N-myc下游调节基因对胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响及其机制研究

目的 探究N-myc下游调节基因（NDRG1）对胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响，并分析可能的机制。方法 体外培养人胰腺癌细胞系MZ-3262细胞，并分为空白对照组（细胞不做特殊处理）、pcDNA-NC组（细胞转染pcDNA-NC）、pcDNA-NDRG1组（细胞转染pcDNA-NDRG1）、通路抑制剂组［转染pcDNA-NDRG1后加入含终浓度为1 mmol/L 磷脂肌醇3-激酶（PI3K）通路激活剂bpv的培养液］；采用实时荧光定量聚合酶链反应检测NDRG1 mRNA的表达；CCK-8法检测细胞存活情况；划痕实验、Transwell实验分别检测细胞迁移、侵袭能力；Western blotting检测NDRG1、增殖及侵袭迁移相关蛋白［细胞增殖相关核抗原（PCNA）、E-钙黏附蛋白（E-Cadherin）、N-钙黏附蛋白（N-Cadherin）、波形蛋白（Vimentin）］及蛋白激酶B/转录激活因子3（Akt/STAT3）通路蛋白［PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、STAT3］的表达。结果 与空白对照组、pcDNA-NC组比较，pcDNA-NDRG1组、通路激活剂组MZ-3262细胞NDRG1 mRNA和蛋白、E-Cadherin蛋白相对表达量升高（P <0.05），细胞存活率、侵袭细胞数、划痕愈合率、PCNA、N-Cadherin、Vimentin蛋白及p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-STAT3/STAT3相对表达量降低（P <0.05）；但通路激活剂组MZ-3262细胞NDRG1 mRNA和蛋白、E-Cadherin蛋白相对表达量低于pcDNA-NDRG1组（P <0.05），细胞存活率、侵袭细胞数、划痕愈合率、PCNA、N-Cadherin、Vimentin蛋白及p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-STAT3/STAT3相对表达量高于pcDNA-NDRG1组（P <0.05）。结论 过表达NDRG1表达可能通过抑制PI3K/Akt/STAT3通路活化，抑制胰腺癌MZ-3262细胞增殖、侵袭及迁移。     

血根碱对宫颈癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移能力影响机制研究

目的 探讨血根碱对宫颈癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移能力的影响机制.方法 分别用MTT法、流式细胞仪、细胞划痕实验、Transwell小室检测血根碱作用后的宫颈癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭能力.Western blot检测经血根碱作用后宫颈癌细胞中E-Cadherin、PTEN、β-catenin、MMP2的蛋白表达水平.结果 0.6、0.8μmol/L血根碱对宫颈癌细胞增殖具有抑制作用.0.8 μmol/L血根碱作用48 h后宫颈癌细胞HeLa和Siha凋亡率高达(45.68±2.26)％和(31.89±3.80)％.0.8μmol/L血根碱作用3 h后宫颈癌细胞HeLa和Siha黏附率仅有(67.45士2.13)％和(73.59±2.61)％.0.8μmol/L血根碱作用16 h后宫颈癌细胞HeLa和Siha侵袭数目仅有(39.64±1.98)个和(43.87±2.83)个.经血根碱作用后的宫颈癌细胞中E-Cadherin和PTEN的表达量增加,β-catenin和MMP2的表达量减弱.结论 血根碱对宫颈癌细胞具有抑制增殖及促凋亡作用,其机制可能与黏附蛋白E-Cadherin、β-eatenin和PTEN、MMP2有关.     

