一氧化氮途径介导人参总皂苷对大鼠右室肥厚的抑制作用

目的: 观察人参总皂苷(TG)对野百合碱(MCT)所致大鼠右心室肥厚的影响并探讨其与一氧化氮途径的关系. 方法: 雄性SD大鼠随机分为:正常对照组、模型组、TG低、中、高剂量组(20,40,60 mg·kg^-1·d^-1)以及L-精氨酸组(L-arg,200 mg·kg^-1·d^-1,L-a组);另外,为探讨TG的作用与NO释放的关系,另设TG+L-N(NOS合酶抑制剂N^G-硝基-L-精氨酸-甲酯,L-NAME)组和L-a+L-N组.在腹腔注射TG 40 mg·kg^-1·d^-1或L-arg 200 mg·kg^-1·d^-1的同时分别灌胃NOS抑制剂L-N 20 mg·kg^-1·d^-1,各组动物均给药18 d.测定各组大鼠的右心室收缩压(RVSP)、右室肥厚指数(RVHI)、右心重/体重(RVW/BW);透射电镜观察心肌细胞超微结构的改变;硝酸还原法检测心肌组织NO₂^-/ NO₃^-的含量;Real time RT-PCR检测心肌组织心房利钠因子(ANF)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA的表达. 结果: TG低、中、高剂量和L-arg预防给药均使RVSP,RVSP,RVHI,RV/BW及ANF mRNA表达明显降低(P<0.05),改善细胞线粒体肿胀、变性,L-N能阻止L-arg对上述指标的影响,而同样剂量的L-N并不能影响TG 40 mg·kg^-1对上述指标的降低作用;TG 20,40 mg· kg^-1不影响eNOS mRNA的表达,但60 mg· kg^-1可提高eNOS mRNA的表达. 结论: TG能明显改善MCT诱导的大鼠右心室肥厚,其抗心肌肥厚作用部分是通过NO途径实现的.     

岩大戟内酯B对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响

目的:探讨岩大戟内酯B(jolkinolide B,JB)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及生长周期的影响。方法:取对数生长期的MDA-MB-231细胞,加入JB,使终质量浓度分别为0,2.5,5,10,20,40,80 mg·L^-1,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测岩大戟内酯B对MDA-MB-231细胞的生长抑制率。另设10,20,40,80 mg·L^-1组的JB,采用流式检测技术分析岩大戟内酯B对MDA-MB-231细胞的细胞周期,RT-PCR及Western blot检测真核细胞翻译起始因子(eIF4E),细胞周期蛋白D₁(CyclinD₁)基因mRNA表达及蛋白水平。结果:随着岩大戟内酯B浓度增加可显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖,G₁期细胞阻滞。与空白组比较,20,40 μmol·L^-1的岩大戟内酯B可抑制CyclinD₁和eIF4E的mRNA表达,转染eIF4E-siRNA组CyclinD₁的mRNA表达及蛋白水平也被抑制,同时细胞周期阻滞在G₁期(P<0.05,P<0.01)。结论:岩大戟内酯B可通过下调eIF4E及CyclinD₁的表达而阻滞细胞周期于G₁期。     

银杏叶、黄芪总黄酮的协同抗氧化作用考察

目的： 考察银杏叶、黄芪醇提物中总黄酮的相互抗氧化作用。 方法： 采用UV测定总黄酮含量,检测波长507 nm。以清除率和半数抑制率质量浓度（IC₅₀）为指标,通过DPPH自由基清除试验与等辐射分析法探讨银杏叶、黄芪醇提物单独和复配（质量浓度比分别为1：1.08,1：3.22,1：9.70）后总黄酮的抗氧化作用。 结果： 银杏叶、黄芪醇提物中总黄酮的IC₅₀分别为3.45,12.01 mg·L^-1,表明二者对DPPH自由基具有明显的清除作用。等辐射分析中银杏叶、黄芪醇提物复配后的效应点均在 相加线及95%可信限的下方,复配组（x±s,n=4）的理论值IC_{50 add}分别为（5.49±0.05）,（7.53±0.04）,（9.82±0.07）mg·L^-1, 试验值IC_{50 mix}分别为（4.95±0.09）,（6.56±0.15）,（8.61±0.15）mg·L^-1,相互作用指数分别为0.90,0.86,0.88。 结论： 银杏叶总黄酮清除DPPH自由基能力较黄芪总黄酮强,银杏叶、黄芪醇提物间存在协同抗氧化效应。     

