近5年来当归多糖的研究进展

当归为伞形科当归属植物,以根入药,具有补血调经、活血止痛、润肠通便之功效.近年来对当归多糖(angelica polysaccharides,APS)的研究逐步深入,其制备工艺逐步优化,并深入研究其对机体免疫系统、血液系统的作用,及抗肿瘤、抗辐射损伤、抗氧化的良好功效.笔者拟就近5年来对当归多糖的研究进展作如下综述. 1 当归多糖的制备 1.1炮制工艺对多糖含量的影响 吕洁丽等[1]测得微波中火干燥法所得当归多糖含量最高,真空干燥法所得当归多糖含量最低;微波干燥法制备的当归多糖在高浓度组既能直接促进小鼠脾脏淋巴细胞增殖,又能增加伴刀豆球蛋白A诱导的T淋巴细胞增殖,远红外干燥法制备的当归多糖在任何浓度及条件下均无明显活性.罗燕等[2]发现酒炙、清炒当归的多糖含量明显高于生品,这对临床合理选用炮制品有一定意义.临床用药时,既要考虑不同炮制方法对中药有效成分含量的影响,还要考虑对中药药效的影响,应合理选用炮制品.     

竹节参多糖对环磷酰胺致免疫低下小鼠的恢复作用研究

目的:研究竹节参多糖(Panax japonicus polysaccharides)对环磷酰胺所致免疫低下模型小鼠免疫功能的调节作用。方法:腹腔注射环磷酰胺(cyclophosphamide,Cy)制备免疫功能低下模型,计算脾脏指数;MTT法检测脾淋巴细胞增殖活性;分光光度法检测血清溶血素的含量;QHS法检测脾脏分泌抗体形成细胞的能力;流式细胞术检测外周血NK细胞百分比。结果:竹节参多糖能提高免疫低下小鼠的脾脏指数;显著促进脾淋巴细胞的增殖;促进血清溶血素的生成及QHS反应;提高外周血NK细胞比例。结论:竹节参多糖具有较好的免疫增强作用,对免疫低下小鼠的免疫系统具有恢复作用。     

不同加工方法对白及多糖含量的影响

目的:比较不同加工方法对白及中多糖含量的影响。方法:采用蒽酮-硫酸显色、紫外可见分光光度法测定不同加工方法白及样品的多糖含量。结果:不同加工方法对白及中多糖成分含量有一定的影响,多糖含量依次为:鲜白及去皮切片蒸20min去皮切片煮20min去皮切片。结论:鲜白及采用去皮、切片、60℃烘干方法加工其多糖含量最高。     

不同产地加工方法对杜仲多糖含量的影响

目的比较不同加工方法对杜仲多糖含量的影响,为建立和完善杜仲的合理产地加工提供科学依据。方法以葡萄糖为对照品,采用紫外分光光度法测定杜仲多糖含量。结果不同加工方法对杜仲多糖含量有影响:同一干燥方法,杜仲发汗与未发汗多糖量存在显著差异,未发汗杜仲高于发汗杜仲;同一性状,不同干燥方法,微波干燥后晒干和烘干多糖量与阴干和晒干存在显著差异,多糖量以微波干燥10 min后晒干最高;不同性状,微波干燥10 min后晒干多糖量板片状与宽丝状存在显著差异,板片状高于宽丝状。结论临床应用如以杜仲多糖的生物活性为主,建议杜仲采用板片状、不发汗,微波辅助干燥后晒干的加工方法。     

不同来源黄芪多糖提取物对淋巴细胞增殖的影响及其化学组成分析

目的 考察不同来源黄芪多糖提取物对体外脾淋巴细胞增殖的影响,明确其活性差异,对比分析其化学组成.方法 MTT法分别检测黄芪多糖提取物对正常脾淋巴细胞、ConA活化脾淋巴细胞增殖的影响;硫酸苯酚法结合重量法分别测定样品中总糖、多糖、醇不溶组分含量.结果 各批样品对正常脾淋巴细胞均有显著的促增殖作用(P＜0.01或P＜0.05),除SSK外,各样品在低浓度时促增殖作用较强,促增殖率为39.4％ ～ 186.4％;XZX、XHS、SLH1对ConA诱导的脾淋巴细胞增殖具有显著抑制作用(P＜0.01),且在4 mg·ml-时抑制作用最强,抑制率为52.9％～104.0％,作用大小为XZX＞XHS＞SLH1,其余各批样品无明显抑制作用;各批样品醇不溶组分含量为18.74％～60.67％,多糖含量为7.22％～44.74％,大小顺序为XZX＞ XHS＞ SLH1＞ SLH2＞ SSK.结论 不同来源黄芪多糖提取物的质量差异十分显著.     

