热疗对顺铂耐药的卵巢癌化疗增敏作用体外实验研究

目的热疗是一种古老的疗法,热疗除了能够直接杀伤癌细胞外,还具有放射增敏和化疗增敏作用.本实验研究的目的旨在探讨热疗与顺铂联合对人卵巢癌顺铂耐药细胞株CAOV3/cDDP的生长抑制作用以及温度与药效的关系.方法将热疗(42℃)和顺铂(6、12、24μg/mL)分别单独以及联合作用于体外培养的人卵巢癌CAOV3/cDDP细胞株.采用MTT(methyl thiazolyl tetrazolium)法检测各实验组人卵巢癌耐药细胞株CAOV3/cDDP的生长抑制率;采用集落形成实验观察各实验组对人卵巢癌耐药细胞株CAOV3/cDDP的诱导分化作用;应用先镜观察实验处理前后人卵巢癌CAOV3/cDDP细胞形态和结构的变化,确定凋亡细胞,评价各组细胞凋亡程度.结果42℃热疗单独作用对肿瘤细胞的生长仅有轻度抑制作用,但它能显著增强顺铂对肿瘤细胞的抑制效应.受热42℃的顺铂与37℃生理温度下的顺铂相比较,前者对体外培养的肿瘤细胞有明显的杀伤作用(P＜0.01).结论顺铂作用的增强与温度的升高呈正相关性,热疗与顺铂药效之间存在着相互协同增敏作用.     

联合中药消积煎剂综合治疗对顺铂耐药卵巢癌体外作用的实验研究

目的：进行体外药物敏感试验，应用综合治疗方案提高化疗药物的敏感性，探索克服卵巢恶性肿瘤抗药性，提高患者生存率的有效途径。方法：将消积煎剂（0．5、5、50mg／mL）、热疗（42℃）和顺铂（6、12、24μg/mL）分别单独以及联合作用于体外培养的人卵巢癌CAOV3／cDDP细胞株。采用MTT（methyl thiazolyl tetrazolium）法检测各实验组人卵巢癌耐药细胞株CAOV3／cDDP的生长抑制率；采用集落形成实验观察各实验组对人卵巢癌耐药细胞株CAOV3／cDDP的诱导分化作用；应用光镜观察实验处理前后人卵巢癌CAOV3／cDDP细胞形态和结构的变化，确定凋亡细胞，评价各组细胞凋亡程度。结果：消积煎剂、热疗和顺铂3种疗法同时应用，结果显示为很明显的协同作用（P〈0．01）。形态学观察可看到，实验处理后人卵巢癌CAOV3／cDDP细胞出现典型的凋亡现象。结论：消积煎剂、热疗和顺铂联合应用可逆转肿瘤细胞对顺铂的耐药性，有很好的临床应用前景。     

联合中药消积煎剂综合治疗对顺铂耐药卵巢癌体外作用的实验研究

目的:进行体外药物敏感试验,应用综合治疗方案提高化疗药物的敏感性,探索克服卵巢恶性肿瘤抗药性,提高患者生存率的有效途径。方法:将消积煎剂(0.5、5、50mg/mL)、热疗(42℃)和顺铂(6、12、24μg/mL)分别单独以及联合作用于体外培养的人卵巢癌CAOV3/cDDP细胞株。采用MTT(methyl thiazolyl tetrazolium)法检测各实验组人卵巢癌耐药细胞株CAOV3/cDDP的生长抑制率;采用集落形成实验观察各实验组对人卵巢癌耐药细胞株CAOV3/cDDP的诱导分化作用;应用光镜观察实验处理前后人卵巢癌CAOV3/cDDP细胞形态和结构的变化,确定凋亡细胞,评价各组细胞凋亡程度。结果:消积煎剂、热疗和顺铂3种疗法同时应用,结果显示为很明显的协同作用(P<0.01)。形态学观察可看到,实验处理后人卵巢癌CAOV3/cDDP细胞出现典型的凋亡现象。结论:消积煎剂、热疗和顺铂联合应用可逆转肿瘤细胞对顺铂的耐药性,有很好的临床应用前景。     