延胡索及L-THP对吗啡条件性位置偏爱大鼠奖赏环路多巴胺系统的影响及比较

目的: 研究延胡索及左旋延胡索乙素(L-THP)对吗啡条件性位置偏爱(CPP)模型大鼠奖赏环路各脑区多巴胺递质与D2受体的影响及比较。 方法: 吗啡剂量递增颈背部皮下注射CPP训练10 d(起始剂量10 mg·kg^-1,每天递增10 mg·kg^-1,至注射10 d时为100 mg·kg^-1),末次训练后48 h CPP检测确认模型建立成功,即日(12 d)延胡索水提液2,1,0.5 g·kg^-1(分别含L-THP 0.153,0.077,0.038 mg),以及L-THP 3.76,1.88,0.94 mg·kg^-1灌胃治疗,共6 d,第18天再次CPP检测,次日取材用高效液相法测定其中脑腹侧被盖区-伏核-前额叶皮质(VTA-NAc-PFC)奖赏神经环路各脑区多巴胺递质含量,免疫组化和Western blotting检测D2受体的表达。 结果: 与生理盐水治疗组比较,延胡索2,1 g·kg^-1,以及L-THP 3.76,1.88 mg·kg^-1组大鼠在白箱(吗啡伴药箱)停留时间明显减少(P<0.01或P<0.05),同时VTA,NAc和PFC内多巴胺含量降低,D2受体表达显著增加(P<0.01或P<0.05)。 结论: 下调奖赏神经环路中升高的多巴胺含量和上调D2受体的表达,可能是延胡索与L-THP加速吗啡CPP效应消退的机制之一;对于抑制吗啡CPP效应以及对多巴胺系统的影响,含1倍量L-THP单体的延胡索中药相当于单独应用约24倍L-THP单体的效果。     

中药复方PC-SPES Ⅱ抑制人前列腺癌细胞LNCaP增殖及其对AR, PSA表达的影响

基于雄激素受体(AR)信号通路探讨中药复方PC-SPES Ⅱ抑制人前列腺癌细胞LNCaP增殖的作用。采用MTT法检测PC-SPES Ⅱ对LNCaP细胞增殖的影响,显示PC-SPES Ⅱ质量浓度为180~1 440 mg·L^-1时能显著抑制LNCaP细胞增殖,PC-SPES Ⅱ作用24,48 h的IC₅₀分别为311.48,199.01 mg·L^-1;流式细胞仪检测细胞周期分布的变化发现240 mg·L^-1 PC-SPES Ⅱ能阻滞细胞于G₂/M期,在G₀/G₁峰前出现明显的凋亡峰,随作用时间的增加而升高;同时采用Hoechst 33258染色观察凋亡细胞形态和Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测凋亡细胞比例,PC-SPESⅡ质量浓度为480 mg·L^-1时凋亡细胞比率增加,作用效果均呈一定剂量依赖性;通过ELISA法检测LNCaP细胞分泌PSA的水平,以25 mg·L^-1 Bic作为阳性对照药,发现480 mg·L^-1PC-SPES Ⅱ能显著降低细胞分泌PSA;采用qRT-PCR和Western blot方法检测AR,PSA mRNA和蛋白表达的变化,结果显示以人工合成雄激素25 μg·L^-1R1881诱导LNCaP细胞后,240~480 mg·L^-1 PC-SPES Ⅱ能显著下调AR,PSA mRNA和蛋白表达,抑制AR由细胞质转移入细胞核。以上结果表明,PC-SPES Ⅱ对LNCaP细胞体外增殖有抑制作用,阻滞细胞周期于G2/M期并诱导细胞凋亡,其机制可能与下调AR,PSA的表达,抑制AR核转位有关。     

