慢性阻塞性肺疾病肺气虚证患者T淋巴细胞差异表达基因的初步研究

目的 通过基因芯片技术研究慢性阻塞性肺疾病（COPD）肺气虚证患者T淋巴细胞相关差异基因表达情况。方法 采集肺气虚证和肺阴虚证患者、健康人的外周血作为实验血样和对照血样。采用Ficoll技术分离外周血淋巴细胞、流式细胞仪分选并纯化T淋巴细胞,采用人类全基因表达谱芯片技术筛选出差异表达基因。结果 肺气虚证组／肺阴虚证组和肺气虚证组／健康对照组均高表达的差异基因15条。结论 基因芯片技术能有效地研究中医证的基因表达谱并初步筛查出COPD肺气虚证患者T淋巴细胞相关差异表达基因。     

肺气虚证患者T淋巴细胞相关基因的表达研究

目的：通过基因芯片技术研究肺气虚证患者T淋巴细胞基因表达的差异。方法：采集肺气虚证和肺阴虚证患者、正常人的外周血作为实验血样和对照血样。采用Fieoll技术分离外周血淋巴细胞、流式细胞仪分选并纯化T淋巴细胞，一步法提取总RNA，逆转录合成双链cDNA，体外转录合成生物素标记的cRNA，片断化后，采用人类全基因表达谱芯片进行芯片杂交，扫描后筛选出差异表达基因。结果：肺气虚证患者／正常人外周血T淋巴细胞相关差异表达基因45条，其中上调41条，下调4条；肺气虚证／肺阴虚证患者外周血T淋巴细胞相关差异表达基因43条，其中上调27条，下调16条；肺气虚证组／肺阴虚证组、正常人组均高表达的差异基因15条。结论：基因芯片技术能有效地研究中医证的基因表达谱，筛查出肺气虚证患者T淋巴细胞相关差异表达基因。     

慢性阻塞性肺病肺气虚证和肺阴虚证患者细胞因子变化的研究

目的研究慢性阻塞性肺病（COPD）肺气虚证和肺阴虚证患者细胞因子的水平及差异。方法分别对COPD肺气虚证患者30例、COPD肺阴虚证患者30例和健康对照者30例血清白细胞介素（IL）-8、IL-1β、肿瘤坏死因子α（TNF—α）的水平进行检测。结果COPD肺气虚证和肺阴虚证患者血清IL-8、IL-1β、TNF-α的水平均较健康对照者显著增高（P〈0．01），且肺阴虚组高于肺气虚组，组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论COPD肺气虚证和肺阴虚证患者存在高水平的细胞因子，肺阴虚证患者更明显。     

肺气虚证和肺阴虚证蛋白芯片研究

目的:探讨蛋白质芯片技术对肺气虚证和肺阴虚证的研究意义以及两证的血清IL-1β、IL-8、TNF-α表达水平。方法:将肺气虚证和肺阴虚证患者的血清通过Array-ELISA蛋白芯片平台检测。结果:COPD肺气虚组、COPD肺阴虚组、支气管哮喘肺气虚组、支气管哮喘肺阴虚组的血清IL-1β、IL-8、TNF-α水平明显高于健康组水平,差异有统计学意义(P0.01);COPD肺气虚组与COPD肺阴虚组、支气管哮喘肺气虚组与支气管哮喘肺阴虚组比较,COPD肺阴虚组和支气管哮喘肺阴虚组的血清IL-1β、IL-8、TNF-α水平相对较高,差异有统计学意义(P0.05);COPD肺气虚组与支气管哮喘肺气虚组、COPD肺阴虚组与支气管哮喘肺阴虚组比较,血清IL-1β、IL-8、TNF-α水平差异无统计学意义(P0.05)。COPD肺气虚组、COPD肺阴虚组、支气管哮喘肺气虚组、支气管哮喘肺阴虚组点的灰度值(发光信号值)明显比健康组点的灰度值高;COPD肺阴虚组和支气管哮喘肺阴虚组点的灰度值比COPD肺气虚组和支气管哮喘肺气虚组的高;COPD肺气虚组点的灰度值与支气管哮喘肺气虚组的、COPD肺阴虚组点的灰度值与支气管哮喘肺阴虚组的相近。结论:蛋白质芯片技术用于肺气虚证和肺阴虚证是可行的;肺气虚和肺阴虚证是一种慢性以肺部为主的全身炎症综合症,且肺阴虚较肺气虚有加重趋势。     

