中国地鼠线粒体基因组的序列分析与分子进化

目的获得中国地鼠线粒体基因组序列,为线粒体疾病模型提供分子数据。 方法参照近缘物种的线粒体基因组序列,设计27对特异引物,采用TD-PCR及测序技术获得了中国地鼠的线粒体全基因组序列,分析了其基因组特点和各基因的定位。还结合GenBank中已发表的其他5种啮齿类动物的线粒体基因组序列,探讨啮齿类动物不同科间的系统进化关系。 结果中国地鼠线粒体基因组全长为16 283 bp,碱基组成为33.53 % A、30.50% T、12.98 %G、22.80% C,包括13个蛋白质编码基因、2个rRNA基因、22个tRNA基因和1个非编码基因控制区。中国地鼠和金黄地鼠亲缘关系最近。结论中国地鼠线粒体基因组各基因长度、位置与典型的啮齿类动物相似,其编码蛋白质区域和rRNA基因与其他啮齿类动物具有很高的同源性,显示线粒体基因组在进化上十分保守。5种动物的分子系统进化树与传统分类地位一致。     

用LA-PCR方法克隆东方田鼠部分Y染色体序列

目的 克隆东方田鼠长江亚种(Microtus fortis calamorum)和宁夏指名亚种(Microtus fortis fortis)Y染色体的部分序列,并挖掘这两个亚种间的单核苷酸多态性位点(SNPs).方法 本研究利用依据Y染色体保守性靶标位点(YCATS)设计的引物,测得Y染色体上的8个内含子短片段序列,进而设计长片段PCR(LA-PCR)引物来获得相距几kb的两个内含子之间的长片段序列.结果 获得东方田鼠长江亚种和宁夏指名亚种Y染色体上的7300 bp序列,比对这两个亚种的序列后发现4个SNPs位点.结论 获得了田鼠Y染色体上的7 300 bp序列和4个SNPs位点.     

四种群东方田鼠线粒体DNA D-loop多态性研究

目的 探讨我国不同地区东方田鼠线粒体DNA D-loop多态性.方法 对四个种群东方田鼠线粒体DNA(mt DNA)D-loop片段进行测序,并对测序结果用Clustal W软件进行比对,通过MEGA Version3.1软件构建基于平均遗传距离的NJ(neighbor-joining,邻接法)分子系统进化树,用Dnasp4.0分析所有序列的多态位点、核苷酸多样性、单倍型数目、单倍型多样性以及进行Tajima's中性显著性检验.结果 四个种群34个东方田鼠个体的mtDNA D-loop区全序列共发现19个单倍型,单倍型比例为55.88%,单倍型多样性和核苷酸多样性分别为0.934±0.024和0.04334±0.00285.以台湾田鼠(Microtus kikuchii)线粒体全序列(GenBank登录号AF348082)为对照,共检测到核苷酸变异位点172个,约占核苷酸总教的18.66%.由分子系统进化树可发现所有34只东方田鼠分为两大类,小体型黑龙江东方田鼠为一类,其他三个种群东方田鼠为另外一类,在这一类别中,又有两个分支,其中所有宁夏种群鼠及3只大体型黑龙江种群鼠为一个分支,所有洞庭湖种群鼠和其他5只大体型黑龙江种群鼠为另一个分支.结论 我国东方田鼠在mt DNA D-loop片段存在种内遗传多态性,种群内和种群间都存在一定的遗传变异,并且黑龙江小体型种群东方田鼠表现出与其他三种群东方田鼠更大的差异水平.     

中国地鼠线粒体DNA 16S rRNA基因序列分析及分子系统发育研究?

目的 实验通过克隆分析中国地鼠16S基因的部分序列，对中国地鼠16S基因的结构和功能进行初步探索和揭示。方法 从GeneBank中已报到的啮齿动物16S基因保守区设计一对引物，进行PCR扩增，测序。用Blastn与Genbank中7种啮齿类动物的16S基因进行序列比较，分析其碱基组成及变异情况，并用邻接法(NJ)、非加权组平均法(UPGMA)构建分子系统树，在分子水平上探讨中国地鼠和其它啮齿类动物的进化关系，对中国地鼠的种属地位进行了进一步验证。结果 获得了中国地鼠线粒体16S基因的部分序列；进化树表明，中国地鼠、金黄地鼠与欧洲仓鼠先聚为一支，小鼠与大鼠先聚为一支，东方田鼠、台湾田鼠与东欧田鼠先聚为一支。结论 中国地鼠和金黄地鼠的亲缘关系最近，与传统的分类地位基本吻合。     

