STAT3基因在人肝癌细胞株HepG2、Bel7402、SMMC7721和肝癌组织中的表达及意义

目的：探讨STAT3基因异常活化在人原发性肝癌发生、发展中的作用及可能的机制。方法：应用免疫组化染色法、RT-PCR和Western blotting法检测人肝癌细胞株HepG2、Bel7402、SMMC7721和肝癌组织中STAT3基因的mRNA和蛋白水平表达。 结果：肝癌细胞株SMMC7721、Bel7402和HepG2中均有STAT3基因的高表达,3种肝癌细胞间表达量比较差异无显著性（P>0.05）。原发性肝癌组织和癌旁组织中均有STAT3的mRNA及蛋白水平的高表达,与正常肝组织比较差异有显著性（P<0.05）,而肝癌组织与癌旁组织比较差异无显著性（P>0.05）。肝癌组织中VEGF、survivin和c-myc 的mRNA表达上调,p53的mRNA表达下调。结论：STAT3
的异常活化可能发生在癌变的早期,在肝癌的形成和发展中可能起重要的促进作用。     

L-选择素在肝癌细胞株HepG2中的表达

目的:观察L-选择素在人正常肝细胞株(L-02)和人肝癌细胞株(HepG2)中的表达。方法:应用RT-PCR法检测肝癌细胞株HepG2、正常肝细胞株L-02中L-选择素mRNA表达情况;应用流式细胞术检测HepG2细胞、L-02细胞中L-选择素的蛋白表达。结果:L-选择素mRNA在HepG2细胞中有表达,而在正常肝细胞株L-02细胞中无表达;HepG2细胞L-选择素的表达量为(10.09±0.51)%,而在L-02细胞中则无表达。结论:L-选择素在HepG2细胞中有表达而在L-02细胞中不表达。     

survivin基因在人原发性肝癌组织中的表达及其意义

目的： 探讨survivin基因在人原发性肝癌发生发展中的作用及可能的机制。方法：应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测15例原发性肝癌患者的肝癌组织、癌旁组织及肝正常组survivin基因及相关基因c-myc、p53、STAT3和VEGF的mRNA表达水平，应用Western blotting法及免疫组织化学染色法检测上述组织中survivin基因的蛋白表达水平及其定位。结果： 肝癌组织及癌旁组织中survivin基因mRNA的表达量均显著高于正常肝组织（P<0.01）, 肝癌组织中survivin基因mRNA的表达量明显高于癌旁组织（P<0.01），肝癌及癌旁组织中c-myc、 STAT3、VEGF基因mRNA的表达量均显著高于正常肝组织（P<0.01），而p53基因mRNA的表达量显著低于正常肝组织（P<0.01）。肝癌组织及癌旁组织中survivin基因的蛋白表达水平均显著高于正常肝组织（P<0.01），且肝癌组织中survivin基因的表达水平显著高于癌旁组织（P<0.01）。结论:survivin基因的异常表达在肝癌的发生发展中起促进作用，可作为治疗的理想靶点。     

KLF6基因在原发性肝癌中的表达

目的 通过研究潜在抑癌基因KLF6在肝细胞癌的表达,探讨KLF6基因作为肝癌抑制基因的可能性.方法 分别用荧光定量PCR、半定量RT-PCR和Western blot方法检测肝细胞癌及癌旁组织中KLF6基因在mRNA及蛋白水平的表达变化.结果 实时荧光定量PCR显示经过看家基因GAPDH标化的KLF6 cDNA 起始浓度,在配对癌旁组织约为肝癌组织的3倍.26例肝癌组织的KLF6 mRNA表达水平与配对癌旁组织相比,差异具有显著性意义(P<0.01).在肝癌细胞株HepG2及Hep3B,KLF6 mRNA的表达亦显著低于正常对照细胞L02(P<0.01).实验还发现,在肝细胞癌中KLF6蛋白表达变化与mRNA表达变化一致,即KLF6蛋白在癌组织及肝癌细胞的表达明显低于癌旁组织及L02(P<0.01).结论 KLF6表达下调可能是肝细胞癌的遗传学改变之一, KLF6基因可能为新的肝癌相关抑癌基因.     

