抗骨增生胶囊含药血清对大鼠成骨细胞增殖、分化的影响

目的探讨抗骨增生胶囊含药血清对大鼠成骨细胞增殖、分化及骨保护蛋白(OPG)和核因子-кB受体活化子配体(RANKL)蛋白表达的影响。方法采用中药血清药理学方法制备含抗骨增生胶囊大鼠血清。取乳鼠颅骨,利用复合胶原蛋白酶反复消化,离心,体外培养成骨细胞。加入不同浓度的抗骨增生胶囊含药血清进行干预,噻唑蓝(MTT)法检测中药血清对成骨细胞增殖的影响,测定碱性磷酸酶(ALP)活性,Western Blot检测OPG和RANKL蛋白表达。结果成骨细胞经抗骨增生胶囊含药血清作用后,细胞的生长呈现不同程度的增殖,中、高剂量中药组在24、48、72 h均有明显的促进作用(P0.01),且呈剂量依赖性。低剂量中药组在24、48 h时与空白对照组比较差异无统计学意义(P0.05),72 h时作用较强(P0.05)。除低剂量组培养24 h外,低、中、高剂量中药组培养24、48、72 h后,ALP分泌均呈不同程度增加,均有明显的促进作用(P0.01)。成骨细胞经过抗骨增生胶囊含药血清低、中、高剂量作用72 h后,对比值进行统计分析,与空白对照组比较,OPG表达明显升高(P0.01),RANKL表达明显降低(P0.01)。结论抗骨增生胶囊含药血清可以促进成骨细胞的增值、分化,从而促进骨形成。     

补肾健脾方对微应力下成骨细胞骨架调控的影响

目的:探讨补肾健脾方对微应力下成骨细胞骨架的调控作用。方法:新西兰兔18只,分为中药组、西药组和空白组。培养细胞用雌性SD大鼠20只。分别施加3 min和6 min应力后中药组和西药组分别以相应药物的含药血浆培养,空白组给予常规培养。采用激光共聚焦显微镜检测细胞的形态学变化及荧光强度变化。结果:施加应力后,各组细胞形态发生明显变化,出现细胞骨架发生解聚和重排,微丝向核周集聚,微管发生断裂,变短,弯曲。以6 min应力最为明显。中药组在3 min和6 min应力下,其培养1 h和6 h后的荧光强度无明显变化,但经过24 h培养后,中药组的荧光强度增强,与空白组、西药组比较,差异有显著性意义(P0.05)。西药组在3 min应力下,其培养6 h的荧光强度明显高于1 h(P0.05),但与24 h比较无明显变化。但在6 min应力下,各个时段的荧光强度无明显变化。结论:施加的应力对细胞造成一定的损伤,应力时间越长,其对细胞的损伤越严重。补肾健脾中药能修复细胞的损伤,促进细胞骨架的重组,但其起效作用时间较长。     

肾系膜细胞在补肾药物基础上进一步上调成骨细胞collagenⅠ和cbfα1基因表达

目的:观察系膜细胞是否影响补肾药物对成骨细胞的作用。方法:空白组大鼠灌服蒸馏水,药物组大鼠以熟地鳖甲1:1配比制成浸膏,3.3g浸膏/kg体质量/d灌服,3d后取血离心,获得无药血清和熟地鳖甲含药血清。无药血清、熟地黄鳖甲含药血清及肾系膜细胞处理的熟地鳖甲含药血清作用于成骨细胞3d,MTT法观察成骨细胞增殖率,实时荧光定量PCR检测成骨细胞Ⅰ型胶原(collagenⅠ)和核心结合因子α1(cbfα1)基因表达。结果:熟地黄、鳖甲含药血清可促进成骨细胞增殖,经肾系膜细胞处理后的含药血清进一步促进细胞增殖(P0.05),荧光定量PCR显示含药血清组成骨细胞collagenⅠ和cbfα1基因表达量明显上调(P0.05),经肾系膜细胞处理后的含药血清2种基因表达量进一步增加(P0.05)。结论:肾脏固有细胞——肾系膜细胞可在补肾药物基础上进一步促进成骨细胞的增殖和成骨相关基因的表达。     

骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞增殖影响的研究

目的 :从细胞分子学角度探讨骨康方防治骨质疏松症的作用机理。方法 :通过体外分离和培养成骨细胞体系 ,运用MTT法分别测定骨康含药血清、罗盖全含药血清、空白血清对新生大鼠成骨细胞增殖的影响。结果 :用 5 %和 10 %的血清培养第 7天时三组的OD值均为最高 ,而 2 0 %的血清培养第 5天时骨康血清组和罗盖全血清组的OD值最高。结论 :骨康含药血清有恒定的促进新生大鼠成骨细胞增殖的作用。实验研究结果〔1〕已经证实 ,骨康方能提高实验动物的骨矿含量和骨密度 ,改善生物力学性能 ,调节体内激素水平 ,具有促进骨形成和抑制骨吸收的双重作用。     

骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞增殖影响的研究

目的：从细胞分子学角度探讨骨康方防治骨质疏松症的作用机理。方法：通过体外分离和培养成骨细胞体系，运用MTT法分别测定骨康含药血清、罗盖全含药血清、空白血清对新生大鼠成骨细胞增殖的影响。结果：用5％和10％的血清培养第7天时三组的0D值均为最高，而20％的血清培养第5天时骨康血清组和罗盖全血清组的OD值最高。结论：骨康含药血清有恒定的促进新生大鼠成骨细胞增殖的作用。实验研究结果^[1]已经证实，骨康方能提高实验动物的骨矿含量和骨密度，改善生物力学性能，调节体内激素水平，具有促进骨形成和抑制骨吸收的双重作用。     

中药骨康含药血清对TNF-α致大鼠成骨细胞凋亡的影响

为观察中药骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞凋亡的影响.将实验动物随机分成中药组、罗盖全组和蒸馏水组3组,通过体外分离和培养成骨细胞体系,应用肿瘤坏死因子(TNF-α)作为诱导成骨细胞凋亡的介质,在透射电镜下观察细胞超微结构.在用空白血清培养7天的成骨细胞中加入TNF-α24h时,电镜下出现明显的细胞调亡形态,表现为核膜不均匀肿胀,粗面内质网扩张,核染色质浓集,细胞表面的微绒毛明显减少,可伴见细胞体积缩小,而用骨康血清和罗盖全血清培养7天的成骨细胞虽然仍有细胞凋亡的形态改变,但可部分对抗TNF-α所致的成骨细胞调亡作用.表明中药骨康含药血清能抑制TNF-α诱导的新生大鼠成骨细胞凋亡.     

骨康方含药血清诱导大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞方向分化的实验研究

目的:观察骨康方含药血清促进骨髓基质细胞(Marrow Stromal Cells,MSCs)体外向成骨细胞增殖、分化的作用。方法:采用不同浓度的骨康方含药血清联合诱导剂对大鼠MSCs定向诱导分化,观察MSCs诱导前后形态学变化;采用ELISA法检测MSCs骨钙素(Osteocalcin,OC);RT-PCR方法检测MSCsOCN mRNA和Cbfα1mRNA表达。结果:联合使用高、中浓度骨康方加诱导剂能显著提高MSCs增殖和骨钙素的含量,且使Cbfα1 mRNA的表达升高。结论:骨康方具有促进大鼠体外MSCs向成骨细胞增殖和分化的作用,这一作用可能与其升高其Cbfα1 mRNA的表达有关。     

补肾健脾药物血清对体外培养的成骨细胞增殖与分化的影响

目的观察补肾健脾药物血清对新生大鼠颅骨成骨细胞增殖和分化的影响.方法用多次酶消化法分离培养新生大鼠颅盖骨成骨细胞,加入含不同药物浓度的补肾健脾药物血清条件培养液共同培养;改良Gomori钙钴法染色鉴定,MTT法测定细胞增殖率,对硝基苯酚法检测碱性磷酸酶(ALP)活性.骨疏康和尼尔雌醇作为阳性对照药物.结果补肾健脾中药组成骨细胞的增殖、ALP活性均显著高于空白对照组(P＜0.05),与骨疏康和尼尔雌醇组比较有显著性差异.结论补肾健脾中药可通过增加成骨细胞的增殖与分化而促进骨形成.     

骨疏康颗粒含药血清对成骨细胞增殖及细胞周期的影响

目的 探讨骨疏康颗粒含药血清对体外培养大鼠成骨细胞增殖及细胞周期分布的影响.方法 采用酶消化法进行大鼠成骨细胞培养,制备骨疏康颗粒含药血清干预成骨细胞,以生理盐水大鼠血清作对照,运用MTT法、流式细胞术检测成骨细胞增殖情况及细胞周期分布.结果 与同浓度生理盐水血清比较,骨疏康含药血清能不同程度地促进体外堵养成骨细胞增殖,其中以20%骨疏康含药血清促增殖作用最显著,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),且能明显降低G0/G1期细胞比例(P＜0.05),提高S期成骨细胞比例及增殖指数(P＜0.05).结论 骨疏康含药血清能加速成骨细胞周期,促进成骨细胞增殖.     