慢性阻塞性肺疾病肺气虚证与肺阴虚证患者细胞免疫功能的比较

目的 了解慢性阻塞性肺疾病(COPD)肺气虚证与肺阴虚证患者细胞免疫功能的差异.方法 采用流式细胞术分别测定COPD肺气虚证患者(肺气虚证组)31例、肺阴虚证患者(肺阴虚证组)27例和健康体检者(对照组)30例外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+数值,并给予统计分析.结果 与对照组比较,肺气虚证和肺阴虚证组CD4+、CD4+/CD8+均降低,CD8+升高,差异均有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05);CD3+降低,肺阴虚证组差异有统计学意义(P＜0.01),肺气虚证组差异无统计学意义(P＞0.05).肺阴虚证组与肺气虚证组比较,CD4+/CD8+降低,差异有统计学意义(P＜0.01);CD3+、CD4+降低,CD8+升高,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 COPD肺气虚证与肺阴虚证患者均存在细胞免疫功能低下,其中肺阴虚证患者细胞免疫功能受抑更为明显.     

慢性阻塞性肺疾病肺气虚证与肺阴虚证患者细胞免疫功能的比较

目的了解慢性阻塞性肺疾病(COPD)肺气虚证与肺阴虚证患者细胞免疫功能的差异。方法采用流式细胞术分别测定COPD肺气虚证患者(肺气虚证组)31例、肺阴虚证患者(肺阴虚证组)27例和健康体检者(对照组)30例外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+数值,并给予统计分析。结果与对照组比较,肺气虚证和肺阴虚证组CD4+、CD4+/CD8+均降低,CD8+升高,差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05);CD3+降低,肺阴虚证组差异有统计学意义(P<0.01),肺气虚证组差异无统计学意义(P>0.05)。肺阴虚证组与肺气虚证组比较,CD4+/CD8+降低,差异有统计学意义(P<0.01);CD3+、CD4+降低,CD8+升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论COPD肺气虚证与肺阴虚证患者均存在细胞免疫功能低下,其中肺阴虚证患者细胞免疫功能受抑更为明显。     

基因芯片技术研究针灸对肾阳虚证骨关节炎患者免疫相关基因表达的影响

目的:探讨针灸对肾阳虚证骨关节炎患者免疫相关基因表达的影响。方法:用基因芯片技术检测肾阳虚证骨关节炎患者及正常人的基因表达谱,以及针灸治疗显效者的治疗前后基因表达谱的变化。结果:通过基因表达谱芯片筛选出与肾阳虚骨关节炎免疫相关的基因13条,肾阳虚骨关节炎患者与正常人相比表达下调4条,上调5条。经温针治疗显效的4例患者治疗前后的基因芯片比较结果显示:NM000265、NM001838基因普遍上调,NM_001784基因普遍下调,其他基因表达无规律性变化。结论:肾阳虚证骨关节炎的发生涉及免疫相关基因表达的异常,针灸可能通过诱导或阻遏这些基因的表达发挥效应。     

肺气虚证和肺阴虚证患者细胞因子变化的研究

目的：探讨肺气虚证和肺阴虚证患者细胞因子的水平及差异。方法：分别对60例肺气虚证患者（COPD30例、支气管哮喘30例）、55例肺阴虚证患者（COPD30例、支气管哮喘25例）和健康对照者30例血清IL-8、IL-1β、TNF—a的水平进行检测。结果：肺气虚证和肺阴虚证患者血清IL-8、IL-1β、TNF-a的水平均较健康对照者有显著增高（P〈0．05）,且肺阴虚组高于肺气虚组,组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：肺气虚证和肺阴虚证患者存在高水平的细胞因子,肺阴虚证患者更明显。     

