乳腺癌基因芯片实验数据分析与挖掘

目的 对公共数据库上下载得到的乳腺癌基因芯片试验结果进行数据分析,找出在正常组织与癌组织中呈现差异表达的基因,并寻找差异表达基因的相关基因.方法 综合运用显著性分析(SAM)、顶级评分基因对(TSP)、关联规则挖掘等方法,对数据进行处理.结果 筛选出若干呈现差异表达的基因,并且寻找了其中一部分基因的可能高度相关的基因....     

应用SYBR实时荧光定量Real-Time PCR法检测人宫颈癌MCPH1mRNA表达

目的 应用SYBR实时荧光定量RT-PCR法检测MCPH1/BRIT1 mRNA的表达.方法 提取人宫颈癌总RNA,经逆转录PCR获得靶基因(MCPH1)及管家基因(GAPDH)的CDNA,采用SYBR Green 荧光实时定量法检测,以GAPDH基因作为内参,计算各组MCPH1 mRNA的相对表达量.结果 在31...     

siRNA介导的Plk1表达沉默对COS-7细胞影响的研究

目的:研究(Polo-like kinase 1,Plk1)表达被抑制后对COS-7细胞的影响,探讨Plk1作为分子靶点用于肿瘤治疗的潜在价值.方法:化学合成法合成特异性的短链Plk1 siRNA,脂质体转染法将短链siRNA分别导入COS-7细胞;采用RT-PCR和Western blot法检测siRNA对Plk1表达的抑制效果;采用胎盘兰染色结合细胞计数法、FACS分析siRNA介导的Plk1表达抑制对COS-7癌细胞生长增殖、细胞周期的影响.结果:半定量RT-PCR和蛋白质印迹分析结果表明,合成的特异性短链Plk1 siRNA在mRNA和蛋白质水平上均能高效、特异性地抑制COS-7细胞中Plk1的表达.细胞生长分析结果表明,siRNA介导的Plk1表达沉默导致COS-7细胞的生长增殖受到显著抑制.FACS分析结果表明,Plk1表达被抑制后,出现细胞周期停滞,大量细胞呈现sub-G1期时相.结论:siRNA介导的Plk1表达沉默显著抑制COS-7细胞生长增殖,是一个潜在的肿瘤治疗靶点.     

抑制NFBD1的表达对鼻咽癌化疗敏感性的影响

目的:研究抑制NFBD1表达后,对鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma,NPC)细胞化疗敏感性的影响。方法:将NFBD1 siRNA导入NPC细胞系,采用RT-PCR和蛋白质印记法检测siRNA对NPC细胞NFBD1表达的抑制效果;NFBD1 siRNA转染后,MTT法分析NPC细胞对化疗药物敏感性的影响。结果:NFBD1 siRNA转染NPC细胞后,能高效、特异地在mRNA水平及蛋白质水平抑制NFBD1的表达;MTT结果分析表明,NFBD1 siRNA转染后,能显著提高NPC细胞系对化疗药物的敏感性。结论:NFBD1 siRNA转染后抑制NPC NFBD1表达,可显著提高其对化疗药物顺铂的敏感性。     

“以器官系统为中心”医学生物化学教学改革初探

为适应医学教育发展,“以器官系统为中心”的课程模式逐渐受到国内医学院校的青睐。借鉴国内外的教学改革经验,根据本校教育教学实际情况,重庆医科大学开展了“以器官系统为中心”的教学改革。这为讲授生物化学这门重要的医学基础课提供了一个良好的机会,我教研室对生物化学教学在教学内容等方面进行调整和重新分配,以期取得更好的教学效果。     

新基因PRR11的克隆、真核表达载体的构建及鉴定

目的：克隆新基因PRR11的开放阅读框区,构建其真核表达载体,并进行表达检测及鉴定。方法：以HeLa细胞cDNA为模板,半定量RT-PCR扩增PRR11基因,克隆入真核表达载体pcDNA3.1中,酶切、测序鉴定确认获得PRR11基因的重组真核表达载体pcDNA3.1-PRR11。然后将pcDNA3.1-PRR11重组载体转染入HeLa细胞中,收集细胞,制备总RNA和细胞裂解液,采用半定量RT-PCR和蛋白质免疫印迹法检测目的基因表达情况。结果：成功扩增了PRR11基因,双酶切、测序鉴定证实目的基因成功克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,测序结果表明序列完全正确,pcDNA3.1-PRR11真核重组表达载体构建成功。半定量RT-PCR和蛋白质免疫印迹法证实了转染入HeLa细胞中的目的基因表达成功。结论：成功构建了PRR11基因的真核表达载体,并可在HeLa细胞中成功表达,为进一步研究PRR11基因的功能奠定了基础。     