芍药苷对胶原诱导型关节炎大鼠外周血单个核细胞糖皮质激素受体的影响

研究芍药苷（paeoniflorin,PF）对胶原诱导型关节炎大鼠外周血单个核细胞（PBMCs）糖皮质激素受体（GCR）的影响。采用胶原诱导型关节炎（CIA）大鼠模型,初次免疫后第14天灌胃给予PF 25,50,100 mg·kg^-1或雷公藤甲素20 μg·kg^-1或PF 50 mg·kg^-1+RU486 15 mg·kg^-1,每天1次,连续给药28 d。末次给药后第2天,除PF+RU486组外所有实验大鼠摘眼球取血,处死并取所有大鼠未免疫关节,ELISA法检测PBMCs中GCRα,GCRβ表达,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法分析PBMCs中GCRα,GCRβ mRNA表达,免疫组化法分析关节滑膜组织IL-1β,NF-κB p65,TNF-α,PGE₂的表达。PF 50,100 mg·kg^-1可抑制CIA大鼠关节滑膜组织IL-1β,NF-κB p65,TNF-α,PGE₂的表达（P<0.05,P<0.01）,而RU486 15 mg·kg^-1可明显影响PF 50 mg·kg^-1的这一作用（P<0.05）;PF 50,100 mg·kg^-1可上调GCRα,GCRα mRNA的表达、下调GCRβ和GCRβ mRNA的表达（P<0.01）,PF抑制CIA大鼠关节滑膜炎性介质可能与其调节GCR表达有关。     

白芍、赤芍及芍药苷、芍药内酯苷对综合放血法致血虚小鼠补血作用的比较研究

目的: 研究白芍、赤芍及其有效成分芍药苷、芍药内酯苷对血虚小鼠的补血作用. 方法: 采用综合放血法复制小鼠血虚模型,灌胃给予白芍水提物、赤芍水提物,检测小鼠外周血象,根据实验结果和白芍、赤芍水提物中芍药苷、芍药内酯苷的含量,进一步采用同一实验方法进行芍药苷、芍药内酯苷补血作用比较研究. 结果: 造模第7天,2 g·kg^-1白芍和2 g·kg^-1赤芍对红细胞和血红蛋白升高作用明显(P<0.01);造模第14天,2 g·kg^-1白芍对红细胞和血红蛋白升高明显(P<0.01),2 g·kg^-1赤芍作用不明显,同剂量组相比,红细胞数和血红蛋白含量差异不显著;造模第7天,120 mg·kg^-1芍药苷、120 mg·kg^-1芍药内酯苷对小鼠红细胞和血红蛋白升高作用明显(P<0.01),60 mg·kg^-1芍药内酯苷、30 mg·kg^-1芍药内酯苷对红细胞和血红蛋白有提升作用(P<0.05);造模第14天,120 mg·kg^-1芍药苷、芍药内酯苷对红细胞、血红蛋白有较好的提升作用,与同剂量组的芍药苷相比,120,30 mg·kg^-1芍药内酯苷的红细胞数升高明显,差异显著(P<0.05);30 mg·kg^-1芍药内酯苷组的血红蛋白含量明显升高,差异显著(P<0.05). 结论: 白芍的补血作用略优于赤芍;芍药内酯苷具有补血作用且补血作用优于芍药苷;白芍有较强的补血作用可能与白芍中含有的芍药内酯苷有关.     