鸦胆子油乳对人卵巢癌耐药细胞A2780／DDP的耐药逆转作用

目的 研究鸦胆子油乳对人卵巢癌耐药细胞A2780/DDP的耐药逆转作用.方法 四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察顺铂及鸦胆子油乳对A2780/DDP细胞的生长抑制作用.结果 卵巢癌耐药细胞株A2780/DDP对顺铂产牛耐药性,顺铂对A2780/DDP的耐药倍数为5.6倍.经鸦胆子油乳预处理24h后,顺铂对A2780/DDP的耐药倍数显著下降.结论 鸦胆子油乳可逆转卵巢癌耐药细胞A2780/DDP的耐药性.     

熊果酸对卵巢癌干细胞荷瘤裸鼠耐药的逆转作用

目的探讨熊果酸对于卵巢癌干细胞荷瘤裸鼠耐药的逆转作用。方法选用人卵巢癌Skov3细胞通过无血清悬浮培养法富集干细胞,接种于裸鼠皮下,建立裸鼠人卵巢癌干细胞皮下移植瘤耐药模型。随机分为Skov3贴壁细胞组、干细胞组,熊果酸高、中、低剂量组,顺铂组,顺铂联合熊果酸组。连续给药14天,空白组给予0.9%Na Cl溶液。每天测量瘤体积,绘制肿瘤生长曲线,计算抑瘤率。给药结束后,取肿瘤组织,HE染色观察肿瘤细胞形态、结构,免疫组化检测ABCG2的表达,TUNEL法检测凋亡细胞。结果熊果酸可以抑制肿瘤组织生长,并且抑瘤率随剂量增加而上升,熊果酸与顺铂联用明显优于顺铂(P0.01)。不同剂量的熊果酸干预后,ABCG2的表达下调,肿瘤干细胞凋亡增多,均具有剂量依赖性。并且熊果酸联合顺铂组较单用顺铂组,ABCG2的表达明显被抑制,细胞凋亡数明显升高。结论熊果酸可以抑制卵巢癌干细胞荷瘤裸鼠的瘤体生长,通过下调耐药指标ABCG2,促进细胞凋亡,提高顺铂诱导的细胞凋亡来达到逆转耐药的作用。     

EGb761逆转NF-κB介导的胃癌细胞耐药及协同增敏的机制研究

目的 探讨银杏叶提取物（ginkgo biloba extract, EGb761）对顺铂诱导的胃癌细胞SGC-7901及胃癌耐药细胞SGC-7901/CDDP增殖和凋亡的影响及其对胃癌细胞化疗耐药的影响及其机制。方法 采用EGb761、顺铂单用及EGb761与顺铂联合应用处理人胃癌细胞株SGC-7901及耐药细胞SGC-7901/CDDP,采用四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium, MTT）法检测两种细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡,实时荧光定量PCR法、Western blot法检测两种细胞中NIBP、NF-κB P65 mRNA和蛋白的表达。结果 顺铂和EGb761均对两种胃癌细胞的增殖具有抑制作用,呈剂量依赖性,但SGC-7901/CDDP细胞对顺铂的敏感性较差。EGb761与顺铂联合应用可明显增强SGC-7901及SGC-7901/CDDP细胞株对顺铂的敏感性并促进细胞的凋亡。SGC-7901/CDDP细胞中NIBP和NF-κB p65的mRNA及蛋白相对表达水平均高于SGC-7901细胞（P＜0.05）,EGb761能明显抑制由顺铂诱导的NIBP和NF-κB p65的表达（P＜0.05）。结论 EGb761具有显著的化疗增敏效果,并能逆转胃癌细胞耐药,增强顺铂对胃癌细胞生长的抑制作用并促进细胞凋亡。其逆转肿瘤细胞耐药和化疗增敏的作用机制可能是通过抑制NF-κB通路的活性,减少NIBP和NF-κB p65的表达而实现。     

