中药复方含药血清对回转模拟失重成骨细胞影响的观察

目的:观察中药复方含药血清对模拟失重条件下体外培养成骨细胞的影响,探讨该方对抗骨丢失的部分作用机理.方法:分离乳鼠颅骨成骨细胞,体外培养后,随机分为5%,10%,20%浓度的空白血清对照组和5%,10%,20%空白血清回转组和5%,10%,20%含药血清回转组,连续回转48h模拟失重,观察该方对大鼠成骨细胞增殖、Ⅰ型胶原合成、碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(BGP)生成的影响.结果:5%和10%空白血清回转组成骨细胞增殖比正常重力组明显降低(P＜0.05);与10%空白血清回转模拟失重组相比,10%含药血清回转组可显著促进细胞增殖(P＜0.05).正常重力组与回转模拟失重组Ⅰ型胶原含量比较差异无统计学意义(P＞0.05);与5%和10%空白血清回转模拟失重组相比,5%和10%含药血清回转组均能明显促进成骨细胞Ⅰ型胶原合成(P＜0.05).与5%正常重力组相比,5%空白血清回转组成骨细胞ALP活性明显降低(P＜0.05);与5%和20%空白血清回转模拟失重组相比,5%和20%舍药血清回转组能明显提高成骨细胞ALP活性(P＜0.05).与10%、20%空白血清组相比,10%、20%空白血清回转组成骨细胞BGP含量明显降低(P＜0.05);而中药复方含药血清对其模拟失重成骨细胞BGP活性没有显著影响(P＞0.05).结论:该方能改善模拟失重条件下成骨细胞增殖,分化成熟,增加胶原蛋白合成,从而实现对抗失重骨丢失的效果.     

骨碎补总黄酮对模拟失重下共育骨细胞中ALP活性及BMP-2和OPG基因表达影响

目的:通过观察骨碎补总黄酮对模拟失重共育骨细胞OPG和BMP-2基因表达的影响,探讨其在失重条件下骨丢失骨代谢的影响及其作用机制。方法:体外分离培养成骨细胞和破骨细胞,建立成骨-破骨细胞共育体系,利用回转器建立骨细胞失重模型;共育骨细胞中加入不同浓度骨碎补总黄酮血清培养液,在模拟失重下,48 h后,检测ALP活性,用RT-PCR法检测OPG和BMP-2基因表达。结果:与正常对照组比较,失重模型组成骨细胞在回旋48 h后细胞培养液中的ALP活性显著降低(P0.05);与失重对照组比较,含药血清组ALP活性和OPG和BMP-2表达均显著升高(P0.05)。结论:利用共育骨细胞实验研究成骨细胞、破骨细胞相互作用及影响,中剂量骨碎补能有效提高失重下共育成骨细胞增殖及分化,与浓度相关。     

壮骨胶囊含药血清对小鼠成骨细胞增殖 及碱性磷酸酶、骨钙素合成的影响

目的观察壮骨胶囊含药血清对小鼠成骨细胞(MC3T3-E1细胞)增殖、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(BGP)合成的影响,探讨壮骨胶囊对骨代谢、骨形成机制的作用。方法壮骨胶囊由射干、白芍等组成。实验分为对照组、壮骨胶囊高、中、低剂量组(4.3、2.15、1.08 g生药/kg),给药组灌胃给予Wistar大鼠壮骨胶囊,对照组给于等体积水,连续给予7 d后,采血离心制备对照组空白血清及含药组血清;以小鼠成骨细胞MC3T3-E1为研究对象,用空白血清及含药血清处理体外培养的MC3T3-E1成骨细胞,采用CCK8法检测成骨细胞增殖能力,IFCC速率法测定ALP活性,酶联免疫法测定BGP分泌量。结果壮骨胶囊含药血清各剂量组对体外培养的MC3T3-E1细胞增殖有显著的促进作用,高、中剂量组48 h可促进成骨细胞增殖(同对照组比较,P 0.05),高、中、低剂量组72 h均能促进成骨细胞增殖(同对照组比较,P 0.01,P 0.05);高、中剂量组含药血清作用于MC3T3-E1细胞72 h后,ALP活性、BGP分泌量较对照组明显提高(P 0.01,P 0.05)。结论壮骨胶囊含药血清具有促进骨形成作用,这可能与其促进成骨细胞增殖,增加成骨细胞ALP的合成和BGP的分泌,从而改善骨代谢有关。     

