人参灰霉菌和人参黑斑菌对人参总皂苷的化学趋向性响应研究

采用平板法和孢子悬滴萌发法分别测定了人参灰霉菌和人参黑斑菌在3种趋化参数(浓度、温度和pH)下对人参总皂苷的化学趋向性响应。结果表明,人参灰霉菌在20 ℃和pH 6的培养条件下,对20 mg·L^-1的人参总皂苷表现出较强的化学趋向性,趋化移动指数(CMI)为1.293 0,趋化生长速率(CGR)为0.476 0,孢子萌发率(SGR)为53%,菌丝干重(DWM)为0.452 6 g·L^-1;而人参黑斑菌则在25 ℃和pH 6的培养条件下,对2 mg·L^-1的人参总皂苷表现出较强的化学趋向性,趋化移动指数(CMI)为1.235 4,趋化生长速率(CGR)为0.537 0,孢子萌发率(SGR)为67%,菌丝干重(DWM)为0.494 8 g·L^-1。显示人参灰霉菌和人参黑斑菌分别对低(2 mg·L^-1)、中(20 mg·L^-1)浓度的人参总皂苷具有正向的化学趋向性响应,而且受此趋化影响下的孢子萌发率、菌丝生长速率及菌丝生长量都得到了显著提高,但随皂苷浓度的升高而降低。     

波浪式WAVE生物反应器悬浮培养枇杷细胞生产熊果酸的研究

采用波浪式WAVE生物反应器放大培养枇杷悬浮细胞,研究细胞生长及熊果酸(UA)的累积情况.摇瓶和反应器中,以细胞的干重和UA的含量为指标进行对比试验;反应器中1 L和5 L工作体积下,以培养液中元素代谢、细胞的干重、UA的含量为指标进行对比试验;生物反应器中,1 L的工作体积下,以接种量、转速、转动角度为因素开展正交试验筛选最佳的组合.反应器中细胞的干重增长及UA含量比摇瓶中高出了105.5%,27.65%;生物反应器中不同的工作体积下,培养液中元素的代谢、细胞的干重及UA的累积情况相似;生物反应器中,接种量为80 g,转速为26 r·min^-1,角度为6°是最佳组合,接种后100 h收获,细胞的干重为19.01 g·L^-1,UA质量分数为27.750 mg·g^-1.结果表明WAVE生物反应器比摇瓶更适合枇杷细胞悬浮培养,并且可实现1 L到5 L的培养放大.     

重金属铅胁迫对人参光合特征与皂苷含量的影响

为阐明Pb胁迫对人参光合作用与次生代谢产物的影响,探讨药用植物对重金属胁迫的响应机制,采用筒栽试验方法,对不同浓度铅（Pb）处理（0,100,250,500,1 000 mg·kg^-1）下人参的光合特征参数与皂苷含量进行了测定与分析。结果表明,低浓度Pb处理（≤250 mg·kg^-1）时,人参叶片净光合速率和SPAD的变化并不显著,当Pb质量分数达到500 mg·kg^-1时,叶片净光合速率和SPAD均显著下降（P<0.05）,当Pb质量分数为1 000 mg·kg^-1时,二者达到最低,降低幅度分别为57.8%,11.0%。从人参根部总皂苷含量来看,Pb胁迫浓度为100 mg·kg^-1时,总皂苷含量的变化并不显著,而当Pb质量分数达到250 mg·kg^-1时,总皂苷含量显著增加（P<0.05）,并在Pb质量分数为1 000 mg·kg^-1时,达到最高。在Pb质量分数为0~1 000 mg·kg^-1时,Pb浓度与叶片净光合速率和SPAD均呈现极显著的负线性相关（P<0.01）,而与人参总皂苷含量呈现出显著的正线性相关关系（P<0.05）。由此说明,人参叶片光合作用与根部次生代谢对Pb胁迫的响应规律是反向的,高浓度Pb胁迫将抑制人参叶片的光合能力,但能够促进人参根部的次生代谢过程。     

酸碱胁迫对人参不定根中皂苷积累的影响及皂苷的组织化学定位研究

为了研究酸碱胁迫对人参不定根中皂苷含量的影响,不定根在反应器中培养30 d后进行酸碱处理的结果,酸碱处理可提高不定根中皂苷含量。用酸和碱处理后皂苷最高含量出现的时期不同,酸处理后的第5天人参皂苷质量分数达最高（14.0 mg·g^-1 DW）,而碱处理在第7天出现皂苷质量分数的最高值（14.1 mg·g^-1 DW）。对不定根中皂苷进行组织化学定位的研究表明,不定根组织中皂苷的颜色呈现出浅红到深红的颜色变化,皂苷主要积累于中柱细胞。     

何首乌不定根的离体诱导及悬浮培养研究

通过离体不定根的高效诱导与悬浮培养,实现何首乌资源的永续利用。在培养基中添加不同浓度的蔗糖和植物生长物质,筛选从幼茎有效诱导不定根的最适培养基;采用正交试验筛选不定根悬浮培养的最适培养基;对悬浮培养的不定根进行继代培养并测定生长曲线,同时对不定根中的主要有效成分进行检测。结果表明,能够从幼茎有效诱导不定根的最适培养基为MS+蔗糖 40 g·L^-1+α-萘乙酸 2.0 mg·L^-1+6-卞基腺嘌呤 0.2 mg·L^-1;不定根悬浮培养的最适培养基为 MS+蔗糖30 g·L^-1+α-萘乙酸 2.0 mg·L^-1+生根粉 0.2 mg·L^-1;经过检测,发现不定根同样含有何首乌药材中的主要有效成分二苯乙烯苷。该实验实现了何首乌不定根的高效诱导与培养,为中药资源的永续利用研究提供了工作基础。     