五子承气汤对大鼠高尿酸血症的影响

目的: 研究五子承气汤对高尿酸血症大鼠的影响. 方法: 将雄性SD大鼠60只随机分为6组,即:正常组、模型组、五子承气汤高、中、低剂量组(104,52,26 g·kg^-1)、阳性对照苯溴马隆(10 mg·kg^-1)组,采用腺嘌呤(100 mg·kg^-1,ig,qd × 28 d)和氧嗪酸钾(250 mg·kg^-1,ip,1次/周,连续4周)制备高尿酸血症大鼠模型.造模4周后,检测各组大鼠尿尿酸(UA),血尿酸(UA),血黄嘌呤氧化酶(XOD),血肌酐(SCr),尿素氮(BUN). 结果: 与正常组相比,模型组大鼠的尿UA显著降低,血UA,XOD,Cre及BUN 明显升高,差异具有显著性(P<0.01);五子承气汤低、中、高剂量组尿UA分别为(146.3±22.5),(202.2±53.8),(218.1±62.6) μmol·L^-1,显著高于模型组(89.8±27.1)μmol·L^-1(P<0.01,P<0.05);血UA分别为(207.3±42.5),(177.1±50.5),(158.0±49.0)μmol·L^-1,显著低于模型组(285.0±54.1)μmol·L^-1(P<0.01,P<0.05);五子承气汤还显著降低高尿酸血症大鼠血清XOD活性,显著降低SCr,BUN含量( P<0.01,P<0.05). 结论: 五子承气汤明显促进尿UA排泄,降低血UA含量,抑制血清XOD活性,改善肾功能,对大鼠高尿酸血症有一定的防治作用.     

琥珀酸对原代心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

本研究采用SD大鼠乳鼠心肌细胞原代培养,复制心肌细胞缺氧复氧损伤模型,考察琥珀酸对心肌细胞缺氧复氧损伤的LDH漏出率的影响,并进一步采用流式细胞术及Western blot考察琥珀酸对心肌细胞凋亡,cleaved caspase-3及p-Akt的影响,探讨琥珀酸对新生大鼠原代心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用。研究结果发现:①琥珀酸31.25~500 mg·L^-1对原代心肌细胞活力无明显影响,琥珀酸400,200,100,50 mg·L^-1均可显著降低心肌细胞缺氧复氧损伤LDH漏出率(P<0.01或P<0.05);②琥珀酸400,200 mg·L^-1可显著降低缺氧复氧损伤所致的心肌细胞凋亡百分数(P<0.05),抑制心肌细胞缺氧复氧所致的cleaved caspase-3 蛋白表达增加(P<0.05);③琥珀酸400 mg·L^-1可显著增加心肌细胞的p-Akt蛋白表达(P<0.05),而琥珀酸200 mg·L^-1对p-Akt蛋白表达无明显影响。因此,本研究认为琥珀酸可通过激活Akt的磷酸化而抑制心肌细胞缺氧复氧所致的坏死和凋亡。     

HPLC同时测定山腊梅清感茶中4种黄酮苷的含量

目的: 建立高效液相色谱方法同时测定山腊梅清感茶中4种黄酮苷含量的方法. 方法: 采用依利特hypersil ODS2色谱柱(4.6 mm× 250 mm,5 μm),以乙腈-0.1%冰醋酸为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,检测波长344 nm,柱温35 ℃. 结果: 芦丁在7.012~70.12 mg·L^-1线性关系良好(r=0.999 6),平均回收率为100.68%,RSD 3.3%,山柰酚-3-O-β-D-半乳糖-(6-1)-α-L-鼠李糖苷在5.126~51.26 mg·L^-1线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率为98.48%,RSD 1.7%,山柰酚-3-O-芸香糖苷在2.631~26.31 mg·L^-1线性关系良好(r=0.999 8),平均回收率为101.82%,RSD 1.9%,紫云英苷在2.634~26.34 mg·L^-1线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率为97.02%,RSD 1.7%. 结论: 该方法操作简便,准确,重复性好,可用于山腊梅清感茶的质量控制.     

