甘露消毒丹对温病湿热证大鼠LBP mRNA、CD14 mRNA、NF-κBp动态干预

目的观察甘露消毒丹对温病湿热证大鼠细胞内毒素特异性受体(LBP mRNA),(CDl4 mRNA)及(NF-κBp65)表达变化的动态干预,深入探讨清热化湿方的治疗机制.方法分为正常组、湿热模型组(高脂 高温高湿 大肠杆菌)、清热化湿组;采用逆转录.聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测肝巨噬细胞LBP mRNA,CD14 mRNA,免疫组化技术检测肝巨噬细胞NF-κBp65活化.结果模型组在感染6,12,24 h等不同时相点LBP mRNA,CDl4 mRNA,NF-kB表达逐渐非常显著增强,且不同时相点之间比较均有显著性差异,说明随着病程的发展,湿热模型LBP mRNA,CD14 mRNA,NF-kB出表达逐渐增强.治疗组6,12,24 h等不同时相点比较,LBP mRNA,CD14 mRNA表达减弱,具有非常显著性差异;24 h时相点治疗组与模型组比较LBP mRNA,CD14 mRNA表达减弱有非常显著性差异,但仍未恢复正常,说明LBP mRNA,CD14 mRNA遏制衰减是一个缓慢的过程.而治疗组NF-kB表达6,12,24 h各时相点间比较无显著性差异;且与正常组比较NF-kB激活均无显著性变化.结论甘露消毒丹对温病湿热证大鼠肝巨噬细胞LBP mRNA,CD14 mRNA及NF-kB的激活具有较好的干预调控作用,能中止炎症介质的转录,限制急性炎症反应.     

温病湿热证大鼠模型LBPmRNA、NF—κBp动态表达的对比研究

目的：通过多因素复合造模方法，观察模型大鼠内毒素特异性爱体LBPmRNA及NF—κBp65表达变化，探讨湿热致病机制。方法：分为正常组、湿热模型组（高脂＋高温高湿＋大肠杆菌）、模型对照组（高脂＋高温高湿）；采用逆转录-聚合酶链反应技术（RT-PCR）检测肝巨噬细胞LBPmRNA，免疫组化技术检测肝巨噬细胞NF-κBp65活化。结果：在感染6小时、12小时、24小时等不同时相点湿热模型组LBPmRNA、NF-κB表达与模型对照组、正常组比较均有非常显著增强；湿热模型组在6小时、12小时．24小时等不同时相点LBPmRNA、NF-κB表达逐渐增强。之间比较均有显著性差异。结论：靶细胞LBPmRNA适量表达及NF—κB激活既是湿热病证的主要致病机理，又是湿热病证的相关性指标。     

泻心汤有效组分配伍对脂多糖诱导的大鼠腹腔巨噬细胞活化的影响

目的:观察泻心汤有效组分结合蒽醌与总黄酮配伍(重量比为4∶3)对LPS诱导巨噬细胞NO合成以及对iNOS、CD14和TLR4 mRNA表达的影响。方法:采用MTT法观察结合蒽醌与总黄酮配伍对巨噬细胞生长活性的影响,采用G riess法观察其对LPS诱导的巨噬细胞产生NO的影响,采用RT-PCR法观察其对巨噬细胞iNOS、CD14和TLR4 mRNA表达在2、4、6、24h的影响。结果:泻心汤结合蒽醌与总黄酮配伍在0.01~0.1 mg/m l剂量对巨噬细胞生长活性无明显影响,此浓度能明显抑制LPS诱导的巨噬细胞NO分泌,结合蒽醌与总黄酮配伍组TLR4和CD14 mRNA表达在2h明显低于LPS模型组,而iNOS mRNA表达与模型组无明显差异,4h以后iNOS和TLR4 mRNA的表达均明显低于模型组,而CD14 mRNA表达在4h后与模型组无明显差异。结论:泻心汤结合蒽醌与总黄酮配伍抑制LPS诱导的巨噬细胞NO合成、iNOS mRNA表达与其抑制TLR4 mRNA的表达密切相关,而与CD14的关系不大,TLR4可能是泻心汤结合蒽醌与总黄酮配伍抗内毒素的作用靶点。     

