VEGF-C反义寡核苷酸对卵巢癌细胞SKOV3的黏附、侵袭能力的影响

目的:探讨VEGF-C反义寡核苷酸(VEGF-C,ASODN)对人卵巢癌细胞SKOV3黏附、侵袭能力的影响.方法:以VEGF-C基因编码区为靶点合成反义寡核苷酸,脂质体介导转染.MTT法检测卵巢癌细胞与细胞外基质黏附能力;利用transwell小室,检测卵巢癌细胞侵袭人工基底膜的能力;免疫组化法检测细胞中VEGF-C蛋白表达,western blot检测细胞中MMP-2蛋白表达.结果:与空白对照组及正义序列转染组相比,ASODN组对细胞外基质黏附率明显降低(P＜0.01),穿透重组基质膜数目明显下降(P＜0.01),细胞中VEGF-C、MMP-2蛋白表达明显下降(P＜0.01).结论:VEGF-C ASODN可明显抑制卵巢癌细胞体外实验中的黏附和侵袭能力,下调MMP-2的表达可能是其作用途径.     

生存素反义寡核苷酸对人子宫内膜癌细胞增殖的抑制作用

 目的 探讨生存素（survivin）反义寡核苷酸（antisense oligonucleotide,ASODN）对人子宫内膜癌细胞HEC-1B增殖的抑制作用。方法 实验分空白对照组（control组）、单纯脂质体对照组（Lip组）、正义链转染对照组（SODN组）、ASODN转染组（ASODN组）4组。人工合成正、反义寡核苷酸,经脂质体将survivin正、反义寡核苷酸转染入子宫内膜癌细胞48 h后收集各组细胞。免疫印迹（Western blot）法检测各组细胞生存素表达情况,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,四甲基偶氮唑蓝试验（MTT）法检测细胞生长抑制情况。结果 脂质体介导生存素反义寡核苷酸转染后的子宫内膜癌细胞出现生存素蛋白表达明显下降;ASODN转染组细胞凋亡率和增殖抑制率均明显高于各对照组（P<0.05）,而各对照组间差异无统计学意义（P>0.05）。结论 生存素反义寡核苷酸转染子宫内膜癌细胞能下调生存素蛋白表达,诱导子宫内膜癌细胞凋亡,抑制细胞增殖,对子宫内膜癌是一种有效的基因疗法。     

survivin反义寡核苷酸诱导胃癌细胞凋亡及对多西他赛的增敏作用

目的探讨生存素（survivin）反义寡核苷酸（antisense oligonucleotide,ASODN）对人胃癌细胞株SGC7901的凋亡诱导、对多西他赛的化疗增敏作用。方法设计合成特异性靶向survivin ASODN。将胃癌细胞株分为空白对照组（Sham组）、单纯脂质体对照组（Lip组）、正义寡核苷酸转染对照组（Lip-SODN组）、ASODN转染组（Lip-ASODN组）。转染48 h后,Western blot法检测各组细胞survivin表达情况,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,MTT法检测转染细胞对多西他赛的敏感性。结果脂质体介导survivin ASODN转染后的胃癌细胞survivin蛋白表达明显下降,细胞凋亡率明显高于各对照组（P〈0.05）,对多西他赛的IC50值明显低于各对照组（P〈0.05）,细胞生长抑制率明显高于各对照组（P〈0.05）。结论survivin ASODN转染胃癌细胞能下调survivin蛋白表达,诱导胃癌细胞凋亡,抑制细胞增殖,增强多西他赛化疗敏感性。     

生存素反义寡核苷酸对人胃癌细胞增殖的抑制作用

目的 探讨生存素（survivin）反义寡核苷酸（ASODN）对人胃癌细胞SGC7901增殖的抑制作用。方法 设计合成特异性靶向生存素的反义寡核苷酸。胃癌细胞株SGC7901分为4组：空白对照组、单纯脂质体对照组、正义链转染对照组、ASODN转染组。作用48h后收获各组细胞。Westernblot法检测各组细胞生存素表达情况，流式细胞仪检测各组细胞凋亡率，MTT法检测各组细胞的生长抑制率。结果 脂质体介导生存素反义寡核苷酸转染后的胃癌细胞出现生存素蛋白表达明显下降；ASODN转染组细胞凋亡率明显高于各对照组（P〈0．05），而各对照组问差异无显著性（P〉0．05）；ASODN转染组细胞的抑制率明显高于各对照组（P〈0．05），而各对照组问差异无显著性（P〉0．05）。结论 生存素反义寡核苷酸转染胃癌细胞能下凋生存素蛋白表达，诱导胃癌细胞凋亡，抑制细胞增殖，具有明显的抗癌作用。     