转染NDRG1基因对宫颈癌细胞COX-2、VEGF表达及增殖的影响

目的： 通过研究人类N-myc下游调节基因1(N-myc downstream regulated gene 1,NDRG1)对人宫颈癌SiHa细胞环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达及细胞增殖的影响,深入探讨NDRG1抑制宫颈癌侵袭转移的作用机制。方法： 经脂质体介导将含有NDRG1真核表达质粒转染人宫颈癌SiHa细胞株,采用G418筛选阳性细胞克隆及RT-PCR、蛋白质印迹鉴定;蛋白质印迹法检测阳性克隆细胞COX-2及VEGF表达的改变;噻唑盐（MTT）比色法检测阳性细胞克隆的增殖活性。结果： 成功建立高表达NDRG1的阳性SiHa细胞克隆（N-12）,并证实其COX-2和VEGF蛋白表达及细胞增殖活性均显著降低。结论： NDRG1可能通过下调宫颈癌细胞COX-2、VEGF的表达及抑制细胞增殖而起到抑制宫颈癌进展的作用。     

miRNA-196a与宫颈癌的关系研究

目的：探讨miRNA-196a与宫颈癌的相关性.方法：采用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）方法检测35例宫颈癌组织、35例宫颈上皮内瘤样病变组织（CIN）和40例非癌疾病切除的正常宫颈组织中miRNA-196a的表达,分析miRNA-196a与宫颈癌的发生发展的相关性;并通过转染的方法将miRNA-196a转入宫颈癌细胞株Siha中,观察其对Siha细胞迁移和侵袭的影响.结果：相对于CIN组织和非癌疾病切除的正常宫颈组织,宫颈癌组织中miRNA-196a的表达水平明显上调,差异有统计学意义（P ＜0.01）;miRNA-196a的表达水平与患者有无淋巴结转移、临床病理分级、临床分期和间质浸润深度密切相关（P＜ 0.01）,但与患者年龄、肿瘤直径大小和绝经与否均无明显关系（P＞0.05）;转染miRNA-196a可促进Siha细胞的迁移和侵袭.结论：miRNA-196a与宫颈癌的发生发展、迁移、侵袭密切相关.     

沉默SLP-2 可抑制人宫颈癌细胞的迁移及侵袭能力

目的研究沉默SLP-2对人宫颈癌细胞迁移及侵袭能力的影响及其作用机制。方法用siRNA转染人宫颈腺癌Hela细胞 及宫颈鳞癌Siha细胞作为沉默组,同时设立空白对照组及阴性对照组,转染48 h后,用Western blot检测SLP-2蛋白的表达量, 用划痕实验、Transwell 实验检测沉默SLP-2 对Hela 和Siha 细胞迁移能力的影响,用基质胶Transwell 实验检测沉默SLP-2 对 Hela 和Siha 细胞侵袭能力的影响,用Western blot 检测沉默SLP-2 后Hela 和Siha 细胞上皮间质转化标志分子E-cadherin、β- catenin、vimentin及上皮间质转化上游转录因子Twist蛋白表达量的变化。结果与对照组相比,Western blot结果显示沉默组 SLP-2蛋白的表达量明显下降;划痕实验显示沉默组的划痕面积愈合率明显下降（P<0.01）;Transwell实验及基质胶Transwell实 验均显示沉默组穿过小室膜至下室的细胞数明显减少（P<0.01）;Western blot结果显示沉默组上皮细胞标志分子E-cadherin及 β-catenin表达升高,而间质细胞标志分子vimentin表达下降,表明Hela细胞和Siha细胞的上皮间质转化受到抑制;Western blot 结果显示沉默组Twist蛋白的表达量也明显下调。结论沉默SLP-2可抑制人宫颈癌细胞上皮间质转化（EMT）的发生,使宫颈 癌细胞的迁移及侵袭能力下降,其作用机制可能与下调Twist蛋白的表达有关。     

