茵陈蒿汤对肝纤维化大鼠肝组织内质网应激caspase-12通路的影响

目的:观察茵陈蒿汤对胆汁瘀积性肝纤维化大鼠肝组织内质网应激caspase-12通路的影响,探讨茵陈蒿汤抗胆汁瘀积性肝纤维的作用机制。方法:将35只SD大鼠分为假手术组和造模组,采用胆总管结扎法复制胆汁瘀积性肝纤维化大鼠模型,1周后将造模组动物分为模型组和中药组,中药组予以3.5 g/kg茵陈蒿汤灌胃,4周后处死动物,HE、Masson染色观察肝脏组织病理学变化;Western blot法检测各组大鼠肝脏GRP78、eIF2α和Caspase-12蛋白表达变化。结果:肝脏组织病理学变化显示模型组大鼠肝纤维化程度较假手术组明显增加(P<0.05),中药组大鼠肝纤维化程度较模型组减轻(P<0.05),但仍重于假手术组。Western blot结果显示,模型组肝脏GRP78、eIF2α和Caspase-12蛋白的表达与假手术组相比显著升高(P<0.01),中药组较模型组eIF2α和Caspase-12明显降低(P<0.01)。结论:抑制eIF2α和Caspase-12的活化,从而减少肝细胞凋亡,进而抑制内质网应激在胆汁瘀积性肝纤维化中的促进作用,是茵陈蒿汤抗胆汁瘀积性肝纤维化的作用机制之一。     

加味茵陈蒿汤对肝损伤大鼠TLR4 mRNA及其蛋白表达的影响

目的:探讨加味茵陈蒿汤对湿热内蕴证大鼠急性肝损伤的治疗作用机制.方法:SPF级SD大鼠,雌性,72只,随机分为空白组、模型组、西药组(复方甘草酸苷)组、中药加味茵陈蒿汤低、中、高剂量组.所有大鼠均适应性喂养在室温15～20℃,相对湿度60％ ～ 80％的实验室7d.7d后给模型组、西药组、中药组予1次性ip D-氨基半乳糖600 mg· kg-1以造成急性肝损伤模型,造模后除模型组外余各组ig给予药物,每日2次,复方甘草酸苷组剂量为15.75 mg· kg-1,加味茵陈蒿汤低、中、高剂量组剂量分别为14.7,29.4,58.8 g·kg-1,空白组予以0.9％的生理盐水ig,灌药体积每次10 mL·kg-1,2次/d,共ig治疗2d.造模48 h后断颈处死动物剖取肝脏,RT-PCR和Western blot法检测肝脏细胞Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR-4) mRNA及其蛋白表达.结果:与正常组比较,模型组大鼠肝脏组织TLR-4mRNA和TLR-4蛋白均有极显著增加(P＜0.01);与模型组比较,加味茵陈蒿汤可显著下调TLR-4 mRNA(P ＜0.01)及TLR-4蛋白(P＜0.01)的表达.结论:加味茵陈蒿汤可通过下调肝脏细胞TLR-4 mRNA及TLR-4蛋白表达有效干预肝脏细胞纤维化病变.     

残黄片对ANIT诱导黄疸模型大鼠的退黄作用机制分析

目的:考察残黄片对α-萘异硫氰酸酯(ANIT)诱导黄疸模型大鼠肝脏法尼醇X受体(FXR),尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A1(UGT1A1)和多药耐药相关蛋白2(MRP2)mRNA和蛋白表达的影响,探讨其治疗残留黄疸的作用机制。方法:大鼠分为正常组、模型组、残黄片(CHP)组和熊去氧胆酸片(UDCA)组,ANIT灌胃复制黄疸模型,相应药物干预后进行血清总胆红素(TBIL),总胆汁酸(TBA),丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)的含量检测和肝组织病理学检查,以评价残黄片的治疗作用。应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹试验(Western blot)检测各组大鼠肝组织FXR,UGT1A1,MRP2 mRNA和蛋白的相对表达量。结果:CHP能显著降低由ANIT引起的大鼠血清TBIL,TBA,ALT,AST,ALP的升高,抑制肝脏病理学改变,退黄作用优于UDCA。与正常组比较,ANIT造模后显著抑制大鼠肝组织FXR,UGT1A1,MRP2的mRNA水平(P0.01)。与模型组比较,CHP和UDCA干预后均显著提升了各蛋白目的基因mRNA水平(P0.01),在提升胆红素代谢酶UGT1A1的mRNA水平上CHP优于UDCA(P0.01)。在影响蛋白表达方面,与正常组比较ANIT造模使大鼠FXR表达明显升高(P0.05),CHP干预有促进FXR表达的趋势,而UDCA未见有促进趋势,但二者无显著差异。在促进胆红素代谢和胆汁排泄方面,ANIT造模使得UGT1A1,MRP2的表达显著降低(P0.01),而CHP治疗后显著提高了UGT1A1和MRP2蛋白的表达(P0.01)。在提高胆红素与胆汁酸外排蛋白MRP2的表达上CHP优于UDCA(P0.01)。结论:CHP退黄作用机制与激活肝脏FXR mRNA的表达,促进胆红素代谢酶UGT1A1和胆汁酸转运体MRP2的mRNA和蛋白表达,提高肝脏对游离胆红素的代谢并促进胆汁酸排出肝脏,缓解胆汁淤积性肝损伤有关。     