槐耳浸膏对乳腺癌细胞系MCF-7的体外作用研究

目的：研究槐耳浸膏对乳腺癌细胞系MCF-7的体外细胞毒性作用及增敏作用和逆转耐药的作用。方法：用MTT法测定不同浓度的槐耳浸膏作用不同时间下对乳腺癌细胞系MCF-7的杀伤作用，同时测定应用槐耳浸膏时对阿霉素的增敏作用和耐药逆转作用；结论：金克在一定范围内对乳腺癌细胞系具有明显的杀伤作用，其作用3天时，IC50在0．05mg／ml左右，随着药物浓度升高和作用时间的延长其杀伤作用相应的增强，对阿霉素化疗具有增敏作用和逆转耐药作用。     

热灌注疗法加局部化疗治疗肺癌胸腔积液的疗效观察

目的评价热灌注治疗加局部化疗治疗肺癌胸腔积液的综合疗效,并讨论其机制。方法采用循环胸腔43℃生理盐水加顺铂治疗25例肺癌胸腔积液患者,随访观察胸水疗效、不良反应、实验室检查等,评价综合疗效。并同以往单用顺铂组治疗对比。结果热疗+化疗治疗胸腔积液有效率达96%,对照组仅31%。结论热灌注疗法加局部化疗为治疗肺癌胸腔积液的有效新方法。机制为温热使顺铂对耐药细胞毒性恢复并具增敏作用,凋亡介导的癌细胞热杀伤作用,热疗后机体免疫功能增强和灌洗液的物理冲刷作用是重要机制。     

莪术醇诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡及对PI3K/Akt信号通路相关蛋白的影响

目的观察莪术醇对人卵巢癌SKOV3细胞的凋亡作用及对PI3激酶(PI3K)/丝氨酸/苏氨酸激酶(Akt信号通路相关蛋白的影响。方法采用MTT法检测不同浓度莪术醇以及临床常用抗肿瘤药物顺铂对人卵巢癌SKOV3细胞的生长抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率及对细胞周期的影响;Western blotting法检测莪术醇、顺铂及其两者联合诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡过程中PI3K/Akt信号通路蛋白(PI3K、p-PI3K、Akt、pAkt)的表达。结果莪术醇对人卵巢癌SKOV3细胞具有生殖抑制作用,其生殖抑制作用呈剂量-时间正效应关系;莪术醇可以促进人卵巢癌SKOV3细胞的凋亡,细胞凋亡率随着莪术醇浓度增大而增强;不同质量浓度莪术醇处理SKOV3细胞48 h后,细胞周期分布发生明显改变,药物的作用将肿瘤细胞的生长阻止在G0/G1和S期;莪术醇、顺铂及其两者联合在诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡时,下调了PI3K/Akt信号通路中p-PI3K、p-Akt蛋白的表达水平,且莪术醇和顺铂联合应用时具有协同效应,联合组p-PI3K、p-Akt蛋白表达下调最为明显。结论莪术醇可能通过抑制PI3K/Akt信号通路的激活来阻滞人卵巢癌SKOV3细胞周期,诱导细胞凋亡,进而阻止肿瘤细胞的生长或诱导其分化。     

鸦胆子油静脉乳剂对卵巢癌细胞株CAOV3作用的实验研究

目的探讨并阐明鸦胆子油静脉乳剂对卵巢癌细胞株CAOV3作用机制,为该中药治疗卵巢癌提供可靠的实验依据。方法采用电镜技术,观察应用鸦胆子油静脉乳剂后卵巢癌细胞株CAOV3的形态学改变。结果CAOV3细胞超微结构变化明显,出现中晚期细胞凋亡现象,微绒毛及突起明显减少,伪足消失,线粒体空泡化,核染色质凝集,可见凋亡小体。结论鸦胆子油静脉乳剂可促进卵巢细胞形态学改变、诱导癌细胞凋亡,能降低CAOV3细胞侵袭和转移能力。     