末端结合蛋白1 (EB1)在宫颈组织中的表达及其对自噬标志蛋白表达的影响

 目的  探讨末端结合蛋白1 (end binding protein 1,EB1)在宫颈组织中的表达及其对自噬标志蛋白LC3和p62/SQSTM1蛋白表达的影响。方法  免疫组织化学检测EB1在宫颈癌、宫颈息肉和慢性宫颈炎组织中的表达;siRNA干扰方法抑制EB1基因表达,并采用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测此时宫颈癌Siha细胞自噬标志蛋白LC3和p62/SQSTM1基因的表达。结果  EB1的表达部位主要集中在细胞核外周的胞质中。EB1在宫颈癌和宫颈息肉中的阳性表达率显著低于宫颈慢性炎性组织(P<0.05),但在阳性表达的宫颈癌组织中,绝大多数间质细胞表现为阴性;EB1在中、低分化宫颈鳞癌组织中的阳性表达率显著低于高分化宫颈鳞癌组织(P<0.05)。当EB1基因表达在宫颈癌Siha细胞中的表达被抑制时,无论是在mRNA还是在蛋白水平,自噬标志蛋白p62/SQSTM1和LC3的表达均显著增加(P<0.05)。结论  EB1在自噬发生较低的宫颈癌组织中阳性表达率低于自噬发生较高的宫颈慢性炎性组织;抑制EB1在宫颈癌Siha细胞中的表达,则自噬标志蛋白p62/SQSTM1和LC3表达改变,这一发现充分证明EB1在宫颈癌的自噬过程中发挥着一定的生物学效应。     

The Effect of RhoC siRNA on the Invasiveness and Proliferation of Human Cervical Cancer Cell Line SiHa Cells

This study investigated the effect of RhoC GTPase on the proliferation and metastasis of cervical cancer cells, SiHa cells, in vitro. RhoC siRNA was introduced into SiHa cells to silence the RhoC gene. The mRNA and protein expression of RhoC, before and after RhoC siRNA transfection, was examined by RT-PCR and Western blotting, respectively. The proliferation and apoptosis of SiHa cells were examined by MTT assay and flow cytometry （FACS）, respectively. Adhesive rate was evaluated by Matrigel adhesive assay, and the invasive capability and migration capability were assessed by transwell invasive assay and migration assay, respectively. The results showed that after the RhoC siRNA transfection, the mRNA and protein expression of RhoC was down-regulated in SiHa cells. The down-regulation of RhoC GTPase did not affect the cell proliferation and apoptosis （P〉0.05）, but it did suppress SiHa cells＇ adhesion to matrigel （P〈0.01）, the invasive capability （P〈0.01） and the migration capability （P〈0.01）. It was concluded that RhoC obviously promotes the adhesion, invasion and migration of SiHa cells in vitro, but not proliferation and apoptosis, suggesting that RhoC plays an important role in the progression in cervical cancer.     

pEGFP-N1-DCN重组质粒抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖和侵袭

目的构建pEGFP-N1-DCN真核表达载体并转染胃癌细胞SGC-7901,观察其对细胞增殖、周期、迁移、侵袭的影响。方法将细胞分为3组,分别为空白对照组、pEGFP-N1组及pEGFP-N1-DCN组,质粒通过脂质体转染SGC-7901,RT-PCR及Western blot方法检测表皮生长因子受体(EGFR)及TGF-β1的表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,Transwell检测核心蛋白聚糖(DCN)对细胞迁移及侵袭能力的影响。结果 RT-PCR及Western blot检测结果显示,DCN使EGFR及TGF-β1的表达均降低(P<0.05);MTT法检测发现72 h时空白对照组、pEGFP-N1组及pEGFP-N1-DCN组细胞D(490)值分别为(1.190±0.037)、(1.169±0.052)、(0.572±0.021),DCN使细胞增殖受到明显抑制(P<0.05);流式细胞仪分析细胞周期空白对照组、pEGFP-N1组及pEGFP-N1-DCN组细胞G0～G1的细胞数分别为(46.12±0.63)、(46.07±0.82)、(56.36±0.92),DCN使细胞阻滞在G0～G1(P<0.05);Transwell迁移、侵袭实验显示DCN使细胞迁移和侵袭能力均降低(P<0.05)。结论 DCN通过抑制肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭等起到抗肿瘤作用。     

