芍药甘草汤对Caco-2细胞P-糖蛋白功能和表达的影响

目的:研究芍药甘草汤(SGT)对Caco-2细胞P-糖蛋白(P-gp)的功能和表达的影响。方法:采用Caco-2单层细胞模型,以P-gp底物3H-地高辛为探针,P-gp抑制剂维拉帕米(Ver)为阳性对照药,测定SGT对Caco-2细胞P-gp功能的影响;用免疫组化法检测SGT对Caco-2细胞膜上的P-gp表达的影响。结果:在Caco-2模型上,3H-地高辛从基底侧(BL)到肠腔侧(AP)与肠腔侧(AP)到基底侧(BL)的表观渗透系数(apparent permeabilities,Papp)比值Papp(BL→AP)/Papp(AP→BL)约为27倍,证明3H-地高辛在Caco-2模型上的吸收方式为主动吸收。阳性药Ver与3H-地高辛联合时,明显增高了3H-地高辛在AP→BL方向的Papp(BL→AP)达3.82倍,但对BL→AP方向的转运影响不明显,说明Ver可明显抑制P-gp活性。SGT在1/25 IC5,1/5IC5,IC5浓度范围对P-gp底物3H-地高辛从AP→BL方向的转运分别促进了159.83%,217.95%,160.26%。1/25 IC5,1/5 IC5浓度下对3H-地高辛在BL→AP方向的转运分别促进了59.16%,50.73%,而相对于IC5浓度下SGT对3H-地高辛在BL→AP方向的转运则无影响。免疫组化结果显示SGT对P-gp的表达有抑制作用。结论:SGT可抑制P-gp的功能和表达,从而促进P-gp底物的吸收。     

川陈皮素在Caco-2细胞模型中跨膜转运机制的研究

目的 研究川陈皮素在人结肠癌细胞Caco-2细胞模型中的跨膜转运机制,模拟体内肠转运的过程.方法 利用Caco-2单层模型研究从绒毛面(apical,AP)侧到基底面(basolateral,BL)侧以及从BL侧到AP侧两个方向的转运过程,并计算不同条件下表观渗透系数(apparent permeability coefficient,Papp),考察其对转运过程的影响.结果 川陈皮素在Caco-2细胞模型中,其转运速率随浓度的增加而基本呈线性增加,Papp (AP-BL)与Papp (BL-AP)大致相同;且加入PgP蛋白抑制剂verapami后,Papp (AP-BL)有所增加,而Papp (BL-AP)有所减少.结论 川陈皮素在Caco-2细胞模型中的转运机制主要是被动扩散,且在转运过程中也存在P-gp蛋白外排作用.     

硫辛酰胺与硫辛酸在Caco-2细胞单层模型中的转运研究

目的研究硫辛酰胺与硫辛酸在体外Caco-2细胞单层模型的转运。方法采用MTS法考察硫辛酰胺与硫辛酸对Caco-2细胞存活率的影响;考察硫辛酰胺与硫辛酸在肠腔侧(apical side,AP)与基底侧(basolateral side,BL)的双向转运,计算累计转运量,表观渗透系数(Papp)及转运百分比,进一步探究转运量与浓度和时间之间的关系。结果硫辛酰胺与硫辛酸转运量与浓度和时间呈依赖性增加,AP→BL硫辛酰胺与硫辛酸Papp值分别为2.44344×10^-5~2.39291×10^-5、8.17978×10^-6~7.89725×10^-6 cm·s^-1,BL→AP硫辛酰胺与硫辛酸Papp值分别为2.25813×10^-5~2.2143×10^-5、8.26798×10^-6~7.92673×10^-6 cm·s^-1。结论在Caco-2细胞的转运实验中硫辛酰胺优于硫辛酸,提示其口服吸收好,生物利用度高,但仍需体内药动学数据的验证。     