板蓝根多糖对小鼠免疫功能的调节作用

目的:研究板蓝根多糖对小鼠免疫功能的影响.方法:采用腹腔注射环磷酰胺的方法制造小鼠免疫功能低下模型,灌胃给予不同剂量的板蓝根多糖,用SPA花环技术测T淋巴细胞亚群的比例,免疫比浊法测Ig的含量,双抗体夹心ABC-ELISA法测sIL-2R含量,检测胸腺指数及MTT法检测脾淋巴细胞增殖和迟发型超敏反应情况.结果:板蓝根多糖可提高环磷酰胺模型小鼠外周血CD3+、CD4+T细胞百分率,降低血清sIL-2R含量,促进血清IgM、IgG和IgA等免疫球蛋白的生成,恢复小鼠胸腺指数及促进脾淋巴细胞增殖和迟发型超敏反应能力.结论:板蓝根多糖可调节环磷酰胺模型小鼠的免疫功能.     

当归多糖组分促进淋巴细胞增殖及对IL-2和IFN-γ的诱生作用

目的:观察当归多糖及其3个组分对淋巴细胞增殖和细胞因子IL-2、IFN-γ的影响.方法:机械分散法制备小鼠单个脾细胞悬液;MTT法检测细胞增殖;酶联免疫法测定培养上清液中IL-2和IFN-γ的浓度.结果:当归多糖及其3个组分在30～100 μg/ml剂量范围内,能显著促进脾细胞的增殖;其中组分AP-3能够显著促进巨噬细胞、混合淋巴细胞的增殖反应,剂量依赖性地增加细胞上清液中IL-2和IFN-γ的浓度.结论:当归多糖能够活化巨噬细胞和T细胞,还可以通过细胞因子IL-2、IFN￣γ发挥免疫调节作用.     

红芪多糖3促进小鼠脾淋巴细胞增殖的差异蛋白质点分析

目的:分析红芪多糖3(HPS-3)作用于小鼠脾淋巴细胞后的差异蛋白质点,探讨红芪多糖3调节免疫的分子生物学机制。方法:提取正常小鼠脾淋巴细胞进行体外培养,用MTT法检测红芪多糖对小鼠脾淋巴细胞的刺激增殖作用,ELISA试剂盒测定培养上清中的IL-2含量,并运用双向电泳技术对脾淋巴细胞总蛋白进行分离,银染显色,PDQuest软件对凝胶图谱进行差异点分析,找出差异明显的蛋白质点。结果:HPS-3能够提高T淋巴细胞增殖能力和IL-2的分泌,实验所得2-DE凝胶图谱经PDQuest软件分析得出以下结果:HPS-3组中共有16个蛋白点发生明显改变,其中11个蛋白质点高表达,4个蛋白质点消失,1个蛋白质点低表达。结论:HPS-3能促进脾淋巴细胞增殖,显著影响小鼠脾淋巴细胞蛋白质表达。     

人参多糖的分级及其免疫活性初探

目的:采用柱分离对人参多糖进行分级,并考察各级分对脾淋巴细胞增殖的刺激作用,找出活性部位.方法:用快流速Q-琼脂糖凝胶( Q-Sepharose FF)色谱将人参多糖进行分级,先用水和0.4 mol·L - 1 NaCl溶液洗脱,将人参多糖分成中性多糖和酸性多糖,再将酸性糖依次用0 ～0.4 mol·L-1NaCl溶液洗脱,得到不同的级分.取小鼠脾脏制备脾淋巴细胞,调整小鼠脾淋巴细胞密度至3.0×106/mL,加样品混合均匀,孵育48 h,考察每个级分不同浓度(25,50,100,200,400 mg·L -1)对脾淋巴细胞增殖的刺激作用.结果:从GP中分级得到GPN和GPA,GPA分级后得到GPA-1,GPA-2,GPA-3和GPA-4.GP,GPA,GPN,GPA-2,GPA-3和GPA-4对脾淋巴细胞增殖都具有促进作用,其最大刺激指数分别为1.073,1.082,1.119,1.101,1.102和1.296.GPA,GPA-2,GPA-3和GPA-4的刺激作用均随着浓度的增加而增强;GPN随着浓度的增加促进作用减弱,在大于100 mg·L-1时呈现抑制作用,且浓度越大抑制作用越强.GPA-1对脾淋巴细胞的增殖具有抑制作用,且浓度越大抑制作用越强.结论:Q-Sepharose FF色谱可将酸性不同的人参多糖逐级分离.人参多糖各级分对脾淋巴细胞增殖有不同程度的促进作用,以GPA-4的刺激作用最强.     