Channel catfish重组激活基因克隆与鉴定

目的尝试用简并引物扩增序列未知的channel catfish基因组DNA中ragl基因的片段并测序,为ragl基因的早期进化模式和遗传学变异情况的研究提供直接的证据.方法基于ragl基因的高度保守设计简并引物,PCR扩增channel catfish基因组DNA中ragl基因的片段,TA克隆并双向测序.将所得序列资料拼接,用多种生物信息学方法分析其ORF、内含子、与其它物种ragI基因及Ragl蛋白的相似性,并做多序列比较和系统进化树分析.结果扩增出3条chan-nel catfish ragl基因的DNA片段.从拼接后的序列中找到一2 235bp的ORF和一293bp的内含子,所得序列与其它物种ragl基因的相似程度高(多大于70%),去除内含子后的channel catfish ragl基因序列与zebrafish、rainbow trout、bull shark的ragl基因cDNA全序列碱基一致的位点占43.9%,自第1 352位碱基至2 925位碱基为53.1%,而自第1位碱基至1 351位碱基为33.2%,有非常显著的差异(P＜0.01).结论用简并引物成功扩增出channel catfish ragl基因的DNA片段.序列在GenBank中的登记号是:AY423858(去除内含子序列),AY423859.ragl基因进化缓慢,高度保守,不同物种ragI基因的变异相对集中在氨基末端的区域.系统进化树分析显示了13种硬骨鱼在进化上关系的亲疏.     

两个不同地区东方田鼠杂交子代RAPD标记分析

目的研究不同地区东方田鼠杂交后产下的子代的遗传特性.方法筛选4条10bp随机引物对宁夏和洞庭湖地区东方田鼠杂交子代的基因组进行随机扩增多态DNA(RAPD)分析,并对不同地区亲代以及子代相互之间的基因组DNA进行相似性分析.结果①所有东方田鼠均有相同的扩增片段出现;②两个不同地区的亲代分别有特异性片般;③亲代的DNA带型均能在子代中找到;④同一胎次东方田鼠之间基因共享度大约在72%～96%之间.结论RAPD分析能在一定程度上反映出东方田鼠种的特性以及亚种的特异性,而且同一胎次之间基因共享度较高.     

我国野生东方田鼠的医学实验动物化

东方田鼠 (Ｍｉｃｒｏｔｕｓｆｏｒｔｉｓ)为啮齿目 ,鼠科 ,田鼠亚科 ,田鼠属动物 ;主要分布在我国以及和我国接壤的俄罗斯、朝鲜、蒙古的某些地区 ,我国的东方田鼠分为 5个亚种 ,即指名亚种 (Ｍ .ｆ.ｆｏｒｔｉｓ)、长江亚种(Ｍ .ｆ .ｃａｌａｍｏｒｕｍ )、辽宁亚种 (Ｍ .ｆ.ｄｏｌｉｃｈｏ ｃｅｐｈａｌｕｓ)、黑龙江亚种 (Ｍ .ｆ.ｐｅｌｌｉｃｅｕｓ)、福建亚种(Ｍ .ｆ.ｆｕｊｉａｎｅｎｓｉｓ) [1] 。东方田鼠是农作物的害鼠 ,我国许多学者对东方田鼠的生态学作了系列研究 ,试图控制这一动物的种群 ,保护农作物[2 ] ;又因为这种动物具…     

中国地鼠线粒体Cyt b基因测序及其分子进化

目的 测定中国地鼠线粒体DNA细胞色素b基因部分序列,分析其分子系统进化关系.方法 提取中国地鼠肝脏的总基因组DNA.设计合成特异引物进行PCR扩增,经检测进行测序.用Blast与GenBank中啮齿类其他常用实验动物的物种细胞色素b基因进行同源序列比较,分析其碱基组成及变异情况,并用邻接法、最大简约法、最小进化法构建了分子系统树,在分子水平上探讨中国地鼠和常用啮齿类实验动物的进化关系.结果 获得了中国地鼠线粒体Cyt b基因的部分序列,共 936 bp.结论 中国地鼠和金黄地鼠的亲缘关系最近,与小鼠、大鼠存在的差异相对大,与豚鼠的亲缘关系最远 ,与传统的分类地位基本吻合.     

洞庭湖日本血吸虫疫区东方田鼠生化与分子遗传学标记的初步研究

目的建立东方田鼠生化与分子遗传学标记检测法.方法参考近交系小鼠、大鼠生化遗传标记检测方法,对东方田鼠某些同功酶进行活性测定.根据东方田鼠特异DNA序列,合成引物,扩增东方田鼠基因组DNA,将PCR产物回收、序列分析并进行生物信息学分析.结果东方田鼠Trf、Es-3和Ce-2三个生化位点呈现遗传多态性,而Id1、Mod-1、Car-2、Gpd-1、Gpi-1、Hbb、Es-1七个生化位点无遗传多态性.用合成的特异引物扩增东方田鼠基因组DNA,得到了丰富的多态性资料.对其中的20只东方田鼠的扩增产物进行测序并进行多序列比较,发现10个等位基因以及16个单核苷酸多态性(SNP)位点.结论初步建立了东方田鼠生化及分子遗传学标记.分子遗传学标记与生化遗传标记相比,具有杂合率高、重复性好、易于操作等优点.这些结果为深入研究东方田鼠的遗传背景、生物进化规律积累了基础资料.     