miR-125b和血管内皮生长因子A在肝细胞癌中的表达及两者的相关性

目的:探讨miR-125b与血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor-A,VEGF-A)在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达情况及与两者的相关性?方法:利用real-time PCR检测肝癌?癌旁组织?肝癌细胞Huh-7?HepG2以及正常肝细胞L02中miR-125b表达,应用real-time PCR和Western blot分别检测肝癌?癌旁组织中VEGF-A mRNA和蛋白表达?转染miR-125b模拟物(mimic)上调肝癌细胞HepG2中miR-125b表达后,real-time PCR和Western blot检测HepG2细胞中VEGF-A mRNA和蛋白表达?结果:miR-125b 在人肝癌组织中的表达较癌旁组织明显降低(P < 0.05);在肝癌细胞Huh-7?HepG2中的表达较L02明显降低(P < 0.05)?VEGF-A mRNA和蛋白在人肝癌组织中的表达较癌旁组织明显升高(P < 0.05)?miR-125b mimic上调HepG2中miR-125b表达后,转染组VEGF-A mRNA和蛋白表达较空白组和阴性对照组均明显下降(P < 0.05)?结论:miR-125b在肝癌中表达明显下调,而VEGF-A表达上调;低表达的miR-125b丧失对VEGF-A表达的抑制作用可能是肝癌发生的重要机制?     

UbcH10在肝细胞癌中的表达及临床病理意义

目的研究UbcH10在肝细胞癌中的表达及其与临床病理特征的联系,初步探讨UbcH10在人肝细胞癌中的生物学意义。方法利用RT-PCR法检测正常肝脏细胞系及肝癌细胞系,和肝癌组织及对应的癌旁组织中UbcH10 mRNA的表达水平。分析UbcH10 mRNA的表达水平与肝癌临床病理特征之间的关系。利用免疫组化方法检测UbcH10蛋白在肝癌组织及其癌旁组织和正常肝脏组织中的表达。结果正常肝脏细胞系L02中UbcH10 mRNA表达水平显著低于肝癌细胞细胞系BEL-7402、Hep3B、HepG2、SMMC-7721中UbcH10 mRNA的表达水平(P<0.05)。肝癌组织中UbcH10 mRNA的表达水平显著高于其癌旁组织(P<0.05)。UbcH10 mRNA表达水平与肿瘤直径、组织病理分化程度、TNM分期、门静脉侵犯特临床病理特征显著相关(P<0.05)。肝癌组织中广泛表达UbcH10蛋白,总体阳性率为68.6%(48/70),癌旁组织和正常肝组织中较少见UbcH10蛋白阳性表达,其染色阳性率分别28.6%(20/70)和26.7%(8/30)。结论 UbcH10在肝癌细胞系及肝癌组织中高表达。UbcH10的高表达与肝癌的恶性临床病理特征相关,UbcH10可能成为潜在的分子标志物或治疗靶点。     

SUMO-1基因在肝癌中的表达及意义

目的 研究肝癌传代细胞、肝癌标本及癌旁肝组织中SUMO-1基因的表达及意义.方法 采用RT-PCR、Western blot方法在mRNA及蛋白水平检测肝癌传代细胞、肝癌标本及癌旁肝组织中SUMO-1基因的表达.结果在mRNA及蛋白水平,SUMO-1基因在肝癌传代细胞SMMC-7721、Hep3B、HepG2及肝癌标本中均明显高表达,而癌旁肝组织中SUMO-1基因明显低表达,肝癌组织和癌旁肝组织中SUMO-1表达差异有统计学意义(P<0.001).结论 SUMO-1基因在肝癌中高表达,SUMO-1可能为肝癌诊断和治疗中的一个靶点.     