壮骨胶囊含药血清对小鼠成骨细胞增殖 及碱性磷酸酶、骨钙素合成的影响

目的观察壮骨胶囊含药血清对小鼠成骨细胞(MC3T3-E1细胞)增殖、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(BGP)合成的影响,探讨壮骨胶囊对骨代谢、骨形成机制的作用。方法壮骨胶囊由射干、白芍等组成。实验分为对照组、壮骨胶囊高、中、低剂量组(4.3、2.15、1.08 g生药/kg),给药组灌胃给予Wistar大鼠壮骨胶囊,对照组给于等体积水,连续给予7 d后,采血离心制备对照组空白血清及含药组血清;以小鼠成骨细胞MC3T3-E1为研究对象,用空白血清及含药血清处理体外培养的MC3T3-E1成骨细胞,采用CCK8法检测成骨细胞增殖能力,IFCC速率法测定ALP活性,酶联免疫法测定BGP分泌量。结果壮骨胶囊含药血清各剂量组对体外培养的MC3T3-E1细胞增殖有显著的促进作用,高、中剂量组48 h可促进成骨细胞增殖(同对照组比较,P 0.05),高、中、低剂量组72 h均能促进成骨细胞增殖(同对照组比较,P 0.01,P 0.05);高、中剂量组含药血清作用于MC3T3-E1细胞72 h后,ALP活性、BGP分泌量较对照组明显提高(P 0.01,P 0.05)。结论壮骨胶囊含药血清具有促进骨形成作用,这可能与其促进成骨细胞增殖,增加成骨细胞ALP的合成和BGP的分泌,从而改善骨代谢有关。     

骨康含药血清对大鼠成骨细胞BMP-2表达的影响

目的:通过观察骨康含药血清对成骨细胞BMP-2表达的影响,探讨其治疗骨质疏松症的作用机制。方法:将6只大白兔随机分为3组:正常血清组、骨康含药血清组和雌二醇含药血清组,分别将血清添加入体外分离、培养的成骨细胞,每组8个样本,采用酶联免疫吸附法,检测成骨细胞BMP-2的表达。结果:骨康含药血清组BMP-2含量显著低于空白对照组(P<0.05),骨康含药血清组与雌二醇含药血清组BMP-2的含量无明显差异。结论:在去势状态下,骨康可能通过促进BMP-2的分泌,达到治疗骨质疏松症的目的。     

不同中药含药血清对体外培养成骨细胞影响的实验研究

目的:研究中药骨康及其中补肾、健脾、活血各成分吸收后不同血清对离体大鼠成骨细胞增殖的影响及其对成骨细胞分泌白介素-6(1L-6)的影响。方法:采用胶原-胰蛋白酶消化法获得新生大鼠的成骨细胞,然后以中药骨康及其中补肾、健脾、活血成分吸收后血清,加入体外培养成骨细胞中进行培养,MTT法测成骨细胞增殖,ELISA法测培养上清中IL-6含量。结果:发现中药骨康吸收后血清能促进成骨细胞的增殖和分化,补肾成分吸收后血清亦能促进成骨细胞的增殖和分化,健脾、活血各成分吸收后血清对成骨细胞无明显影响,同时,中药骨康及其中补肾成分含药血清可作用于成骨细胞,使分泌其IL-6的能力下降。而中药骨康含药血清的作用明显优于补肾成分含药血清的作用。结论:中药骨康及其中补肾成分含药血清能够促进成骨细胞的增殖与分化从而促进骨形成,同时可抑制成骨细胞分泌IL-6,健脾、活血二法是补肾法的良好补充。     

