人结肠癌肝转移裸鼠肝组织中端粒酶逆转录酶的表达

目的 建立人结肠癌HT-29裸鼠肝转移模型,检测肝脏组织中人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的表达.方法 Balb/c裸鼠30只,腹腔内注射戊巴比妥麻醉,经脾脏注入人结肠癌HT-29细胞悬液,并切除脾脏,建立裸鼠肝转移模型.处死动物后观察肿瘤生长情况,并作病理学检查;采用RT-PCR方法检测裸鼠肝脏组织中hTERT mRNA的表达.结果 30只裸鼠均发生人结肠癌肝转移,肝转移率100%,病理学证实肝转移发生,肝脏组织中hTERT mRNA表达阳性.结论 脾种植HT-29细胞建立人结肠癌裸鼠肝转移模型,肝脏组织中hTERT mRNA阳性表达,提示hTERT在结肠癌肝转移早期诊治中的意义.     

人结肠癌细胞裸鼠肝转移模型及其血中CK20mRNA表达的研究

目的 :建立人结肠癌裸鼠肝转移模型 ,检测血中 CK2 0 m RNA表达 ,应用于结肠癌肝转移的防治研究。方法 :BAL B/ C裸鼠 12只 ,腹腔内注射戊巴比妥钠麻醉 ,经脾脏注入指数生长期的人结肠癌低分化腺癌细胞悬液( L S174 t) 0 .1m l,含细胞数 1× 10 6 个 ,切除脾脏 ,喂养 2 0天后 ,建立人结肠癌裸鼠肝转移模型。随后 ,心脏采血检测血中 CK2 0 m RNA表达 ,处死裸鼠观察腹腔内肿瘤生长和肝转移癌灶数目及大小 ,作病理组织学检查。采用巢式逆转录聚合酶链反应 ( RT- PCR)法 ,检测裸鼠血中 CK2 0 m RNA表达。结果 :12只裸鼠均建立人结肠癌裸鼠肝转移模型 ,无1只死亡。初期活跃如常体形无改变 ,10天后裸鼠出现消瘦、精神差 ,摄食量减少。裸鼠尸解肝脏表面均有灰白色转移癌结节形成 ,其它脏器未发现转移癌灶。病理组织学示肝转移癌灶具有人结肠癌低分化腺癌特征。血中 CK2 0 m RNA均阳性表达。结论 :经脾脏注入 L S174 t细胞悬液可建立人结肠癌裸鼠肝转移模型 ,裸鼠血中 CK2 0 m RNA阳性表达 ,证实血中存在着结肠癌细胞 ,是形成肝转移灶的条件。     

复方参七汤对人结肠癌细胞株裸鼠肝转移影响

目的:建立人结肠癌细胞株裸鼠肝转移模型,研究复方参七汤对裸鼠肝转移模型的影响。方法:采用BALB/C裸鼠,Ls174 t人大肠癌细胞株,脾脏切除脾脏种植法建立裸鼠肝转移模型。给予复方参七汤颗粒饲料喂养,观察体态及肿瘤生长情况;采用巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测裸鼠循环血中CK20 mRNA表达;标本作病理组织学检查。结果:①脾脏切除脾脏种植法建立裸鼠结肠癌肝转移模型的成功率为100%,病理组织学证实肝转移癌细胞呈人结肠癌低分化腺癌特征;②实验组裸鼠肿瘤数目及重量明显低于对照组,P<0.05;③实验组裸鼠肝转移血中CK20 mRNA表达为0.398±0.143,明显低于对照组0.518±0.090,P<0.05。结论:复方参七汤可显著降低肝转移裸鼠血中CK20 mRNA表达,抑制裸鼠结肠癌肝转移的发生及发展,可作为大肠癌术后预防复发和肝转移治疗的手段之一。     

裸鼠脾脏移植瘤模型在NGX6抗结肠癌转移作用研究中的应用

目的:建立结肠癌肝转移模型,为抑瘤基因NGX6功能研究提供体内试验平台.方法:将低分化结肠癌细胞系HT-29组(HT-29)、空白质粒转染组[pcDNA3.1( )/HT-29]、NGX6转染组[(pcDNA3.1( )/NGX6/HT-29)]细胞分别接种于裸鼠脾脏下极包膜内,每天称量裸鼠体质量并观察裸鼠摄食、活动及精神情况,45 d后处死裸鼠,分别从大体水平以及镜下观察肝、脾、肺、肾、脑等器官肿瘤转移情况.结果:pcDNA3.1( )/NGX6/HT-29组裸鼠较其他两组裸鼠肝脏转移灶数目明显减少、脾脏上种植瘤形成明显减少.结论:抑瘤基因NGX6抑制结肠癌HT-29细胞的转移,裸鼠脾内种植转移模型可作为新基因体内功能研究的理想模型.     