加味不忘散对AD模型大鼠海马区NLRP3炎症通路中相关因子表达的影响

目的:通过观察加味不忘散对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠学习记忆能力及海马区NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)炎症通路中相关分子NLRP3,天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)和白细胞介素-1β(IL^-1β)表达的影响,探讨其作用机制。方法:通过Morris水迷宫筛选出合格SD大鼠52只,随机均分为假手术组,AD模型组,加味不忘散低剂量组(1.5 g·kg^-1),加味不忘散高剂量组(3 g·kg^-1)。采用双侧海马注射β-淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)5μL(2 g·L^-1)建立AD模型大鼠。造模后分别予低、高剂量加味不忘散灌胃,每日1次,连续4周。灌胃结束后通过Morris水迷宫法检测大鼠学习记忆能力,判断造模是否成功;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠海马组织中NLRP3,Caspase-1,IL^-1βmRNA和蛋白的表达水平。结果:与假手术组比较,AD模型组大鼠学习记忆能力明显下降(P<0.05);与AD模型组比较,加味不忘散低剂量组大鼠学习记忆能力无改善,NLRP3,Caspase-1,IL^-1βmRNA和蛋白的表达水平均无统计学差异,加味不忘散高剂量组大鼠学习记忆能力明显改善,NLRP3,Caspase-1,IL^-1βmRNA和蛋白的表达均明显下降(P<0.05)。结论:高剂量加味不忘散可改善大鼠学习记忆能力,其机制可能与下调NLRP3炎症通路中NLRP3及下游Caspase-1,IL^-1β的表达,抑制海马组织内的炎症反应有关。     

清热化瘀中药复方对急性肝衰竭大鼠肝组织HMGB1表达的干预研究

目的:观察清热化瘀中药复方——清肝方对急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)大鼠高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达的影响,从mRNA水平探讨其抗ALF的机制。方法:采用D-氨基半乳糖(D-GalN)单次腹腔注射构建ALF大鼠模型,125只SD大鼠以是否接受造模和药物干预随机分为空白组、模型组、复方甘草酸苷组和清肝方组,每组再以36,96 h 2个时间点继续随机分为1,2两个亚组,共8组,其中亚组1用于造模后36 h取血及肝组织标本,亚组2用于96 h后观察大鼠的生存率。用全自动生化分析法检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和总胆红素(TBiL);全自动血凝分析法检测血浆凝血酶原时间(PT);常规HE染色作肝组织病理学观察。实时荧光定量(RT-PCR)检测HMGB1 mRNA的表达变化,以管家基因β-actin为对照,2-ΔΔCt法计算目的基因相对表达量。结果:模型组、复方甘草酸苷组及清肝方组估计平均生存时间分别为64.6,71.9,83.3 h;log-rank检验提示清肝方组累积生存率高于模型组(P<0.05)。空白组、清肝方组和复方甘草酸苷组肝组织HMGB1 RNA/β-actin值均显著降低(0.006±0.003,0.067±0.033,0.112±0.027 vs 0.245±0.153,均P<0.01),清肝方组低于复方甘草酸苷组(P<0.01)。与模型组相比,空白组、清肝方组和复方甘草酸苷组在血清ALT,AST,TBiL和血浆PT水平方面与模型组相比均明显下降(P<0.01),清肝方组低于复方甘草酸苷组(P<0.01)。清肝方组和复方甘草酸苷组肝组织损害程度积分与模型组相比明显下降(1.84±0.13,2.85±0.20 vs 3.56±0.24,均P<0.01),清热化瘀复方组低于复方甘草酸苷组(P<0.01)。结论:清肝方可有效改善D-GalN诱导的大鼠的肝功能、凝血功能及肝脏病理,降低死亡率,其发挥作用的分子机制与抑制HMBG1的表达有关。     