阿里红多糖体外免疫活性的研究

目的:探讨阿里红多糖(FoP)对小鼠体外免疫的调节作用。方法:采用体外淋巴细胞增殖实验考察FoP对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响;采用磺酰罗丹明B(SRB)法检测不同浓度FoP单独作用及其与有丝分裂原ConA、LPS共同作用对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响;采用酶联免疫吸附实验(ELSA)法检测不同浓度FoP体外刺激对小鼠脾淋巴细胞诱生白介素2(IL-2)、白介素13(IL-13)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)等细胞因子的影响。结果:Fop在25~100μg/m L浓度范围内能显著促进小鼠脾淋巴细胞增殖,并与Con A、LPS协同促进T、B淋巴细胞增殖,还能诱导脾淋巴细胞分泌IL-2、TNF-α。结论:FoP具有免疫促进作用。     

中麻黄基因组DNA不同提取方法的比较

目的:比较不同DNA提取方法,选择最适于中麻黄基因组的方法.方法:采用改良CTAB,SDS法、试剂盒法提取中麻黄基因组DNA;用琼脂糖凝胶电泳法和紫外分光光度法检测所得总DNA的得率和纯度,并进行ISSR-PCR扩增检测.结果:3种方法均可从新鲜中麻黄中提取出产量较高的基因组DNA,但其中改良CTAB法提取的总DNA纯度高,质量好,扩增产物的电泳条带也较明显;SDS法和试剂盒法提取的总DNA质量差,不适用于下游分子生物学实验.结论:改良十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法为中麻黄基因组DNA提取的最佳方法,该方法提取的基因组DNA适用于中麻黄基因组PCR扩增和其他分子生物学研究.     

UPLC测定半夏中胡芦巴碱的含量

目的:采用超高效液相(UPLC)及亲水作用色谱法(HILIC,hydrophilic interaction chromatography)测定半夏中胡芦巴碱的含量,建立半夏药材质量评价方法.方法:半夏细粉经50％的甲醇超声提取后,采用ACQUITY UPLC BEH HILIC色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7 μm)进行胡芦巴碱含量的测定,流动相为乙腈-10 mmol·L-1醋酸铵(80∶20),流速0.4 mL· min -1,检测波长265 nm,进样量10 μL.结果:盐酸胡芦巴碱在1.125 ～72 nmol·mL-1线性关系良好(r =0.999 6,n=7),平均回收率为99.7％( RSD l.4％).结论:该方法专属性强、重复性好、稳定、可控,可作为半夏药材质量控制的方法.     

不同干燥方法对黄芩有效成分含量的影响

目的:比较不同干燥方法对黄芩有效成分含量的影响,优选黄芩的最佳干燥方式.方法:以HPLC测定黄芩苷含量为指标,比较自然晒干、自然阴干、60℃烘干、真空干燥、远红外干燥及微波干燥6种方法处理黄芩药材的优劣.结果:采用远红外干燥方法时黄芩有效成分黄芩苷的质量分数最高,平均为14.43％;从成本和成分含量及实用性综合分析黄芩应采用自然晒干方法.结论:优选的干燥方法稳定,可控性高.     

基于硫酸-蒽酮法对不同产地藏药线叶龙胆多糖的含量测定

研究线叶龙胆药材中多糖含量的测定方法,分析不同产地线叶龙胆药材中多糖的含量。结果表明,采用硫酸-蒽酮法,操作简便,结果准确;样品经硫酸-蒽酮显色后于620 nm处测定吸收度,在此波长处溶液的吸收度与葡萄糖含量呈良好的线性关系;线性范围0. 01~0.07 g·L^-1（r=0.996 7）,加样回收率99.41%,RSD 2.0%;综合考虑实验条件,确定料液比为1：60、提取时间为50 min、乙醇浓度为4倍量（体积分数80%）。测得产自甘肃夏河的线叶龙胆中多糖质量分数为0.743%,含量最高,为线叶龙胆多糖的进一步研究奠定良好的基础。     