基于分子对接与Caco-2细胞模型研究马钱苷元的转运特性

目的:评价马钱苷元的转运特性及P-gp抑制剂对其转运的影响。方法:采用分子对接法预测马钱苷元与P-gp的结合方式及作用能力的强弱,建立Caco-2细胞单层模型,研究马钱苷元在模型中的双向转运,考察时间、药物浓度及P-gp转运蛋白抑制剂对其吸收的影响。运用高效液相色谱法检测药物浓度,计算其表观渗透系数。结果:分子对接结果显示,当对接蛋白为4F4C时,维拉帕米与马钱苷元的对接自由能值存在较大差异,马钱苷元与P-gp通过氢键及疏水作用形成不稳定的复合物;马钱苷元在Caco-2细胞单层模型的双向跨膜转运过程中,均呈现透过率下降趋势,具有相同的吸收特征及时间与浓度依赖性。Papp(BL→AP)与Papp(AP→BL)无显著性差异(P0.05),且无明显方向性,随着时间增加Papp减小;P-gp蛋白抑制剂对马钱苷元转运无显著影响(P0.05)。结论:马钱苷元的跨膜转运方式为被动转运,且分子对接与Caco-2模型结果均揭示了马钱苷元可能不是P-gp的底物,不存在P-gp转运蛋白的外排作用。     

养阴通脑颗粒主要有效部位的转运研究

目的:研究养阴通脑颗粒主要有效部位在Caco-2细胞模型的吸收特性和转运机制。方法:利用MTT试验研究养阴通脑颗粒主要有效部位在Caco-2细胞中的安全浓度,用Caco-2细胞模型研究养阴通脑颗粒主要有效部位配伍后的转运情况,采用高效液相色谱法进行含量测定。结果:黄芪甲苷、川芎嗪和葛根素的吸收转运Papp皆<1.0×10-6cm·s-1,吸收转运Papp与难吸收药物阿替洛尔接近,其口服在体内的吸收从大到小的顺序为:葛根素>川芎嗪>黄芪甲苷。皂苷与黄酮配伍后,黄芪甲苷吸收转运Papp明显提高,促进吸收方向转运;黄酮、皂苷和生物碱的相互配伍对黄芪甲苷的外排作用明显,对川芎嗪和葛根素的吸收转运影响不明显。各有效部位代表成分的双向转运程度差异较大,Papp(B→A)明显大于Papp(A→B),提示这3个有效部位代表成分在Caco-2细胞单层模型中从BL侧到AP侧的外流转运较占优势。结论:黄芪甲苷、川芎嗪和葛根素可能为吸收不良的化合物,在其转运途径中可能受到了小肠顶侧膜的转运蛋白的外排作用。     

HPLC考察和厚朴酚在Caco-2细胞模型的转运特征

目的:研究和厚朴酚在Caco-2细胞模型中的转运机制.方法:Kromasil 100-5 C18色谱柱(4.5 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈.水(70:30),检测波长203 nm.以Caco-2细胞模型研究和厚朴酚的双向转运,考察时间、药物浓度、抑制剂、pH、温度对和厚朴酚转运的影响.运用HPLC检测药物浓度,计算其表观渗透系数.结果:和厚朴酚标准曲线为Y=24 044X-3 763.6(r=0.999 8),检测限0.04 μmol·L-1.和厚朴酚在Caco-2细胞模型中,从细胞层底端到顶端的转运量小于顶端到底端的转运,在相同浓度条件下和厚朴酚在AP→BP和BP→AP方向的转运量随时间呈增长趋势;维拉帕米可以显著提高和厚朴酚AP→BL的转运量;pH对和厚朴酚在AP→BL方向的转运影响不明显;和厚朴酚在AP→BL和BL→AP方向对温度有依赖性.结论:和厚朴酚在Caco-2细胞模型中的转运主要为被动转运,兼有载体介导的主动转运,同时还受到P-gp糖蛋白的外排作用.     