P300/CBP相关因子在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的：检测P300/CBP相关因子（P300/CBP-associated factor,PCAF）在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）中的表达情况,分析其与肝癌临床病理特征之间的相关性。方法：收集40例HCC及对应癌旁组织,运用RT-PCR、免疫组化技术检测PCAF在肝癌及对应癌旁组织中的表达情况,研究PCAF蛋白表达与肝癌临床病理特征之间的相关性;应用Western blot技术检测人正常肝细胞LO2和肝癌细胞HepG2和SMMC-7721中PCAF蛋白的表达。结果：PCAF mRNA及蛋白在肝癌组织中的表达低于对应的癌旁组织（P=0.000）;PCAF蛋白低表达与肿瘤肝内转移（rs=0.413,P=0.037）、门脉侵犯（rs=0.589,P=0.011）和高TNM分期（rs=0.513,P=0.029）相关;人肝癌细胞株HepG2和SMMC-7721中PCAF 蛋白的表达较正常肝细胞株LO2降低（P=0.000）。结论：肝癌细胞系及肝癌组织中PCAF表达下调,且PCAF的表达下调与肝癌的恶性病理特征相关。     

原发性肝癌中AnnexinA2和P19的表达及意义

目的检测AnnexinA2和P19在原发性肝癌中的表达并探讨其在肝癌发生发展及转移中的作用。方法原发性肝癌62例,分别取癌组织及癌旁肝组织,采用IHC、RT-PCR及Western blot法分别检测AnnexinA2和P19 mRNA及蛋白的表达。结果肝癌组织中AnnexinA2 mRNA及蛋白表达量均明显高于癌旁肝组织(P<0.05),肝癌组织中P19 mRNA及蛋白表达量均明显低于癌旁肝组织(P<0.05);AnnexinA2、P19阳性表达与肝癌患者的性别、年龄和肿瘤大小均无关(P>0.05),而与乙肝表面抗原、组织分级和脉管内有无癌栓均有关(P<0.05)。结论联合检测AnnexinA2、P19 mRNA及蛋白在原发性肝癌中的表达水平,对判断其发生和转移有重要价值,可为临床治疗和判断预后提供依据。     

原发性肝癌中AnnexinA2和P19的表达及意义

目的检测AnnexinA2和P19在原发性肝癌中的表达并探讨其在肝癌发生发展及转移中的作用。方法原发性肝癌62例,分别取癌组织及癌旁肝组织,采用IHC、RT-PCR及Western blot法分别检测AnnexinA2和P19 mRNA及蛋白的表达。结果肝癌组织中AnnexinA2 mRNA及蛋白表达量均明显高于癌旁肝组织（P〈0.05）,肝癌组织中P19 mRNA及蛋白表达量均明显低于癌旁肝组织（P〈0.05）;AnnexinA2、P19阳性表达与肝癌患者的性别、年龄和肿瘤大小均无关（P〉0.05）,而与乙肝表面抗原、组织分级和脉管内有无癌栓均有关（P〈0.05）。结论联合检测AnnexinA2、P19 mRNA及蛋白在原发性肝癌中的表达水平,对判断其发生和转移有重要价值,可为临床治疗和判断预后提供依据。     

uPA在肝癌细胞株及肝癌组织中的表达及意义

目的:从mRNA水平探讨uPA在不同转移潜能肝癌及恶性黑色素瘤细胞株中的表达,从蛋白水平探讨uPA在肝癌组织中的代表表达及其与肝癌转移的关系。方法:检测uPA在不同转移潜能人肝癌及恶性黑色素瘤细胞株中的mRNA表达,用免疫组织化学方法检测uPA在肝癌组织中的蛋白表达。结果:uPAmRNA在高转移潜能肝癌和恶性黑色素瘤细胞株呈高表达,在相应低潜能转移细胞株呈低表达;uPA蛋白在肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织和正常对照组,在有转移及静脉癌栓形成的肝癌组织阳性表达高于无转移及无癌栓者,癌巢边缘的癌细胞表达强于癌巢中央,血管内癌栓呈强阳性表达。结论:uPA在肝癌的的生长、侵袭和转移中起重要作用,可能作为治疗的操作、预防转移复发的对象。     