肉鸡对不同形态锰源的生物利用率研究

目的 :　研究肉仔鸡对不同形态锰源的相对生物学利用率。方法 :　将 62 4只 1日龄肉公鸡随机分为 1 3组 ,分别饲不添加锰的基础饲粮 (对照组 )或以不同锰化合物添加 60、1 2 0、1 80 mg/ kg锰的试验饲粮 2 1 d。结果 :　肉鸡生长性能各指标和腿病发生率以及肉鸡的跖骨灰锰含量、心肌细胞线粒体中 Mn SOD活性均未受到添加锰源以及锰源与锰水平互作的显著影响 ,但受到添加锰水平的显著影响。肉鸡心肌含锰量和 Mn SOD m RNA水平均未受到添加锰源与锰水平互作的显著影响 ,但受到添加锰源及添加锰水平的显著影响。其中中等和强络合强度有机锰源的生物学利用率明显高于无机硫酸锰和弱络合强度有机锰源。结论 :　中等和强络合强度的复合氨基酸锰对肉仔鸡的生物学利用率明显优于无机硫酸锰和弱络合强度的蛋氨酸锰     

苛求芽孢杆菌胞外尿酸酶的表征及其在血清尿酸测定中的应用

目的考察苛求芽孢杆菌(ATCC 26904)分泌型尿酸酶的特性和将其应用于直接动力学尿酸酶法测定血清尿酸的有效性。方法苛求芽孢杆菌分泌的尿酸酶经DEAE-cellulose层析纯化后,用于以积分法分析尿酸酶反应曲线预测反应体系本底的直接动力学尿酸酶法测定血清尿酸。结果苛求芽孢杆菌分泌的尿酸酶只含1种肽链,分子量为34.7 kD(1kD=0.992 1 ku),其米氏常数为(0.22±0.01)mmo1/L(n=11),黄嘌呤抑制常数为(36±3)μmo1/L(n=4)。用此尿酸酶,只要被分析反应曲线终点的底物浓度低于起点的30%,应用积分法就能可靠预测本底;直接测定反应前吸收,可使直接动力学尿酸酶法不受常见血清成分、酶活性变化和15μmo1/L黄嘌呤等干扰。监测0.025 U/ml尿酸酶反应5 min的数据,其线性响应范围为1~50μmol/L;所得临床标本血清尿酸含量(Ck)与过氧化物酶偶联间接终点平衡法(Ce)正相关(Ck=-0.008 1.046Ce,r=0.996,n=206),但Bland-Altman法分析表明两种方法不一致。结论苛求芽孢杆菌分泌的尿酸酶可用于直接动力学尿酸酶法测定尿酸,并可保障其优势。     

一个新的人NFBD1启动子的鉴定与分析

目的：鉴定分析NFBD1启动子，为进一步研究其转录调控奠定基础．方法：综合应用生物信息学分析和异构体特异性的巢式RT—PCR技术鉴定NFBD1转录起始位点和转录变异体；高保真PCR方法扩增NFBD1基因启动子区域并分别定向克隆入pGL3-basic和pGL3-enhancer载体，构建NFBD1启动子荧光素酶报告基因重组体；荧光素酶分析检测启动子活性；生物信息学方法预测转录因子结合位点．结果：鉴定了一个新的NFBD1转录起始位点和转录变异体，构建了2个含有长度分别为2．5和1．2kb的NFBD1启动子序列的荧光素酶报告基因重组体以及2个相应的含有外源增强子的NFBD1启动子荧光素酶报告基因重组体．启动子活性分析表明，该启动子区域具有启动子活性，且能被外源增强子有效驱动，是一个新的人NFBD1启动子．转录因子结合位点预测分析表明，该启动子区域缺乏典型的CCAAT盒和GC盒，但含有TATA盒以及STAT1，MZF1和MAZ等潜在的转录因子结合位点．结论：鉴定了一个新的NFBD1启动子．