白花蛇舌草对肝内胆汁淤积模型大鼠的保护作用

目的:研究白花蛇舌草对α-异硫氰酸萘酯(ANIT)诱导肝内胆汁淤积模型大鼠保护作用。方法:采用灌服ANIT法建立肝内胆汁淤积大鼠模型,大鼠随机分为正常对照组、模型组、白花蛇舌草组、熊去氧胆酸阳性对照组。连续给药5 d后,测定大鼠胆管胆汁排泄量、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆汁酸(TBA)、胆红素(TB)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、肝组织病理学变化及其胆盐输出泵(BSEP)和多药耐药相关蛋白2(MRP2)表达等指标,研究白花蛇舌草对肝内胆汁淤积大鼠肝功能、胆汁酸排泄、炎症因子及肝组织病理学变化的影响。结果:与模型组比较,白花蛇舌草能显著促进胆汁排泄,降低大鼠血清中ALT、AST、TBA、TB、TNF-α、IL-1β水平(P0.01),诱导肝内BSEP、MRP2蛋白表达,改善大鼠肝组织病理学。结论:白花蛇舌草具有保护ANIT诱导肝内胆汁淤积模型大鼠肝损伤的作用。     

茵陈蒿水煎液对ANIT所致肝内胆汁淤积模型小鼠肝损伤影响及其机制初步探讨

目的探讨茵陈蒿水煎液对ANIT所致肝内胆汁淤积小鼠肝损伤的影响作用及可能机制。方法雌性C57BL/6小鼠分组灌胃茵陈蒿水煎液10 d,第7天给药后1 h采用ANIT造模。检测血清总胆红素(TBIL)、碱性磷酸酶(ALP)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性;HE染色观察肝脏病理;采用LC-MS/MS测定血、肝和胆囊胆汁酸。RT-PCR法检测CAR、PXR、MRP2、MRP3、MRP4、BSEP、CYP3A11和UGT1A1基因表达。结果与模型组比较,茵陈蒿水煎液低剂量组(0.945 g·kg~(-1)·d~(-1))血清TBIL、ALP、AST、ALT明显下降(P0.05),肝损伤好转,血浆、肝脏胆汁酸总量明显减少(P0.05),胆囊中胆汁酸明显增加;茵陈蒿水煎液中剂量组(1.8 g·kg~(-1)·d~(-1))AST和ALT明显下降(P0.05),血浆胆汁酸总量减少(P0.05);茵陈蒿水煎液高剂量组(3.78 g·kg~(-1)·d~(-1))血清酶活性无明显改变,血浆、肝脏和胆囊胆汁酸总量无明显增减。各剂量组的CAR、MRP2、MRP3、BSEP、CYP3A11和UGT1A1表达增加。结论茵陈蒿水煎液低剂量组(0.945 g·kg~(-1)·d~(-1))对ANIT诱导的小鼠肝内胆汁淤积肝损伤有保护作用,可能与茵陈蒿诱导CAR和相关靶基因增加胆汁代谢和胆汁排泌有关。     

葫芦茶苷对肝损伤大鼠肝组织Caspase-3与Caspase-8活性的影响及保肝作用研究

目的:研究葫芦茶苷对四氯化碳(CCl4)诱导急性肝损伤大鼠的保护作用及对肝组织Caspase-3与Caspase-8活性的影响。方法:将健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组,肝损伤模型组,阳性对照组(水飞蓟宾胶囊),葫芦茶苷低中高剂量组(3、6、12 mg·kg-1),每日灌胃给药1次,连续给药14 d,正常组与模型组每天灌服等体积的生理盐水,末次灌胃给药1 h后,除空白对照组外,皮下注射CCl4原液建立急性肝损伤大鼠模型,检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)和γ-氨基酰转肽酶(γ-GT)、胆碱酯酶(CHE)、总胆汁酸(TBA)和总胆红素(TBIL);检测肝组织匀浆超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性以及还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)和肝微粒体一氧化氮(NO)的含量,并检测肝组织Caspase-3,Caspase-8活性。结果:与模型组比较,葫芦茶苷能降低血清ALT,AST,LDH,γ-GT活性及TBA和TBIL含量(P<0.05或P<0.01),升高血清CHE含量;降低肝微粒体NO含量和MDA含量,增加肝组织SOD,GSH-PX活性和GSH含量,并降低肝组织Caspase-3,Caspase-8的活性(P<0.05或P<0.01)。结论:葫芦茶苷对四氯化碳致急性肝损伤大鼠具有明显的保护作用,其机制可能与其抗氧自由基、抑制脂质过氧化作用以及下调Caspase-3和Caspase-8的活性有关。     