紫萁贯众中多糖的含量测定

目的:建立紫萁贯众中总多糖的含量测定方法,比较不同产地和采收期紫萁贯众多糖含量。方法:采用硫酸-苯酚法显色,分光光度法在490nm处测定。结果:12个不同产地紫萁贯众多糖含量为1.22%～1.85%,同产地不同采收期紫萁贯众多糖含量为0.91%～1.37%。结论:紫萁贯众多糖含量因产地和采收期变化而不同。     

西藏红雪茶多糖含量测定

目的:研究西藏红雪茶多糖含量测定的方法.方法:采用苯酚-硫酸法测定总糖含量,3,5-二硝基水杨酸(DNS)法测定还原糖含量,两者的差值即为多糖含量.结果:总糖标准曲线方程为OD =0.051 4C- 0.0146(r=0.999 2),还原糖标准曲线方程为OD =0.022 9C-0.086(r =0.999 9),两者分别在2.5 ～12.5,8～40 mg·L-1有良好的线性关系.测得LC,LCA,LCP多糖含量分别为63.6％,82.6％,57.6％.结论:该方法操作快速、简便、灵敏、准确、重复性好.     

二精丸多糖两种测定方法的比较

目的:选择一种准确、稳定、简便的二精丸多糖含量测定的方法。方法:对硫酸-蒽酮法和苯酚-硫酸法测定二精丸多糖的含量进行比较。结果:硫酸-蒽酮法和苯酚-硫酸法分别在1.2～12mg·L-1(r=0.9993)和1.5～15mg·L-1(r=0.9991)范围内呈线性关系;精密度试验RSD分别为0.13%和0.31%;硫酸-蒽酮法在3h(RSD=2.87%)内稳定,苯酚-硫酸法在2h(RSD=2.89%)内稳定;含量测定结果分别为53.79%和58.92%。结论:苯酚-硫酸法测定二精丸多糖含量显色灵敏,颜色稳定,操作简便,可作为测定二精丸多糖含量测定的方法。     

古今附子加工方法的沿革与变迁

附子为回阳救逆之要药,也是著名的有毒中药。为了确保附子的疗效和安全用药,多以加工品的形式入药。历代医家对附子加工方式的记载多不相同,且2010年版《中国药典》中记载的附子加工方式与古代本草所记载的也存在差异。该文回溯核查汉代至民国时期的本草著作,对古今文献中所收载的附子加工方法内容加以归纳整理。结果表明,历史上附子的加工方法和入药方式随着朝代的变迁发生改变,且古今加工方法存在差异。唐代之前附子加工多为炮和浸法,唐代至明代期间多为炮、浸、煮和炒法,清代主要为浸和煮法,现代加工方法为煮和浸结合。附子在唐代之前多以整枚和劈破的方式入药,而现代入药方式多采用切片。不同的加工方法对附子的毒性影响很大,建议对古今附子加工方法开展比较研究。     

苯酚-硫酸法测定乌梅多糖的含量

目的:建立乌梅药材中多糖的含量测定方法。方法:采用苯酚-硫酸显色法测定乌梅药材中多糖的含量。结果:样品经苯酚-硫酸显色后于488 nm处测定吸收度,在此波长处溶液的吸收度与葡萄糖含量呈良好的线性关系;线性范围0.02～0.2 g·L-1(r=0.999 8),加样回收率100.38%,RSD 0.892%;乌梅中多糖含量2.51%。结论:苯酚-硫酸显色法操作简便,结果准确,为乌梅多糖的进一步研究奠定良好的基础。     

氧化铝固相萃取小柱在苦参生物碱含量测定中的应用

该文使用中性氧化铝Cleanert Alumina-N-SPE小柱(0.5 g/6 mL),洗脱剂为三氯甲烷-甲醇(7:3)5 mL,代替氧化铝开放柱(100~200目,5 g,内径1 cm),依次以三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇(7:3)各20 mL进行洗脱对苦参药材供试液进行处理,该方法优化洗脱溶剂使用种类和数量,并优化了苦参药材中苦参碱和氧化苦参碱含量测定的色谱条件,将2010年版《中国药典》中流动相条件乙腈-无水乙醇-3%磷酸溶液(80:10:10)优化为乙腈-无水乙醇-3%磷酸溶液(84:6:10);简化了2010年版《中国药典》规定苦参药材供试液的前处理,缩短了样品处理时间,减少了洗脱溶剂,结果更为准确可靠,适合苦参药材中含量的测定,提高苦参药材中苦参生物碱含量测定的工作效率。