舒胸方在Caco-2细胞单层模型的转运研究

舒胸方(三七、川芎和红花)具有活血化瘀、通络止痛功效,该文研究舒胸方在Caco-2细胞单层模型的转运特征。采用MTT法确定舒胸方对Caco-2细胞单层模型作用的安全浓度范围;采用Caco-2细胞单层模型探讨舒胸方对地高辛吸收转运的影响;采用HPLC测定并计算地高辛表观渗透系数Papp。结果显示,从顶侧(AP)到底侧(BL)(AP→BL),三七提取液、红花提取液、川芎提取液、(川芎+红花)混合提取液及舒胸方复方提取液表观渗透系数(Papp)分别为(3. 12±0. 73)×10~(-6),(2. 58±0. 41)×10~(-6),(4. 97±0. 64)×10~(-6),(4. 63±0. 57)×10~(-6),(5. 79±0. 68)×10~(-6)cm·s-1,表明地高辛在Caco-2单层细胞膜转运中主要以主动吸收为主,且需要P-gp蛋白参与;川芎的加入能显著降低地高辛BL→AP方向的转运(P 0. 01),且能显著增加地高辛AP→BL方向的转运(P 0. 05);舒胸方提取液加入后,BL→AP方向地高辛转运受到显著抑制(P 0. 01)。研究结果提示,红花提取液不影响P-gp蛋白转运也未对地高辛自主扩散产生影响;川芎提取液和舒胸方提取液均显著降低了地高辛BL→AP方向的转运;三七对地高辛自主扩散并无影响;川芎红花混合提取液与川芎提取液实验结果类似。     

小柴胡汤在Caco-2细胞模型的吸收特性和转运机制研究

目的:研究小柴胡汤在Caco-2细胞模型的吸收特性和转运机制.方法:利用MTT实验筛选小柴胡汤在Caco-2细胞中的安全浓度,用Caco-2细胞模型研究小柴胡汤的双向转运情况,采用高效液相色谱法进行含量测定,考察时间对小柴胡汤吸收的影响.结果:汉黄芩苷(wogonoside,WGS)和汉黄芩一素(wogonin,WGN)由AP侧到BL侧的Papp分别为(1.23±0.09)×10-6,(1.07±0.89)×10-5,由BL侧到AP侧的Papp分别为(2.12±0.19)×10-6,(7.12±1.02)×10-6,二者的转运率随着时间的增加而增加,WGS和WGN的PappAP→BL/PappBL→AP分别为0.58,1.49.黄芩苷、黄芩素和甘草酸不能透过Caco-2细胞单层.结论:WGS和WGN在Caco-2,细胞单层模型中的转运途径可能为被动转运.     

野黄芩苷和野黄芩素在Caco-2细胞模型中的吸收转运特性

目的:研究黄酮类化合物野黄芩苷(scutellarin)和野黄芩素(scutellarein)在Caco-2单层细胞模型中的吸收和转运特性。考察缓冲液、作用时间、P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)抑制剂、多药耐药蛋白2(multidrug resistance protein 2,MRP2)抑制剂、乳腺癌耐药蛋白(breast cancer drug resistance protein,BCRP)抑制剂对野黄芩苷和野黄芩素吸收转运的影响。方法:利用Caco-2单层模型研究从绒毛面(apical,AP)侧到基底面(basolateral,BL)侧以及从BL侧到AP侧两个方向的转运过程。应用高效液相色谱法定量分析,计算转运参数和表观渗透系数(apparent permeability coefficient,Papp)。结果:两化合物在磷酸盐缓冲液和Hanks缓冲液中的Papp有差异。在磷酸盐缓冲液中野黄芩苷AP→BL侧无转运,BL→AP侧的Papp为(0.74～1.58)×10-6cm/s;野黄芩素在AP→BL侧与BL→AP侧的Papp分别为(4.33～6.79)×10-6cm/s和(1.32～2.56)×10-6cm/s。随着时间延长,Papp逐渐下降,野黄芩素的吸收转运优于野黄芩苷。P-gp抑制剂维拉帕米、MRP2抑制剂MK-571钠盐及BCRP抑制剂利血平能够促进野黄芩苷的吸收转运,维拉帕米能促进野黄芩素的吸收转运,MK-571钠盐促进野黄芩素外排。结论:野黄芩苷属于难吸收的化合物,野黄芩素吸收优于野黄芩苷,野黄芩素可通过小肠上皮被动吸收进入体内。P-gp抑制剂能够促进野黄芩苷和野黄芩素的转运,MRP2抑制剂和BCRP抑制剂能够促进野黄芩苷的转运,MRP2抑制剂促进野黄芩素外排。野黄芩苷吸收不良和外排蛋白的作用是造成其生物利用度较低的原因。     