药用动物乌梢蛇线粒体基因组全序列分析

[目的]获取药用动物乌梢蛇线粒体基因组全序列。[方法]采用Ion Torrent PGM技术,对乌梢蛇全基因组DNA进行提取测序,采用MIRA方法从头组装方法和近缘种mapping方法进行组装拼接,应用MITOS等方法进行注释。[结果]获得17 162 bp乌梢蛇线粒体基因组全序列。其共编码22个tRNA,13个蛋白编码基因,2个rRNA(16S rRNA、12S rRNA)并有1个轻链(L链)复制起始区。[结论]获取乌梢蛇线粒体基因组全序列,并可用于该药用动物的资源调查与保护研究。     

东方田鼠乳酸脱氢酶同工酶的研究

为了解普通级KM、NIH、BABL/c小鼠群的健康状况，对2288只淘汰的繁殖群小鼠进行剖检。结果发现KM繁殖群1（KM-1）、KM繁殖群2（KM-2）、NIH、BALB/c小鼠的肺部病变分别为：19.20%（192/1000）、11.85%(34/287)、7.80%(39/500)、11.98%(60/501)；其中肺炎分别占：13.3%()133/1000)、5.57%（16/287）、4.60%(23/500)、9.38%(47/501)；肺肿瘤分别占：5.90%(59/1000)、6.27(18/287)、3.20%(16/500)、2.59%(13/501)。肝脏病变分别为：20.7%(207/1000)、5.57%(16/287)、4.60%(23/500)、1.80%(9/501)。脾脏病变分别为：18.0%(18/1000)、4.88%(14/287)、2.20%(11/500)、1.20%(6/501)。其它器官系统也出现程度不同的病变。剖检结果提示：普通级小鼠群必须提高级别，从实验动物设施、饲养环境条件、饲养方法等诸多方面达到清洁极标准，否则普通级小鼠将影响科研、生产、鉴定等试验结果的准确性、可靠性及重复性。     

东方田鼠非酒精性脂肪肝模型的建立

[摘要] 目的：建立东方田鼠非酒精性脂肪肝模型，并观察测定其肝指数、病理、血清生化指标的动态变化。方法：选取6周龄湖南洞庭湖种群雄性东方田鼠70只，随机分为2组，模型组饲喂高脂肪料，对照组饲喂高纤维料，分别于第2、4、6、8、12周处死，称量体重及肝重，计算肝指数，采血检测东方田鼠血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、r-谷氨酰转移酶（r-GT）、胆碱酯酶（CHE）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、游离脂肪酸（FFA）、葡萄糖（GLU）、高密度脂蛋白（HDL）和低密度脂蛋白（LDL），并取肝脏HE染色后做病理学观察。结果：与对照组相比，模型组6周时肝脏出现了典型的脂肪肝特征，肝重和肝指数都明显升高（P﹤0.05），血清ALT、AST、r-GT、CHE、TC、FFA、GLU和LDL都明显升高（P﹤0.05），HDL和TG均明显降低（P﹤0.05）。镜检观察到模型组田鼠肝细胞逐渐呈现弥漫性脂肪变性，6周时大范围出现脂滴，8周时肝内出现弥漫性大脂肪滴，12周后出现炎细胞的浸润。结论：采用高脂饲料成功诱发东方田鼠非酒精性脂肪肝，可为研究非酒精性脂肪肝的发病机制和药物干预提供新的模型。     

《中国实验动物学报》稿约

为了解和控制东方田鼠的微生物与寄生虫,参照二级（清洁级）大、小鼠标准,对普通级（半封闭系统）饲养环境条件下的东方田鼠进行了规定项目的检测。结果为：体外寄生虫螨、石膏样毛癣菌、钩端螺旋体为阳性,其余均为阴性。     

用数据库搜索法寻找东方田鼠微卫星引物

目的借助微卫星具有的多态性和引物通用性的特点，寻找东方田鼠的微卫星引物。方法用数据库搜索法及生物信息学分析原理，并用PCR法证实这些微卫星引物的存在。结果初步筛选出D2mgh10、D1mgh12、D2mit16具有东方田鼠微卫星序列特点。结论表明异种微卫星引物可在东方田鼠转移使用。     

Immunological characteristics of natural resistance in Microtus fortis to infection with Schistosoma japonicum

ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｎａｔｕｒａｌｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏＳｃｈｉｓｔｏｓｏｍａｊａｐｏｎｉｃｕｍｉｎｆｅｃｔｉｏｎｉｎＭｉｃｒｏｔｕｓｆｏｒｔｉｓ（ＭＦ）ｌｉｖｉｎｇ...     