microRNA-1290通过 NDRG1/NF-κB/IL-6信号通路促进结肠癌细胞迁移和侵袭

目的: 探讨微小RNA-1290（microRNA-1290,miR-1290）通过N myc下游调节基因 1（N-Myc downstream-regulated gene 1,NDRG1）调控NF κB/IL 6活化分子机制及其对结肠癌细胞侵袭和迁移的影响。方法: 选择48例结肠癌患者肿瘤及癌旁组织,用免疫组织化学染色检测IL 6表达;qRT-PCR法检测20例肿瘤组织,结肠癌细胞与正常结肠上皮HCoEpiC细胞中IL-6 mRNA及miR-1290表达;结合miR-1290类似物及抑制剂处理,蛋白质印迹和ELISA法分别检测结肠癌细胞中p-NF-κB、NF-κB、NDRG1、上皮钙黏素、波形蛋白表达以及IL-6外泌量;小干扰RNA及中和性抗体靶向下调IL-6表达,miR-1290类似物处理,划痕实验以及Transwell实验检测结肠癌细胞迁移、侵袭能力。结果： 结肠癌中IL-6免疫组织化学染色评分明显高于癌旁组织（P<0.01）;结肠癌瘤体内miR-1290与IL-6 mRNA表达呈正相关（r=0.845 4,P<0.01）;与HCoEpiC细胞相比,结肠癌细胞中miR-1290表达明显增高（P均<0.01）;上调miR-1290表达可抑制NDRG1表达从而促进NF-κB信号通路及上皮间充质转化活化（P<0.01）,而下调miR-1290表达可促进NDRG1、上皮钙黏素表达并抑制p-NF-κB和波形蛋白形成（P<0.01）;划痕实验显示上调miR-1290表达可增强结肠癌细胞迁移能力,而敲低IL-6后细胞愈合率则明显抑制（P<0.01）;miR-1290类似物处理促进结肠癌细胞侵袭,而抗体中和IL-6可显著降低侵袭细胞数（P<0.01）。结论： 结肠癌细胞中miR-1290可通过抑制NDRG1形成促进NF-κB/IL-6调控轴诱导的细胞迁移和侵袭发生。     

RNF2在结直肠癌中的表达及其对结直肠癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨环指蛋白2（RNF2）在结直肠癌中的表达及其对结直肠癌细胞生物学行为的影响。方法 采用免疫组织化学法检测RNF2在结直肠癌组织和癌旁正常组织中的表达，并利用过表达的慢病毒转染HCT116细胞构建过表达RNF2的HCT116细胞系，通过CCK-8法、划痕实验、Transwell实验检测过表达RNF2对结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭等生物学行为的影响。结果 结直肠癌组织中RNF2阳性表达率高于癌旁正常组织（P <0.05）；不同年龄、组织学类型、分化程度、Dukes分期、淋巴结转移的结直肠癌患者的RNF2表达阳性率比较，差异有统计学意义（P <0.05）；HCT116组、HCT116-control组、HCT116-RNF2组HCT116细胞增殖、迁移能力及侵袭能力比较，差异有统计学意义（P <0.05）；HCT116-RNF2组细胞增殖速度、迁移能力及侵袭能力均高于HCT116-control组和HCT116组（P <0.05）。结论 RNF2在结直肠癌中呈高表达，且过表达RNF2可促进结直肠癌细胞迁移、增殖、侵袭能力，可为结直肠癌治疗提供新的治疗靶点。     