骨碎补总黄酮含药血清对成骨细胞增殖、分化、周期及调亡的影响

目的:观察含骨碎补总黄酮大鼠血清对体外培养SD大鼠成骨细胞增殖、分化、周期及凋亡的影响.方法:取新生的SD大鼠的颅骨,胶原酶法培养成骨细胞.应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法(PNPP)及流式细胞术观察不同浓度的含骨碎补总黄酮大鼠血清在不同时段对体外培养成骨细胞的光密度D(λ)值、碱性磷酸酶(ALP)活性及细胞周期和凋亡的影响.结果:不同浓度的骨碎补总黄酮大鼠含药血清均可促进成骨细胞增殖、分化,使处于DNA合成期细胞比例增加,使早期和晚期凋亡细胞比例减少,与对照组比较均具有统计学意义(P＜0.05). 结论: 骨碎补总黄酮含药血清具有促进体外成骨细胞增殖、分化,抑制成骨细胞凋亡的作用,即具有抗骨质疏松活性.     

补肾活血中药对体外培养成骨细胞活性的影响

目的研究补肾活血中药对体外培养成骨细胞活性的影响.方法取二次酶消化法培养的胎鼠颅骨第三代成骨细胞,随机分为5组,即:细胞对照组、空白血清组、含药血清组、原药组、阳性对照药α D3组,分别加入普通细胞培养液、含空白血清及不同浓度补肾活血中药含药血清、补肾活血中药原药液、阳性对照药(αD3)的条件培养液,分别在培养第3天和第6天进行各试验组成骨细胞碱性磷酸酶及骨钙蛋白分泌量测定,观察补肾活血中药含药血清及原药液对成骨细胞活性的影响.结果含药血清组成骨细胞活性指标碱性磷酸酶(ALP)值在培养第3天均低于空白血清组,且与含药血清浓度呈负相关关系;第6天,含药血清组各浓度组ALP值明显升高,均显著高于空白血清组,ALP值与含药血清浓度存在正相关关系;空白血清组ALP值在培养第6天时下降,其均值低于培养第3天ALP值.培养第3天及第6天,各浓度原药组ALP值均高于细胞对照组及αD3组;ALP值与原药浓度呈正相关关系.含药血清组及中药原药组骨钙素(OC)含量显著高于空白血清及其他各对照组.结论补肾活血中药含药血清及原药能够直接作用于体外培养的成骨细胞,促进成骨细胞增殖,增强其分泌活性;可延长成骨细胞活性分泌期,使其活性分泌高峰后移而峰值升高,增加其活性分泌总量.     

二至丸含药血清对成骨细胞增殖、分化及矿化的影响

目的 研究二至丸含药血清对体外培养大鼠成骨细胞(Osteoporosis,OP)增殖、分化及矿化的影响.方法 二至丸(9,4.5,2.25 g/kg/d)给大鼠连续灌胃7d,每天2次,于第8天灌胃后1～2 h眼眶取血制备含药血清,采用多次酶消化法获得大鼠原代成骨细胞,将含药血清加入成骨细胞培养液中,采用MTT比色法、碱性磷酸酶(ALP)染色法、茜素红染色法研究其对细胞增殖及功能的影响.结果 二至丸含药血清能不同程度地促进大鼠原代成骨细胞的增殖,二至丸中剂量在24,48,72 h均能显著促进大鼠原代成骨细胞的增殖(P＜0.05);二至丸中、小剂量能显著增加大鼠原代成骨细胞ALP活性(P＜0.05)和矿化结节的数量(P＜0.05),其中二至丸中剂量效果最为显著(P＜0.01).结论 二至丸含药血清具有良好的促进成骨细胞增殖、分化、矿化的作用,其中二至丸中剂量组作用效果尤为显著.     

骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响

观察中药骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响.方法:将实验动物随机分成中药组、罗盖全组和蒸馏水组3组,通过体外分离和培养成骨细胞体系,运用分光光度计测定含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响.结果:成骨细胞在10%的血清中培养7天时,用分光光度计测定ALP活性,发现骨康含药血清和罗盖全含药血清均能明显提高成骨细胞的ALP活性,骨康血清组和罗盖全血清组对成骨细胞ALP活性的平均影响率分别为128.1%和129.1%.结论:中药骨康含药血清能明显提高成骨细胞的碱性磷酸酶活性.     