清热解毒、凉血化瘀中药联合干细胞移植对急性肝衰竭大鼠肝脏细胞凋亡的影响

目的:探讨清热解毒、凉血化瘀中药联合大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对急性肝衰竭大鼠(ALF)肝脏细胞凋亡的影响。方法:40只清洁级雄性SD大鼠,随机分为空白组5只,造模组35只,造模组采用D-氨基半乳糖(D-Gal N,1.2 g·kg~(-1))联合脂多糖(LPS,5μg·kg~(-1))建立急性肝衰竭大鼠模型,造模后12 h取存活大鼠随机分为模型组、复方甘草酸苷组、茵陈四苓颗粒组、干细胞移植组及茵陈四苓颗粒联合干细胞移植组(联合组),联合组给予干细胞门静脉移植及茵陈四苓颗粒灌胃(每次1.5 g·kg~(-1)),干细胞组给予单纯干细胞门静脉移植(1.0×106个/m L),余各组给予等体积生理盐水门静脉注射,茵陈四苓颗粒组给予茵陈四苓颗粒灌胃,复方甘草酸苷组给予复方甘草酸苷灌胃(每次7.5 mg·kg~(-1)),余各组给予等体积生理盐水灌胃,干预后120 h处死大鼠。检测各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),总胆红素(TIBL)变化,苏木-伊红(HE)染色观察肝组织病理改变,计算肝脏炎症活动度,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测肝脏细胞凋亡指数(AI),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肝组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)测定肝组织中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA的表达。结果:急性肝衰竭大鼠造模后肝功能异常,联合组与模型组、复方甘草酸苷组、茵陈四苓颗粒组及干细胞移植组比较,大鼠血清AST,ALT,TBIL降低,肝炎活动度及凋亡指数明显降低(P0.05);联合组大鼠肝组织内Caspase-3蛋白的表达明显降低,Bax mRNA的表达降低,Bcl-2 mRNA表达明显升高,与模型组及各干预组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:清热解毒凉血化瘀中药联合干细胞移植能够改善肝功能,通过下调Caspase-3蛋白表达,上调Bcl-2 mRNA,下调Bax mRNA的表达来抑制肝脏细胞凋亡,效果优于单纯干预,两者对肝细胞凋亡的抑制具有协同作用。     

肝龙胶囊联合复方甘草酸苷体外抗肝纤维化的作用

目的:通过检测肝龙胶囊联合复方甘草酸苷用药后人肝星状细胞系(LX-2)中I型胶原(Col-I),III型前胶原(PCIII),IV型胶原(IV-C),层粘蛋白(LN),透明质酸(HA),转化生长因子-β1(TGF-β1)的含量及Col-I,基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)mRNA的表达变化,探讨肝龙胶囊联合复方甘草酸苷对LX-2细胞的抗肝纤维化作用。方法:体外培养LX-2细胞,将对数期细胞分为复方甘草酸苷用药组(3.125,1.562,0.781 g·L~(-1)),空白组,肝龙胶囊(0.938,0.469,0.235 g·L~(-1))联合复方甘草酸苷(3.125,1.562,0.781 g·L~(-1))交叉用药组,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测肝纤维化四项指标PCIII,IVC,LN,HA和Col-I,TGF-β1的含量;逆转录PCR(RT-PCR)检测Col-I和TIMP-1 mRNA的表达水平。结果:与复方甘草酸苷用药组比较,联合用药组在24,48 h时均可使HA,Col-I的含量降低(P0.05),在72 h可使LN,HA,Col-I,PCIII,TGF-β1的含量降低(P0.05);与空白组比较,联合用药组可使TGF-β1含量明显降低(P0.05,P0.01);与复方甘草酸苷用药组比较,联合用药组明显降低TIMP-1 mRNA的表达量(P0.05),且呈现时间依赖性;与空白组比较,联合用药组对Col-I mRNA在24 h呈现抑制作用(P0.05),在72 h时却使其表达量增加。结论:肝龙胶囊联合复方甘草酸苷用药组可使LX-2细胞LN,HA,Col-I,TGF-β1的含量降低,抑制Col-I和TIMP-1 mRNA的表达,效果优于复方甘草酸苷用药组。肝龙胶囊增强了复方甘草酸苷的体外抗肝纤维化作用。     