血管生成抑制剂联合分化诱导剂治疗结肠癌肝脏转移的实验研究

目的:实验通过建立人LOVO细胞结肠癌裸鼠肝脏转移瘤模型,研究血管生成抑制剂(TNP-470)联合分化诱导剂(RA)抗结肠癌转移的效应,二者是否具有协同效果.方法:建立人LOVO细胞结肠癌裸鼠肝脏转移瘤模型,随机分为4组,模型建立后分组治疗,至治疗结束时处死裸鼠,检测肝脏转移率和肝转移结节数及肝脏转移瘤组织中血管内皮生...     

替泊沙林对裸鼠结肠癌移植瘤的抑制作用

目的通过动物体内实验研究环氧合酶-2/5-脂氧合酶双重抑制剂（替泊沙林）对人结肠癌的抑制作用。方法 10只裸鼠皮下接种HT-29人结肠癌细胞建立人结肠癌模型,随机分为治疗组和对照组。治疗组以替泊沙林与5%羧甲基纤维素钠溶液制成的混悬液给药,对照组不作任何治疗。治疗期间观察裸鼠皮下瘤体的生长情况,测算肿瘤体积。治疗结束后处死裸鼠并取瘤,测量肿瘤质量,检测环氧合酶-2/5-脂氧合酶在肿瘤组织中的表达,用免疫组化方法检测肿瘤微血管密度,用脱氧核糖核苷酸末端转移法酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测肿瘤细胞凋亡情况。结果 10只裸鼠全部成瘤,实验过程中无裸鼠死亡。实验结果显示：替泊沙林可抑制HT-29人结肠癌细胞的生长,可降低环氧合酶-2/5-脂氧合酶在人结肠癌细胞所致肿瘤组织中的表达水平,对诱导人结肠癌细胞诱导的裸鼠皮下移植瘤具有促进肿瘤细胞凋亡及抑制肿瘤微血管生成作用。结论环氧合酶-2/5-脂氧合酶双重抑制剂替泊沙林可能通过促进结肠癌细胞的凋亡、抑制肿瘤微血管生成,从而抑制结肠肿瘤的生长。     

塞来昔布对结肠癌细胞株HT-29的放射增敏研究

目的研究塞来昔布对结肠癌细胞株HT-29的放射增敏效应,并初步探讨其作用机制。方法体外培养结肠癌细胞株HT-29,用不同浓度的塞来昔布作用于HT-29细胞,以成克隆实验检测细胞辐射敏感性;建立结肠癌荷瘤裸鼠模型,不同实验条件下观察肿瘤体积变化并绘制肿瘤生长曲线;采用免疫组织化学方法检测肿瘤组织中血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结果克隆形成实验结果显示,塞来昔布30μmol/L和50μmol/L作用后的放射增敏比分别为1.304和1.475;肿瘤生长曲线表明,联合治疗组的肿瘤增长最缓慢;塞来昔布组可致肿瘤组织中VEGF表达下降（P〈0.05）。结论塞来昔布在体内和体外实验中均可增强结肠癌细胞HT-29细胞的放射敏感性,其机制可能与其抑制肿瘤新生血管形成相关。     

塞来昔布对人结肠癌细胞裸鼠移植瘤肝转移和血管生成的影响

目的研究COX-2选择性抑制剂塞来昔布对结肠癌肝转移瘤微血管生成以及血管生成因子VEGF、bFGF表达的影响,从而探讨COX-2对结肠癌肝转移瘤血管形成的作用机制.方法细胞培养建立稳定的结肠癌细胞株HT-29和HCT-116,利用脾切除法建立结肠癌肝转移动物模型,免疫组化检测结肠癌肝转移瘤MVD、VEGF、bFGF蛋白表达.结果结肠癌肝脏转移率,HT-29组、HCT-116组和塞来昔布组分别为83.33%、16.67%和33.33%.肝脏转移瘤MVD、VEGF、bFGF的表达,HT-29组与HCT-116组、塞来昔布组比较治疗组表达减弱,有显著统计学差异(P＜0.01,P＜0.05);塞来昔布组与HCT-116组比较无显著性差异(P＞0.05).结论塞来昔布可能通过抑制促血管生成因子VEGF、BFGF的表达,进而抑制了结肠癌肝转移瘤新生血管生成.     

