补肾化痰降浊方对高脂血症大鼠血管平滑肌细胞增殖影响的实验研究

目的:观察补肾化痰降浊方对高脂血症大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法:健康Wistar清洁级大鼠,分离大鼠胸主动脉,贴块法培养VSMC,抗α-actin的免疫组织化学染色鉴定细胞。无血清培养液培养静止后,以20%胎牛血清(FBS)刺激VSMC增殖。实验分为空白对照组、补肾化痰降浊方组,分别加入不同浓度的补肾化痰降浊方,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察药物对VSMC增殖的影响,并用流式细胞仪检测VSMC细胞周期的变化。结果:经20%FBS刺激后,VSMC细胞增殖明显升高,加入不同浓度的补肾化痰降浊方作用24小时后,细胞增殖明显下降,并呈一定程度的剂量依赖关系。随着补肾化痰降浊方浓度加大,VSMC细胞周期分布发生变化,G0/G1期细胞比例增加,而合成增殖的S期细胞比例减少,出现G0/G1期细胞周期阻滞。结论:补肾化痰降浊方对血管平滑肌细胞增殖具有抑制作用,并呈剂量依赖关系,可能是其防治动脉粥样硬化(AS)及AS性疾病的部分作用机制。     

大黄素对血管平滑肌细胞周期调控蛋囱Cyclin D1表达的影响

目的：观察大黄素对人血管平滑肌细胞周期时相和CyclinD1表达的影响。方法：取对数增长期的平滑肌细胞，采用MTY法观察大黄素对平滑肌细胞增殖抑制的有效浓度范围，求出IC50并干预细胞；然后分别用流式细胞仪和Westemblot法进行细胞周期对相和Cyclin D1表达的测定。结果：与对照组比较，IC50对药物组G0／G，期细胞百分比升高，S期细胞百分比下降，Cyclin D1表达高峰延迟，表达量下调，细胞周期受阻于G0/G1期。结论：大黄素在抑制平滑肌细胞增殖的过程中通过下调Cyclin D1表达，阻滞了细胞周期的进程；是一种有效的抗平滑肌细胞增殖的药物。     

三七总皂苷对PDGF-BB所致动脉平滑肌细胞增殖周期的影响

目的:研究三七总皂苷对血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)诱导SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞(ASMC)增殖周期的影响及可能作用的机制。方法:将SD大鼠ASMC进行体外培养,采用MTS法检测三七总皂苷对PDGF-BB诱导平滑肌细胞增殖的影响;流式细胞仪分析细胞增殖周期;实时逆转录聚合酶链反应技术检测ASMC中c-fos、cyclin D1和cyclin E1 mRNA表达。结果:PDGF-BB0.02 mg/L能明显升高ASMC光密度值,增加S期细胞比例而降低G0/G1期细胞比例,并上调c-fos、cyclin D1和cyclin E1 mRNA表达。PDGF-BB+三七总皂苷30 mg/L、60 mg/L、180 mg/L组均明显降低PDGF-BB升高的细胞光密度、S期细胞比例而升高G0/G1期细胞比例;明显下调PDGF-BB所致的c-fos、cyclin D1和cyclin E1 mRNA高表达。结论:三七总皂苷可能通过阻止动脉平滑肌细胞由G0/G1期进入S期而抑制PDGF-BB所致的增殖,其作用机制可能与降低c-fos、cyclin D1和cyclin E1 mRNA高表达有关。     

红花黄色素对大鼠血管平滑肌细胞的影响

目的:观察红花黄色素对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)生长增殖、细胞周期和核因子(NF-KB)活性的影响。方法:胎牛血清刺激体外培养的大鼠VSMC使其快速增殖生长,加入不同浓度的红花黄色素作用一定时间后,通过MTT法测定红花黄色素对血管平滑肌细胞生长的抑制率、流式细胞技术测定细胞周期和核因子活性的影响。结果:红花黄色素能明显抑制胎牛血清刺激的血管平滑肌细胞的增殖(IC为0.38mg/ml),与对照组相比具有显著差异(P<0.01)。结论:红花黄色素能显著抑制血管平滑肌细胞的增殖生长。     

