东方田鼠指名亚种的线粒体基因组序列分析及系统进化研究

目的 获得东方田鼠指名亚种的线粒体基因组序列,为东方田鼠的遗传结构和系统进化研究提供分子数据.方法 照近缘的台湾田鼠的线粒体基因组序列(Microtus kikuchii,NC_003041.1)设计9对引物,利用传统和长距离PCR结合引物步移的策略,首次完成了东方田鼠指名亚种的线粒体基因组测序(Genbank:JF261174),并对该物种的线粒体基因组序列进行了分析,并利用线粒体基因组上的细胞色素b(Cytb)基因序列构建系统进化树,探讨中国东方田鼠的系统进化关系.结果 东方田鼠指名亚种的线粒体基因组全长16 312 bp,含有13个蛋白质编码基因、2个rRNA基因、22个tRNA基因和一个非编码控制区.同时,在其控制区,分别发现了终止序列区(EATS1、EATS2)、中央保守区1(CSB1)的相关保守序列和一个保守的Poly(C)10区段.在比较了东方田鼠指名亚种和长江亚种以及近缘物种的线粒体轻链复制起点(OL)序列的二级结果,发现茎环结构在茎和邻近序列处表现出高度保守性,而在环上的序列却存在着一定差异.通过Cyt b基因构建的系统进化树表明中国的东方田鼠与分布于俄罗斯的Microtus middendoffi田鼠,表现出最亲缘的系统进化关系.结论 中国东方田鼠指名亚种线粒体基因组各编码基因的长度、位置符合典型的脊椎动物特征,本研究的结果将为中国东方田鼠的系统进化、亚种分类研究提供重要的数据参考.     

东方田鼠的研究进展

东方田鼠(Microtus fortis Bachner 1889)，亦称米氏田鼠(Microtus rnichnoi Kastschenko 1910)、长江田鼠、沼泽田鼠、远东田鼠、大田鼠、苇田鼠，谷称湖鼠，在分类学上属啮齿目(Rodentia)、仓鼠科(Cricetidae)、田鼠亚科(Microtinae)、田鼠属(Microtus)。东方田鼠具有携带病原并传播多种自然疫源性疾病(如钩端螺旋体病等)、抗血吸虫感染、近交遗传病高发的特性。     

四种群东方田鼠线粒体DNA D-loop多态性研究

目的 探讨我国不同地区东方田鼠线粒体DNA D-loop多态性.方法 对四个种群东方田鼠线粒体DNA(mt DNA)D-loop片段进行测序,并对测序结果用Clustal W软件进行比对,通过MEGA Version3.1软件构建基于平均遗传距离的NJ(neighbor-joining,邻接法)分子系统进化树,用Dnasp4.0分析所有序列的多态位点、核苷酸多样性、单倍型数目、单倍型多样性以及进行Tajima's中性显著性检验.结果 四个种群34个东方田鼠个体的mtDNA D-loop区全序列共发现19个单倍型,单倍型比例为55.88%,单倍型多样性和核苷酸多样性分别为0.934±0.024和0.04334±0.00285.以台湾田鼠(Microtus kikuchii)线粒体全序列(GenBank登录号AF348082)为对照,共检测到核苷酸变异位点172个,约占核苷酸总教的18.66%.由分子系统进化树可发现所有34只东方田鼠分为两大类,小体型黑龙江东方田鼠为一类,其他三个种群东方田鼠为另外一类,在这一类别中,又有两个分支,其中所有宁夏种群鼠及3只大体型黑龙江种群鼠为一个分支,所有洞庭湖种群鼠和其他5只大体型黑龙江种群鼠为另一个分支.结论 我国东方田鼠在mt DNA D-loop片段存在种内遗传多态性,种群内和种群间都存在一定的遗传变异,并且黑龙江小体型种群东方田鼠表现出与其他三种群东方田鼠更大的差异水平.     

我国野生东方田鼠的医学实验动物化

东方田鼠 (Ｍｉｃｒｏｔｕｓｆｏｒｔｉｓ)为啮齿目 ,鼠科 ,田鼠亚科 ,田鼠属动物 ;主要分布在我国以及和我国接壤的俄罗斯、朝鲜、蒙古的某些地区 ,我国的东方田鼠分为 5个亚种 ,即指名亚种 (Ｍ .ｆ.ｆｏｒｔｉｓ)、长江亚种(Ｍ .ｆ .ｃａｌａｍｏｒｕｍ )、辽宁亚种 (Ｍ .ｆ.ｄｏｌｉｃｈｏ ｃｅｐｈａｌｕｓ)、黑龙江亚种 (Ｍ .ｆ.ｐｅｌｌｉｃｅｕｓ)、福建亚种(Ｍ .ｆ.ｆｕｊｉａｎｅｎｓｉｓ) [1] 。东方田鼠是农作物的害鼠 ,我国许多学者对东方田鼠的生态学作了系列研究 ,试图控制这一动物的种群 ,保护农作物[2 ] ;又因为这种动物具…     

两个不同地区东方田鼠杂交子代RAPD标记分析

目的研究不同地区东方田鼠杂交后产下的子代的遗传特性.方法筛选4条10bp随机引物对宁夏和洞庭湖地区东方田鼠杂交子代的基因组进行随机扩增多态DNA(RAPD)分析,并对不同地区亲代以及子代相互之间的基因组DNA进行相似性分析.结果①所有东方田鼠均有相同的扩增片段出现;②两个不同地区的亲代分别有特异性片般;③亲代的DNA带型均能在子代中找到;④同一胎次东方田鼠之间基因共享度大约在72%～96%之间.结论RAPD分析能在一定程度上反映出东方田鼠种的特性以及亚种的特异性,而且同一胎次之间基因共享度较高.     