健脾化痰方抗胃癌转移及对Survivin、Bax的影响

目的观察健脾化痰方对裸鼠前胃癌肝转移瘤的影响,探讨其对瘤组织中相关凋亡基因表达的调控作用。方法将MFC细胞接种于裸鼠脾脏中,建立裸鼠前胃癌(Mouse forestomach carcinoma,MFC)肝转移模型后,随机分为模型组、5-fu组及健脾化痰方高、中、低剂量组,实验结束后,测定移植瘤的质量、肝脏质量及评估转移瘤分级,同时应用免疫组织化学法和RT-PCR方法检测移植瘤组织中Survivin、Bax蛋白及mRNA的表达。结果健脾化痰方能明显抑制转移瘤生长,减少转移瘤数目;明显下调Survivin蛋白及mRNA的表达、上调Bax蛋白及mRNA的表达。结论健脾化痰方对裸鼠前胃癌移植瘤的生长及转移具有抑制作用,其作用与下调Survivin、上调Bax的表达有关。     

两种大肠癌细胞株小鼠肝转移模型的建立及比较

目的 建立人、鼠大肠癌细胞肝转移动物模型,为研究大肠癌肝转移机制及筛选、评估抗转移药物提供工具.方法 选取鼠大肠癌细胞株CT26和人大肠癌细胞株LoVo,分别接种于Balb/c小鼠及裸鼠脾脏内,观察其成瘤情况、肝脏转移率及生存期,并对两种模型进行初步比较.结果 两种细胞株均能复制出大肠癌肝转移动物模型,病理结果证实肝转移肿瘤符合典型的低分化腺癌特征.CT26细胞在免疫功能完整的小鼠体内,仍具有良好的成瘤性和转移率,较LoVo细胞建立的裸鼠肝转移模型转移率更高,成瘤时间更短.结论 成功复制出两种人鼠大肠癌细胞株肝转移动物模型,均能较好模拟大肠癌体内肝转移过程.     

Effects of down-regulation of integrin-β<Subscript>1</Subscript> expression on migration and hepatic metastasis of human colon carcinoma

Organ-specific tumor cell adhesion to extracellular matrix (ECM) components and cell migration into host organs often involve integrin-mediated cellular processes. Direct integrin-mediated cell adhesion to ECM components in the space of Disse appears to be required for the successful liver metastatic formation of colon cancer. In the present study, human colon cancer HT-29 cells were transfected by liposome with integrin-β1 antisense oligodeoxynucleotide (ASODN). The integrin-β1 gene expression in HT-29 cel...     

Pyk2对人类结肠癌细胞肝转移能力及超微结构的影响

目的:研究在裸鼠结肠癌肝转移模型中,富含脯氨酸的蛋白酪氨酸激酶2(proline-rich tyrosine kinase 2,Pyk2)对人结肠癌细胞肝转移能力和超微结构的影响。方法:利用正义及反义cDNA技术,在人结肠癌细胞系SW480基础上,构建Pyk2高表达的细胞系SW480-Pyk2+及低表达的细胞系SW480-Pyk2-作为实验组,并以转染空载体的细胞系SW480-vector和原细胞系SW480作为对照组。4组共32只4周龄的Babl/c nu/nu雄性裸鼠,用脾注射保留脾脏法构建裸鼠肝转移瘤模型。6周后处死裸鼠,用Western blot检测瘤细胞中Pyk2蛋白的表达,计数肝转移瘤数目,电子显微镜下观察肝转移瘤细胞的超微结构。结果:6周后裸鼠肝转移模型建立成功,Western blot显示SW480-Pyk2+组的蛋白表达量明显高于空载体组(SW480-vector)和SW480组,SW480-Pyk2-组的蛋白表达量明显低于SW480组和SW480-vector组;肝转移瘤计数显示SW480-Pyk2+组明显少于SW480-vector组及SW480组,SW480-Pyk2-组明显多于SW480-vector组及SW480组(P<0.05),而SW480-vector组与SW480组之间无明显差异;电子显微镜下观察发现,SW480-Pyk2+组细胞连接发育较成熟,有形成腺腔趋势,微绒毛较多,细胞器较多,粗面内质网较多,细胞异型性较轻;而SW480-Pyk2-组细胞连接发育不良,细胞器少,微绒毛短小而稀疏,细胞核异形明显,有核沟。结论:Pyk2能减少结肠癌肝转移灶的数量,改善细胞的异型性和细胞连接发育,并可能通过此机制抑制肿瘤转移。     

原位小鼠乳腺癌肝转移模型

目的 探讨利用HER-2阳性细胞系SKBr-3建立自发性乳腺癌肝转移模型，为乳腺癌肝转移的机制及治疗学研究提供有价值的模型。方法 利用SKBr-3乳腺癌细胞株接种至16只裸鼠第二对乳腺脂肪垫，建立裸鼠第一代原位乳腺癌模型，再利用建立成功的原位肿瘤组织在16只裸鼠原位进行瘤组织块第二代原位种植，最后利用第二代组织块种植成功的瘤组织对16只裸鼠再次进行原位肿瘤种植，分别观察肿瘤肝转移情况。结果 在第一代肿瘤细胞原位种植的肿瘤中，没有发生肝转移现象。而在第二代组织原位种植瘤中，只有1只发生肝转移，而在第三代的组织原位肿瘤种植模型中出现了接近81．25％（13／16）的肝转移。无一只出现肉眼肺转移。结论 乳腺癌裸鼠体内反复传代可以建立高效、相对特异性的自发性乳腺癌肝转移模型，为肝转移机制及治疗研究提供很好的模型。     