独活寄生汤对佐剂性关节炎大鼠的抗炎镇痛作用及血清中5-HTP，5-HIAA的影响

目的:观察独活寄生汤对佐剂性关节炎模型大鼠免疫器官脏器系数和血清中5-羟色氨酸(5-HTP)和5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)含量的影响。方法:实验设对照组、模型组、阿司匹林组(0.20 g·kg-1)、独活寄生汤低、中、高剂量组(0.85,1.7,3.4 g·kg-1);除对照组外,其余各组左后肢踝关节腔注射完全弗氏佐剂(FCA)制作佐剂性关节炎模型。ig给药14 d,对照组及模型组灌服羧甲基纤维素钠(CMC-Na)。ELISA法测定血清中5-HTP和5-HIAA的含量。结果:独活寄生汤能显著增加大鼠胸腺质量,明显降低佐剂性关节炎大鼠血清中5-HTP和5-HIAA的含量,与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:独活寄生汤对大鼠起到抗炎镇痛的作用,其作用机制可能与降低大鼠血清5-HTP和5-HIAA有关。     

加味独活寄生汤对胶原诱导性关节炎大鼠关节炎症的影响

目的:观察加味独活寄生汤对Ⅱ型胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠关节炎症的影响。方法:SPF级雄性SD大鼠90只,随机分为正常对照组、模型对照组、来氟米特治疗组、加味独活寄生汤高、中、低剂量组共6组。除正常对照组6只,于大鼠尾根部每只0.2mg im胶原乳剂制成关节炎大鼠模型,造模后,每组选择造模成功的大鼠分别6只,来氟米特组按10 mL·kg-1给予来氟米特ig,加味独活寄生汤高、中、低剂量组按44,22,11 g·kg-1给予加味独活寄生汤ig,对照组ig相同体积的蒸馏水,每天1次,连续12周。分别观察治疗后0,2,4,6,8,10,12周大鼠体质量、关节炎症指数(AI)、足爪指标、关节病理变化情况。结果:与模型组比较,加味独活寄生汤高、中、低剂量组与来氟米特组对关节炎大鼠AI有显著改善作用,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);各治疗组较模型组体质量、足爪均有显著改善(P<0.05,P<0.01);对踝关节软骨病理改善方面,高剂量组与模型组比较有改善。结论:加味独活寄生汤对CIA大鼠关节炎症有明显改善作用,是治疗类风湿关节炎的有效方剂。     

龙胆泻肝汤不同提取部位对白念珠菌生物膜的抑制作用研究

目的： 观察龙胆泻肝汤提取物体外对白念珠菌生物膜形成影响,探讨其可能的作用机制。方法：采用XTT法和微量稀释法筛选龙胆泻肝汤各提取部位的抗菌活性并检测各提取物对白念珠菌生物膜的抑制作用。采用实时荧光定量PCR法检测其黏附相关基因ALS1和菌丝形成基因SUN41的表达量。结果：龙胆泻肝汤用石油醚、水、正丁醇、甲醇及乙酸乙酯提取部位对白念珠菌浮游菌的MIC分别为>1 000,>1 000,>1 000,125,125 mg·L^-1;对白念珠菌生物膜的SMIC₅₀分别为>1 000,>1 000,>1 000,500,500 mg·L^-1;SMIC₈₀分别为>1 000,>1 000,>1 000,>1 000,1 000 mg·L^-1;1 000 mg·L^-1的乙酸乙酯提取物能明显抑制黏附相关基因ALS1和菌丝形成基因SUN41的表达。结论：龙胆泻肝汤抗白念珠菌生物膜的活性部位为乙酸乙酯提取部位。     