红花等10种中药的植物雌激素活性研究

目的：评价红花、川牛膝、丹参、女贞子、枸杞、甘草、肉苁蓉、淫羊藿、补骨脂、菟丝子等10味中药的植物雌激素活性。方法：选用昆明种雌性乳鼠,随机分为A,B二组：A组又分为12组（溶剂对照组、己烯雌酚组和10个中药组）；B组也分为12组（溶剂对照组、己烯雌酚组和10个中药拮抗组）,其中中药拮抗组每天同时灌胃中药和己烯雌酚；各组给药4 d后分离血清。利用雌激素受体（ER）阳性MCF-7细胞,以MTT法检测中药含药血清对细胞增殖的影响。结果：A组中,红花、川牛膝、丹参、枸杞、肉苁蓉、淫羊藿、补骨脂和菟丝子等中药含药血清可显著促进MCF-7细胞增殖；而女贞子组可见细胞增殖受到明显抑制。B组中,红花、川牛膝、丹参、甘草、淫羊藿、补骨脂和菟丝子组可见己烯雌酚促细胞增殖的作用受到了显著抑制；而肉苁蓉可协同并显著增强己烯雌酚促细胞增殖的作用。结论：红花、川牛膝、丹参、淫羊藿、补骨脂、菟丝子等6种中药在单独用药时具有拟雌激素作用,在与雌激素同时用药时具有抗雌激素作用,其双向调节效应依赖于体内雌激素水平的高低。     

养阴清热煎剂对系统性红斑狼疮患者黏附分子表达及狼疮损伤指数的影响

目的:研究中医药对系统性红斑狼疮(SLE)的治疗作用机制及其对SLE器官损害的远期疗效.方法:1999～2003年住院及门诊的SLE患者51例,随机分为以中药养阴清热煎剂为主的中西医结合治疗组(简称治疗组)和单纯西药治疗的对照组(简称对照组),进行了治疗前后血清细胞黏附分子1(ICAM-1)、黏附分子3(ICAM-3)、P-选择素以及SLE损伤指数(SLICC/ACRDI)的研究.结果:SLE患者的ICAM-1、ICAM-3、P-选择素均较正常人明显增高;治疗组治疗后ICAM-1、P-选择素比对照组明显下降;而SLE损伤指数积分显示,治疗组比较稳定,对照组较治疗前有明显增加.结论:提示以中药养阴清热煎剂为主的治疗组对SLE患者的血清黏附分子高表达有明显的抑制作用,并对SLE的器官损害有明显的保护与修复作用.     

清热化瘀滋阴方对狼疮性 MRL/lpr 小鼠免疫功能的影响

目的观察中药清热化瘀滋阴方对狼疮性MRL／lpr小鼠免疫功能的影响。方法选用C57BL／6J小鼠作为对照组,将MRL／lpr小鼠随机分为模型组、中药组（清热化瘀滋阴方组）、西药组（泼尼松组）、中西药结合组（清热化瘀滋阴方加泼尼松组）,每组各8只。对照组和模型组给予生理盐水,其余各组连续灌胃给予相应药物4周,4周末荧光显微镜观察肾组织IgG的沉积,测定血清IgG、抗ds—DNA抗体、IL-6、IL-10、ICAM-1的含量。结果与模型组比较,中药组、西药组、中西药结合组MRL／lpr小鼠肾组织IgG荧光强度显著降低、血清IgG、抗ds—DNA抗体、II,6、IL-10、ICAM—1的含量下调,其中以中西药结合组效果更为明显（P〈0．05或P〈0．01）。结论清热化瘀滋阴方具有改善狼疮性MRL／Ipr小鼠免疫功能的作用。     

骨康胶囊辅助治疗不稳定性桡骨远端骨折的临床效果

目的:观察骨康胶囊辅助治疗老年不稳定性桡骨远端骨折的效果,以探讨中医药在这类患者外科治疗中的辅助作用。方法:选取2014年2月至2016年6月在骨科住院治疗的老年不稳定性桡骨远端骨折68例,按随机数字表法分为观察组和对照组,各34例,2组患者均接受掌侧锁定钢板内固定治疗,对照组患者术后予以碳酸钙片口服治疗,1.5 g/次,3次/d,观察组患者则在对照组患者的基础上予以骨康胶囊口服治疗,4粒/次,3次/d,2组患者均连续服用2个月。分别于术前、术后1个月、术后2个月检测2组患者血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP5b)、I型前胶原羧基端肽(PICP)、骨钙素(BGP)等骨代谢生化指标,同时详细记录2组患者术后肿胀消退时间、骨折愈合时间、住院时间,并于术后6个月时评价患者骨折复位质量和腕关节功能恢复情况。结果:与对照组患者比较,术后1个月、2个月时观察组患者血清TRACP5b水平均明显降低,血清PICP、BGP均明显升高,差异均有统计学意义(P0.05);观察组患者术后肿胀消退时间、骨折愈合时间、住院时间均明显短于对照组患者,差异均有统计学意义(P0.05);术后6个月时常规拍摄腕关节正侧位X线片,2组患者掌倾角、尺偏角、桡骨高度比较,差异均有统计学意义(P0.05);术后6个月时,观察组患者腕关节功能恢复优良率为79.41%(27/34),对照组患者为64.71%(22/34),组间差异无统计学意义(P0.05)。结论:骨康胶囊辅助治疗老年不稳定性桡骨远端骨折的效果显著,有效改善患者骨代谢状态,促进术后肿胀消退和骨折愈合。     