甘露消毒丹干预小鼠病毒性肝炎湿热证Toll受体通路的实验研究

目的 使用清热祛湿类代表方甘露消毒丹干预病毒性肝炎湿热证小鼠,通过研究Toll受体通路中TLR2、TLR4、NF-κBp65的表达变化,探讨清热祛湿法干预温病湿热证的药效机制及可能作用靶点.方法 将小鼠随机分为正常组、模型组(肥甘饮食+湿热环境+病毒MHV-A59感染造模)、治疗组(模型组使用甘露消毒丹干预)、安慰剂组(模型组使用生理盐水干预).采用免疫组化法检测各组小鼠肝脏TLR2、TLR4、NF-κBp65蛋白阳性表达,实时荧光定量PCR检测各组小鼠肝组织中TLR2、TLR4、NF-κBp65基因的mRNA含量.结果 甘露消毒丹能降低湿热证小鼠体温,增加小鼠耗食量、饮水量,对TLR2、TLR4、NF-κBp65蛋白及mRNA表达均有抑制作用.结论 清热化湿法能够抑制TLR2、TLR4、NF-κBp65的表达,通过保护细胞膜,减轻炎症反应而发挥治疗温病湿热证的效应.     

基于TLR4/NF-κB通路的解毒化瘀通腑方干预内毒素性肝损伤的作用机制

目的研究解毒化瘀通腑方通过TLR4/NF-κB通路干预内毒素性肝损伤的作用机制。方法 SPF级雄性SD大鼠共160只,随机分为模型组,中药高、中、低剂量组,TLR4单克隆抗体组各30只,并设置空白组。造模各组给予D-GalN (300mg/kg)+LPS(30μg/kg)腹腔注射制备内毒素肝损伤模型。分别在24h、48h、72h三个时间点处死8只大鼠,观察大鼠肝功能(ALT、AST)、内毒素、TNF-α、IL-1β、IL-6水平变化;RT-PCR法检测肝组织中TLR4、NF-κB mRNA表达;Western-Blot法检测肝组织中CD14、TLR4、MyD88、IKK、NF-κB蛋白表达;HE染色观察肝组织病理变化。结果造模后大鼠肝损害明显,内毒素及炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著升高,肝组织中TLR4、NF-κB mRNA表达及CD14、TLR4、MyD88、IKK、NF-κB的蛋白表达同步升高,24h达到高峰,之后逐渐下降,同一时间点以模型组大鼠肝脏损害最为严重,中药组损害程度较模型组相对较轻,其中以中药高剂量对肝脏的保护作用最为明显,在24h、48h时间点中药高剂量组ALT及AST与模型组比较有显著性差异(P0.05);内毒素水平及炎性因子TNF-a、IL-1β、IL-6水平在同一时间点与模型组比较有显著性差异(P0.05);在同一时间点,中药高剂量组大鼠肝组织TLR4、NF-κB mRNA表达及CD14、TLR4、MyD88、IKK、NF-κB的蛋白表达与模型组比较有显著性差异(P0.05),和TLR4抗体组表现相近,两者比较差异无统计学意义(P0.05)。肝组织病理损害以模型组最重,在同一时间点中药中、高剂量组肝组织病理损害表现较模型组轻。结论解毒化瘀通腑方能够降低内毒素肝损伤大鼠血清内毒素水平,影响TLR4/NF-κB通路炎性级联信号的传导,抑制NF-κB的激活,减少炎性递质及细胞因子的释放,从而减轻内毒素对机体的损害,起到肝细胞保护作用。     

清热化湿方对温病湿热证大鼠肝线粒体K+-Na+-ATP酶作用的实验研究

目的:观察清热化湿方对温病湿热证大鼠肝线粒体Na -K -ATP酶活性的调控作用.方法:24只大鼠分为正常组、湿热模型组、清热化湿组,运用定磷法测肝线粒体Na -K -ATP酶活性变化.结果:湿热模型组肝线粒体Na -K -ATP酶活性非常显著降低(P＜0.01),清热化湿组治疗后上述指标恢复正常,与正常组比较无显著性差异(P＞0.05).结论:清热化湿方对温病湿热证大鼠模型肝线粒体Na -K -ATP酶活性具有恢复调节作用.     

大肠湿热型溃疡性结肠炎患者Toll-like2/4受体mRNA表达及溃结灵的干预作用

目的探讨溃结灵颗粒配合柳氮磺胺吡啶（SASP）对大肠湿热型溃疡性结肠炎（UC）的作用机制。方法活动期UC（大肠湿热证）患者随机分为治疗组（溃结灵＋SASP）与对照组（SASP）,以RT-PCR方法检测治疗后肠黏膜组织内的TLR2/4mRNA表达的变化。结果病变组的TLR2/4 mRNA表达较正常对照组明显增强。治疗组治疗后较治疗前TLR2/4 mRNA表达明显减少;对照组治疗后较治疗前TLR2 mRNA表达有所减少,但无显著性差异,TLR4 mRNA表达明显减少。治疗组与对照组TLR2 mRNA表达治疗后差值比较有显著差异。治疗组与对照组的TLR2/4 mRNA表达治疗后差值比较亦有显著差异。结论溃结灵配合SASP治疗很可能是通过抑止TLR4、TLR2 mRNA表达,减弱了CD14和TLR2的协同作用,抑制TLR2依赖的脂蛋白信号转导,阻断TLR4蛋白,进而磷酸化激活κB的功能减弱,使损伤的内皮细胞得以修复,而达到治疗UC的作用。     