千金子甾醇在Caco-2细胞单层模型中的吸收研究

目的研究千金子甾醇在Caco-2细胞单层模型中的吸收和转运。方法用Caco-2细胞模型研究千金子甾醇在Caco-2细胞模型中的双向转运,考察时间、药物浓度和P-糖蛋白抑制剂对千金子甾醇跨膜转运的影响。采用UPLC-MS/MS法测定药物浓度,计算表观渗透系数(Papp)以及表观渗透率(PDR)。结果在Caco-2细胞中的转运过程中,不同浓度千金子甾醇的Papp值介于1×10-6~1×10-5,其累积转运量随时间和浓度的增加而增加,具有浓度依赖性。10、30、50μmol/L千金子甾醇的PDR分别为1.35、0.83、0.65。盐酸维拉帕米可以促进千金子甾醇由AP侧→BL侧的转运。结论千金子甾醇在肠道中的吸收中等,以被动转运为主,可能存在肠道转运蛋白的外排机制。     

丹参脂溶性成分在Caco-2细胞模型中吸收机制研究

 目的研究丹参脂溶性成分在Caco-2细胞模型中的吸收机制。方法以Caco-2细胞作为吸收研究模型,分别测定了各种条件下,包括分别以单体丹参酮Ⅱ_A和丹参醇提取物给药、改变给药浓度、改变转运方向以及加入影响吸收的物质,丹参酮Ⅱ_A,隐丹参酮和丹参酮Ⅰ的转运情况。结果给予不同剂量的丹参酮ⅡA,其表观通透系数P_app随浓度的增加先降低后升高; 丹参酮Ⅱ_A细胞绒毛侧Apical→基底侧Basolateral转运(AP→BL)大于BL→AP 5倍以上;随着冰片含量增加,丹参脂溶性成分的 P_app明显增大;EDTA对吸收没有明显影响。结论丹参酮Ⅱ_A在Caco-2细胞模型中的转运机制类似载体介导转运兼有被动扩散,无细胞旁路途径,无外排泵参与;冰片有促吸收的作用。本实验结果为含丹参的制剂研究、口服给药等提供信息。     

乌头碱在Caco-2细胞模型上的转运行为

目的:研究乌头碱在Caco-2细胞模型上的转运行为。方法:采用MTT法确定乌头碱在Caco-2细胞转运过程中的安全浓度范围,以乌头碱累积转运量及表观渗透系数Papp为指标,采用高效液相色谱法对成分进行检测,考察不同浓度、不同孵育时间乌头碱在Caco-2细胞模型上的双向转运。结果:乌头碱累积转运量与孵育时间、给药浓度呈正相关,不同浓度乌头碱Papp保持恒定,无统计学差异,且外排作用明显强于吸收,外排比接近1.5,Papp约为1×10-5cm·s-1。结论:乌头碱以被动转运为主,且可能存在外排蛋白的参与,为吸收良好的一类药物。     