补肾中药对体外培养成骨细胞增殖和功能的影响

目的:观察补肾中药活性成分对体外培养成骨细胞增殖和功能的影响.方法:体外培养成骨细胞,观察补肾中药含药血清对成骨细胞增殖率和ALP活性的影响.结果:补肾中药含药血清对成骨细胞增殖能力和ALP活性有增强作用.结论:补肾中药活性成分对体外培养成骨细胞的增殖和功能有促进作用.     

健骨康胶囊配方血清药理学筛选研究

目的:研究健骨康胶囊不同配方不同浓度含药血清对体外培养大鼠成骨细胞活性和及成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。方法:以健骨康胶囊不同配方口服吸收后的血清,加入体外培养大鼠成骨细胞中进行培养,MTT法测成骨细胞活性,比色法测定培养ALP活性。结果:健骨康胶囊不同配方中药吸收后血清能促进成骨细胞的增殖和分化,提高成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)活性,以配方2药物灌胃后10%药物血清浓度最佳。结论:健骨康胶囊药物血清体外具有抗骨质疏松症作用;健骨康胶囊配方2为优选方。     

抗骨增生胶囊含药血清对大鼠成骨细胞增殖、分化的影响

目的探讨抗骨增生胶囊含药血清对大鼠成骨细胞增殖、分化及骨保护蛋白(OPG)和核因子-кB受体活化子配体(RANKL)蛋白表达的影响。方法采用中药血清药理学方法制备含抗骨增生胶囊大鼠血清。取乳鼠颅骨,利用复合胶原蛋白酶反复消化,离心,体外培养成骨细胞。加入不同浓度的抗骨增生胶囊含药血清进行干预,噻唑蓝(MTT)法检测中药血清对成骨细胞增殖的影响,测定碱性磷酸酶(ALP)活性,Western Blot检测OPG和RANKL蛋白表达。结果成骨细胞经抗骨增生胶囊含药血清作用后,细胞的生长呈现不同程度的增殖,中、高剂量中药组在24、48、72 h均有明显的促进作用(P0.01),且呈剂量依赖性。低剂量中药组在24、48 h时与空白对照组比较差异无统计学意义(P0.05),72 h时作用较强(P0.05)。除低剂量组培养24 h外,低、中、高剂量中药组培养24、48、72 h后,ALP分泌均呈不同程度增加,均有明显的促进作用(P0.01)。成骨细胞经过抗骨增生胶囊含药血清低、中、高剂量作用72 h后,对比值进行统计分析,与空白对照组比较,OPG表达明显升高(P0.01),RANKL表达明显降低(P0.01)。结论抗骨增生胶囊含药血清可以促进成骨细胞的增值、分化,从而促进骨形成。     

骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响

观察中药骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响。方法：将实验动物随机分成中药组、罗盖全组和蒸馏水组3组，通过体外分离和培养成骨细胞体系，运用分光光度计测定含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响。结果：成骨细胞在10％的血清中培养7天时，用分光光度计测定ALP活性。发现骨康含药血清和罗盖全含药血清均能明显提高成骨细胞的ALP活性，骨康血清组和罗盖全血清组对成骨细胞ALP活性的平均影响率分别为128．1％和129．1％。结论：中药骨康含药血清能明显提高成骨细胞的碱性磷酸酶活性。     

骨疏康颗粒含药血清对成骨细胞增殖及细胞周期的影响

目的 探讨骨疏康颗粒含药血清对体外培养大鼠成骨细胞增殖及细胞周期分布的影响.方法 采用酶消化法进行大鼠成骨细胞培养,制备骨疏康颗粒含药血清干预成骨细胞,以生理盐水大鼠血清作对照,运用MTT法、流式细胞术检测成骨细胞增殖情况及细胞周期分布.结果 与同浓度生理盐水血清比较,骨疏康含药血清能不同程度地促进体外堵养成骨细胞增殖,其中以20%骨疏康含药血清促增殖作用最显著,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),且能明显降低G0/G1期细胞比例(P＜0.05),提高S期成骨细胞比例及增殖指数(P＜0.05).结论 骨疏康含药血清能加速成骨细胞周期,促进成骨细胞增殖.     