γ-谷氨酰转移酶ⅠmRNA亚型联合甲胎蛋白mRNA检测对肝癌的诊断价值

目的：探讨γ-谷氨酰转移酶ⅠmRNA（GGTⅠmRNA）亚型和甲胎蛋白（AFP）mRNA检测对肝癌的诊断价值。方法：运用RT—PCR检测肝脏组织标本和人肝细胞株QSG-7701、人肝癌细胞株HepG2中GGTⅠmRNAA、B、C3种亚型和AFP mRNA的表达。结果：AFP mRNA在肝癌组织中的表达显著高于非癌肝组织、癌旁组织和远癌组织。GGTⅠmRNAA亚型主要在非癌肝组织中表达，B亚型主要在远癌组织、癌旁组织、癌组织中表达。人肝细胞株QSC-7701中GGTⅠmRNAC亚型阳性表达。人肝癌细胞株HepG2中AFP mRNA、GGTⅠ mRNAB亚型表达阳性。GGTⅠmRNAB亚型联合AFP mRNA诊断肝癌的阳性率可达98．0％，小肝癌的阳性率达95．2％。结论：在肝脏癌变的过程中存在着GC-TⅠmRNAA亚型向B亚型的转化，联合监测GGTⅠmRNA亚型和AFPmRNA有助于对肝癌的早期诊断。     

肝细胞癌中下调STAT3对caspase3、muc1及cyclinD1表达影响的机制研究

目的:研究在肝细胞癌中STAT3下调后,caspase3、muc1及cyclin D1表达量的变化,筛选出针对肝癌STAT3信号通路的关键分子。方法:选择2014年5月-2016年5月,40例来本院进行治疗的肝癌患者为研究对象,分别取肝癌组织和癌旁正常组织为研究材料。进行免疫荧光、Western blot分析肿瘤组织和细胞中STAT3及P-STAT3蛋白的表达。根据GENEBANK上提供的STAT3编码序列,筛选目标序列,取相同目标序列为潜在siRNA靶位点,BLAST比对后设计多个靶序列siRNA,以荧光素标记,体外转染细胞株,筛选转染效率最佳si RNA序列。用RT-qPCR技术分析人肝癌细胞株中caspase3、muc1、cyclin D1、P21、MMP2 mRNA的表达量,Western blot分析转染后细胞株中STAT及P-STAT3蛋白的表达。结果:通过Western blot检测肝癌组织和癌旁正常组织中STAT3和P-STAT3蛋白的表达量发现,肝癌组织中的STAT3和P-STAT3蛋白的表达量比癌旁正常组织中的表达量高;下调STAT3可以抑制肝癌细胞Hep-G2的增殖和体外侵袭能力,促进细胞凋亡,沉默STAT3基因,其STAT3信号通路上的信号分子也在不同时间点显著性下调表达。结论:由此可见阻断或下调STAT3信号通路可以抑制肝癌细胞増殖及侵袭生物学行为影响,STAT3有可能是肝脏肿瘤治疗新的优良分子靶点。     

Hepsin蛋白对肝癌细胞生长的影响

目的:探讨Hepsin蛋白对肝癌细胞生长和细胞凋亡的影响。方法:运用RT-PCR技术检测肝癌组织样品肝癌细胞系中Hepsin基因的表达水平,并从原发性肝癌患者的癌组织中扩增Hepsin基因编码区序列,该序列被克隆并构建pCMV-tag-HS表达质粒。将pCMV-tag-HS表达质粒转染人肝癌细胞系HepG2细胞、Bel-7402细胞,观察Hepsin蛋白对肝癌细胞的增殖能力和细胞凋亡效应的影响。结果:Hepsin基因在临床肝癌组织和人正常肝细胞L-02细胞中高表达,在人肝癌细胞系Bel-7402细胞、HepG2细胞和临床肝癌癌旁组织不表达或低表达,Hepsin蛋白可以增强肝癌细胞系的增殖能力,同时抑制肝癌细胞凋亡。结论:Hepsin蛋白促进肝癌细胞生长并抑制肝癌细胞凋亡。     