独活寄生汤含药血清对膝骨性关节炎大鼠关节软骨细胞凋亡及GRP78，CHOP，HIRA及ASFla表达的影响

目的:观察独活寄生汤含药血清抗膝骨性关节炎(KOA)大鼠关节软骨细胞凋亡、内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78),CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)及衰老蛋白组蛋白调节因子(HIRA),染色质组装和调节复合因子1a(ASF1a)的影响。方法:采用Hulth法建立KOA模型大鼠,模型成功后采用酶原消化法培养正常软骨细胞与KOA软骨细胞;另将40只大鼠分为独活寄生汤低、中、高剂量组(0.85,1.7,3.4 g·kg~(-1))及阳性药组(硫酸氨基葡萄糖胶囊3 g·kg~(-1)),灌胃14 d后处死取血清;将培养细胞分为空白组、模型组、独活寄生汤含药血清低、中、高剂量组(对应剂量组大鼠血清培养)及阳性药组(阳性药组大鼠血清培养);采用活性检测试剂盒(CCK-8)法检测各组软骨细胞增值率;采用TUNEL法检测各组软骨细胞凋亡情况;蛋白质免疫印迹(Western blot)检测各组软骨细胞中ASF1a,HIRA,GRP78及CHOP蛋白的表达。结果:与空白组软骨细胞比较,模型组细胞增殖抑制率明显升高,与模型组细胞比较,独活寄生汤含药血清低、中、高剂量组及阳性药组软骨细胞增殖抑制率降低(P0.05);与空白组软骨细胞比较,模型组细胞凋亡数量明显增加(P0.05),与模型组软骨细胞比较,独活寄生汤低、中、高剂量组及阳性药组细胞凋亡数量明显降低(P0.05);与空白组软骨细胞比较,模型组细胞中ASF1a,HIRA,GRP78及CHOP蛋白表达明显升高(P0.05),与模型组软骨细胞比较,独活寄生汤低、中、高剂量组及阳性药组细胞中ASF1a,HIRA,GRP78及CHOP蛋白表达降低(P0.05)。结论:独活寄生汤含药血清可通过减少KOA软骨细胞内质网应激相关因子GRP78,CHOP及衰老相关因子ASF1a,HIRA的表达,从而起到抑制KOA软骨细胞衰老、凋亡,促进软骨细胞再生的作用,进而起到治疗KOA的目的。     

独活寄生汤加减结合透明质酸钠针关节腔注射治疗膝骨性关节炎

目的:探讨独活寄生汤加减结合透明质酸钠针关节腔注射膝骨性关节炎的疗效.方法对本院收治的150例膝骨性关节炎患者根据随机原则分为3组,每组50例.独活寄生汤组单独给予独活寄生汤加减进行治疗,透明质酸钠组单独给予透明质酸钠注射治疗,联合组注射透明质酸钠的同时服用独活寄生汤.对3组患者的疗效、VAS疼痛评分、血清C-反应蛋白水平以及不良反应进行比较.结果联合组的总有效率为94％,显著高于独活寄生汤组(80％)和透明质酸钠组(78％),差异具有统计学意义(P＜0.05);治疗后联合组的VAS评分显著低于独活寄生汤组和透明质酸钠组,差异具有统计学意义(P＜0.05);治疗后联合组的CRP水平相比较独活寄生汤组和透明质酸钠组均显著下降,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论独活寄生汤加减结合透明质酸钠针关节腔注射治疗膝骨性关节炎疗效确切,能迅速缓解疼痛,改善功能,值得临床推广使用.     