大黄素对血管平滑肌细胞周期调控蛋白CyclinD1表达的影响

目的:观察大黄素对人血管平滑肌细胞周期时相和CyclinD1表达的影响.方法:取对数增长期的平滑肌细胞,采用MTT法观察大黄素对平滑肌细胞增殖抑制的有效浓度范围,求出IC50并干预细胞;然后分别用流式细胞仪和Westernblot法进行细胞周期时相和CyclinD1表达的测定.结果:与对照组比较,LC50时药物组G0/G1期细胞百分比升高,S期细胞百分比下降,CyclinD1表达高峰延迟,表达量下调,细胞周期受阻于G0/G1期.结论:大黄素在抑制平滑肌细胞增殖的过程中通过下调Cyclin D1表达,阻滞了细胞周期的进程;是一种有效的抗平滑肌细胞增殖的药物.     

芒果苷对白血病K562细胞周期分布及细胞周期素A、细胞周期素B1表达的影响

目的：观察芒果苷对白血病K562细胞周期分布及细胞周期素A（CyclinA）、细胞周期素B（CyclinB1）表达的影响,以进一步探讨芒果苷抗白血病的分子作用机制。方法：应用流式细胞仪检测细胞周期的分布,用RT-PCR方法检测Cyclin A及Cyclin B1 mRNA表达水平。结果：芒果苷作用24 h后,K562细胞G2/M期细胞增多,出现G2/M期阻滞,并呈现剂量依赖性;Cyclin A mRNA和Cyclin B1 mRNA的表达随作用浓度的增加而逐渐增强,呈显著的剂量依赖性。结论：芒果苷阻滞白血病K562细胞周期于G2/M期,明显上调K562细胞Cyclin A和Cyclin B1 mRNA表达水平,芒果苷诱导K562细胞G2/M期阻滞可能是其抗白血病作用的分子机制之一。     

绿茶多酚抑制LDL刺激的大鼠血管平滑肌细胞增殖的研究

目的：观察绿茶多酚对低密度脂蛋白（LDL）刺激下离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响。方法：体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞，LDL刺激时，应用不同剂量的绿茶多酚作用24h后，采用MTS／PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态，应用流式细胞术测定细胞周期，结果：与对照组相比，LDL可以明显刺激大鼠血管平滑肌细胞的增殖，绿茶多酚对LDL刺激下的大鼠血管平滑肌细胞增殖具有明显的抑制作用（P＜0．05），并呈现剂量依赖性，流式细胞术检测表明，绿茶多酚可以使LDL刺激下的大鼠血管平滑肌细胞大部分处于G0／G1期，与LDL组相比有明显差异（P＜0．05），结论：绿茶多酚可明显抑制LDL刺激下的大鼠血管平滑肌细胞增殖。     

消斑通脉合剂对血管平滑肌细胞增殖和P21waf1/cip1蛋白表达的影响

目的：探讨中药复方消斑通脉合荆药物血清对血小板源性生长因子（PDGF—BB）诱导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）增殖与细胞周期分布的影响及相关作用机制。方法：体外培养VSMCs，PDGF—BB刺激VsMCs，采用MTr法检测药物血清对VSMCs增殖的影响；流式细胞仪分析各组细胞周期分布情况；应用Western印迹法检测药物血清对VSMcs中P21waf1/cip1蛋白的表达变化。结果：MTT法显示药物血清呈剂量依赖性抑制VSMCs增值，高剂量与低剂量比较有显著差异（P〈0．05）；流式细胞仪分析结果显示与模型组比较，低剂量与高剂量组明显提高G0／G1期百分率（P〈0．01）、减少s期百分率（P〈0．01），低剂量与高剂量组比较有显著差异（P〈0．05）；Western印迹法显示与模型组比较，高剂量与低剂量可明显提高VSMCs中P21waf1/cip1蛋白表达（P〈0．01），低剂量与高剂量比较有统计学差异（P〈0．01）。结论：中药复方消斑通脉合剂药物血清通过促进VSMCs中P21waf1/cip1。蛋白表达，阻滞VsMcs细胞周期进程，起到抑制VsMcs增殖作用。     