姜黄素对卵巢癌耐药细胞株OVCAR-3/DDP的顺铂耐药逆转作用初探

目的:研究姜黄素的使用与卵巢癌顺铂耐药细胞株OVCAR-3/DDP对顺铂化疗敏感性的关系。方法:用MTT实验检测姜黄素处理后OVCAR-3/DDP细胞株对顺铂敏感性的变化。用荧光定量PCR方法检测各处理组OVCAR-3/DDP细胞株中mdr1基因表达。结果:姜黄素明显增加OVCAR-3/DDP细胞株对顺铂的敏感性。姜黄素抑制OVCAR-3/DDP细胞株中多药耐药基因mdr1的表达。结论:姜黄素通过抑制糖蛋白P-gp的药物外排作用,有效逆转OVCAR-3/DDP细胞株的耐药性。     

中药复方药物血清对人卵巢癌细胞SKOV3抑制作用的研究

目的：探讨中药复方理冲生髓饮药物血清对人卵巢癌细胞株SKOV3细胞增殖和细胞凋亡形态学变化的作用机理。方法：以不同剂量理冲生髓饮水煎荆灌饲大鼠，制备药物血清，培养SKOV3卵巢癌细胞株，应用MTT比色法观察SKOV3细胞生长情况和在电子显微镜下观察中药血清诱导SKOV3细胞凋亡的形态学变化。结果：理冲生髓饮药物血清对人卵巢癌细胞SKOV3的体外生长有抑制作用；电镜下可见凋亡的肿瘤细胞表面微绒毛消失，细胞核固缩，染色质凝集成新月状，形成凋亡小体等典型的形态学改变。结论：理冲生髓饮药物血清对人卵巢癌细胞SKOV3的体外增殖有抑制作用并可诱导其细胞凋亡。     

去甲斑蝥素增强人卵巢癌SKOV3细胞对顺铂敏感性的机制研究

目的 探讨去甲斑蝥素与顺铂联合应用对人卵巢癌SKOV3细胞敏感性的影响.方法 噻唑蓝(MTT)法检测去甲斑蝥素联合顺铂用药对卵巢癌细胞增殖的影响;流式细胞术检测SKOV3细胞凋亡;荧光显微镜观察药物作用细胞后细胞线粒体的形态变化和分布;Western blot实验检测细胞中procaspase-3的表达水平.结果 去甲斑蝥素可有效提高卵巢癌细胞对顺铂的敏感性,并促进顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡.去甲斑蝥素联合顺铂用药可显著改变卵巢癌细胞内线粒体形态,降低procaspase-3蛋白表达水平.结论 去甲斑蝥素可增强人卵巢癌SKOV3细胞对顺铂敏感性.     

增免抑瘤方联合顺铂对铂类耐药卵巢癌抑瘤率影响的实验研究

目的观察增免抑瘤方对顺铂耐药卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用,并探讨其可能的作用机制。方法采用顺铂耐药人卵巢癌细胞株COC1/DDP构建裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为中药高、中、低剂量组,顺铂组,联合组(顺铂联合中药),对照组(生理盐水),连续给药3周,剥取瘤体计算瘤重及抑瘤率;定量RT-PCR及免疫组化测定Bcl相关X连锁蛋白(Bcl-associated x protein,Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病基因-2(B-cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2)的表达;电镜观察瘤体细胞超微结构。结果联合组抑瘤率最高,为(59.26±6.86)%,与其他各组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。RT-PCR结果显示:促凋亡基因Bax mRNA联合组表达最高,对照组表达最低(P<0.01)。抑凋亡基因Bcl-2mRNA对照组表达最高,中药高剂量组表达最低,联合组Bcl-2mRNA的表达低于顺铂组(P<0.01)。免疫组化结果显示:联合组Bax蛋白的表达最高,Bcl-2蛋白的表达最低,与其他各组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。电镜下中药各剂量组与联合组均可见凋亡中、晚期的表现。结论增免抑瘤方辅助化疗可逆转耐药卵巢癌裸鼠对顺铂的耐药性,增强其抑瘤作用。其机制与上调Bax的表达,下调Bcl-2的表达,促进耐药卵巢癌细胞的凋亡有关。     