蛇床子素在Caco-2细胞模型中的转运机制研究

 目的 研究蛇床子素在 Caco-2 细胞模型中的转运机制。方法 通过研究蛇床子素在 Caco-2 细胞模型中的转运,考察蛇床子素浓度、PEG600、P-gp抑制剂维拉帕米（verapamil及温度对蛇床子素转运的影响。结果 随着蛇床子素溶液浓度和温度的升高,蛇床子素在Caco-2 细胞中 AP-BL 的转运量增加;PEG600对蛇床子素在 Caco-2 细胞中的 AP-BL 的转运量有显著增加;P-gp 抑制剂维拉帕米对蛇床子素在 Caco-2 细胞中转运的表观通透系数 PAP 和 PBL 无显著影响。结论 蛇床子素表观通透系数 PAP大于10×10-6 cm·s-1,较易被 Caco-2 细胞吸收,但由于3个浓度蛇床子素溶液的PAP 和 PBL比值无明显变化、P-gp 抑制剂对 PAP 和 PBL 无明显影响及转运的活化能较低(17.31 kJ·mol-1,因此,蛇床子素在 Caco-2 细胞模型中的转运机制主要是被动转运。     

Caco-2细胞单层模型研究葛根提取物中葛根素转运机制及白芷提取物对其转运的影响

 目的 利用人源结肠腺癌细胞系 Caco-2 细胞单层模型,研究了葛根提取物中葛根素的吸收转运机制,以及白芷提取物对其吸收转运的影响。方法 建立人源结肠腺癌细胞系 Caco-2细胞模型,利用此模型研究葛根提取物中葛根素的双向转运特征,并考察时间、药物浓度、pH值对其转运的影响;研究葛根中葛根素在P-糖蛋白（P-gp）、人多药耐药蛋白（MRP）蛋白专属抑制剂存在或缺失条件下,葛根素在Caco-2细胞模型的转运情况;并考察白芷提取物对葛根中葛根素吸收转运的影响。结果 在pH 5.5弱酸条件下,葛根素吸收较好;随着葛根提取物浓度的增大,K_a值逐渐增大,P_app值逐渐增加并趋于平衡,在加入P-糖蛋白和人多药耐药蛋白蛋白抑制剂后,葛根的P_{app AP-BL}增大,P_{app BL-AP}/P_{app AP-BL}降低;白芷提取物中香豆素能够促进葛根素的转运。结论 葛根提取物中葛根素在Caco-2 细胞模型的吸收机制以被动转运为主,同时存在着载体转运,P-糖蛋白和人多药耐药蛋白蛋白可能为其主要载体并参与载体转运的过程,白芷提取物对葛根素有一定促吸收作用。     

补骨脂素在Caco-2细胞模型中的吸收特性研究

 目的 研究补骨脂素在Caco-2细胞模型中的吸收特性,为设计合理的给药方式提供依据。方法 利用MTT实验筛选出 补骨脂素在Caco-2细胞中的安全浓度,然后用Caco-2细胞单层模型研究补骨脂素的双向转运,采用高效液相色谱法检测药物 浓度,计算其表观渗透系数,考察时间、药物浓度对补骨脂素吸收的影响。结果 补骨脂素在Caco-2细胞模型中的转运中对 应时间点表观渗透系数值(P_app)A→B约等于B→A,随时间增加P_app逐渐下降,而在所测浓度范围内P_app值基本保持恒定。 结论 补骨脂素在Caco-2细胞模型中的吸收机制主要是被动转运。     

23-羟基白桦酸在Caco-2细胞模型中的吸收特性研究

 目的研究23-羟基白桦酸在Caco-2细胞模型中的吸收特性,为设计合理的给药方式提供依据。方法利用MTT实验筛选出23-羟基白桦酸在Caco-2细胞中的安全浓度,然后用Caco-2细胞单层模型研究23-羟基白桦酸的双向转运,采用同位素示踪法检测药物浓度,计算其表观渗透系数,考察时间、药物浓度对23-羟基白桦酸吸收的影响。结果23-羟基白桦酸在Ca- co-2细胞模型中的转运中对应时间点表观渗透系数值(P_app)A→B约等于(P_app)B→A,随时间增加P_app逐渐下降,而在所测浓度范围内P_app值基本保持恒定。结论23-羟基白桦酸在Caco-2细胞模型中的吸收机制主要是被动转运。     