甘露消毒丹及其拆方对感染肠道病毒71型细胞miR-146a和Toll样受体4mRNA表达的影响

目的探讨甘露消毒丹及其拆方对肠道病毒71型(EV71)感染后免疫及炎症反应的调节作用。方法运用细胞培养技术,设甘露消毒丹组(甘全方组)、清残方组、利残方组、病毒唑组、正常组、模型组,进行病毒毒力和药物细胞毒性测定后,以药物作用于EV71感染后的RD细胞,24 h后RT-PCR检测各组细胞miR-146a、Toll样受体4(TLR4)mRNA表达。结果与正常组比较,模型组miR-146a mRNA表达降低,TLR4 mRNA表达升高;与模型组比较,甘全方组、清残方组、利残方组miR-146a mRNA表达升高、TLR4 mRNA表达降低,病毒唑组与模型组比较差异不明显;与甘全方组比较,清残方组miR-146a、TLR4 mRNA表达降低,利残方组miR-146a mRNA表达升高、TLR4 mRNA表达降低;与清残方组比较,利残方组miR-146a mRNA表达升高,TLR4 mRNA表达无明显差异。结论甘露消毒丹可能通过调节miR-146a、TLR4 mRNA表达从而影响EV71感染所致免疫反应,其中清残方与利残方可能存在互相拮抗效应。     

利开灵对脑出血大鼠脑组织CD14、TLR4 mRNA表达的影响

目的:探讨脑出血后大鼠出血局部脑组织CD14、TLR4 mRNA表达的变化规律,并观察利开灵对其影响。方法:采用Rosenberg法改良后建立大鼠脑出血模型,并根据脑出血不同时点(12、24、48、72h),用RT-PCR方法动态观察假手术组、模型组、利开灵组大鼠出血局部脑组织CD14、TLR4 mRNA的表达,并观察利开灵对神经功能缺损体征及出血局部脑组织相应病理改变的影响。结果:模型组各时点CD14、TLR4 mRNA均明显升高,在48h达最高(P<0.01,P<0.05);同时发现利开灵可明显改善脑出血后神经功能缺损体征及出血局部脑组织病理形态损伤,并下调CD14、TLR4 mRNA过高表达。结论:CD14/TLR4信号通路可能参与了脑出血后病理损伤过程,利开灵对出血局部脑组织CD14、TLR4 mRNA表达有较好的调控作用,这可能是利开灵改善脑出血后脑水肿的作用机制之一。     

甘露消毒丹对温病湿热证大鼠胃动素、胃泌素作用的实验研究

目的：观察甘露消毒丹对温病湿热证大鼠胃动素（MTL）、胃泌素（GAS）作用的调控作用。方法：分为正常组、湿热模型组、清热化湿组；运用放免法观察血液中MTL、GAS的变化。结果：湿热模型组MTL水平显著升高，GAS水平显著降低，湿热模型组经过治疗后，上述指标恢复正常，与正常组比较无显著性差异。结论：甘露消毒丹既能调降温病湿热证大鼠模型血浆MTL水平显著升高，又能调升血清GAS水平显著降低．     

钩藤碱对AngⅡ诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

 目的研究钩藤碱(rhynchophylline,Rhy)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖的抑制作用及机制。方法采用细胞计数法和MTT比色法检测Rhy对AngⅡ诱导大鼠VSMCs增殖的影响;测定Rhy对AngⅡ作用的VSMCs上清液一氧化氮(nitric oxide,NO)含量和一氧化氮合酶(constitutive nitric oxide synthase,cNOS)活性的影响;实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测VSMCs中c-myc、NOS和高血压相关基因-1(hypertension related gene-1,rHRG-1)mRNA的表达。结果Rhy(3×10^-6～3×10^-7mol·L^-1)呈浓度依赖性地抑制AngⅡ诱导大鼠VSMCs的增殖,升高细胞上清液中NO的含量和NOS活性,降低c-myc mRNA,升高rHRG-1和NOS mRNA的表达。结论Rhy明显抑制AngⅡ诱导大鼠VSMCs的增殖,机制可能与增加VSMCs中NOS活性并促进NO的合成和释放以及下调c-myc、上调NOS和rHRG-1 mRNA的表达有关。     