新生儿瓜前退黄散对溶血性黄疸模型大鼠的影响研究

目的:研究新生儿瓜前退黄散对溶血性黄疸模型大鼠的治疗作用及机制,为临床使用该方提供实验依据。方法:采用以乙酰苯肼(Acetylphenylhydrazine,APH)灌胃诱导大鼠,复制溶血性黄疸模型大鼠,鼻饲予以瓜前退黄散,并观察给药后大鼠的一般行为学与生物学状态,检测血清中谷丙转氨酶(Alanine Aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(Aspartate Aminotransferase,AST)、总胆红素(Total Bilirubin,TBIL)、胆汁酸(Total Bile Acid,TBA)、直接胆红素(Direct Bilirubin,DBIL)和间接胆红素(Indirect Bilirubin,IBIL)含量。结果:模型组各指标均明显高于空白组(P<0.05),并以间接胆红素升高为主,表明大鼠溶血性黄疸模型造模成功;与模型组比较,瓜前退黄散高、中、低剂量组干预后的黄疸大鼠血清TBIL、DBIL、IBIL、AST、ALT、TBA含量均显著降低(P<0.05);且中药高剂量组的TBIL、DBIL、IBIL、ALT、AST、TBA与空白组相比,差异不具有统计学意义(P>0.05);中药中剂量组的ALT、AST与空白组相比,差异不具有统计学意义(P>0.05);中药低剂量组的AST与空白组相比,差异不具有统计学意义(P>0.05),表明瓜前退黄散可降低APH所致的血清肝功能损害,降低黄疸水平。各组间差异无统计学意义(P>0.05),说明实验中选择的3种剂量瓜前退黄散均能有效治疗溶血性黄疸。结论:新生儿瓜前退黄散对溶血性黄疸模型大鼠具有明显的治疗作用,其退黄机制可能为与改善血清中TBIL、DBIL、IBIL、AST、ALT、TBA的水平有关,减轻肝脏损伤,为临床使用该放治疗新生儿溶血性黄疸提供了科学依据。     

Preclinical evidence of Yinchenhao decoction on cholestasis: A systematic review and meta‐analysis of animal studies

Cholestasis is an important cause of liver fibrosis and cirrhosis. Yinchenhao decoction has been used as a well‐known traditional Chinese medicine used in the treatment of cholestasis for over 2,000 years. The purpose of this systematic review is to evaluate the preclinical evidence of Yinchenhao decoction on cholestasis models. The following databases were searched from inception to February 2020. Chinese National Knowledge Infrastructure, VIP medicine information system, Wanfang Database, PubMed, Web of Science, Embase and the Cochrane Library were searched. The content concerned Yinchenhao decoction on different animal model experiments for the treatment of cholestasis. The methodological quality of the included studies was assessed based on the SYstematic Review Center for Laboratory animal Experimentation Animal Experiment Bias Risk Assessment Tool. A meta‐analysis was conducted with RevMan 5.3 software according to the Cochrane tool. Nineteen studies on a total of 404 animals were included with five kinds of experimental animal models. The results showed that serum total bilirubin (TBIL), direct bilirubin (DBIL), indirect bilirubin and total bile acid in the group treated with Yinchenhao decoction were significantly lower than those in the model group (P < 0.00001). The alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase and alkaline phosphatase levels in the Yinchenhao decoction group were also significantly reduced (P < 0.00001). The subgroup analysis of the different models showed that Yinchenhao decoction had a significant effect on the bile duct ligation model, and there was a significant reduction in TBIL, DBIL and ALT levels (P < 0.00001) in ANIT‐induced cholestasis. After 24 hours of Yinchenhao decoction treatment, there was no significant difference in TBIL levels (P = 0.34), but after 48 and 72 hours of treatment, the TBIL levels were significantly reduced compared with the model group (P < 0.00001). There was no significant difference in DBIL after 48 hours of administration (P = 0.26), but compared with the model group, Yinchenhao decoction could significantly reduce the DBIL levels after 48 hours of treatment (P < 0.0003). Yinchenhao decoction could significantly reduce the ALT levels after 24, 48 and 72 hours (P < 0.006). Yinchenhao decoction was able to significantly reduce the levels of TBIL, DBIL and ALT on different rat species: Wistar and Sprague Dawley (P = 0.0001; P = 0.0002). The preclinical evidence indicated that Yinchenhao decoction might be a potent and promising agent for cholestasis. Moreover, this conclusion should be further confirmed with more well‐designed researches.     