淫羊藿苷在Caco-2细胞单层模型中的吸收机制

目的:研究淫羊藿苷在Caco-2细胞模型中的吸收机制。方法:通过研究10,20μmol.L^-1淫羊藿苷在细胞中的双向转运,考察时间、药物浓度及转运蛋白抑制剂对淫羊藿苷吸收的影响。用超高压液相法测定药物浓度,计算其表观渗透系数。结果:淫羊藿苷通过Caco-2细胞单层的转运量4 h内随时间延长呈线性增大,双向转运的渗透系数P_BA/P_AB大于4。在加入P-糖蛋白(P-gp)转运蛋白抑制剂维拉帕米后,淫羊藿苷P_AB增大了1.2倍[(1.37±0.10)×10^-6cm.s^-1],P_BA/P_AB显著降低(由4.83下降到2.72)。而加入转运蛋白多药耐药蛋白(MRP2)的抑制剂白细胞三烯C₄、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)的底物潘生丁时,对淫羊藿苷转运影响不显著。结论:结果提示淫羊藿苷口服吸收差的原因有二:一是淫羊藿苷肠壁的渗透系数较小,二是可能存在肠道P-gp转运蛋白对淫羊藿苷的外排。     

白芷中10种呋喃型香豆素对长春新碱肠道转运的影响

目的研究自芷中10种吠喃型香豆素成分:氧化前胡素、佛手柑内酷、珊瑚菜素、欧前胡素、异欧前胡素、自当归脑、异补骨脂素、东蓑若内酷、伞形花内酷、自当归素对长春新碱吸收转运的影响。方法采用人源结肠癌细胞系Caco-2细胞单层模型,以长春新碱透过Caco-2细胞单层的表观渗透系数(papp)为指标,分别考察自芷中10种吠喃型香豆素类成分对长春新碱透过Caco-2细胞单层的影响。结果 10种香豆素类化介物对长春新碱转运的影响小同,氧化前胡素、异欧前胡素、欧前胡素能促进长春新碱透过Caco-2细胞单层转运(P0.05);佛手柑内酷、自当归脑、异补骨脂素、伞形花内酷、自当归素对长春新碱透过Caco-2细胞单层转运有抑制作用(P0.01);珊瑚菜素、东蓑若内酷对长春新碱透过Caco-2细胞单层转运无明显影响。结论小同种类吠喃型香豆素类化介物对长春新碱的肠道转运的影响小同,虽然均是吠喃型香豆素,对药物的转运可表现为完全相反的作用,可能与吠喃型香豆素类的结构以及其连接的官能团有关。     

巴戟天中有效成分在Caco-2细胞模型中的吸收转运

目的 研究巴戟天中的有效成分水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸和耐斯糖在人源结肠癌细胞Caco-2单层模型中的吸收特性。方法 通过细胞培养技术建立Caco-2细胞单层模型,以细胞形态学特征、细胞跨膜电阻等指标验证和筛选模型。考察不同pH、不同质量浓度的水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸和耐斯糖对Caco-2细胞活力的影响,以确定给药pH和质量浓度。通过Caco-2细胞转运实验探究药物质量浓度、作用时间与P-糖蛋白抑制剂维拉帕米对水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸和耐斯糖吸收转运的影响。采用高效液相色谱法（HPLC）测定水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸和耐斯糖的累积转运量。结果 水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸和耐斯糖在Caco-2细胞单层模型中吸收良好,三者低质量浓度的双侧表观渗透系数（P_app）明显大于中、高质量浓度;加入盐酸维拉帕米后,三者的P_app变化不大,说明这3个成分的小肠吸收不需要载体。去乙酰车叶草苷酸的液相色谱图中存在少量水晶兰苷,说明去乙酰车叶草苷酸存在首过效应。结论 巴戟天中水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸和耐斯糖3个特征性成分在跨膜转运过程中均以被动转运为主,且3个成分都存在自身质量浓度抑制现象。