平调饮对原发性肝癌AFP mRNA、GPC-3 mRNA影响的研究

目的探讨平调饮对原发性肝癌患者AFP mRNA、GPC-3 mRNA表达的影响。方法抽取60例肝癌患者的抗凝血液,配对法随机分为试验组和对照组各30例。采用Tr-Izol一步法提取总RNA,用逆转录巢式聚合酶链反应(RT-nested PCR)技术检测治疗前后试验组及对照组患者AFP mRNA、GPC-3 mRNA的表达情况。结果治疗后试验组及对照组AFP mRNA、GPC-3 mRNA表达均显著下降,在降低AFP mRNA表达方面试验组与对照组无显著性差异,降低GPC-3 mRNA表达方面试验组明显优于对照组(P0.05)。结论平调饮能有效抑制人血液中AFP mRNA、GPC-3 mRNA的高表达,在降低GPC-3 mRNA表达方面效果优于华蟾素。其治疗原发性肝癌机制与临床应用价值值得进一步研究。     

固肾培元方对肾阳虚大鼠耳蜗组织Bcl-2及Bax mRNA表达的影响

目的 观察固肾培元方对肾阳虚大鼠耳蜗组织Bcl-2、Bax mRNA蛋白表达的影响。     

华蟾素对晶状体上皮细胞增殖及bcl-2 mRNA、bax mRNA表达影响

目的 探讨华蟾素对兔晶状体上皮细胞(lens epithelial cells, LECs)增殖及凋亡抑制基因bcl-2 mRNA、凋亡促进基因bax mRNA表达的影响。     

络气郁滞证大鼠主动脉组织葡萄糖调节蛋白78mRNA表达的研究

目的 观察络气郁滞证大鼠主动脉组织葡萄糖调节蛋白78(GRP78)mRNA表达的变化.方法 20只Wistar大鼠按体重随机分为正常组、络气郁滞组,实验末检测血清同型半胱氨酸(Hcy)、一氧化氮(NO)、血浆内皮素(ET),观察主动脉组织超微结构,以RT-PCR方法检测主动脉组织中GRP78mRNA的表达.结果 与正常组比较,络气郁滞组血清Hcy明显增高.NO明显下降(P<0.05),ET明显升高(P<0.05);主动脉组织超微结构发生明显改变,主动脉组织中GRP78mRNA的表达较正常组比较明显增强(P<0.01).结论 络气郁滞证大鼠的主动脉组织GRP78mRNA表达增强,其血管内皮功能障碍可能与主动脉组织内质网的应激有关.     

复方黄芩提取物对小鼠体内流感病毒mRNA复制和干扰素(IFN)表达的影响

目的:研究复方黄芩提取物对小鼠体内流感病毒(influenza virus,Ⅳ)mRNA复制的抑制作用和干扰素(interferon,IFN)表达的诱生作用。方法:以流感病毒鼠肺适应株A/FM/1/47(H1N1)感染的小鼠肺炎为模型,采用RT-PCR技术测定小鼠体内流感病毒mRNA和干扰素含量。观察复方黄芩提取物对小鼠体内流感病毒mRNA复制和IFN表达的影响。结果:复方黄芩提取物对小鼠体内流感病毒mRNA表达有较好的抑制作用(P<0.01),对干扰素的表达有诱生作用(P>0.05)。结论:复方黄芩提取物具有诱生干扰素、抑制流感病毒在小鼠体内的复制作用。     

复方蒲黄颗粒对局灶性脑缺血再灌注大鼠热休克蛋白70及其mRNA表达的影响

目的 观察复方蒲黄颗粒对大鼠脑缺血再灌注后热休后蛋白70(HSP-70)及其mRNA表达的影响. 方法 75只雄性SD大鼠,采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,随机分为假手术组、模型组,蒲黄颗粒大、中、小剂量组,每组15只.各组大鼠分别在缺血2小时再灌注6、24、72小时断头取脑组织,每时间点5只.再灌注24小时进行神经功能缺陷评分,采用Nissl染色观察神经元形态学变化;采用原位杂交检测HSP-70 mRNA的表达;采用免疫组化法检测HSP-70蛋白的表达. 结果 蒲黄颗粒大、中剂量组在缺血再灌注24小时时神经功能改善显著优于模型组(P＜0.05);Nissl染色结果显示,模型组大脑皮层神经元形态不规则,体积缩小,胞核固缩深染,细胞间质水肿,尼氏体减少,可见明显的神经元丢失,而蒲黄颗粒各剂量组未见明显的神经元损伤和丢失;模型组在再灌注6～72小时HSP-70及其mRNA的表达均增加,与假手术组比较各时间点差异均具有统计学意义(P＜0.01),蒲黄颗粒各剂量均能增强HSP-70及其mRNA的表达,与模型组各时间点的差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 复方蒲黄颗粒能促进脑缺血再灌注后HSP-70的表达,减轻缺血再灌注损伤.     