银杏内酯B下调切除修复交叉互补基因1表达及增加耐药卵巢癌细胞对顺铂敏感性体外研究

目的:研究银杏叶提取物银杏内酯B(GB)增加耐顺铂卵巢癌细胞株(SKOV3/DDP-luc)对顺铂(CDDP)敏感性的作用及相关机制。方法:分别以DMSO及25μmol/L的GB处理SKOV3/DDP-luc细胞3、7及14d,溴化噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞经不同浓度CDDP作用72h后的活性,并据此计算出各组细胞对CDDP的IC50;同时提取上述作用时间点各组细胞的总蛋白,Western Blot检测DNA损伤修复相关蛋白ERCC1的表达情况。结果:GB作用3、7、14d后,SKOV3/DDP-luc细胞对CDDP的IC50分别降为24.2(与对照组相比P=0.07)、18.2(与对照组相比P=0.001)、11.6μmol/L(与对照组相比P=0.0004);在上述处理过程中,肿瘤细胞中ERCC1的表达逐渐下降(P0.01)。结论:GB可显著增加耐药卵巢癌细胞株对CDDP的敏感性,这一作用通过下调肿瘤细胞中ERCC1蛋白的表达而实现,提示GB可能成为临床卵巢癌化疗过程中的一种辅助药物。     

黄芩苷对人卵巢癌细胞株SKOV3、CAOV3增殖侵袭的作用机制研究

目的研究黄芩苷对人卵巢癌细胞株SKOV3、CAOV3增殖侵袭的作用机制。方法体外培养的人卵巢癌细胞株SKOV3、CAOV3分别与不同浓度的黄芩苷(0、5、7.5、10、12.5μmol/L)孵育24 h,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活性;用改良Boyden趋化小室法行癌细胞侵袭实验。卵巢癌细胞用不同浓度黄芩苷(0、5、7.5、10μmol/L)处理24 h,然后用蛋白质免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)实验检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白水平表达及信使RNA(mRNA)水平。结果不同浓度黄芩苷对人卵巢癌细胞株SKOV3、CAOV3活性及侵袭均有抑制作用,且呈浓度依赖性;能明显降低MMP-2蛋白表达和mRNA表达,亦呈剂量依赖性。结论黄芩苷可在体外抑制人卵巢癌细胞株SKOV3、CAOV3活性及侵袭,其机制可能与抑制MMP-2活性有关。     

白英甾体皂苷组分抗肿瘤作用初步研究

目的：探讨白英甾体皂苷组分的抗肿瘤作用及其作用机制。方法：采用MTT法观察白英甾体皂苷组分体外对人卵巢癌细胞SKOV3及人宫颈癌细胞ME180的增殖抑制作用、检测LDH漏出率观察白英甾体皂苷组分对人卵巢癌细胞SKOV3的杀伤作用。结果：白英甾体皂苷组分能显著抑制SKOV3、ME180的生长，低浓度下对人正常细胞CCC—HPF-1无明显抑制作用，作用于SKOV3时LDH漏出率显著增加。结论：白英甾体皂苷组分能引起肿瘤细胞的坏死，具有抗肿瘤的作用。     