Survivin-ASODN对肝癌SMMC-7721细胞凋亡的促进作用及其机制

目的：应用反义寡核苷酸（ASODN）技术靶向抑制生存素（survivin）基因,研究其对肝癌 SMMC-7721细胞凋亡的影响,阐明survivin反义寡核苷酸（survivin-ASODN）促进SMMC-7721细胞凋亡的作用机制。方法：设计合成survivin-ASODN序列（FAM荧光素标记）。利用脂质体介导法分别用浓度为100、200、300、400和600 nmol?L-1 survivin-ASODN转染SMMC-7721细胞(ASODN转染组),并设空白对照组、空脂质体对照组 和正义寡核苷酸（SODN）对照组。应用流式细胞术(FCM)检测不同浓度survivin-ASODN体外转染SMMC-7721细胞24、48和72 h后SMMC-7721细胞凋亡率及细胞周期;Western blotting法检测survivin蛋白表达水平。结果：与各对照组比较,荧光素标记的ASODN转染SMMC-7721细胞24 h后,细胞生长开始受到抑制,细胞凋亡率增加,呈现剂量-时间依赖性（P<0.05）;作用48 h后,ASODN转染组细胞在G1期前出现明显的亚二倍体凋亡峰,G0/G1期细胞明显减少（P<0.05）,G2/M期细胞显著增加（P<0.05）,细胞被阻滞于G2/M期。与各对照组比较,不同浓度ASODN转染组SMMC-7721细胞survivin蛋白表达水平下降（P<0.05）,且随作用时间的延长而降低（P< 0.05）。结论：survivin-ASODN通过抑制survivin蛋白表达、改变细胞周期进程等机制促进SMMC-7721细胞凋亡,并且呈现时间-剂量依赖性。     

存活蛋白反义寡核苷酸诱导食管癌细胞凋亡的研究

目的观察存活蛋白反义寡核苷酸转染对食管癌细胞凋亡、增殖、对化疗药物敏感性的影响。方法设计合成特异性存活蛋白反义寡核苷酸（ASODN）。食管癌EC109细胞系分为6组：空白对照组、空脂质体转染对照组、正义链转染对照组、160、200、240nmol／L ASODN转染组。作用20h后收获各组细胞,Western blot法检测各组细胞生存素表达情况。TUNEL法检测各组细胞的凋亡情况。结果各ASODN转染组细胞存活蛋白表达有不同程度减弱,细胞变圆、折光增强、细胞碎片形成等,而各对照组细胞生长良好。各ASDON转染组细胞凋亡指数明显高于各对照组（P〈0．05）,以240nmol／L转染组最明显（P〈0．05）。结论封闭食管癌细胞存活蛋白基因,能下调存活蛋白的表达,从而诱导食管癌细胞凋亡,抑制食管癌的发展。     

反义硫代寡核苷酸对786-O细胞survivin基因的表达及生长抑制作用

目的研究survivin反义寡核苷酸对肾透明细胞癌786O细胞表达survivin蛋白、细胞凋亡、增殖的影响。方法设计并合成特异性靶向survivin的反义寡核苷酸(ASODN)。肾透明细胞癌细胞株786O分为6组:空白对照组、脂质体转染对照组、正义链转染对照组、200、400和600nmol/LASODN转染组。作用24h后收获各组细胞。倒置显微镜及透射电子显微镜观察细胞形态变化,免疫组化法检测各组细胞survivin表达情况和流式细胞术检测各组细胞周期变化和凋亡指数,MTT法检测survivin反义寡核苷酸对各组细胞的生长抑制率。结果电镜下可以见到典型凋亡样改变,而各对照组细胞生长良好;各ASODN转染组细胞survivin表达有不同程度减弱;各ASODN转染组细胞凋亡指数明显高于各对照组(P<0.05),以600nmol/LASODN转染组最为明显(P<0.05),而各对照组间差异无显著性(P>0.05)。结论不同浓度survivinASODN转染后能下调survivin蛋白表达,诱导肾透明细胞癌786O细胞凋亡,抑制786O细胞增殖。     