Sonic Hedgehog信号通路分子Shh和Smo在肝细胞肝癌中表达与意义

目的:探讨Sonic Hedgehog(SHH)信号通路分子Shh和Smo在肝细胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及其意义?方法:用RT-PCR方法检测10例HCC组织及相应癌旁组织和肝癌细胞系HepG2?Huh7中Shh?Smo mRNA的表达?采用免疫组化方法检测30例肝癌组织及10例正常肝组织中Shh?Smo蛋白的表达?结果:RT-PCR结果显示HCC组织中Shh?Smo mRNA的表达率显著高于癌旁组织(P < 0.05);Shh?Smo mRNA在Huh7中的表达强度高于HepG2,但两者间无显著性差异(P > 0.05)?免疫组化结果显示Shh?Smo蛋白在HCC组织中阳性率分别为63.3%(19/30)?76.7%(23/30);Smo蛋白的表达与肿瘤大小相关(P < 0.05)?Shh?Smo蛋白在正常肝组织中均无表达?结论:Shh和Smo在肝癌中高表达,表明SHH信号通路可能参与肝癌的发生,为肝癌防治提供新的依据?     

Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1促进肝癌细胞的转移

目的:探讨Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(ROCK1)在肝癌中的表达及在肝癌侵袭中的作用?方法:荧光定量PCR(real-time PCR)检测肝癌及癌旁组织中ROCK1的mRNA表达水平,同时检测肝癌细胞系及正常人肝细胞中ROCK1mRNA表达水平,免疫组织化学染色(IHC)法检测肝癌及癌旁组织中ROCK1蛋白的表达量,并通过在肝癌细胞株中过表达及干扰ROCK1分析ROCK1蛋白对肝癌细胞转移的作用?结果:60对样本中有42对ROCK1的mRNA表达水平在肝癌组织中高于癌旁组织,免疫组织化学染色提示肝癌组织中ROCK1蛋白表达量高于癌旁组织?在体外肝癌细胞的功能实验中,过表达ROCK1能促进HepG2细胞的侵袭和转移,而干扰ROCK1的表达能减少SMMC-7721细胞的侵袭和转移?结论:ROCK1在肝癌组织中高表达,过表达ROCK1能促进肿瘤的侵袭及转移,ROCK1可能成为临床治疗中抑制肿瘤侵袭和转移的靶点?     

肝细胞肝癌(HCC)中PDGF-A的表达及其临床意义

 目的    阐明血小板源性生长因子A(platelet-derived growth factor A,PDGF-A)在人肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达情况及临床意义。方法  在手术切除的50例HCC组织中,应用定量RT-PCR的方法检测PDGF-A mRNA水平,并分析其与临床病理分期之间的关系。采用Western blot检测正常肝细胞株L02和7株肝癌细胞株中PDGF-A蛋白质水平。运用免疫组化方法在43例HCC石蜡组织中检测PDGF-A蛋白质水平。再利用免疫荧光双染色方法检测HCC组织中间质区域炎症细胞中PDGF-A与炎症细胞标志物(CD4、CD8、CD19和CD68)共表达情况。结果    与相应癌旁肝组织相比,HCC癌组织PDGF-A mRNA水平升高,约50%(24/50例)癌组织PDGF-A mRNA水平是癌旁肝组织的2倍及以上,这种差异在BCLC 0期和C期的HCC病例中更为显著。PDGF-A蛋白质见于L02、SMMC-7721、HCCLM3和MHCC97-H细胞株,而HepG2、Hep3B、Huh7和BEL-7402细胞株未检测到该蛋白质。近60%的HCC病例中,肝癌细胞表达PDGF-A,阳性染色有两种分布方式:弥漫于胞质内及在细胞质/细胞膜局部聚集。PDGF-A也大量分布于肿瘤间质区域和紧邻癌组织间质区域的炎症细胞(CD4+、CD8+、CD19+和CD68+)中。结论    HCC癌组织PDGF-A基因表达高于癌旁肝组织,在早期和进展期(BCLC 0和C期)病例更为明显;PDGF-A蛋白表达于HCC癌细胞和间质炎症细胞。     

