骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞增殖影响的研究

目的 :从细胞分子学角度探讨骨康方防治骨质疏松症的作用机理。方法 :通过体外分离和培养成骨细胞体系 ,运用MTT法分别测定骨康含药血清、罗盖全含药血清、空白血清对新生大鼠成骨细胞增殖的影响。结果 :用 5 %和 10 %的血清培养第 7天时三组的OD值均为最高 ,而 2 0 %的血清培养第 5天时骨康血清组和罗盖全血清组的OD值最高。结论 :骨康含药血清有恒定的促进新生大鼠成骨细胞增殖的作用。实验研究结果〔1〕已经证实 ,骨康方能提高实验动物的骨矿含量和骨密度 ,改善生物力学性能 ,调节体内激素水平 ,具有促进骨形成和抑制骨吸收的双重作用。     

骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响

观察中药骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响。方法：将实验动物随机分成中药组、罗盖全组和蒸馏水组3组，通过体外分离和培养成骨细胞体系，运用分光光度计测定含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响。结果：成骨细胞在10％的血清中培养7天时，用分光光度计测定ALP活性。发现骨康含药血清和罗盖全含药血清均能明显提高成骨细胞的ALP活性，骨康血清组和罗盖全血清组对成骨细胞ALP活性的平均影响率分别为128．1％和129．1％。结论：中药骨康含药血清能明显提高成骨细胞的碱性磷酸酶活性。     

骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响

观察中药骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响.方法:将实验动物随机分成中药组、罗盖全组和蒸馏水组3组,通过体外分离和培养成骨细胞体系,运用分光光度计测定含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响.结果:成骨细胞在10%的血清中培养7天时,用分光光度计测定ALP活性,发现骨康含药血清和罗盖全含药血清均能明显提高成骨细胞的ALP活性,骨康血清组和罗盖全血清组对成骨细胞ALP活性的平均影响率分别为128.1%和129.1%.结论:中药骨康含药血清能明显提高成骨细胞的碱性磷酸酶活性.     

中药骨康含药血清对TNF-α致大鼠成骨细胞凋亡的影响

为观察中药骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞凋亡的影响.将实验动物随机分成中药组、罗盖全组和蒸馏水组3组,通过体外分离和培养成骨细胞体系,应用肿瘤坏死因子(TNF-α)作为诱导成骨细胞凋亡的介质,在透射电镜下观察细胞超微结构.在用空白血清培养7天的成骨细胞中加入TNF-α24h时,电镜下出现明显的细胞调亡形态,表现为核膜不均匀肿胀,粗面内质网扩张,核染色质浓集,细胞表面的微绒毛明显减少,可伴见细胞体积缩小,而用骨康血清和罗盖全血清培养7天的成骨细胞虽然仍有细胞凋亡的形态改变,但可部分对抗TNF-α所致的成骨细胞调亡作用.表明中药骨康含药血清能抑制TNF-α诱导的新生大鼠成骨细胞凋亡.     

不同中药含药血清对体外培养成骨细胞影响的实验研究

目的:研究中药骨康及其中补肾、健脾、活血各成分吸收后不同血清对离体大鼠成骨细胞增殖的影响及其对成骨细胞分泌白介素-6(1L-6)的影响。方法:采用胶原-胰蛋白酶消化法获得新生大鼠的成骨细胞,然后以中药骨康及其中补肾、健脾、活血成分吸收后血清,加入体外培养成骨细胞中进行培养,MTT法测成骨细胞增殖,ELISA法测培养上清中IL-6含量。结果:发现中药骨康吸收后血清能促进成骨细胞的增殖和分化,补肾成分吸收后血清亦能促进成骨细胞的增殖和分化,健脾、活血各成分吸收后血清对成骨细胞无明显影响,同时,中药骨康及其中补肾成分含药血清可作用于成骨细胞,使分泌其IL-6的能力下降。而中药骨康含药血清的作用明显优于补肾成分含药血清的作用。结论:中药骨康及其中补肾成分含药血清能够促进成骨细胞的增殖与分化从而促进骨形成,同时可抑制成骨细胞分泌IL-6,健脾、活血二法是补肾法的良好补充。     

中药骨康对成骨细胞OPG和RANKL分泌的影响

目的：通过观察骨康含药血清对成骨细胞OPG、RANKL表达的影响,探讨其治疗骨质疏松的作用机制。方法：体外分离、培养成骨细胞,实验分为3组：正常血清组、中药骨康血清组和雌二醇含药血清组。采用酶联免疫吸附法,检测成骨细胞OPG和RANKL的表达。结果：中药骨康含药血清组RANKL含量显著低于空白对照组（P〈0.05）,而OPG分泌量显著高于空白对照组（P〈0.05）;中药骨康含药血清组与雌二醇含药血清组OPG和RANKL的含量无明显差异。结论：在去势状态下,中药骨康可能是抑制RANKL分泌,上调OPG分泌,而达到治疗骨质疏松症的作用。     