东方田鼠人工繁育观察

目的观察东方田鼠人工繁育状况,为抗日本血吸虫机制研究提供基础资料。方法分别将东方田鼠长江中下游亚种(M.f.calamorum)洞庭湖种群、指名亚种(M.f.fortis)青铜峡种群、东北亚种(M.f.pelliceus)金山屯种群的野生鼠引入上海实验室人工繁育,饲料以专利配制之人工颗粒料喂养。观察统计其繁育特性。结果三亚种的东方田鼠在上海实验室内饲育均能繁殖,可突破野外的季节性差异全年繁殖。妊娠期约20 d,平均窝产仔数洞庭湖种群为4．9±0．98只,青铜峡种群为5．3±1．06只,金山屯种群为3．97±0．52只。幼仔离乳率洞庭湖种群为89．7%±10．7%,青铜峡种群为97．2%±5．02%,金山屯种群为80．7%±9．09%。结论三亚种东方田鼠人工繁育状况良好,为东方田鼠的实验动物化打下了基础。     

洞庭湖日本血吸虫疫区东方田鼠生化与分子遗传学标记的初步研究

目的建立东方田鼠生化与分子遗传学标记检测法.方法参考近交系小鼠、大鼠生化遗传标记检测方法,对东方田鼠某些同功酶进行活性测定.根据东方田鼠特异DNA序列,合成引物,扩增东方田鼠基因组DNA,将PCR产物回收、序列分析并进行生物信息学分析.结果东方田鼠Trf、Es-3和Ce-2三个生化位点呈现遗传多态性,而Id1、Mod-1、Car-2、Gpd-1、Gpi-1、Hbb、Es-1七个生化位点无遗传多态性.用合成的特异引物扩增东方田鼠基因组DNA,得到了丰富的多态性资料.对其中的20只东方田鼠的扩增产物进行测序并进行多序列比较,发现10个等位基因以及16个单核苷酸多态性(SNP)位点.结论初步建立了东方田鼠生化及分子遗传学标记.分子遗传学标记与生化遗传标记相比,具有杂合率高、重复性好、易于操作等优点.这些结果为深入研究东方田鼠的遗传背景、生物进化规律积累了基础资料.     

Klinefelter综合征X染色体着丝粒区α-卫星DNA变异

目的从DNA分子水平建立研究X染色体着丝粒区域的α-卫星DNA变异的方法,发现Klinefelt综合征患者的X染色体着丝粒区域的α-卫星DNA串联重复序列结构变化与染色体不分离的关系.方法采用(representative sampling of multiple repetitive units,rep)PCR方法,通过设计适当的引物,对α-卫星DNA多个单拷贝串联重复序列同时进行扩增,检测重复序列中结构变化的种类、频率及重组位点.结果首次发现由缺失产生的562 bp和220 bp变异片段和重组位点,异常组的570、562、220 bp构成显著高于正常组(P＜0.05).Logistic回归分析显示:570、562bp和220 bp 3个短片段同时出现和任两个短片段同时出现均是疾病相关的危险因素.结论Klinefelt综合征的X染色体着丝粒区α-卫星DNA过多的重组可能是造成X染色体不分离的重要原因之一.     

贵州省侗族人群mtDNA 9 bp序列缺失频率及DYS287位点多态性研究

目的:分析贵州省侗族人群线粒体DNA 9 bp序列缺失频率及Y染色体DYS287位点的多态性.方法:用PCR-聚丙烯酰胺凝胶法(PAGE)分析mtDNA 9 bp缺失多态性,DNA序列分析法验证结果;用PCR-琼脂糖凝胶电泳检测法分析DYS287位点多态性.结果:在96例侗族男性个体中,mtDNA 9 bp缺失多态频率为13.54％ (13/96),DYS287全部显示为YAP-.结论:获得贵州省侗族人群mtDNA 9 bp序列缺失频率及Y染色体DYS287位点多态数据,为该民族群体遗传分析及起源提供了相关遗传背景资料.     

不同地区东方田鼠染色体数及带型比较

目的 比较不同地区东方田鼠的染色体及核型。方法 对不同地区东方田鼠的染色体片用姬姆萨染色法进行分析。结果 湖南洞庭湖田鼠的核型为2n=52=14(m.sm) 36(st.6) xy(n.t)；宁夏地区田鼠核型为2n=52=16(m.sm) 34(st.t) xy(m.t)。东北田鼠染色体核型为2n=42=18(m.sm) 22(st.t) xy(t.t)。结论 东北田鼠染色体数目不同于湖南和宁夏两地，三地区田鼠的G带带型也不尽相同。