MicroRNA-182在宫颈癌中的表达及对肿瘤细胞增殖、侵袭及迁移的影响

探讨MicroRNA（miR-182）在宫颈癌组织、宫颈上皮内瘤变组织（CIN）和正常宫颈组织中的表达,及其对宫颈癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法应用实时聚合酶链反应（real-time PCR）技术方法检测78例宫颈癌组织、30 例CIN组织及20例正常宫颈组织中miR-182的表达,并分析其与宫颈癌临床病理特征之间的关系。在宫颈癌细胞株CaSki中,应用细胞转染技术上调miR-182的表达,应用Cell CountingKit-8（CCK-8）试剂盒检测细胞增殖能力的变化,Transwell 实验检测细胞侵袭迁移能力的变化。结果RealtimePCR结果显示miR-182 在宫颈癌组织、宫颈上皮内瘤变（CIN）组织与正常宫颈组织比较,差异有统计学意义﹙p <0.05﹚;两两比较,miR-182 在宫颈癌组织和CIN组织中的表达较正常宫颈组织降低﹙ p<0.05﹚,miR-182 在宫颈癌组织与CIN组织比较,差异无统计学意义（p >0.05）,宫颈癌组织中miR-182 的表达与分化程度、淋巴转移密切相关,而与年龄、肿瘤直径、浸润深度及临床分期等无关（p >0.05）。在人宫颈癌上皮细胞（CaSki）中,上调miR-182表达能够抑制肿瘤细胞的侵袭和迁移﹙p <0.05﹚,但不改变细胞的增殖能力。结论miR-182在宫颈癌组织中低表达,miR-182的表达水平与分化程度和淋巴结转移有关,上调miR-182的表达能够抑制宫颈癌CaSki细胞的迁移及侵袭。     

NDRG2对乳腺癌细胞增殖的影响

目的：观察NDRG2（N—myc downstream regulated gene 2）对于乳腺癌细胞系增殖的影响．方法：采用脂质体转染法将NDRG2基因转入乳腺癌细胞系SK-BR-3,经G418筛选后获得稳定高表达NDRG2的亚克隆细胞系SK—BR-3／NDRG2-flag及仅转染载体的SK—BR-3／pcDNA3．1（＋）．应用Western Blot检测NDRG2在转染细胞中的表达;应用平板克隆形成试验、MTT、流式细胞仪检测转染前后细胞增殖能力的差异．结果：成功建立了稳定高表达NDRG2的亚克隆细胞系SK—BR-3／NDRG2-flag;NDRG2的高表达导致了乳腺癌细胞系增殖能力减弱（P〈0．01）：细朐周期阳滞存G0／G1期．结论：存乳腺痛细胞系SK—BR-3中,过表达NDRG2可有效抑制细胞增殖并导致细胞周期的阻滞．     

miR-29a在宫颈癌组织中的表达及其上调后对宫颈癌细胞恶性生物学行为的影响

目的检测微小RNA（miR）-29a 在宫颈癌组织和不同种类宫颈癌细胞系中的表达情况及其上调后对宫颈癌SiHa细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移等恶性生物学行为的影响。方法①组织标本检测：收集2014 年7 月-2016 年7 月西南医科大学附属医院活检或手术切除的宫颈组织标本160 例,采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-29a 的表达情况,并分析宫颈癌组织中miR-29a 的表达与临床病理特征的关系。②细胞学实验：采用qRT-PCR检测miR-29a在不同种类的人宫颈癌细胞系（SiHa、HeLa、Caski及C33a）和人正常宫颈细胞系Ect1/E6E7中的表达水平,选取miR-29a表达最低的宫颈癌细胞系SiHa进行后续研究,使用miR-29a mimics转染SiHa细胞,qRT-PCR检测转染后细胞miR-29a 的表达变化,CCK-8 法检测转染后细胞增殖活力的变化,流式细胞仪检测转染后细胞凋亡率的变化,Transwell实验检测转染后细胞迁移和侵袭能力的变化。结果宫颈鳞癌组织中miR-29a 表达低于HSIL、LSIL及正常宫颈组织（p <0.05）;HSIL组织中miR-29a表达低于LSIL及正常宫颈组织（p <0.05）,LSIL与正常宫颈组织间miR-29a的表达差异无统计学意义（p >0.05）。宫颈鳞癌组织中miR-29a的表达与患者临床分期和淋巴结转移密切相关（p <0.05）。miR-29a在人宫颈癌细胞系（SiHa、HeLa、Caski和C33a）中的表达低于人正常宫颈细胞系Ect1/E6E7（p <0.05）。SiHa细胞转染miR-29a mimics后,miR-29a表达水平增高（p <0.05）,细胞增殖活力降低（p <0.05）,细胞凋亡率增高（p <0.05）,细胞迁移和侵袭能力下降（p <0.05）。结论miR-29a在宫颈癌组织和细胞中均呈低表达,上调miR-29a的表达能够抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖及侵袭迁移能力,促进细胞的凋亡。     