骨碎补对微重力下共培养骨细胞中成骨细胞分化的影响

目的:观察模拟微重力下骨碎补对成骨细胞破骨细胞共培养中成骨细胞分化影响及ALP、OPG、Runx2表达作用机制。方法:建立成骨细胞破骨细胞共培养系统,模拟微重力下加骨碎补总黄酮。正常重力组(A组)和微重力空白组(B组)加等容生理盐水组大鼠血清。骨碎补低剂量组(C组)加含低浓度骨碎补血清0.054 g/(kg·d),骨碎补中剂量组(D组)加含中浓度骨碎补血清0.162 g/(kg·d),骨碎补剂量组(E组)加入高浓度骨碎补血清0.486 g/(kg·d)。A组置于培养箱中,B、C、D、E置于摸拟微重力回转器48 h。测成骨细胞ALP活性、OPG、Runx2表达。结果:与正常对照组比较,微重力组成骨细胞ALP活性降低(P0.05);与微重力空白对照组比较,含药组ALP活性、OPG和Runx2表达升高,中剂量组差异显著(P0.05)。结论:中剂量骨碎补能提高微重力下成骨细胞破骨细胞共培养系统中提高成骨细胞ALP活性、OPG、Runx2表达,促成骨细胞增殖、分化。     

益骨汤含药血清对新生大鼠成骨细胞成骨性的影响

目的探讨益骨汤含药血清对新生大鼠成骨细胞增殖及其成骨分化的影响。方法实验分为益骨汤高剂量组、益骨汤中剂量组、益骨汤低剂量组、a-D3胶丸组、空白组,先制备各组相应含药血清,然后采用酶消化法获得新生大鼠的成骨细胞,每组给予相应含药血清培养成骨细胞,分别检测各组成骨细胞增殖情况及碱性磷酸酶(ALP)活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量。结果益骨汤高、中、低剂量组和a-D3胶丸组成骨细胞增殖情况均明显优于空白组(P均0.05),益骨汤高、中、低剂量组间比较差异无统计学意义;成骨细胞ALP活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量均明显高于空白组(P均0.05),而与a-D3胶丸组比较差异均无统计学意义(P均0.05)。益骨汤中剂量组ALP活性、钙盐沉积量、钙素分泌量均明显高于益骨汤低剂量组。结论益骨汤含药血清可促进成骨细胞的增殖及成骨分化。     

补肾活血固齿方对小鼠颅顶前成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的观察补肾活血固齿方对小鼠颅顶前成骨细胞(MC3T3-E1)碱性磷酸酶(ALP)活性的影响,探讨其对成骨细胞分化的作用机制。方法将20只SD大鼠随机分为含药血清组和无药血清组,各10只。含药血清组大鼠予补肾活血固齿方灌胃,无药血清组予等容积0.9%氯化钠注射液灌胃,均灌胃7 d后抽取腹主动脉血制备成含药血清和无药血清。胎牛血清组为直接购买的PAA胎牛血清。分别用含10%含药血清、10%无药血清及10%胎牛血清的培养基培养MC3T3-E1细胞24、48、72 h,检测MC3T3-E1细胞中ALP的含量。结果含药血清组培养24、48、72 h后MC3T3-E1细胞ALP含量均高于胎牛血清组及无药血清组同期水平,比较差异均有统计学意义(P0.05),但胎牛血清组与无药血清组同期差异无统计学意义(P0.05);含药血清组MC3T3-E1细胞ALP含量随培养时间的延长而明显增加(P0.05)。结论补肾活血固齿方可增强MC3T3-E1细胞中ALP活性,促进MC3T3-E1细胞向成骨细胞分化,且均有一定时间依赖性。     

失重下骨碎补总黄酮经MAPK通路促间充质干细胞向成骨细胞分化研究

目的:观察模拟失重状态下,骨碎补总黄酮促间充质干细胞向成骨细胞分化,MAPK/ERK通路变化。方法:体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,建立失重模型,加入骨碎补血清培养液,观察间充质干细胞向成骨细胞分化过程中形态学变化,MTT法测定细胞活性,PNPP法测定ALP活性,RT-PCR测定MAPK/ERK通路。结果:与空白对照组和低剂量组相比,中、高剂量组细胞增殖能力及ALP活性值均明显升高,且具有统计学意义(P0.05),与阳性对照组接近。加入TFDF后,ERK1/2通路表达明显升高(P0.05)。结论:失重下骨碎补能激活MAPK/ERK通路促间充质干细胞向成骨细胞增殖、分化成熟。     

