基因(mtDNA)突变被认为是糖尿病的一种新的病因。1997年美国糖尿病学会(ADA)把线粒体糖尿病列为特殊类型糖尿病,属于β细胞遗传缺陷疾病。线粒体糖尿病也是一大类异质性疾病,为加深对此病的认识,本文主要就所报道的线粒体糖尿病的突变位点、发病机制、主要的临床特点及其诊断和治疗方面的进展做一综述。     

调强三维放疗联合TP化疗方案对食管癌患者生活质量及不良反应发生率的影响

目的探讨调强三维放疗联合TP化疗方案对食管癌(EC)患者生活质量及不良反应发生率的影响。方法选取2012年3月至2014年2月该院EC患者92例,按照不同治疗方法分为观察组和对照组,每组46例。对照组予以三维适形放疗联合TP化疗方案治疗,观察组予以调强放疗联合TP化疗方案治疗。采用生活质量核心问卷(EORTC QLQ-C30)量表评估治疗前后两组生活质量,统计两组不良反应发生率,对比两组治疗后肺V20、V30。结果治疗后观察组角色功能、躯体功能、认知功能、社会功能、情绪功能评分均高于对照组,差异均有统计学意义(均P0.05);治疗后观察组肺V20、V30为(20.94±5.08)%、(14.36±3.74)%,均低于对照组,差异均有统计学意义(均P0.05)。结论调强放疗联合TP化疗方案可改善患者生活质量,减轻肺损伤,安全性较好。     

参与实验教学准备 促进实践能力培养

目的 探讨学生参与实验准备工作对于学生实践能力的影响.方法 将河南省某高校2006级部分五年制医学检验专业学生分为实验组与对照组,实验组课前跟随教师参与实验准备工作,而对照组不参加,只按常规方式上实验课,课程结束后,在同一时间内采用相同方法进行实验考核.结果 实验组在20个骨髓细胞的辨认、肠杆菌科分离及生化鉴定、肥达氏反应效价判断、质粒的提取与纯化、不规则抗体的筛选与鉴定、白细胞分类计数等6项内容的考核结果与对照组相比较,差异具有统计学意义;而回收试验实验组与对照组比较差异无统计学意义.结论 学生利用课余时间参与实验准备工作,能够增强专业学习兴趣,提高实践动手能力.     

设计性实验在医学检验专业实验教学中的应用

随着检验医学的不断发展,传统的临床检验基础实验教学模式已经不能满足教学的需要。为提高实验课的教学质量,增强学生的综合素质,笔者对实验课进行改革,引入设计性实验,从而激发学生学习的积极性、主动性和创造性,强化实验教学效果。学生座谈会和问卷调查结果显示学生的学习兴趣、综合素质、对教师教学效果的满意度均比之前明显提高。