晚期结直肠癌脾气亏虚证患者差异表达基因的临床研究

目的:从分子生物学水平探讨晚期结直肠癌脾气亏虚证的中医证候本质,为证候的客观化研究提供思路。方法:选取2012年12月—2013年11月本院肿瘤二科住院及门诊收治的经病理明确诊断的III期、IV期结直肠癌患者,其中晚期结直肠癌脾气亏虚证患者5例为试验组,非脾气亏虚证患者6例为对照组。两组患者均采集外周血,提取RNA,采用Agilent表达谱芯片筛选湿热内蕴证的差异表达基因,并进行基因功能注释及富集度分析。结果:试验组与对照组比较共筛选出126条差异表达基因,其中上调的71条,下调的55条;基因功能富集度分析提示:在上调的差异基因功能中,明显的趋势是脾气亏虚证大部分症状与细胞质基因及免疫应答相关基因的过度表达相关,脘腹胀痛,神疲乏力可能与线粒体基因的上调相关;黏附基因表达下调可能是导致是脾气亏虚证患者免疫功能紊乱原因。结论:应用表达谱芯片筛选差异表达基因,可以从分子生物学水平对晚期结直肠癌脾气亏虚证的证候实质的探索提供新思路;脾气亏虚证与细胞质基因及免疫应答相关基因的过度表达相关,与免疫功能紊乱相关。     

慢性阻塞性肺疾病肺气虚证和肺阴虚证患者肺功能变化的研究

目的：探讨常规肺功能检查在慢性阻塞性肺疾病（COPD）肺气虚证和肺阴虚证患者中的应用价值。方法：应用德国耶格公司肺功能仪（Master Semen PFT）分别对COPD肺气虚证患者34例、COPD肺阴虚证患者30例和健康对照者34例各做常规肺功能检查。指标包括：肺活量（VC）、用力肺活量（FVC）、第1s用力呼气容积（FEV1）、第1s用力呼气容积占用力肺活量百分比（FEV1/FVC）、最大用力呼气峰流量（PEF）、最大通气量（MVV）。结果：COPD肺气虚证和肺阴虚证患者肺功能改变均较健康对照者有不同程度降低（P〈0．05），COPD肺气虚证和肺阴虚证患者肺功能改变组间无显著差异（P〉0．05）。结论：肺功能测定可以为肺气虚证和肺阴虚证的研究提供客观依据，反映病情变化实质，用于病情评价。     

慢性乙型肝炎肝郁脾虚证和脾胃湿热证患者的差异表达基因研究初探

目的 探讨慢性乙型肝炎(慢乙肝)肝郁脾虚证与脾胃湿热证患者的差异表达基因。方法 采集正常健康者（26名）及肝郁脾虚证（35例）、脾胃湿热证（34例）患者空腹肘静脉血,按Trizol法提取总RNA。采用Aglient表达谱芯片进行基因芯片检测,利用随机方差模型筛选差异基因,通过GO、Pathway、Genbank、NCBI、Geneontology等数据库对差异基因进行分析。结果 两证型间获得差异基因125个（其中66个为上调基因,59个为下调基因）,主要表现的功能为跨膜运输、硒反应离子、钙离子依赖的胞吐作用等。参与的通路中较为重要的包括影响细胞黏附分子、钙离子信号通路、白细胞穿上皮迁移等。通过动态网络构建,寻找出共表达能力差异最显著的9个基因（即LOC340508、HIST2H2BE、MPL、FLJ22536、TUBA8、NT5M、EGFL7、PTPRF、TSPAN33）,其主要涉及免疫反应、细胞生长、DNA损伤、信号转导、炎症反应等生命过程。结论慢乙肝肝郁脾虚证和脾胃湿热证两个证型间存在差异表达基因,提示中医证候分类学具有基因表达谱依据,基因组学研究方法有望为中医辨证提供客观依据。     