两种结肠癌动物模型的淋巴管生成比较

目的探讨建立人结肠癌裸鼠淋巴管生成模型的可能性。方法建立人结肠癌皮下移植瘤及原位种植瘤动物模型,通过免疫组化染色和定量RT—PCR检测淋巴管内皮细胞标记lyve-1（lymphatic vessel endothelial HA receptor-1,淋巴管内皮透明质酸受体-1）,细胞角蛋白20（cytokeratin 20,ck20）及淋巴管生成因子血管内皮生长因子-C（vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C）,血管内皮生长因子-D（vascular endothelial growthfactor-D．VEGF-D）及血管内皮生长因子受体-3（vascular endothelial growth factor receptor-3,VEGFR-3）的表达,以比较两者在淋巴管生成的管网数量和淋巴管生成因子的差异。结果与阴性对照组相比．皮下移植瘤及原位种植瘤的VEGF-C,VEGF-D和VEGFR-3的含量明显升高（P〈0．01）,原位种植瘤与皮下移植瘤之间也存在差异（P〈0．05）：而原位种植瘤lyve-1及CK20染色的阳性淋巴管相比皮下移植瘤更为密集。结论原位种植瘤和皮下移植瘤结肠癌动物模型都发生了淋巴管生成,但前者淋巴管生成的数量及形态都较后者更有优势,为进一步研究结直肠癌淋巴道转移机制．药物干预及抗转移治疗提供了建立较理想动物模型的参考。     

卡介苗联合DC-CIK细胞对裸鼠结肠癌生长及肝转移的抑制作用

目的研究卡介苗联合树突状细胞（DC）及细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）对BALB/c裸鼠结肠癌肝转移的抑制作用。方法 60只BALB/c裸鼠腹腔内注射人结肠癌细胞株SW480建立结肠癌肝脏转移模型,随机分为对照组、DC-CIK组、卡介苗联合DC-CIK组（联合组）,每组20只。联合组建模后第2天,鼠尾静脉注射卡介苗（12.5 mg/kg）,隔日1次,共15次,并注射DC-CIK细胞免疫治疗,每周2次,共8次,DC-CIK组只注射DC-CIK细胞,对照组注射等量生理盐水。建模后30 d处死裸鼠,测量各组裸鼠原发灶的大小、肝转移瘤的数量,运用细胞角蛋白-18（CK-18）免疫组化单克隆抗体检测转移瘤组织来源;检测肿瘤转移灶的凋亡指数（AI）、肿瘤转移灶微血管密度（MVD）和血清血管内皮细胞生长因子（VEGF）浓度。结果各组脾脏的原发灶体积平均数分别为：对照组1.272 cm^3,DC-CIK组1.096 cm^3,联合组0.859 cm^3;与DC-CIK组、对照组比较,联合组脾脏原发灶体积明显缩小（P均〈0.05）。各组肝转移肿瘤为结肠腺癌CK-18（＋）;联合组肝转移瘤数量明显少于对照组和DC-CIK组（P均〈0.05）。联合组肿瘤转移灶AI高于DC-CIK组、对照组（P均〈0.05）,血清VEGF浓度、MVD计数均明显低于DC-CIK组、对照组（P均〈0.05）。结论卡介苗联合DC-CIK细胞或单独应用DC-CIK细胞均能明显抑制裸鼠结肠癌生长及肝转移,但卡介苗联合DC-CIK细胞的肿瘤抑制效果更好。     

三氧化二砷对人结肠癌裸鼠移植瘤端粒酶活性及其催化亚单位表达的影响

目的:研究三氧化二砷(As2 O3 )注射液对人结肠癌裸鼠移植瘤端粒酶活性及其催化亚单位人端粒逆转录酶(hTERT)表达的影响。方法:建立人结肠癌裸鼠移植瘤模型,随机分为生理盐水组、As2 O3 低剂量(2 .5mg·kg-1)组、As2 O3 高剂量(5mg·kg-1)组及5 - FU(2 0mg·kg-1)组。腹腔注射As2 O3 ,利用银染 端粒重复扩增(TRAP)法测定人结肠癌裸鼠移植瘤端粒酶活性、RT PCR法检测hTERT的表达。结果:生理盐水组及5 -FU组端粒酶活性及其催化亚单位表达不受影响,不同剂量As2 O3 均明显抑制端粒酶活性及其催化亚单位表达。结论:As2 O3 注射液对人结肠癌裸鼠移植瘤端粒酶活性及其催化亚单位的表达有抑制作用。