血根碱对人类宫颈癌细胞生长和转移的抑制作用

目的利用宫颈癌细胞株探讨血根碱（SAN）的抗肿瘤作用。方法采用MTT、克隆形成及细胞划痕试验研究不同浓度SAN对体外培养的人类宫颈癌HeLa和Siha细胞的影响。结果经1.0μmol/L和5.0μmol/LSAN处理后,Siha细胞的存活率分别为对照组的72%和10%（P〈0.01）,HeLa细胞比Siha细胞更敏感。用1.0μmol/LSAN处理后,HeLa和Siha细胞的克隆形成数从33个降低到14个和16个（P〈0.05）。划痕试验显示培养48h后,HeLa细胞和Siha细胞的“细胞伤口”宽度对照组分别为（0.51±0.04）mm和（0.64±0.02）mm,而0.5μmol/LSAN处理组为（1.22±0.02）mm和（1.63±0.01）mm（分别P〈0.01和P〈0.05）。MTT、克隆形成及细胞划痕试验均呈剂量和时间依赖性。结论SAN可抑制宫颈癌细胞的生长和转移。该研究为SAN作为一种新药应用于宫颈癌的治疗提供了初步的实验依据和理论基础。     

真核表达载体pEGFP-N1-MKRN1的构建及其在Siha细胞中的表达

目的：构建真核表达载体pEGFP-N1-MKRN1并稳定转染人宫颈癌细胞系Siha细胞,检测MKRN1表达情况及对细胞增殖和凋亡的影响.方法：用RT-PCR技术从人胚肾细胞株HEK293细胞中获得MKRN1的cDNA并将其插入表达载体pEGFP-N1中;构建的重组质粒经脂质体介导转染Siha细胞;Western Blot鉴定MKRN1在Siha细胞中的稳定表达.结果：RT-PCR成功地扩增出一条约1477 bp的片段,经限制性内切酶酶切分析和DNA序列测定证实目的基因已插入重组质粒,荧光显微镜下观察到稳定转染的细胞发出较强绿色荧光,Western Blot证明人MKRN1能以融合蛋白的形式在Si-ha细胞中稳定表达.结论：成功构建了真核表达载体pEGFP-N1-MKRN1,获得了稳定表达人MKRN1基因的Siha细胞克隆,为进一步研究人MKRN1的功能及其与细胞增殖及凋亡的关系提供了实验基础和重要的细胞模型.     

血管抑制素-2通过调控上皮细胞间质化促进宫颈癌细胞的增殖和转移

目的 探讨血管抑制素-2（VASH2）能否促进宫颈癌细胞在体外的增殖和转移及其可能的分子机制。方法 在外源性过表达和干扰内源性flotillin-1表达的宫颈癌细胞中,通过公共数据库结合RNA-seq挖掘分析差异表达基因;在宫颈正常上皮细胞（HcerEpic细胞）和宫颈癌细胞（HeLa、C-33A、Ca ski、SiHa和MS751）以及不同淋巴结转移状态的新鲜宫颈癌组织中检测VASH2的表达;运用慢病毒稳定表达载体构建外源性过表达VASH2和干扰内源性VASH2表达的宫颈癌细胞及对照细胞,并检测其增殖、迁移、侵袭和淋巴管形成的情况;在上述细胞模型中检测上皮细胞间质化（EMT）过程关键分子及TGF-β的表达水平。结果 RNA-seq发现在外源性过表达flotillin-1的宫颈癌细胞中VASH2的表达上调（P<0.05）,而在抑制内源性flotillin-1表达的细胞中VASH2表达下调（P<0.05）,并在公共数据库中证实VASH2在有淋巴结转移的宫颈癌组织中相对于无淋巴结转移的癌组织呈高表达（P<0.01）。相对于HcerEpic细胞和淋巴结未转移的宫颈癌组织,VASH2在Ca Ski、SiHa、MS751细胞和有淋巴结转移的宫颈癌组织中表达上调（P<0.05）;相对于对照细胞,外源性过表达VASH2的宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭和淋巴管形成能力增强,而抑制内源性VASH2表达的宫颈癌细胞上述能力则受到抑制（P<0.05）;相对于对照细胞,外源性过表达VASH2的宫颈癌细胞中EMT过程的关键分子E-cadherin下调,N-cadherin、Vimentin和VEGF-C上调,而抑制内源性 VASH2 表达的宫颈癌细胞中 E-cadherin 上调,N-cadherin、Vimentin 和 VEGF-C 下调（P<0.05）;外源性过表达VASH2的宫颈癌细胞中TGF-β的mRNA表达水平上调,而抑制内源性VASH2表达的宫颈癌细胞中TGF-β的mRNA表达水平下调（P<0.001）。结论 flotillin-1可能通过下游靶基因VASH2参与 TGF-β信号通路诱导EMT过程在体外促进宫颈癌细胞的增殖、迁移、侵袭和淋巴管形成。     