益气活血方对三阴性乳腺癌MDA-MD-231细胞体外抑制作用的研究

目的:探讨中药益气活血方对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的抑制作用和可能的作用机制。方法:采用MTT法测定益气活血方在不同作用时间下对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的生长、抑制作用;应用流式细胞技术检测其对细胞周期的影响;利用Western Blot法检测Kif15、Cyclin B1、Cyclin D、CDK1蛋白表达的影响。结果:倒置显微镜下观察发现,益气活血方作用于三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞48h后,细胞发生不同程度的形态学改变,细胞减少,排列疏松,体积变小,形态变圆;随着给药浓度的增加,作用时间的延长,益气活血方对细胞的抑制率相应增加,其中12.5g/L、25g/L浓度组的增殖抑制率接近阳性对照组(10nM紫杉醇);12.5g/L剂量益气活血方作用于MDAMB-231细胞48h后可使肿瘤细胞的细胞周期阻滞于G1期;同时,益气活血方可明显下调细胞周期相关的Kif15、Cyclin B1蛋白表达,差异有统计学意义。结论:益气活血方能阻滞MDA-MB-231细胞周期,抑制乳腺癌细胞的增殖。     

丹参酮ⅡA抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖及其机制研究

目的：观察丹参酮ⅡA（tanshinone ⅡA，TA）对10％胎牛血清诱导的大鼠血管平滑肌细胞（RVSMC）增殖的抑制作用，并探讨其可能的作用机制。方法：体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞A7r5细胞株，以终浓度为10％的胎牛血清（FBS）作为刺激因素，用细胞计数法、噻唑蓝（MTY）比色法和5-溴脱氧尿嘧啶（BrdU）掺入法测定TA对细胞增殖的影响，用流式细胞术（FCM）分析细胞周期分布特征，用Western blot实验测定细胞外信号调节激酶1／2（ERK1／2）磷酸化活性，用RT—PCR测定c—fos的表达水平。结果：细胞计数、MTY比色法和BrdU掺入实验表明丹参酮Ⅱ。能抑制10％FBS所诱导的VSMC增殖，作用强度呈剂量依赖性；细胞周期分析显示，TA处理组G0／G1期细胞百分比高于10％FBS组，而S期比例低于10％FBS组，表明TA可阻止10％FBS所诱导的细胞周期由G0／G1期向S期推进；Western blot结果显示与10％FBS组相比，TA处理组ERK1／2磷酸化活性降低；RT—PCR结果显示TA处理组c—fos表达水平降低。结论：丹参酮可抑制10％FBS诱导的体外培养大鼠动脉平滑肌细胞增殖，此作用可能与其阻止细胞周期由G0／G1期向S期推进，抑制MAPK信号转导通路激活，进而下调c-fos表达有关。     

黄芩苷抑制大鼠胰岛细胞瘤细胞株增殖的分子机制研究

目的 探索黄芩苷对大鼠胰岛细胞瘤细胞的影响及作用的分子机制。方法 应用光学显微镜、MTT测定、流式细胞仪、报告基因分析以及Western Blot等方法,探讨黄芩苷对细胞增殖和细胞周期的影响及作用分子机制。结果 黄芩苷处理大鼠胰岛细胞瘤细胞后,分裂相细胞显著减少,细胞增殖受到抑制,细胞的生存率下降,随黄芩苷浓度的增加和／或作用时间的延长,抑制率呈上升趋势,并出现凋亡细胞;胰岛细胞瘤细胞株凋亡过程中caspase-3活性以时间依赖性方式增高;通过流式细胞仪检测细胞周期发现,随黄芩苷处理浓度增加,S期细胞逐渐减少,从38．2％下降至9．4％,G0／G1期细胞所占百分率逐渐增加,从56．4％上升至85．9％,细胞出现G1阻滞;同时,细胞周期蛋白基因启动子活性显著下调,细胞周期蛋白表达明显降低。结论 黄芩苷能诱导细胞凋亡,其作用可能与caspase-3活化有关;黄芩苷还能以剂量依赖性方式和时间依赖性方式抑制胰岛细胞瘤细胞增殖,黄芩苷诱导细胞周期蛋白基因转录和表达下调可能在其中起着重要作用。     