骨康含药血清对大鼠成骨细胞BMP-2表达的影响

目的:通过观察骨康含药血清对成骨细胞BMP-2表达的影响,探讨其治疗骨质疏松症的作用机制。方法:将6只大白兔随机分为3组:正常血清组、骨康含药血清组和雌二醇含药血清组,分别将血清添加入体外分离、培养的成骨细胞,每组8个样本,采用酶联免疫吸附法,检测成骨细胞BMP-2的表达。结果:骨康含药血清组BMP-2含量显著低于空白对照组(P<0.05),骨康含药血清组与雌二醇含药血清组BMP-2的含量无明显差异。结论:在去势状态下,骨康可能通过促进BMP-2的分泌,达到治疗骨质疏松症的目的。     

强骨宝方糖尿病模型鼠不同时效与量效的含药血清对成骨细胞增殖的影响

目的：探讨强骨宝方糖尿病模型鼠含药血清促进体外培养成骨细胞增殖的最佳时相与量效。方法：采用胰蛋白酶-Ⅱ型胶原酶消化法从1—2日龄SD大鼠颅盖骨中分离出成骨细胞，鉴定细胞后，用不灭活的不同时效（灌胃3d、5d，末次灌胃后1h、3h）、不同浓度（5％、10％、20％）的强骨宝方糖尿病模型鼠含药血清加入成骨细胞培养体系，培养镐、72h，应用MTT比色法来检测其对成骨细胞增殖功能的影响。结果：各时相的强骨宝方糖尿病模型鼠含药血清对成骨细胞的增殖作用呈浓度依赖性，即20％〉10％〉5％；其中以3d末次灌胃后1h、20％的含药血清作用最明显，在成骨细胞培养48h、72h后均具有显著促进其增殖作用。结论：灌胃3d、末次灌胃后1h、20％不灭活的强骨宝方糖尿病模型鼠含药血清对成骨细胞增殖作用最明显。     

清络通痹颗粒含药血清对体外培养的成骨细胞和破骨细胞的影响

目的：观察清络通痹颗粒（QLTBG）含药血清对体外培养的成骨细胞增殖、碱性磷酸酶（AKP）活性及破骨细胞增殖的影响。方法：（1）取1d龄SD大鼠颅骨分离培养成骨细胞，取5d龄SD大鼠四肢股骨、胫骨分离培养破骨细胞。（2）MTT法检测成骨细胞、破骨细胞增殖，偶联重氮盐法测定成骨细胞AKP活性。结果：QLT以7．2，14．4g／kg给药的大鼠含药血清对成骨细胞的增殖能力有明显增强作用，能明显增加AKP活性；QLT以3．6，7．2，14．4g／kg给药的大鼠含药血清对破骨细胞均有明显的抑制作用。结论：清络通痹颗粒含药血清可促进成骨细胞增殖、增强成骨细胞的AKP活性，抑制破骨细胞增殖。     

含骨松宝的老龄大鼠血清对兔成骨细胞增殖作用的实验研究

目的：观察骨松宝对体外培养成骨细胞增殖和代谢的影响。方法：给18月龄老年大鼠灌胃骨松宝1．5g／kg体重,每日2次,连续3天,末次灌胃后1h取血分离血清,用D8900培养基分别配成含药鼠血清7．5％和15％的培养基,并用于培养成骨细胞24h,同时以加有7．5％和15％未用药老龄大鼠血清的D8900培养基、含20μmol／L氟化钠(NaF)的D8900无血清培养基及D8900无血清培养基作对照,用MTT法检测细胞增殖,并测定培养基上清液中Ca^2+浓度及碱性磷酸酶(ALP)的含量变化。结果：与加有相同浓度鼠血清的D8900培养基组、D8900培养基加NaF组和D8900培养基组比较,含药鼠血清组的成骨细胞增殖明显,差异有显著性(P<0．01),培养基中的Ca^2+消耗量明显增加(P<0．05,P<0．01),ALP浓度明显升高(P<0．05,P<0.01)。结论：骨松宝能促进成骨细胞DNA合成和提高对Ca2^2+的利用,促进成骨细胞的生长增殖。     