老龄冠心病心肾阳虚证的差异表达基因谱分析

目的:采用双通道基因表达谱芯片技术,分析老龄冠心病心肾阳虚证基因表达水平的异常。方法:采用病证结合的诊断标准,筛选老龄冠心病心肾阳虚证患者6名和同龄健康对照者6名,采血,分离白细胞,提取总RNA,做基因芯片检测。结果:经Microsoft excel和Microsoft office Access软件筛选,老龄冠心病心肾阳虚证与健康对照者比较,获得44条差异表达基因,主要涉及脂代谢、免疫、心血管病变的基因。结论:老龄冠心病心肾阳虚证的发生涉及一系列免疫和脂代谢紊乱的复杂的过程,与动脉硬化存在密切关联。     

以药测证绘制肾虚证两大基因网络调控路线图谱

目的 研究肾虚证基因网络调控的路线和规律.方法 选择青年组（4月龄）、老年组（24月龄）、淫羊藿总黄酮（Epimedium Flavonoids,EF）治疗组SD大鼠,取全面反映肾虚的7个组织下丘脑、垂体、肾上腺、淋巴细胞、骨骼、肝脏、肾脏,采用Affymetrix公司的大鼠全基因组芯片再次重复肾虚证基因表达谱差异研究.结果 老年大鼠下丘脑、垂体、肾上腺（HPA轴）显示神经递质γ氨基丁酸（GABA）,促性腺激素释放激素（GnRH）,促甲状腺激素释放激素（TRH）与促甲状腺激素（TSH）,生长激素释放激素受体（GHRH）、胰岛素样生长因子及结合蛋白（IGF、IGFBP）;淋巴细胞显示与细胞生长相关的生长因子相关蛋白（GFRP）,与免疫调节相关的IFNγ、IL-4、IL-6等;骨骼显示甲状旁腺（PTH）、降钙素（calcitonin）与骨基质相关的前胶原、胶原、结缔组织生长因子等;肝脏显示氧化磷酸化相关的细胞色素Cytochrome P450、NADH脱氢酶,与蛋白质代谢相关的谷氨酸脱氢酶（Glutamate dehydrogenase）,与糖代谢相关的葡萄糖-6-磷酸酶（G-6-Phosphatase）均为低表达.EF作用后,可见老年大鼠7个标本低表达的基因几乎全部上调,此外还有大量与衰老机理相关的基因明显上调.包括HPA轴的神经递质如GABA,激素如GnRH,细胞周期相关基因如CyclinB,免疫调节相关基因如NF-κB105;淋巴细胞与生长调节相关的基因如GFRP,免疫调节相关的基因如IFNγ;骨骼的甲状旁腺、降钙素、IGF、前胶原、胶原、GnRH、Progesterone等;肝脏的大量代谢相关的基因如Cytochrome P450、NADH脱氢酶;肾脏的代谢相关基因及钠、氯通道等基因.结论 通过以药测证,发现肾虚证大鼠模型存在神经-内分泌-免疫以及神经-内分泌-骨代谢两大基因调控路线的紊乱,补肾能纠正该网络功能低下.     

脾气虚证免疫相关基因组学机制初探

目的 采用CDNA芯片技术,探讨脾气虚证免疫功能的异常变化,并揭示其发生的基因组学机制。方法 分别提取脾气虚证慢性胃炎与溃疡性结肠炎患者(6例)以及健康人(3名)外周血白细胞总RNA,mRNA微量扩增,制成杂交探针;脾气虚证慢性胃炎与溃疡性结肠炎患者分别用Cy3标记,健康人用Cy5标记。标记好的Cy3、Cy5探针等量混匀后与cDNA芯片杂交。扫描仪扫描芯片荧光信号,处理、分析数据。分别比较脾气虚证慢性胃炎与溃疡性结肠炎患者同健康人外周血白细胞中免疫相关基因表达水平的差异。结果 脾气虚证慢性胃炎与溃疡性结肠炎患者外周血白细胞中CD9、CD164、PF4、RARB基因表达下调,IGKC、DEFA1、GNLY基因表达上调。结论 脾气虚证发生有免疫相关基因组学基础,脾虚时机体免疫功能紊乱。     