中西药联合治疗轻度妊娠期肝内胆汁淤积症42例

目的：探讨茵栀黄口服液联合熊去氧胆酸胶囊对轻度妊娠期肝内胆汁淤积症（ICP）的临床疗效。方法：将本院2011年5月-2013年8月的84例轻度ICP患者分为观察组和对照组各42例。观察组给予茵栀黄口服液20mL口服,3次/d,配合熊去氧胆酸胶囊0.5g口服,2次/d;对照组给予熊去氧胆酸胶囊0.5g口服,2次/d。两组均以10d为一个疗程。比较两组患者治疗前后皮肤瘙痒症状、血清总胆汁酸（TBA）、甘胆酸（CG）、总胆红素（TBIL）、直接胆红素（DBIL）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）的变化情况。结果：两组孕妇治疗后瘙痒评分、TBA、CG、TBIL、DBIL、ALT、AST 值均较治疗前明显下降（P〈0.05）,治疗后观察组的瘙痒评分、TBA、CG值均低于对照组（P〈0.05）,TBIL、DBIL、ALT、AST值与对照组比较无显著性差异（P〉0.05）。结论：茵栀黄口服液联合熊去氧胆酸胶囊治疗轻度ICP效果明显。     

茵陈蒿汤醇提与水提部位利胆保肝药效研究

目的筛选茵陈蒿汤利胆、保肝退黄的药效部位。方法将64只大鼠随机分成正常对照组、模型对照组及醇提和水提部位低、中、高剂量组,每组8只。除正常对照组外,其余各组于实验第1、4、7、10日给予α-萘异硫氰酸酯（ANIT）80 mg/kg灌胃造模。醇提和水提部位低、中、高剂量组每日分别给予茵陈蒿汤75%乙醇提取物和其药渣的水提取物0.040 5、0.081、0.162 g/10 g（折合成原药材计）灌胃,正常对照组和模型对照组灌胃给予生理盐水,连续12 d。末次给药后1 h胆总管插管收集胆汁,记录每只大鼠2、4、6 h的胆汁量;胆汁收集结束后,颈动脉取血,检测总胆红素（TBIL）、碱性磷酸酶（ALP）、谷氨酸氨基转移酶（ALT）、总胆汁酸（TBA）。结果与模型对照组比较,醇提及水提部位中剂量组胆汁分泌量均显著增加（P〈0.01或P〈0.05）,血清TBIL、ALP、ALT、TBA均显著降低（P〈0.01或P〈0.05）;醇提部位高剂量组TBIL、ALT、TBA显著下降（P〈0.01）;水提部位高剂量组TBIL、ALT也显著下降（P〈0.05）。结论茵陈蒿汤醇提部位及水提部位均具有一定的利胆保肝退黄作用。     

Paeoniflorin ameliorates ANIT‐induced cholestasis by activating Nrf2 through an PI3K/Akt‐dependent pathway in rats

Cholestasis causes hepatic accumulation of bile acids leading to liver injury, fibrosis and liver failure. Paeoniflorin, the major active compound isolated from the roots of Paeonia lactiflora pall and Paeonia veitchii Lynch, is extensively used for liver diseases treatment in China. However, the mechanism of paeoniflorin's hepatoprotective effect on cholestasis has not been investigated yet. In this study, we administered paeoniflorin to rats for 3 days prior to alpha‐naphthylisothiocyanate (ANIT) administration for once, then went on administering paeoniflorin to rats for 3 days. The data demonstrated that paeoniflorin significantly prevented ANIT‐induced change in serum alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), alkaline phosphates (ALP), serum total bilirubin (TBIL), direct bilirubin (DBIL), total bile acid (TBA) and gamma‐glutamyl transpeptidase (γ‐GT). Histology examination revealed that paeoniflorin treatment rats relieved more liver injury and bile duct proliferation than ANIT‐administered rats. Moreover, our data indicated that paeoniflorin could restore glutathione (GSH) and its related synthase glutamate‐cysteine ligase catalytic subunit (GCLc) and glutamate‐cysteine ligase modifier subunit (GCLm) in ANIT‐treated group. In addition, the RNA and protein expression of Akt and nuclear factor‐E2‐related factor‐2 (Nrf2) were also activated by paeoniflorin in ANIT‐induced rats. These findings indicated that paeoniflorin protected ANIT‐induced cholestasis and increased GSH synthesis by activating Nrf2 through PI3K/Akt‐dependent pathway. Therefore, paeoniflorin might be a potential therapeutic agent for cholestasis. Copyright © 2015 John Wiley & Sons, Ltd.     