中药天花粉蛋白对黑色素瘤细胞凋亡及细胞周期的影响

目的：探讨中药天花粉蛋白纯化组分对黑色素瘤细胞增殖的抑制作用。方法：用流式细胞仪测定提纯的中药天花粉蛋白有效组分对小鼠黑色素瘤细胞体外培养过程中细胞ＤＮＡ合成、细胞周期及细胞凋亡的影响。结果：天花粉蛋白纯化组分可引起小鼠黑色素瘤细胞Ｇ_０／Ｇ_１期细胞增加，Ｓ期细胞减少，呈现 Ｇ_０／Ｇ_１期阻滞现象。并有诱导细胞凋亡作用，而且 Ｇ_０／Ｇ_１期阻滞与细胞凋亡高度相关（ｒ＝０．８７０５）。结论：天花粉蛋白纯化组分可通过抑制黑色素瘤细胞Ｓ期ＤＮＡ合成、抑制瘤细胞分裂增殖以及诱导瘤细胞凋亡来达到抑瘤作用。     

消斑通脉合剂对PDGF-BB诱导血管平滑肌细胞增殖的影响

[目的]观察中药复方消斑通脉合剂药物血清对体外培养的VSMCs细胞周期的作用。[方法]体外培养VSMCs,取对数生长期细胞用作实验,MTT法检测不同浓度药物血清对体外培养的VSMCs增殖活力;应用流式细胞仪分析各组细胞周期分布。[结果] MTT法显示药物血清呈剂量依赖性抑制VSMCs增值,高剂量与低剂量比较有统计学差异(P<0.05),流式细胞仪显示药物血清可明显阻滞VSMCs细胞进程,高剂量与低剂量比较有统计学差异(P<0.01)。[结论]中药复方消斑通脉合剂药物血清可以阻滞VSMCs的细胞周期进程,达到抑制VSMCs增殖的作用。     

益肺活血颗粒对血小板衍生生长因子诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及转化生长因子活性的影响

目的 观察益肺活血颗粒(Yifei Huoxue Granule, YFHXG)对血小板衍生生长因子（platelet-derived growth factor BB,PDGF-BB）刺激大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)增殖的抑制作用及对转化生长因子（transforming growth factor-β,TGF-β）活性的影响。     

当归多糖诱导K562白血病细胞凋亡的实验研究

目的从细胞凋亡的角度探讨当归多糖(APS)抑制白血病细胞增殖的机制。方法体外培养白血病细胞株K562,培养时添加25 mg/L、250 mg/L、2 500 mg/L当归多糖,分别于第2,4,6天,取细胞用台盘蓝拒染法进行活细胞计数;流式细胞术分析细胞周期分布;免疫组织化学检测bcl-2抗凋亡基因的表达。结果细胞生长曲线显示25~2 500 mg/L的当归多糖对白血病细胞株K562有显著抑制作用,且呈剂量效应关系。流式细胞术结果显示250 mg/L作用后S,G2+M期K562细胞数减少,G0/G1期细胞增多。APS诱导细胞后bcl-2明显降低(P<0.05)。结论APS对白血病细胞株K562细胞的增殖具有显著抑制作用,APS通过阻止K562细胞进入S期而抑制其DNA合成,bcl-2表达降低可能是APS诱导白血病细胞凋亡重要途径之一。     

三氧化二砷对体外人胶质瘤细胞株U251的影响

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对体外培养的人类成神经胶质瘤细胞株U251MG的作用及其机制。方法应用倒置相差显微镜、四甲基偶氮唑蓝法、流式细胞仪,分别对不同浓度加药组及对照组U251细胞的存活、形态学改变、细胞DNA含量的分布进行观察和测定。结果0.5～4μmol/L的As2O3可明显抑制U251的增殖。流式细胞仪分析显示,加药组在G1期细胞前均出现亚二倍体峰,且G0/G1期细胞减少,诱导细胞凋亡。结论As2O3能抑制体外人胶质瘤细胞株U251的增殖,有望用于神经胶质瘤的治疗。     

Crocetin inhibits cell cycle G1/S transition through suppressing cyclin D1 and elevating p27kip1 in vascular smooth muscle cells