针药对抑郁症模型大鼠海马α1-AR mRNA表达的影响

目的 观察中枢去甲肾上腺素系统在抑郁症病理和治疗机制中的作用.方法 建立慢性应激诱导的抑郁模型,通过原位杂交技术,观察α1受体mRNA在海马不同区域的表达.结果 ① 抑郁症模型大鼠海马α1-AR的mRNA阳性表达的神经元数目增加,在CA3和DG区显著高于正常组(P<0.01);而阳性表达神经元的平均光密度降低,在DG区显著低于正常组(P<0.05);②在早期(3天),氟西汀治疗组α1-AR的mRNA阳性表达神经元数目出现减少,尤其在DG区明显低于针药结合治疗组(P<0.05);③ 在中期(7～14天),α1-AR的mRNA阳性表达神经元的平均光密度有增强趋势,尤其是针药合用治疗组14天时CA1明显强于氟西汀治疗(P<0.05);④ 在多数时间段,针刺组和针药结合组α1-AR的mRNA阳性表达呈现较为相近的效应.结论 抑郁大鼠海马单个神经元α1-AR的活性下降,针刺、氟西汀单独或者合用都可以影响海马α1-AR的mRNA表达,但是各自有不同的效应特点,且存在时效差异.     

复方861含药血清对HSC-T6细胞Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA表达影响的研究

观察复方 86 1含药血清对HSC T6细胞Ⅰ型胶原 (CoL Ⅰ )、Ⅲ型胶原 (CoL Ⅲ )mRNA表达影响。以不同剂量复方 86 1灌胃大鼠制备的含药血清 ,作用HSC T6细胞 4 8h ,应用逆转录定量PCR方法测定其对HSC T6细胞CoL Ⅰ、CoL ⅢmRNA表达的影响。结果表明 :复方 86 10 5、1.0、2 .0、6 .0g kg等不同剂量含药血清HSC T6细胞CoL Ⅰ、CoL ⅢmRNA表达。与空白对照组比较 ,具有显著性 (P <0 .0 5或P ,0 .0 1)。因此 ,复方 86 1可降低HSC T6细胞CoL Ⅰ、CoL ⅢmRNA表达水平 ,具有抗肝纤维化作用。     

针氧疗法对兔慢性鼻-鼻窦炎模型鼻窦黏膜上皮白细胞介素-8、肿瘤坏死因子-αmRNA表达影响的实验研究

目的 观察针刺结合氧疗对慢性鼻-鼻窦炎(CRS)模型鼻窦黏膜促炎因子白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达的影响,探索针氧疗法治疗((2RS)的可能机制.方法 取新西兰大白兔36只,适应性喂养1周后,随机分为正常组、模型组、假手术组、西药组、针刺组、针氧组,每组6只,建立CRS模型.西药组予克拉霉素25 mg/(kg·d),共14 d;针刺组针刺双侧迎香穴、肺俞穴、脾俞穴、肾俞穴和后三里穴,1次/d,共14 d;针氧组在针刺治疗的基础上,给予29%O<,2>吸氧30 min,1次/d,共14 d.鼻窦黏膜HE染色,光镜观察黏膜病理改变;实时定量PCR检测鼻窦黏膜IL-8、TNF-α mRNA表达.结果 模型组鼻窦黏膜呈慢性炎症改变,黏膜上皮细胞增生,炎细胞浸润,腺体和杯状细胞明显增生;IL-8 mRNA表达较正常组显著增高(P<0.01),TNF-α mRNA表达虽较正常组增高,但无显著差异(P>0.05).针氧组鼻窦黏膜上皮修复较好,炎细胞浸润、腺体和杯状细胞增生不如西药组明显;鼻窦黏膜IL-8 naRNA表达较模型组显著降低(P<0.01),与正常组无显著差异(P>0.05);TNF-α mRNA表达虽较模型组降低,但无显著差异(P>0.05).结论 针氧疗法对CRS具有一定的治疗作用,其机制可能与降低鼻窦黏膜促炎细胞因子IL-8、TNF-α mRNA表达有关.