miR-197靶向调节CD82对结肠癌细胞侵袭转移的影响

【摘要】 目的 探讨下调microRNA-197 (miR-197)对结肠癌HCT116细胞侵袭转移能力的影响及其作用机制。方法 将对数生长期HCT 116细胞随机分为miR-197反义寡核苷酸（inhibitor）组、无义序列阴性对照（NC）组、空白对照（Mock）组,采用脂质体介导转染法,将miR-197反义寡核苷酸（miR 197 inhibitor）转染HCT116细胞。运用荧光定量PCR (qRT-PCR)检测miR-197的表达水平;通过生物信息学预测miR-197靶基因,应用Western blot法检测CD82蛋白的表达;采用transwell小室实验检测HCT116细胞的侵袭、迁移能力的改变。结果 miR-197反义寡核苷酸转染HCT116细胞后,inhibitor组miR-197的表达较NC组和Mock组明显降低(P＜0.05);下调miR-197的表达后,inhibitor组的CD82蛋白表达较其余两组显著增加(P＜0.05);转染miR-197反义寡核苷酸的HCT116细胞的侵袭与迁移能力inhibitor组较NC组、Mock组均降低 (P＜0.05)。结论 下调结肠癌HCT116细胞中miR-197的表达能抑制肿瘤细胞的侵袭和转移,其机制可能与其靶点CD82表达增加有关,这将为结肠癌的治疗提供新的靶点。     

Survivin反义寡核苷酸诱导胃癌SGC7901细胞凋亡及对白藜芦醇的增敏作用

目的:观察survivin反义寡核苷酸(ASODN)对胃癌SGC7901细胞的增殖、凋亡及对白藜芦醇敏感性的影响. 方法:人工合成survivin硫代ASODN,通过脂质体转染胃癌细胞株(SGC7901)后,用MTT法检测细胞毒作用;用荧光染色、流式细胞术检测细胞凋亡;RT-PCR、免疫组化技术检测survivin mRNA及蛋白的表达. 结果: ①survivin ASODN抑制胃癌SGC7901细胞的增殖呈时间和剂量依赖性; ②survivin ASODN处理组SGC7901细胞24 h后凋亡率为(33.6±1.2)%,正义寡核苷酸(SODN)组为(10.7±0.8)%,两组相比,差异有显著性(P＜0.05);③survivin ASODN处理组SGC7901细胞survivin蛋白及mRNA的表达水平显著下降. ④survivin ASODN和白藜芦醇联合处理组SGC7901细胞24,48,72 h生长抑制率,显著高于单用survivin ASODN组(P＜0.05)和单用白藜芦醇组(P＜0.05). 结论:survivin ASODN能够抑制胃癌SGC7901细胞的增殖、诱导凋亡,并能增加胃癌细胞株SGC7901对白藜芦醇的敏感性,推测可能通过下调survivin mRNA及蛋白表达而起作用.     

c-raf-1反义寡核苷酸转染对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制作用

目的：探讨c-raf-1基因反义寡核苷酸转染对人卵巢癌SKOV，细胞增殖的抑制作用及其分子机制。方法：实验分3组：正常对照组、c-raf-1正义治疗组、c-raf-1反义治疗组。脂质体转染后不同时间分别进行MTT试验、集落形成试验、荧光显微镜检测、蛋白质荧光强度测定，以观察不同条件处理后各组细胞的增殖、凋亡、蛋白质表达有无差别。结果：反义治疗组与正义治疗组比较：转染72h OD值分别0．272与1．307（P〈0．05）；克隆形成率分别为30．6％与75．0％（P〈0．05）；凋亡率分别为19．7％与9．2％（P〈0．05），同时明显地下调P74蛋白质的表达水平（P〈0．05）。结论：c-raf-1反义寡核苷酸对人卵巢癌SKOV，细胞的增殖有明显的抑制作用。     

67 kDa层粘连蛋白受体在胆囊癌中的表达及意义

目的:研究67 kDa层粘连蛋白受体(67LR)在胆囊癌中的表达情况与其生物学行为之间的关系.方法:应用免疫组织化学SP法检测40例胆囊癌、21例慢性胆囊炎及9例胆囊腺瘤组织中67LR的表达.结果:胆囊癌组织中67LR阳性表达率为52.50%,明显高于慢性胆囊炎(P＜0.01),而与胆囊腺瘤差异无显著性(P＞0.05).67LR阳性表达率淋巴结转移者明显高于无淋巴结转移者(P＜0.005).结论:67LR可能在促进胆囊腺瘤恶变以及胆囊癌细胞获得浸润、转移能力等方面起作用.     