白头翁汤正丁醇提取物对碱性pH条件下白念珠菌VVC临床株形态转化的影响

目的:探讨白头翁汤正丁醇提取物(butyl alcohol extract of Baitouweng decoction,BAEB)在碱性条件下对白念珠菌VVC(vulvovaginal candidiasis)临床分离株酵母-菌丝形态转化的影响。方法:采用肉汤稀释法测定白头翁汤不同溶剂萃取物对VVC临床株的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC);倒置显微镜观察不同p H环境下VVC临床株形态;采用XTT还原法评价在p H 8.0时菌丝活性;扫描电镜观察白念珠菌菌丝形态;荧光显微镜观察菌体代谢活力;固体培养基上观测菌落形态;半固体培养基上观察菌丝侵袭能力;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测菌丝特异性基因ALS3,CSH1,SUN41,HWP1和Ca PDE2的表达量。结果:白头翁汤正丁醇提取物(BAEB)对VVC临床株的MIC为64~128 mg·L-1,低于总提取物、石油醚提取物、乙酸乙酯提取物和水提取物的MIC;p H 8.0时VVC临床株的菌丝形成能力最强;扫描电镜结果显示512,1 024 mg·L-1的BAEB明显抑制VVC临床株的形态转化,荧光显微镜结果显示1 024 mg·L-1的BAEB可以降低VVC临床株的代谢活性;512,1 024 mg·L-1BAEB浓度的固体菌落未出现褶皱,1 024 mg·L-1BAEB浓度的半固体培养基内部未见菌丝侵袭;qRT-PCR检测显示1 024 mg·L-1时,ALS3,CSH1,SUN41,HWP1分别下调4.26,3.2,2.74,5.12倍,Ca PDE2上调2.38倍。结论:BAEB在碱性p H条件下对白念珠菌VVC临床株的形态转化具有抑制作用。     

裸花紫珠提取物的抗乳腺癌转移作用及其机制

目的:研究裸花紫珠乙酸乙酯提取物(ethyl acetate extracts from Callicarpa nudiflora,ECN)的抗乳腺癌转移作用及其作用机制。方法:采用尾静脉注射肿瘤细胞法建立裸鼠实验性肺转移模型,24 h后将实验动物随机分为空白组,ECN低、中、高剂量组(0.125,0.25,0.5 g·kg-1),空白组给予等量溶剂,每日ig给药1次,连续8周。给药结束后,采用巢式PCR法检测裸鼠肺组织中人细胞角蛋白19(CK19)基因的表达,以确定肿瘤细胞的肺转移程度(n=10)。建立肿瘤细胞体外迁移、侵袭模型,以100,200 mg·L-1ECN以及10 nmol·L-1BB-94(阳性对照)处理MDA-MB-231细胞14 h(n=4),观察ECN对乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞的体外迁移、侵袭的影响;建立肿瘤细胞体外黏附模型,以100,200 mg·L-1ECN以及10 nmol·L-1BB-94处理MDA-MB-231细胞60 min(n=3),观察ECN对乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞的体外黏附能力的影响;采用Western blot法,检测MDA-MB-231细胞分别经100,200 mg·L-1ECN处理24 h后p-锌指转录因子(p-Snail)和上皮性钙黏附蛋白(Ecadherin)的表达情况。结果:体内研究表明,ECN可显著降低裸鼠肺组织中人CK19 mRNA的表达(P0.01);体外迁移实验发现,ECN 100,200 mg·L-1组的迁移细胞数与空白组相比显著减少(P0.01);体外侵袭实验显示,ECN低、高剂量组的侵袭细胞数与空白组相比显著减少(P0.01);体外黏附实验表明,ECN可干扰肿瘤细胞与细胞外基质蛋白之间的黏附(P0.01);Western blot实验结果表明,ECN可显著抑制p-Snail,并增加E-cadherin的表达。结论:ECN具有明显的抗乳腺癌转移作用。抑制细胞内p-Snail的活化可能是抗转移作用的机制之一。     