补肾壮骨胶囊含药血清对大鼠成骨细胞增殖及骨保护素mRNA表达的影响

目的:观察补肾壮骨胶囊含药血清对SD大鼠成骨细胞(OB)增殖、骨保护素(OPG)mRNA表达的影响,探讨其防治骨质疏松的机理。方法:将40只3月龄SD雌性大鼠分为补肾壮骨胶囊灌胃组(高、中、低剂量)和空白对照组制备含药血清和空白对照血清;取1天龄SD大鼠颅盖骨,分离、培养成骨细胞(OB),分别加入各实验血清组培养液培养OB,倒置相差显微镜下观察OB生长情况,MTT法测定OB的OD值,RT-PCR检测各组成骨细胞OPGmRNA表达。结果:3-8天时,补肾壮骨胶囊高、中、低含药血清组成骨细胞OD值均高于空白对照组(P<0.05)。各含药血清组成骨细胞OPGmRNA表达均高于空白对照组(P<0.01);补肾壮骨胶囊高、中、低含药血清组间比较,差异无显著意义(P<0.05)。结论:补肾壮骨胶囊含药血清组能促进OB增殖、上调OPGmRNA表达,可能是其防治骨质疏松的机制之一。     

骨疏康颗粒含药血清对成骨细胞增殖及细胞周期的影响

目的探讨骨疏康颗粒含药血清对体外培养大鼠成骨细胞增殖及细胞周期分布的影响。方法采用酶消化法进行大鼠成骨细胞培养,制备骨疏康颗粒含药血清干预成骨细胞,以生理盐水大鼠血清作对照,运用MTT法、流式细胞术检测成骨细胞增殖情况及细胞周期分布。结果与同浓度生理盐水血清比较,骨疏康含药血清能不同程度地促进体外培养成骨细胞增殖,其中以20%骨疏康含药血清促增殖作用最显著,与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,且能明显降低G0/G1期细胞比例（P〈0.05）,提高S期成骨细胞比例及增殖指数（P〈0.05）。结论骨疏康含药血清能加速成骨细胞周期,促进成骨细胞增殖。     

阿胶强骨口服液含药血清对大鼠成骨细胞的影响

目的:探讨喂饲阿胶强骨口服液大鼠的血清对体外培养的成骨细胞的生物学作用。方法:在新生SD大鼠头颅骨第2代成骨细胞培养液中加入不同浓度(低、中、高)的阿胶强骨口服液血清,并与空白组对照,分别观察成骨细胞的增殖、分化和矿化功能。结果:阿胶强骨口服液血清具有刺激成骨细胞增殖的作用,可提高碱性磷酸酶活性并增加矿化结节形成的数量。结论:阿胶强骨口服液血清具有刺激体外培养的成骨细胞增殖及分化成熟的功能。     

益骨汤含药血清对新生大鼠成骨细胞成骨性的影响

目的探讨益骨汤含药血清对新生大鼠成骨细胞增殖及其成骨分化的影响。方法实验分为益骨汤高剂量组、益骨汤中剂量组、益骨汤低剂量组、a-D3胶丸组、空白组,先制备各组相应含药血清,然后采用酶消化法获得新生大鼠的成骨细胞,每组给予相应含药血清培养成骨细胞,分别检测各组成骨细胞增殖情况及碱性磷酸酶(ALP)活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量。结果益骨汤高、中、低剂量组和a-D3胶丸组成骨细胞增殖情况均明显优于空白组(P均0.05),益骨汤高、中、低剂量组间比较差异无统计学意义;成骨细胞ALP活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量均明显高于空白组(P均0.05),而与a-D3胶丸组比较差异均无统计学意义(P均0.05)。益骨汤中剂量组ALP活性、钙盐沉积量、钙素分泌量均明显高于益骨汤低剂量组。结论益骨汤含药血清可促进成骨细胞的增殖及成骨分化。     

骨疏康颗粒含药血清对成骨细胞增殖及细胞周期的影响

目的 探讨骨疏康颗粒含药血清对体外培养大鼠成骨细胞增殖及细胞周期分布的影响.方法 采用酶消化法进行大鼠成骨细胞培养,制备骨疏康颗粒含药血清干预成骨细胞,以生理盐水大鼠血清作对照,运用MTT法、流式细胞术检测成骨细胞增殖情况及细胞周期分布.结果 与同浓度生理盐水血清比较,骨疏康含药血清能不同程度地促进体外堵养成骨细胞增殖,其中以20%骨疏康含药血清促增殖作用最显著,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),且能明显降低G0/G1期细胞比例(P＜0.05),提高S期成骨细胞比例及增殖指数(P＜0.05).结论 骨疏康含药血清能加速成骨细胞周期,促进成骨细胞增殖.     