骨康健生丸配合手法及中药外敷治疗腰三横突综合征

观察骨康健生丸配合手法及中药外敷治疗腰三横突综合征的临床疗效。136例患者随机分为两组，治疗组采用口服骨康健生丸及手法、药物热敷的方法，对照组采用单一服药或针刺或中频治疗。治疗组总有效率95.5%，明显高于对照组的60.0%。骨康健生丸配合手法及中药外敷治疗腰三横突综合征疗效肯定，值得临床推广。     

阿仑膦酸钠维 D3 联合滋肾骨康方治疗骨质疏松症临床研究

目的:观察阿仑膦酸钠维D3联合滋肾骨康方对骨质疏松症患者的临床治疗效果。方法:将127例骨质疏松症患者按随机数字表法分成2组,对照组63例患者予以阿仑膦酸钠维D3进行治疗,观察组64例患者在对照组的基础上予以滋肾骨康方治疗。对比2组治疗前后骨密度、骨代谢指标和免疫功能的变化情况。结果:治疗后,观察组左股骨颈(LFN)、L1~4及左股骨粗隆骨密度明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组人I型胶原交联氨基端肽(NTXI)、骨钙素(BGP)、25-羟基维生素(25-OHD)、β-胶原羧基端肽(β-CTX)水平明显优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组免疫功能指标IgM、IgG及中医症状综合评分明显优于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:阿仑膦酸钠维D3联合滋肾骨康方可以有效提高骨质疏松症患者的骨密度,改善骨代谢指标,增强患者的免疫功能,改善临床症状。     

"更年春"方对大鼠成骨细胞增殖与分化及矿化的影响

目的观察中药复方“更年春”药物血清对新生大鼠成骨细胞增殖、分化和矿化的影响。方法用酶消化法分离培养新生大鼠颅盖骨成骨细胞,加入含不同药物浓度的更年春药物血清条件培养液培养,生理盐水作为阴性对照组,尼尔雌醇作为阳性对照药物。MTT法测定细胞增殖率,对硝基苯酚法(PNPP)检测碱性磷酸酶(ALP)活性以观察成骨细胞活性,茜素红染色观察矿化结节个数。结果与生理盐水组相比,更年春组成骨细胞MTT值(OD570)及OD405值明显增加(P均<0.01),更年春高剂量组矿化结节数显著高于生理盐水组(P<0.01)。与雌激素组相比,中药高剂量组成骨细胞的OD570值(P<0.01)、OD405值(P<0.05)及矿化结节数均增高(P<0.05)。结论更年春在体外对成骨细胞的增殖、分化和矿化有明显促进作用,更年春高剂量明显优于雌激素,提示更年春防治骨质疏松的作用可能与其促进成骨细胞活性有关。     

龟龙坚骨汤对TNF-α诱导大鼠成骨细胞凋亡中Fas和Bcl-2表达的影响

目的:探讨龟龙坚骨汤对TNF-α诱导大鼠成骨细胞凋亡中Fas和Bcl-2表达的影响。方法:将原代培养的SD大鼠颅骨成骨细胞分为中药组和对照组,中药组给予龟龙坚骨汤含药血清培养,对照组给予常规血清培养,培养7d后,用含量为30ng/mL TNF-α刺激成骨细胞,采用流式细胞术检测细胞凋亡,应用免疫组化结合计算机图像分析技术检测细胞Fas和Bcl-2蛋白表达。结果:TNF-α刺激成骨细胞后,中药组中Bcl-2蛋白表达升高,Fas蛋白表达不明显;而对照组的Fas蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达不明显。在细胞凋亡率方面,中药组在早期及晚期细胞凋亡率均低于对照组,两组差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:龟龙坚骨汤能上调Bcl-2蛋白表达,对Fas蛋白表达不明显,在一定程度上可以抑制成骨细胞的凋亡,但能否促进成骨细胞的增殖,有待下一步的研究。