东方田鼠自发性腹水细胞的分离培养与生物特性观察

目的 目的 对人工饲养条件下的东方田鼠自发性腹水细胞进行体外分离、 培养及生物学特性进行初步观察, 为研究 东方田鼠腹腔微环境的抗虫机制提供实验依据。 方法 方法 选取野外捕捉并人工饲养90 d后自发腹水的东方田鼠, 分离培 养腹水细胞, 显微镜下观察细胞形态特征, 并将其与正常及感染日本血吸虫的东方田鼠腹腔细胞进行对比; 同时对组织 病变进行观察。 结果 结果 与正常及感染日本血吸虫后的东方田鼠腹腔细胞相比, 自发性腹水东方田鼠无明显脏器组织病 变, 腹腔液中细胞数量和种类较多, 细胞形态不规则, 黏性大, 贴壁后有大量空泡样细胞集落出现。随培养时间的延长, 空泡样细胞集落依次呈现增殖、 变形、 崩解、 塌陷及纤维样变化, 纤维样腹水细胞传代3～4 d后死亡。 结论 结论 东方田鼠 自发性腹水细胞与其感染日本血吸虫后的腹腔细胞生物特性相似。     

东方田鼠皮肤成纤维细胞的分离培养及生物学特性

目的 探索和建立东方田鼠皮肤成纤维细胞体外分离、培养的技术方法并观察其生物学特性。方法采用含10%小牛血清的Dulbecco 改良Eagle培养液(DMEM)和1640两种培养体系,运用组织块贴壁法和胰酶消化法,分别对出生后1 、3 d和5 d的东方田鼠乳鼠皮肤成纤维细胞进行原代分离、培养。苏木素-伊红染色及倒置相差显微镜下观察成纤维细胞形态和生长特性。结果0.25%胰酶消化分离出生后1 d和3 d东方田鼠乳鼠皮肤较出生后5 d组织可获得较多数量细胞,成纤维细胞在体外快速贴壁生长,一般6 ～7 d长满培养瓶,细胞纯度高,HE染色细胞呈长梭形,胞核明显；DMEM和1640两种培养液均可用于东方田鼠皮肤成纤维细胞的培养,但细胞传代后生长趋缓,只可传代2～3次。本实验运用组织块贴壁法未能培养出皮肤成纤维细胞。结论确定了有效分离东方田鼠皮肤成纤维细胞的日龄和方法,为进一步深入研究提供了技术方法和操作依据。     

东方田鼠肺成纤维细胞的分离培养及其对日本血吸虫的杀伤作用

目的探索和建立东方田鼠肺成纤维细胞体外分离、培养的技术方法,并观察其对日本血吸虫的杀伤作用。方法运用含15%小牛血清的Dulbecco改良Eagle培养液(DMEM)和RPMI 1640两种培养体系,采用组织块贴壁法和胰酶消化法,分别对出生后1、3和5 d的东方田鼠乳鼠肺成纤维细胞(Microtus fortis lung fibroblasts,MfLF)进行原代分离、培养,倒置显微镜下观察MfLF形态和生长特性.第2代和第3代MfLF培养上清与日本血吸虫童虫共培养96 h,观察其对童虫的杀伤效果。结果实验发现,采用胰酶消化法培养,只有少量MfLF细胞缓慢贴壁生长,而组织块贴壁法MfLF贴壁速度较快。不同日龄幼鼠的肺成纤维细胞采用组织块贴壁法培养,细胞活率和细胞纯度以1～3日龄乳鼠为最佳。在DMEM和RPMI 1640两种培养液中MfLF均可传代培养,两者无明显差异。MfLF体外只可传代4～5次。日本血吸虫童虫经第2代和第3代MfLF培养上清处理后,死亡率分别为9.5%和10.5%,与阴性对照(8.8%)比较差异无统计学意义(P<0.05)。结论提示组织块贴壁法适用于MfLF的体外培养,但MfLF培养上清对日本血吸虫童虫无明显杀伤效果。     

室内繁殖东方田鼠感染日本血吸虫的实验研究

目的 比较室内繁殖东方田鼠与昆明鼠感染日本血吸虫后不同阶段脏器病变以及体内日本血吸虫发育与存活状况。方法 采用日本血吸虫尾蚴感染健康东方田鼠和昆明鼠, 在感染后12、 20、 40 d剖杀, 观察并比较东方田鼠以及昆明鼠肝、 肾、 肺等脏器组织病变及体内日本血吸虫发育与存活情况。结果 日本血吸虫感染后12、 20 d昆明小鼠和感染40 d后东方田鼠的内脏器官均未出现明显病变; 感染12 d及20 d后的东方田鼠肝脏、 肾脏及脾脏出现明显白色结节, 且以感染12 d的组织病变更为明显, 部分东方田鼠病变组织仅见于肝脏。病理切片显示, 病变肝脏和肾脏组织中存在完整日本血吸虫虫体, 与正常组织界限分明; 而无病变的肝脏和肾脏组织病理切片未发现虫体。结论 室内繁殖东方田鼠感染日本血吸虫后12 d免疫反应剧烈且存在明显的个体差异。     

细菌鞭毛银染法的改进

目的通过改进发明一种新的细菌鞭毛银染色方法。方法本方法通过载玻片的准备、菌种活化、染液制备,菌液制备孵育、制片、染色等环节步骤完成。结果改进后的牛肉膏蛋白胨培养基新配方,营养更丰富,硬度更适宜,镜检结果,鞭毛多,粗壮、着色更容易且均匀。菌液改为恒温水槽孵育,能让菌体鞭毛更活跃,鞭毛更舒展。涂片菌膜清晰便于少量A液覆盖操作,B液染色升温时容易掌握火源高度。结论这种鞭毛染色方法操作简单,易学易掌握,鞭毛着色率高,还有延长A、B液的有效使用时间。此鞭毛染色值得推广使用。