重用赤芍治疗ANIT诱导大鼠急性淤胆型肝炎的研究

目的:观察不同剂量赤芍对α-萘异硫氰酸酯(α-naphthylisothiocy,ANIT)诱导大鼠急性淤胆型肝炎的保护作用.方法:赤芍高、中、低(分别相当于原生药量36,18,1g·kg-1)剂量ig给药3 d(2次/d)后,采用ANIT(60 mg·kg-1)诱导大鼠急性淤胆型肝炎模型,造模后继续给药3次,末次给药1h后,进行胆管引流,记录大鼠6h内的胆汁流量,检测血清学指标变化及肝脏病理学改变,结合对应分析综合评价赤芍对ANIT诱导大鼠急性淤胆型肝炎的影响.结果:血清生化结果显示,与模型组相比,赤芍中、高剂量给药组血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆汁酸( TBA)明显降低(P＜0.01),胆汁流量显著升高(P＜0.05),低剂量组变化不明显;病理组织学观察结果显示,与模型组相比,赤芍中、高剂量组肝脏病变均有明显改善,低剂量组改善不明显;对应分析结果表明,赤芍中、高剂量组的治疗效果显著,且呈剂量依赖性增强.结论:高、中剂量赤芍(36,18 g·kg-1)对ANIT诱导的大鼠急性淤胆型肝炎有显著的保护作用.     

茵连化浊解毒汤对胆结石小鼠血生化指标、胆汁代谢谱的影响及其机制分析

目的研究茵连化浊解毒汤对胆结石小鼠血生化指标、胆汁代谢谱的影响及机制。方法选择C57BL/6雄性小鼠,随机分为对照组(普通饲料喂养)、模型组(高脂高热量高胆固醇饲料喂养)、实验组(高脂高热量高胆固醇饲料喂养并给予茵连化浊解毒汤干预)。检测血生化指标、胆汁内代谢产物、肝脏内胆汁酸代谢蛋白的表达。结果模型组小鼠血液中总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量及胆汁内胆汁酸(TBA)、丙氨酸(Gla)、TC、LDL-C的含量均明显高于对照组,血液中高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的含量及肝脏中Abcb11、Abcc2的表达水平明显低于对照组;实验组小鼠血液中TBIL、DBIL、ALT、AST、TC、HDL-C、LDL-C的含量及胆汁内TBA、Gla、TC、LDL-C的含量均明显低于模型组,Abcb11、Abcc2表达水平明显高于模型组。结论茵连化浊解毒汤用于胆结石小鼠能够通过增加Abcb11、Abcc2的表达来改善肝功能、调节胆汁代谢。     

退黄合剂对ANIT致胆汁淤积性肝损伤的保护作用及机制研究

目的 观察退黄合剂对异硫氰酸-1-萘酯（ANIT）诱导的胆汁淤积性肝损伤的保护作用.方法 SD大鼠随机分成5组,即空白对照组,ANIT模型组,退黄合剂低、中、高剂量组,大鼠在ANIT处理48 h后被处死,检测血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）和碱性磷酸酶（ALP）活性及总胆红素（TBIL）和直接胆红素（DBIL）含量;肝组织做组织切片HE染色;分析肝组织中SOD和MPO活性;酶联免疫法分析肝组织中巨噬细胞炎性蛋白（MIP）-2生成;免疫印迹法检测细胞间黏附分子（ICAM）-1表达.结果 与空白对照组相比,模型组ALT、AST、ALP、DBIL、TBIL、MPO和MIP-2显著增高（P＜0.01）,肝脏病理病变明显,肝组织Ⅰ-CAM-1表达上调;与模型组相比,退黄合剂呈剂量依赖地降低ALT、AST、ALP、DBIL、TBIL、MPO和MIP-2,减轻肝脏病变,下调ICAM-1的表达（P＜0.05或P＜0.01）.结论 退黄合剂能保护ANIT诱导的胆汁淤积性肝损伤,其作用机制可能与抑制MIP-2和ICAM-1,减少中性粒细胞浸润,减轻炎症性肝脏损伤有关.     