补肾健脾药物血清对体外培养的成骨细胞增殖与分化的影响

目的观察补肾健脾药物血清对新生大鼠颅骨成骨细胞增殖和分化的影响.方法用多次酶消化法分离培养新生大鼠颅盖骨成骨细胞,加入含不同药物浓度的补肾健脾药物血清条件培养液共同培养;改良Gomori钙钴法染色鉴定,MTT法测定细胞增殖率,对硝基苯酚法检测碱性磷酸酶(ALP)活性.骨疏康和尼尔雌醇作为阳性对照药物.结果补肾健脾中药组成骨细胞的增殖、ALP活性均显著高于空白对照组(P＜0.05),与骨疏康和尼尔雌醇组比较有显著性差异.结论补肾健脾中药可通过增加成骨细胞的增殖与分化而促进骨形成.     

补肾强筋胶囊对成骨细胞缺氧诱导因子1α的影响

目的:探讨补肾强筋胶囊含药血清对成骨细胞缺氧诱导因子1α(HIF1-α)的影响。方法:制备补肾强筋胶囊大鼠含药血清,成骨细胞株hFOB1.19培养并分为常规组、对照组、低浓度组及高浓度组,常规组用21%O2培养,其余三组用2%O2培养,其中对照组加入空白血清,低浓度组和高浓度组分别加入低浓度和高浓度补肾强筋胶囊含药血清,MTT法检测成骨细胞增殖,并检测各组ALP活性,Western blot检测各组HIF1-α。结果:MTT检测成骨细胞增值率低于常规对照组,差异有统计学意义(P0.01);高浓度组、低浓度组OD值与低氧对照组比较,差异有统计学意义(P0.05);常规对照组ALP活性与低氧对照组比较,差异有统计学意义(P0.05);高浓度组与低浓度组均比低氧对照组的ALP活性高,差异有统计学意义(P0.05);在低氧环境下,加入补肾强筋胶囊含药血清后,高浓度组及低浓度组其HIF-1α的表达较低氧对照组降低,差异有统计学意义(P0.01)。结论:补肾强筋胶囊含药血清可促进低氧环境下成骨细胞的增殖,降低HIF1-α含量。     

益骨胶囊含药血清对SD大鼠成骨细胞分泌NO、NOS的影响

目的:观察益骨胶囊含药血清对体外培养的大鼠成骨细胞(OB)表达NO、NOS的影响.方法:(1)将40只12月龄SD大鼠分为益骨胶囊组(高、中、低剂量组)和生理盐水对照组,制备含药血清和对照血清;确定最佳灌胃剂量组和最佳血清添加浓度.(2)分离、培养新生SD大鼠的颅骨成骨细胞,传至第3代后分为2组(含药血清组和空白血清对照组),分别在培养24 h、48 h和72 h后用RT-PCR和试剂盒检测OB表达NOSmRNA的量及其活性变化和OB分泌NO的量.结果:益骨胶囊含药血清组在24h、48 h和72 h时OB表达NOSmRNA的量及其活性和分泌NO的量均明显高于空白血清对照组(P＜0.01或P＜0.05).结论:益骨胶囊含药血清能促进OB NO的分泌和NOS的表达,提示这可能是该方防治骨质疏松的机理之一.     

纳米钙补肾中药血清对体外培养大鼠成骨细胞增殖的影响

用血清药理学方法探讨纳米钙补肾中药血清对体外培养大鼠成骨细胞增殖的影响.按照随机对照原则设立7个实验组:假手术组、模型空白组、中药复方小剂量组、中药复方中剂量组、中药复方大剂量组、骨疏康颗粒组、牡蛎碳酸钙咀嚼片组,在相同条件下分别制备含药血清和对照血清.采用多次胶原酶消化法获得足够数量的成骨细胞进行实验研究.用MTT法观察各组不同浓度血清在不同作用时间段对成骨细胞增殖的影响.采用SPSS 10.0软件进行均数比较和多元线性分析.结果表明,3个中药复方组均能促进成骨细胞增殖,其中20%血清浓度下中剂量中药复方增殖作用最为明显,有显著的统计学意义(P＜0.01).表明血清浓度与成骨细胞增殖率有较强的相关关系.