增免抑瘤方对顺铂耐药卵巢癌裸鼠耐药相关基因HIF-1α、Glut1、MDR1、P-gp表达的影响

目的研究增免抑瘤方(ZMYL)对顺铂耐药卵巢癌裸鼠耐药调控基因HIF-1α、Glut1、MDR1、P-gp表达的影响。方法采用顺铂耐药人卵巢癌细胞株COC1/DDP构建裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为对照组,中药高、中、低剂量组,顺铂组(DDP),联合组(DDP联合中药),各组给予相应干预措施共3周。定期测量瘤体最大、最小径线,绘制肿瘤生长曲线,给药结束后处死裸鼠,剥取瘤体计算瘤重及抑瘤率,免疫组化测定瘤体HIF-1α、Glut1的表达,定量RT-PCR测定瘤体MDR1、P-gp的表达。结果①抑瘤率:联合组抑瘤率最高,达(59.26±6.86)%,与其他各组比较差异均有统计学意义(P<0.01);中药各剂量组均有一定的抑瘤作用,抑瘤率低于顺铂组(P<0.01)。②免疫组化结果:联合组HIF-1α的表达最低(P<0.01);中药高、中剂量组HIF-1α的表达较顺铂组降低(P<0.01);低剂量组与之比较差异无统计学意义(P>0.05)。联合组以及中药高剂量组Glut1的表达低于顺铂组(P<0.01);中剂量组与之比较差异无统计学意义(P>0.05);低剂量组高于顺铂组(P<0.05),但与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。③定量RT-PCR结果:顺铂组MDR1、P-gp的表达较对照组升高(P<0.01);联合组以及中药各剂量组MDR1、P-gp的表达较顺铂组降低(P<0.01)。结论增免抑瘤方辅助化疗可逆转耐药卵巢癌裸鼠对顺铂的耐药性,增强其抑瘤作用;其作用机制可能通过下调瘤体内缺氧标记物Glut1、HIF-1α的表达,下调多药耐药基因MDR1、P-gp的表达,从缺氧介导的"药泵"耐药机制途径改善卵巢癌化疗耐药。     

中药单体逆转卵巢癌顺铂耐药机制的研究进展

卵巢癌的早期症状不典型并且缺乏有效的筛查方法,多数患者确诊时已是晚期,严重危害当代妇女健康。肿瘤减灭术后以铂类药物为主的化疗是晚期卵巢癌和复发性卵巢癌患者的首选,但几乎所有的复发性卵巢癌患者最终都会发展为铂耐药。因此寻找天然、安全、有效的化疗增敏剂已成为卵巢癌研究中迫切而又重要的课题。随着中药在癌症治疗中的应用日益广泛,人们对中药单体的研究也日渐深入,中药单体干预卵巢癌顺铂(DDP)耐药的机制也愈发清晰。基于中药单体研究现状,通过查阅多个中英文数据库中中药单体相关实验研究,发现中药单体在多方面参与了逆转卵巢癌DDP耐药,其机制可以概括为以下6个方面:增加胞内药物浓度、逆转凋亡受阻、逆转胞内信号通路异常、增加DNA损伤和抑制DNA修复、调控胞内自噬、抑制上皮间质转化(EMT)。中药单体从多靶点减轻了卵巢癌DDP耐药,增加了DDP对卵巢癌体外细胞和体内移植瘤的毒性作用,因此中药单体有望成为卵巢癌DDP化疗的天然增敏剂。然而中药单体目前的研究还存在实验类型单一、机制尚不完全明确、不良反应不明等不足,从实验室到临床,中药单体增敏DDP化疗的应用未来还需要多靶点、多水平的实验研究及大规模的临床研究的验证。     

消岩汤药物血清对A549/DDP多药耐药逆转作用的研究

[目的]探讨消岩汤药物血清对接种S180昆明小鼠肿瘤的抑制作用,及对耐顺铂人肺腺癌细胞系A549/耐顺铂(DDP)的耐药逆转作用。[方法]通过建立小鼠肿瘤模型,观察消岩汤对小鼠S180移植肿瘤生长的影响;以人肺腺癌敏感细胞A549和耐药细胞A549/DDP为研究对象,采用细胞毒实验(MTT)方法,探讨消岩汤对肺癌耐药细胞的多药耐药逆转作用。[结果]消岩汤高、低剂量组的抑瘤率分别是48.36%和27.87%;消岩汤荷瘤动物含药血清高、低剂量组分别与DDP合用时,对耐药细胞A549/DDP的杀伤作用分别是DDP组的1.78倍和1.57倍。[结论]消岩汤可改善小鼠生活质量,拮抗恶病质,并能够抑制肿瘤生长;消岩汤含药血清对A549及A549/DDP均有生长抑制作用,且能增强DDP对肺癌敏感细胞和耐药细胞的杀伤作用,具有耐药逆转作用。