东方田鼠的同工酶与异构蛋白生化基因位点

目的观察四类东方田鼠在10个同工酶与异构蛋白生化基因位点上的基因分布特征,以研究它们间的遗传关系。方法应用乙酸纤维素膜电泳对四类东方田鼠的同工酶与异构蛋白生化基因位点进行测定分析。结果与结论黑龙江小体型东方田鼠与其他三类东方田鼠的电泳结果差异较大,在6个位点上都存在其所特有的等位基因,并且在其中的3个位点上它的基因型与其他三类鼠完全不同;湖南、宁夏和黑龙江大体型东方田鼠三者间的遗传距离在0.0633~0.2107之间,而黑龙江小体型东方田鼠与其他三类鼠的遗传距离在0.7068~0.8953之间;UPGMA聚类分析显示,湖南、宁夏和黑龙江大体型东方田鼠聚为一类,亲缘关系较近,而黑龙江小体型东方田鼠单独为一类,与其他三种鼠的亲缘关系均相对较远。     

东方田鼠抗日本血吸虫病相关免疫学研究进展

东方田鼠是一种可以感染血吸虫但是感染后不致病的哺乳动物,体内可能存在对日本血吸虫先天的、可遗传的抗性机制.近年来随着东方田鼠实验动物化,人们对东方田鼠的这种抗性机制进行了深入研究.本文对近几年东方田鼠抗日本血吸虫病相关免疫学研究进展做一综述,从非特异性免疫和特异性免疫角度对东方田鼠这一特殊抗性进行总结及展望.     

东方田鼠的驯育与繁殖研究初报

对１０８只野生东方田鼠进行了驯育，并观察其习性和繁殖情况。经过２年，东方田鼠已适应实验鼠类常规饲养环境，生产发育良好，繁殖产仔日趋正常；７５－８０日龄性成熟，初配日龄为８５－９０日龄，孕期为２１ｄ，平均每胎产仔３．７只，仔鼠成活率６８．７５％．     

东方田鼠感染日本血吸虫后病理观察及相关基因研究

目的 研究东方田鼠感染日本血吸虫后肝、肺组织病理改变及相关基因表达差异,为进一步研究东方田鼠抗血吸虫机制提供依据。方法 东方田鼠感染日本血吸虫尾蚴（2000条/只）,取对照组东方田鼠和感染血吸虫后第6、10、15、20、30天肺、肝组织样品,HE染色后进行病理观察,并提取肺和肝总RNA,对Lyz、RT1-Db1、Cd74、C1qa、Thra、Igf1基因进行实时荧光定量PCR检测,比较其在肝脏和肺脏的动态表达水平。结果 东方田鼠感染血吸虫后6-10天,肺部有大量出血点,肝细胞空泡变性,肝窦高度扩张,肺和肝组织内血管周围及管腔均有大量嗜酸性粒细胞及少量中性粒细胞、巨噬细胞等炎性细胞浸润,至第20天逐渐恢复。从感染后第6天开始,Lyz、RT1-Db1、Cd74基因在肺和肝内表达均明显上调,在第20天后逐渐恢复,C1qa基因在肺内表达上调,Thra基因在肺内表达下调,Igf1基因肝内表达下调。结论 在东方田鼠抗血吸虫感染的过程中,嗜酸性粒细胞发挥了非常重要的作用,相关基因在东方田鼠抗血吸虫感染的过程中可能发挥一定的作用。     

东方田鼠皮肤成纤维细胞的分离培养及生物学特性

目的 探索和建立东方田鼠皮肤成纤维细胞体外分离、培养的技术方法并观察其生物学特性。方法采用含10%小牛血清的Dulbecco 改良Eagle培养液(DMEM)和1640两种培养体系,运用组织块贴壁法和胰酶消化法,分别对出生后1 、3 d和5 d的东方田鼠乳鼠皮肤成纤维细胞进行原代分离、培养。苏木素-伊红染色及倒置相差显微镜下观察成纤维细胞形态和生长特性。结果0.25%胰酶消化分离出生后1 d和3 d东方田鼠乳鼠皮肤较出生后5 d组织可获得较多数量细胞,成纤维细胞在体外快速贴壁生长,一般6 ～7 d长满培养瓶,细胞纯度高,HE染色细胞呈长梭形,胞核明显；DMEM和1640两种培养液均可用于东方田鼠皮肤成纤维细胞的培养,但细胞传代后生长趋缓,只可传代2～3次。本实验运用组织块贴壁法未能培养出皮肤成纤维细胞。结论确定了有效分离东方田鼠皮肤成纤维细胞的日龄和方法,为进一步深入研究提供了技术方法和操作依据。