基于转运体的何首乌致肝损伤作用机制探讨

目的 阐明长期给药何首乌醇提物（PME）和水提物（PMW）致大鼠肝损伤的可能机制。方法 分别制备PME和PMW。雄性SD大鼠随机分为对照组、阳性对照异硫氰酸α-萘酯（ANIT 100 mg·kg^–1）组、PMW组（15 g·kg^–1）、PME组（12 g·kg^–1）。PME、PMW组大鼠给药剂量相当于60 g·kg^–1生药量,约为临床最大量的110倍,灌胃给药42 d,每日给药1次。ANIT组于第40天灌胃给药1次。采用试剂盒方法检测大鼠血清生化指标丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆汁酸（TBA）、碱性磷酸酶（ALP）、总胆红素（TBIL）水平;采用苏木素-伊红（HE）染色法检测大鼠肝脏病理变化;采用实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）测定给药后大鼠肝脏组织中胆汁酸、胆红素代谢相关转运体有机阴离子转运多肽1a1（OATP1a1）、OATP1b2、多药耐药相关蛋白2（MRP2）、MRP3、胆盐外排泵（BSEP）、Na⁺-牛磺胆酸共转运多肽（NTCP）、乳腺癌耐药蛋白（BCRP）、P-糖蛋白（P-gp）mRNA表达水平。结果 与对照组比较,PMW组大鼠血清中AST水平显著降低（P<0.05）,ALT和ALP水平显著升高（P<0.05）;PME组大鼠血清中AST水平显著降低（P<0.05）,ALT、TBA和ALP水平显著升高（P<0.01）;PMW组于PME组TBIL水平差异无统计学意义。病理结果显示,PME、PMW给药后均可引起不同程度的肝损伤,并且PME组表现更为严重。qRT-PCR结果表明,PMW和PME可同时影响胆红素和胆汁酸代谢过程中摄取和外排转运体的表达,均可显著下调外排转运体MRP2、BCRP mRNA表达水平,上调摄取转运体OATP1a1、OATP1b2 mRNA表达水平;PME可显著下调BSEP、P-gp、NTCP mRNA表达水平;PMW可显著上调NTCP、BSEP、P-gp mRNA水平;两者对MRP3 mRNA表达水平影响差异无统计学意义。结论 经过长期诱导后,PME、PMW均可引起大鼠肝损伤,其作用机制与影响胆红素和胆汁酸相关转运体相关,PME和PMW引发肝损伤程度存在差异,可能与两者对具体转运蛋白的作用不同相关。     

消黄方对α-萘异硫氰酸酯大鼠黄疸模型肝组织氧化应激的影响

目的:探讨消黄方对α-萘异硫氰酸酯(ANIT)大鼠黄疸模型的治疗作用及抗氧化应激效应。方法:Wistar雄性大鼠40只,随机分为正常组(10只)和ANIT处理组(30只)。ANIT按照2mL/kg一次性经口灌胃,48h后,ANIT处理组随机分为模型组,消黄方组及熊去氧胆酸(UDCA)组(各10只),各组每天分别给予生理盐水、消黄方、UDCA治疗1周,实验结束处死全部大鼠。观测大鼠死亡率、检测肝功能及肝组织总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽-S转移酶(GST)活性和丙二醛(MDA)含量。结果:肝功能结果发现:与正常组比较,模型组大鼠肝ALT、AST、ALP、TBIL、DBIL显著升高(P0.05,P0.01)。与模型组比较,UDCA和消黄方显著降低血清TBIL和DBIL含量(P0.01),消黄方显著降低ALT、AST及ALP活性(P0.05,P0.01)。肝组织氧化应激结果显示:与正常组比较,模型组肝组织GST活性及MDA含量显著升高(P0.01),T-SOD活性显著下降(P0.01),而消黄方显著降低GST活性及MDA含量(P0.01),升高肝组织SOD活性(P0.01)。结论:消黄方具有保肝退黄作用;氧化应激是ANIT大鼠黄疸模型的重要病理环节,抗氧化应激效应是消黄方退黄主要机制之一。