雷公藤红素对非酒精性脂肪肝L02细胞内质网应激的影响及机制

目的:通过雷公藤红素干预非酒精性脂肪肝L02细胞模型来探讨雷公藤红素调节肝L02细胞脂质代谢紊乱及非酒精性脂肪肝L02细胞内质网应激的相关机制。方法:将肝L02细胞分为空白组,模型组,雷公藤红素低剂量组(0. 5 mg·L~(-1)),雷公藤红素高剂量组(1 mg·L~(-1))和辛伐他汀组(SIM,6 mg·L~(-1))进行培养。检测肝L02细胞内胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)含量变化;用油红O染色观察肝L02细胞脂质沉积情况;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测各组肝L02细胞中内质网应激(ERS)相关信号分子活化转录因子6(ATF6),葡萄糖调节蛋白78(GRP78),肌醇需求酶1(IRE1),固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SCAP),固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)和固醇调节元件结合蛋白-2(SREBP-2)的mRNA转录以及蛋白表达水平。结果:非酒精性脂肪肝病(NAFLD)组肝L02细胞中TC及TG含量均高于空白组(P 0. 05),雷公藤红素低、高剂量组及SIM 6 mg·L~(-1)组肝L02细胞中TC及TG含量较NAFLD组均有不同程度减少(P 0. 05)。油红O染色显示NAFLD组肝L02细胞内含有大量红染脂质颗粒沉积,而雷公藤红素低、高剂量组及SIM 6 mg·L~(-1)组红染脂质颗粒较NAFLD组均有不同程度减少。RT-PCR和Western blot结果显示,NAFLD组肝L02细胞内ERS相关信号分子ATF6,GRP78,IRE1,SCAP,SREBP-1c和SREBP-2的mRNA转录和蛋白表达水平均高于空白组(P 0. 05);雷公藤红素低、高剂量组和SIM 6 mg·L~(-1)组肝L02细胞内ATF6,GRP78,IRE1,SCAP,SREBP-1c和SREBP-2的mRNA转录及蛋白表达水平均低于NAFLD组(P 0. 05)。而雷公藤红素高剂量组与SIM 6 mg·L~(-1)组间肝L02细胞内ATF6,GRP78,IRE1,SCAP,SREBP-1c和SREBP-2 mRNA转录及蛋白表达水平差异不具有统计学意义。结论:雷公藤红素可通过下调肝L02细胞ERS时相关信号分子ATF6,GRP78,IRE1,SCAP,SREBP-1c和SREBP-2的表达来减轻肝L02细胞脂质代谢紊乱,从而改善NAFLD。     

去水卫矛醇应用于斑马鱼胚胎的安全性评价

目的:利用斑马鱼胚胎评价抗肿瘤药物去水卫矛醇(DAG)的安全性。方法:以受精后6 h(6 hpf)发育正常的斑马鱼胚胎作为实验对象,分别暴露于A,B两个不同实验组的DAG溶液中,A组:98.00,110.00,125.00,141.00,160.00 mg·L~(-1)的低质量浓度剂量组,B组:661.00,871.00,1 148.00,1 514.00,1 995.00 mg·L~(-1)的高质量浓度剂量组,两组均设空白组,每隔24 h更换一次DAG溶液。观察药物处理至不同时间点时斑马鱼胚胎的发育情况,计算半数致死浓度(LC50),半数致畸效应浓度(EC50),治疗指数(TI)和安全指数(SI)。结果:B组斑马鱼胚胎在48 hpf时心率随着DAG浓度增大而下降,48,72,96 hpf孵化率随着观察时间点不同呈现不同趋势,与空白组比较有统计学差异(P0.01)。斑马鱼胚胎的畸形率和死亡率均随着给药浓度增大和给药时间的延长而增加(P0.01)。72 hpf的LC50为1 851.33 mg·L~(-1),EC50为184.50 mg·L~(-1),TI为10.03 mg·L~(-1),SI为1.59 mg·L~(-1);96 hpf的LC50为1 071.96 mg·L~(-1),EC50为74.76 mg·L~(-1),TI为14.34 mg·L~(-1),SI为2.94 mg·L~(-1);6 dpf的LC50为133.12 mg·L~(-1)。结论:DAG的浓度与斑马鱼胚胎发育的毒性存在量效关系;DAG作用时间长短与斑马鱼胚胎发育毒性也存在明显的剂量效应。DAG安全性评价指数相对较高。