老龄肾阳虚证差异表达基因的筛选与鉴定

目的:筛选并鉴定与老龄肾阳虚证相关的差异表达基因。方法:从前期基因表达谱芯片初步获得的差异表达基因中筛选出25个基因,选取18例肾阳虚证患者和6例正常对照者,采用半定量RT-PCR检测其血液中这25个基因的表达情况,从中鉴定出与老龄肾阳虚证相关的差异表达基因。结果:有8个基因在18例老龄肾阳虚证患者和6例正常人间的表达水平存在明显差异,这8个基因主要涉及细胞周期和凋亡,肿瘤发生以及免疫。结论:老龄肾阳虚证的发生涉及一系列免疫紊乱的复杂过程,推测肾阳虚可能与肿瘤的发生存在某种程度的关联。     

中西药物对肺腺癌放射增敏基因表达谱初步研究

目的:利用基因芯片技术研究扶正增效方、甲硝唑对肺腺癌放射增敏基因表达谱,筛选出中西药物对放射增敏的差异表达基因及其共同表达基因。方法:捉取中西药物加放射组癌组织及单纯放射组癌组织RNA,分别用Cy5-dCTP或Cy3-dCTP标记,再与38500点人基因芯片杂交,筛选中西药物加放射组与单纯放射组差异表达基因。结果:中药加放射组与单纯放射组差异表达基因857条,上调349条,下调508条,其中39条GeneBank中登录,差异显著基因中15条表达上调,21条表达下调,分别为凋亡、转录调节、信号转导、细胞周期、DNA损伤与修复、免疫等相关基因;差异极显著基因1条,为THRA。西药加放射组与单纯放射组差异表达基因47条,已知显著差异基因3条,分别为DNA损伤与修复、转录调节、信号转导等相关基因。只有RARA基因在中西药放射组出现差异表达。结论:中西药物放射增敏存在不同的基因表达谱,说明中西药物放射增敏基因机制不尽相同,筛选出的特异表达基因和共同表达基因为进一步研究放射增敏药物开发和建立放射增敏动物模型具有重要意义。     

气虚证大鼠垂体一致下调的基因

目的：探索气虚证在大鼠垂体基因表达层面的物质基础。方法：采用16周龄Wistar大鼠、自发性高血压大鼠（SHR大鼠）、自发性糖尿病大鼠（GK大鼠）,综合应用标准化大鼠诊法,及GeneChip Rat Gene1.0ST Array等技术,检测正常Wistar大鼠、正常气虚Wistar大鼠、SHR气盛大鼠、SHR气虚大鼠、GK气盛大鼠、GK气虚大鼠等垂体基因的表达,重点关注3个气虚证垂体基因表达较正常对照一致下调的基因。结果：共筛选得到24个基因,（1）与基因转录、翻译和修饰有关的基因8个：Leo1、Aatf、Myst2、Ttc12、Mtfmt、Sdccag10、Nmt2、LOC364236;（2）与信号转导、细胞活动、细胞生命有关的基因10个：Plce1、Sgk1、Sema3a、Nrp1、Tagln、Rnf185、Arl5b、Pcdhb20、Stk17b、Sept1;（3）不属于以上两类的6个：Fdft1、Abca5、Aox1、Ccdc93、RGD131055、AB086234（mRNA号）。结论：气虚大鼠垂体有其特征性的下调基因群,其具体的调控机制及生理/病理意义,以及与那些上调基因群的关系,有待深入的研究。