大黄素对宫颈癌细胞体外转移活性和顺铂敏感性的影响及其机制研究

目的 探究大黄素对宫颈癌细胞体外转移活性和顺铂敏感性的影响，以期为宫颈癌的治疗提供新思路。方法 将HeLa细胞分为4组：对照组、顺铂组、大黄素组、联合组。采用Transwell实验、MTT法、流式细胞术、划痕试验检测细胞侵袭、增殖、凋亡和迁移能力，Western blotting检测大黄素对PI3K/Akt信号通路的影响。结果 对照组、顺铂组、大黄素组、联合组细胞24、36和72 h的吸光度（OD）值比较，经重复测量设计的方差分析，结果：(1)不同时间点OD值比较，差异有统计学意义（F=396.000,P=0.000）；(2)各组细胞OD值比较，差异有统计学意义（F=158.500,P=0.000），联合组OD值低于对照组、大黄素组、顺铂组（P <0.05）；(3)各组细胞OD值的变化趋势比较，差异有统计学意义（F=39.100,P=0.000）。与对照组比较，大黄素组和顺铂组宫颈癌细胞集落形成数、细胞侵袭数和迁移率均减少（P <0.05）；与对照组、大黄素组、顺铂组比较，联合组的宫颈癌细胞集落形成数、细胞侵袭数和迁移率均减少（P <0.05）。与对照组比较，大黄素组...     

宫颈癌组织中c-myc、bcat1的表达及其临床意义

目的 探究c-myc、bcat1表达与宫颈癌发生发展及临床特征的关系。方法 采用免疫组织化学方法半定量检测30例正常宫颈组织、30例宫颈上皮内瘤变（CIN）组织、80例宫颈癌组织（40例宫颈鳞癌、40例宫颈腺癌）中c-myc及bcat1蛋白的表达情况,并进行Spearman秩相关分析,分析两者表达水平与宫颈癌临床病理因素间的关系。结果 c-myc在正常宫颈组织、CIN组织、宫颈癌组织中的阳性表达率分别为16.7%（5/30）、43.3%(13/30)、73.8%(59/80);bcat1阳性表达率分别为10.0%（3/30）、23.3%(7/30)、52.5%(42/80);c-myc与bcat1在宫颈鳞癌及腺癌组织中的秩相关系数r_s分别为0.773（P=0.000）、0.369(P=0.019);c-myc阳性表达率与癌组织病理类型（腺癌/鳞癌）、癌组织分化程度、间质浸润深度、有无脉管浸润有关(P<0.05);bcat1阳性表达率与癌组织分化程度、有无脉管浸润及Ki67指数有关(P<0.05)。结论 c-myc的高表达可能促进宫颈癌的侵袭及转移,bcat1的高表达可能促进宫颈癌的增殖、侵袭与转移,两者可能在宫颈癌致病过程中存在协同作用。     