Identification of a parasite-specific cytoplasmic 67 kDa Entamoeba histolytica antigen recognized by patient sera and monoclonal antibodies.

To avoid false positive reactions in tests for anti-ameba antibodies, we wanted to identify parasite-specific component(s). Amebiasis patient sera recognized an antigen of 67 kDa by immunoblotting in an active E. histolytica fraction obtained by ion exchange chromatography. Monoclonal antibodies against the fraction were made. Antibody 3G2 reacted with three antigenic components of 67, 40 and 25 kDa and in the immunocytology with an epitope located in the cytoplasm of E. histolytica trophozoites. ELISAs using the isolated parasite fraction and monoclonal antibody 3G2 (to assay inhibition of binding) were capable of distinguishing specific reactivity in sera from amebiasis patients.     

日本血吸虫成虫67kDa分子抗原的纯化及其对血吸虫病的诊断和疗效考核

目的 为检测日本血吸虫成虫67kDa分子抗原(SjAWA67)对血吸虫病的诊断及疗效考核价值。方法 通过SDS-PAGE和电渗方法,从日本血吸虫成虫抗原中分离纯化出67kDa分子抗原,并用该抗原包被酶标反应板微孔,进行ELISA检测。结果 SjAWA67的纯度已达到电泳纯和免疫纯,对急、慢性血吸虫病患血清的捡出率分别为100％和95％,与正常人血清、肝吸虫病和肺吸虫病患血清均未出现明显的交叉反应,44例血吸虫病患治疗后3、6和12个月后的阴转率分别达45．5％、75．0％和90,9％。结论 SjAWA67分子抗原具有较好的疗效考核价值和现场应用前景。     

125I偶联反义寡核苷酸抑制人肾癌细胞系生长及Ki-67基因表达

目的　探讨Ki- 6 7基因翻译起始区反义寡核苷酸偶联12 5I对人肾癌细胞Ki- 6 7基因表达和细胞生长的影响。方法　人工合成反义寡核苷酸 ,氯胺 -T法偶联12 5I,脂质体包装后转染肾癌 786 - 0系细胞 ,采用免疫组化法、MTT法和原位末端标记法 (TUNEL)研究肾癌细胞Ki- 6 7抗原的表达、细胞增殖抑制和凋亡情况。结果　经免疫组化检测发现Ki- 6 7抗原表达下降至 ( 19.3± 1.0 ) % ,MTT法表明细胞抑制率达 ( 33.3± 3.5 ) % ,TUNEL法显示细胞凋亡达 ( 2 9.1± 0 .6 ) %。结论　12 5I偶联反义寡核苷酸能阻止人肾癌Ki- 6 7基因的表达 ,抑制细胞生长 ,并诱导细胞凋亡     

细粒棘球绦虫66 kDa抗原的超微结构定位

目的：确定细粒棘球绦虫66kDa抗原在虫体组织超微结构中的精确定位。方法：本实验采用金标免疫组织化学方法，电镜观察66kDa抗原在细粒棘球绦虫原头蚴及成虫超薄切片中的定位。结果：该抗原定位于细粒棘球绦虫原头蚴及成虫虫体的体表、微毛内外、皮层、皮层合体细胞体(核周体)内和皮下肌纤维中。结论：该抗原可能由皮层合体细胞产生。     

穿透支原体P35蛋白在大肠杆菌中的表达与鉴定

目的为研究穿透支原体(Mpe)35 kD脂质相关膜蛋白(P35)的生物学活性,构建其原核细胞表达载体,并在大肠杆菌(E.coli)中表达.方法 PCR扩增p35基因片段,克隆至pQE31载体, 用PCR介导的突变将p35基因中两个“TGA”终止密码子定点突变为“TGG”,使其在E.coli中编码表达色氨酸.IPTG诱导pQE31/P35在E.coli 中表达目的蛋白rP35,经Ni-NTA Spin亲和纯化, Western blot分析鉴定表达产物. 结果 PCR扩增出约1kb的DNA片段,克隆至pQE31载体,筛选到阳性克隆pQE31/P35,测序分析 p35基因中两个“TGA”终止密码子成功突变成“TGG”. IPTG诱导pQE31/p35在E.coli 中表达分子量约37.4 kD的蛋白质,Western blot分析鉴定其为rP35. 结论构建的pQE31/p35原核表达载体,在E.coli中成功地表达rP35.