Crocetin is a natural carotenoid compound isolated from Gardenia jasminoids Ellis. Our previous study shows that crocetin inhibits angiotensin II (Ang II)‐induced vascular smooth muscle cells (VSMCs) proliferation. To further explore the mechanism by which crocetin inhibits VSMCs proliferation, in the present study we examined the effect of crocetin on cell cycle progression and cell cycle regulatory proteins. Flow cytometry analysis showed that Ang II elicited significant increase in the percentage of VSMCs in the S phase, with a concomitant decline in the percentage of VSMCs in the G₀/G₁ phase. However, on pretreatment of VSMCs with crocetin, the percentage of VSMCs in the S phase decreased, while that in the G₀/G₁ phase increased significantly. In addition, Ang II‐induced increase of cell proliferation index was also decreased by crocetin. Western blotting analysis indicated that crocetin markedly inhibited the protein expression of cyclin D1 but not cyclin E. Crocetin also increased the level of cyclin‐dependent kinase inhibitor (CDKI) p27^kip1 but not CDKI p21^waf1/cip1. In conclusion, our present results suggest that the inhibition of cell cycle G₁/S transition in VSMCs by crocetin can be attributed, at least in part, to its suppression of cyclin D1 and elevation of CDKI p27^kip1. Copyright © 2009 John Wiley & Sons, Ltd.     

番茄红素对牛胸主动脉平滑肌细胞增殖的作用及作用机制

目的：研究番茄红素对牛胸主动脉平滑肌细胞增殖的作用及作用机制。方法：采用组织块法体外培养牛胸主动脉平滑肌细胞,以含10%小牛血清的培养基制备牛胸主动脉平滑肌细胞增殖模型。细胞分为正常组、阴性对照组、模型组及1、0.1和0.01μmol·L^-1三个不同浓度的番茄红素实验组。实验采用MTT法测定牛胸主动脉平滑肌细胞的增殖活性,采用流式细胞术测定细胞周期分布,并测定了细胞内的SOD活性和MDA含量。结果：番茄红素在三个实验浓度下都能显著抑制血管平滑肌细胞的增殖。一方面,番茄红素抑制了G1期细胞进入S期;另一方面,番茄红素在1和0.1μmol·L^-1的浓度下,能明显增强细胞中的SOD活性,同时,在三个给药浓度下,细胞内的MDA含量都显著降低。这些作用都具有浓度依赖性,并且与模型组比较均有统计学差异。结论：番茄红素对牛胸主动脉平滑肌细胞的增殖有抑制作用,并且这种抑制作用可能与它能够抑制细胞进程和它的强抗氧化性能够抑制细胞中的脂质过氧化和氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）的形成有关。它有望成为防治动脉粥样硬化的一种新的药物。     

黄芩茎叶总黄酮对高甘油三酯血清刺激的VSMCs增殖的影响

目的:观察黄芩茎叶总黄酮(SSTF)对单纯高甘油三酯血清(HTG)刺激的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的抑制作用及可能的分子机制.方法:体外培养大鼠胸主动脉VSMCs,HTG诱导其增殖,观察SSTF对细胞增殖、细胞周期、CO含量、血红素氧化酶-1(HO-1)平EFLK/p-ERK蛋白表达的影响.结果:50HD mg·L~(-1)的SSTF可明显抑制HTG诱导的VSMCs增殖,增加VSMCs培养上清液中CO的生成量,抑制细胞周期进程(P＜0.05,P＜0.01),并呈时间和剂量依赖趋势;500 mg·L~(-1)的SSTF显著诱导细胞ERK/p-ERK蛋白的表达(P＜0.01),但是对HO-1蛋白的表达无影响.结论:SSTF通过阻滞细胞周期进程直接参与抑制VSMCs增殖的作用,ERK信号通路可能参与SSTF介导的细胞保护作用.     

雷公藤内酯醇对K562细胞增殖周期的影响及对比研究

目的探讨雷公藤内酯醇抑制 K562细胞增殖的机理。方法选用 K562细胞株,运用细胞培养、MTT 法及流式细胞仪研究不同浓度雷公藤内酯醇、足叶乙甙(VP-16)对 K562细胞增殖及细胞周期的影响。结果雷公藤内酯醇能抑制 K562细胞的增殖,呈时间与剂量依赖性,且具有上调 K562细胞 G_1/S 检测点的能力。而 VP-16作用点是 G_2/M 期。结论雷公藤内酯醇有明确的抗白血病细胞增殖的能力,能干扰 K562细胞 G_1/S 检测点的转换,与 VP-16作用点不同。