miR-196a在肝癌细胞中的表达及其促增殖作用

目的: 探讨miR-196a在肝癌组织的表达水平和对肝癌Hep3B细胞增殖的影响,阐明其促进肝癌细胞增殖的可能机制。方法: 收集20例肝癌组织及对应癌旁组织,培养人正常肝细胞株L02及肝癌细胞株SMMC-7721、HepG2和Hep3B,采用qRT-PCR法检测miR-196a mRNA在肝癌组织和对应癌旁组织及肝癌细胞株中的表达水平。取处于对数生长期人肝癌Hep3B细胞随机分为对照组、miR-196a mimics转染组和miR-196a inhibitors转染组,MTT法检测各组Hep3B细胞增殖活力,qRT-PCR法检测各组Hep3B细胞miR-196a的表达,流式细胞术检测各组Hep3B细胞周期变化,qRT-PCR和Western blotting法检测各组Hep3B细胞miR-196a潜在靶点叉头转录因子(FOXO1)的表达水平。结果: 肝癌组织中miR-196a mRNA表达水平明显高于相应癌旁组织(P<0.05);miR-196a mRNA在人肝癌SMMC-7721、HepG2和Hep3B细胞中的表达水平明显高于人正常肝L02细胞(P<0.05)。与对照组比较,miR-196a mimics转染组Hep3B细胞中miR-196a mRNA表达水平明显升高(P<0.05),而miR-196a inhibitors转染组Hep3B细胞中miR-196a mRNA的表达水平明显降低(P<0.05)。与对照组比较,miR-196a mimics转染组Hep3B细胞增殖率明显升高(P<0.05), miR-196a inhibitors转染组Hep3B细胞增殖率明显降低(P<0.05),且呈时间依赖性。与对照组比较,转染24 h时,miR-196a inhibitors转染组Hep3B细胞G₀/G₁期细胞百分率明显升高(P<0.05),S期细胞百分率明显降低(P<0.05)。与对照组比较, miR-196a mimics转染组FOXO1 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论: miR-196a可能通过FOXO1促进肝癌细胞的增殖,提示miR-196a可能成为肝癌诊断和治疗的新靶点。     

TRAF3在肝细胞肝癌中的表达及意义

目的探讨肿瘤坏死因子受体相关因子3(TRAF3)在肝细胞癌(简称肝癌)发生、发展中的意义。方法采用免疫组化方法检测50例原发性肝癌组织、12例癌旁肝组织及10例正常肝组织中TRAF3蛋白的表达,分析其与肝癌的临床病理参数的关系。Western blot法检测TRAF3在肝癌高分化细胞系HepG2、低分化细胞系SMMC7721和人正常肝细胞系L-02中的表达差异。结果 TRAF3主要定位于细胞质,其阳性率在正常肝组织(100%)及癌旁组织(91%)明显高于肝细胞癌组织(52%)。TRAF3在肝癌的表达与临床分期相关,与患者性别、年龄、癌灶数目、肿瘤大小、瘤栓有无、乙肝表面抗原(HBsAg)阴阳性、甲胎蛋白(AFP)、肿瘤包膜是否完整均无关。TRAF3总蛋白在正常肝细胞系中的表达量明显高于肝癌细胞系,且在肝癌高分化的细胞系中表达量高于低分化细胞系。结论 TRAF3在肝癌中的表达明显下调,且在肝癌中的表达水平与肝癌的侵袭程度相关,提示TRAF3可能抑制肝癌的浸润和转移。