SNHG17对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞体外增殖及迁移的影响

目的 探讨SNHG17在三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞系和组织中的表达及对肿瘤细胞增殖及迁移的影响.方法 收集2018年1月至2019年12月深圳市人民医院病理科40例三阴性乳腺癌组织标本,通过碱性磷酸酶原位杂交检测癌和癌旁正常组织中SNHG17的表达情况.构建过表达SNHG17质粒,经一代测序验证质粒.采用荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测转染SNHG17过表达质粒后过表达组和对照组SNHG17 RNA表达水平.使用CCK8检测过表达SNHG17对MDA-MB-231细胞增殖的影响.通过平板克隆形成实验观察过表达SNHG17对MDA-MB-231细胞克隆能力的影响.进行Transwell小室实验观察过表达SNHG17对肿瘤细胞的迁移能力及侵袭能力的影响.结果 原位杂交显示SNHG17在乳腺癌组织表达水平高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05).构建SNHG17过表达质粒,经过一代测序验证碱基序列完全匹配.通过qRT-PCR发现,SNHG17过表达组与对照组相比,细胞中SNHG17RNA表达量升高,差异有统计学意义(P<0.05).CCK8检测表明SNHG17过表达组MDA-MB-231细胞增殖活性较对照组增加,组间比较差异有统计学意义(P<0.05);不同检测时间之间MDA-MB-231细胞增殖活性差异有统计学意义(P<0.05);组间与时间之间存在交互作用,组间差异随时间变化而增加,差异具有统计学意义(P<0.05).平板克隆形成实验结果显示,SNHG17过表达组克隆细胞数较对照组增加,差异有统计学意义(P<0.05).进一步Tr-answell细胞迁移和侵袭实验结果显示,SNHG17过表达组MDA-MB-231细胞迁移和侵袭数目均较对照组增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论 SNHG17在MDA-MB-231细胞系及乳腺癌组织中高表达,过表达SNHG17后可促进乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭.     

NDRG1干扰载体的构建及稳定过表达NDRG1人脑微血管内皮细胞的建立

目的 构建N-myc下游调节基因1（NDRG1）的shRNA干扰载体和过表达载体,转染人脑微血管内皮细胞（hCMECs）后验证干扰和过表达效果并获得稳定过表达NDRG1的细胞。 方法 将pGPU6-GFP质粒采用BamH Ⅰ和Bbs Ⅰ双酶切后,分别与设计的8条shRNA连接构建pGPU6-GFP-NDRG1 shRNA干扰载体,经测序鉴定后采用Lipofectamine 2000转染hCMECs,采用荧光显微镜观察载体转染效率,将PCR扩增的NDRG1编码区序列与pMD19-T连接,经测序正确后将重组质粒与pcDNA3.1空质粒采用限制性内切酶BamH Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切,连接后构建pcDNA3.1-NDRG1过表达载体,采用Lipofectamine 2000将测序正确的过表达载体转染hCMECs,采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测干扰和过表达的hCMECs中NDRG1 mRNA表达水平,Western blotting法检测hCMECs中NDRG1蛋白表达水平,采用新霉素筛选出阳性克隆hCMECs。 结果 pGPU6-GFP载体经双酶切后,电泳结果显示完全线性化,测序结果显示shRNA均成功连接至pGPU6-GFP载体;荧光显微镜观察载体转染效率约为70%;RT-qPCR法检测,有3个shRNA干扰载体的干扰效果良好,转染后hCMECs中NDRG1 mRNA表达水平分别约为对照组的26%、21%和13%;Western blotting法检测到对应的特异性蛋白条带,重组质粒pcDNA3.1-NDRG1经双酶切后,电泳结果可见大小为1 185和5 428 bp的2条DNA条带,测序结果显示NDRG1基因成功插入,成功制备阳性克隆hCMECs。RT-qPCR法检测,阳性克隆hCMEC中NDRG1 mRNA表达水平较对照组升高,约为对照组的25.96倍;Western blotting法检测,hCMEC中NDRG1蛋白表达水平较对照组升高。 结论 成功构建pGPU6-GFP-NDRG1 shRNA干扰载体并验证干扰效果;成功构建pcDNA3.1-NDRG1过表达载体和稳定过表达NDRG1的hCMECs。