骨康及其含药血清中类性激素样物质含量的测定

目的：验证骨康方及其含药血清中是否有类性激素样物质的存在，同时探讨骨康含药血清的理想采血时间、以及给药剂量与血药浓度之间的关系。方法：采用放免法分别测定骨康方中及其不同给药剂量、不同采血时相的含药血清中类雌二醇(E2)样物质和类睾酮(T)样物质的含量。结果：骨康高浓度煎剂样品和骨康低浓度煎剂样品中均含有类E2样物质和类睾酮(T)样物质，而且呈明显的量效关系；最后一次用药后2小时采血的含药血清中类E2样物质含量最高，其中又以骨康中剂量组相对较高。结论：中药骨康及其含药血清中本身就含有类性激素样作用的物质；中药骨康含药血清理想采血时相可能是用骨康中剂量连续灌胃7天、最后一次用药后2小时采用。     

益骨胶囊对成骨细胞增殖影响的时效及量效关系研究

目的 :运用中药血清药理学方法 ,观察益骨胶囊含药血清对新生大鼠颅骨成骨细胞 (OB)体外增殖的影响 ,并探讨用于OB药效观察的益骨胶囊含药血清制备条件。方法 :雌性 12月龄SD大鼠 80只 ,随机分为生理盐水组、益骨胶囊低剂量 (11 6g/kg)、中剂量 (34 8g/kg)、高剂量 (10 4 4g/kg)组 ,每日灌胃一次 ,连续 12天 ,分别在灌胃后的 0 5h、1h、1 5h、2h采血 ,分离血清 ,用含不同浓度益骨胶囊的血清培养SD新生大鼠颅骨OB ,MTT法检测细胞增殖情况。结果 :末次灌胃后 1 5h采血组的吸收度 (A)值明显高于各组其它时间 (P <0 0 5 ) ;不同剂量各浓度的益骨胶囊含药血清对体外培养的OB增殖均有显著的促进作用 ,其中以高剂量组的稀释比为 2 5 %的血清浓度最佳。结论 :益骨胶囊含药血清对OB增殖具有明显的促进作用 ;益骨胶囊用于OB药效观察的大鼠含药血清制备条件以人等效剂量 9倍连续 12天灌胃、末次灌胃后 1 5h采血 ,血清添加浓度以 2 5 %为宜。     

蒙药珍宝丸药物血清对雪旺细胞增殖的影响

目的 观察蒙药珍宝丸药物血清对体外培养雪旺细胞增殖的影响.方法 选用新生24 h SD大鼠,取双侧坐骨神经,分离、培养并纯化雪旺细胞,用S -100免疫细胞化学染色法鉴定雪旺细胞,将纯化的雪旺细胞分别用胎牛血清、不同给药剂量大鼠血清、以及不含药大鼠血清培养,并分别于培养的第1天、第4天以及第7天用MTT法观察各组雪旺细胞增殖情况.结果 (1)S - 100免疫染色结果显示纯化后的雪旺细胞纯度为93.8％.(2) MTT法测得培养第7天时高剂量含药血清组OD值明显高于正常剂量含药血清组和不含药大鼠血清组OD值(P＜0.05),而全过程中胎牛血清组OD值明显高于不含药大鼠血清组OD值(P＜0.05).结论 蒙药珍宝丸药物血清在适度条件下可促进雪旺细胞的增殖.     

复方中药含药血清对大鼠成骨细胞增殖及矿化功能的影响

目的：观察补肾健脾活血方中药含药血清对大鼠成骨细胞增殖及矿化功能的影响。方法：制备补肾健脾活血方复方中药含药血清，取不同浓度剂量干预体外培养的成骨细胞，用MTT法检测成骨细胞增殖率，用茜素红染色法显示矿化结节的形成。结果：补肾健脾活血方含药血清能明显增加成骨细胞增殖率和矿化结节形成数，且与含药血清浓度呈正相关。结论：补肾健脾活血方能明显促进成骨细胞的增殖，并能促进成骨细胞对骨机质的矿化功能。     

补肾健骨汤对成骨细胞增殖及碱性磷酸酶、骨钙素合成的影响

目的考察补肾健骨汤体外对大鼠成骨细胞增殖及碱性磷酸酶、骨钙素合成的影响.方法采用酶消化法分离大鼠颅骨成骨细胞,取第3代为实验模型,用常规计数法每日同时间检测成骨细胞增殖情况,连续7 d,观察补肾健骨汤提取液及载药血清对成骨细胞增殖的影响;以酶免法测定培养第5天细胞内骨钙素的含量.结果补肾健骨汤提取液及载药血清对体外培养的成骨细胞增殖均有显著的促进作用,其中提取液的作用在0～100 μg/mL浓度范围内呈剂量依赖性;提取液与载药血清均提高细胞内碱性磷酸酶和骨钙素含量,与空白对照组比较均有显著差异(P＜0.05).结论补肾健骨汤体外对成骨细胞的增殖及碱性磷酸酶、骨钙素的合成具有促进作用.