碳源、氮源和磷源对西洋参悬浮细胞生物量和活性成分积累的影响

 目的研究碳源、氮源和磷源对西洋参悬浮细胞生长,人参皂苷Re,Rb1以及西洋参多糖合成的影响。方法利用组织培养技术结合高效液相色谱法和紫外分光光度法,通过改变培养基碳源种类、氮源和磷源浓度,研究其对西洋参悬浮细胞生长,人参皂苷Re,Rb1以及西洋参多糖含量的影响。结果添加40g·L^-1蔗糖的细胞干重生长率最大,加入30g·L^-1蔗糖得到的人参皂苷Re、Rb1和多糖的含量最高,分别为0.531%,0.145%和3.62%。本实验保持氮源浓度60mmol·L^-1,当培养基中全部为NO₃^-时,细胞干重生长率最低,而人参皂苷Re、Rb1和多糖含量最高,分别为对照组的2.40,1.96和4.41倍。添加5.00mmol·L^-1的KH₂PO₄,细胞干重生长率最大。当培养基中KH₂PO₄浓度为0.63mmol·L^-1时,人参皂苷Re、Rb1和多糖的含量最高。结论本实验确定了西洋参细胞悬浮培养的最佳碳源种类、氮源比例和磷源浓度,表明不同碳源、氮源和磷源对西洋参细胞生长和活性成分有显著影响。     

3种重金属对欧洲花楸悬浮细胞生物量的影响

目的： 以欧洲花楸悬浮培养细胞（SASC）为材料,研究非生物诱导子-重金属对SASC生物量的影响。方法： 配制不同浓度的氯化镧、硝酸铜、硝酸铅溶液对SASC进行处理,用电子天平进行SASC生物量测定。结果： 低浓度氯化镧刺激细胞生长而高浓度则抑制细胞生长,对细胞生长的影响表现为Hormesis现象,最适刺激质量浓度为0.01 mg·L^-1;低浓度硝酸铜抑制细胞生长,高浓度刺激细胞生长,0.05 mg·L^-1 硝酸铜处理后细胞生物量最低;基本所有浓度的硝酸铅都表现为刺激细胞生长,最适刺激质量浓度为0.5 mg·L^-1。结论： 重金属诱导子影响了SASC的生物量,且其作用程度和方式与氯化镧、硝酸铜、硝酸铅3种诱导子种类及浓度相关。     

人参皂苷对糖基化终末产物条件下视网膜Müller细胞活力的影响

目的：探讨人参皂苷对糖基化终末产物（advanced glycation end products,AGEs）条件下视网膜Müller细胞活力的影响。方法：以改良酶消化法培养SD大鼠视网膜Müller细胞,将纯化培养的视网膜Müller细胞分别置于低剂量AGEs（终质量浓度为75 mg·L^-1）及高剂量AGEs（终质量浓度为150 mg·L^-1）下进行培养,并分别以人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re、人参皂苷Rb₁及人参皂苷提取物干预。在干预24,48,72 h后以酶联免疫吸附法测定各组细胞外液中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）的漏出量,以推测Müller细胞活力。结果：低AGEs组24,48 h的LDH漏出量较正常对照组均无明显差异,但72 h的LDH漏出量较正常对照组增多（P<0.05）;高AGEs组各时段LDH漏出量均较正常对照组以及低AGEs组增多（P<0.05）;人参皂苷Rg₁,Re,Rb₁及人参皂苷提取物均能减少低AGEs组48,72 h的LDH漏出量（P<0.05）,减少高AGEs组各时段的LDH漏出量（P<0.05）。结论：AGEs能明显增加视网膜Müller细胞膜的通透性,降低细胞活力,并且与干预的时间、浓度有关;人参皂苷Rg₁,Re,Rb₁及人参皂苷提取物能降低本实验中AGEs条件下Müller细胞膜的通透性、提高Müller细胞膜稳定性,增强细胞活力,尤其以人参皂苷提取物效果显著。     

新疆雪莲细胞悬浮系的建立和黄酮类活性成分的产生

目的:建立新疆雪莲的悬浮培养体系。方法:研究不同培养基、培养基初始pH、碳源、接种量、植物生长物质含量对雪莲细胞生长和黄酮合成的影响。结果:N₆液体培养基在pH5.8、蔗糖含量50g·L^-1、接种量60-80g·L^-1FW时有利于细胞生长和黄酮合成,附加BA0.2mg·L^-1+NAA2mg·L^-1有利于黄酮合成,而附加BA0.5mg·L^-1+NAA3mg·L^-1则对生长有利。结论:培养条件的优化可有效提高雪莲悬浮细胞的生长和总黄酮的合成。     

液相色谱-串联质谱法研究腈菌唑在人参根、茎、叶和土壤中的残留动态

建立了人参根、茎、叶及土壤中腈菌唑的液相色谱-串联质谱检测方法,并研究了25%腈菌唑水分散粒剂在人参根、茎、叶和土壤中的消解动态及最终残留量。样品经丙酮提取,N-丙基乙二胺（PSA）固相萃取柱净化后,经Kromasil Eternity-5-C₁₈（2.1 mm×150 mm,5 μm）色谱柱分离,以乙腈和0.1%甲酸水溶液为流动相进行洗脱,采用质谱正离子扫描,多反应监测模式进行定量分析,外标法定量。在0.01~0.20 mg·kg^-1添加范围内,回收率为80.9%~90.7%,相对标准偏差为5.54%~9.29%,定量限为0.005 mg·kg^-1。该方法精密度高,重复性好,检出限低,能满足生产上对腈菌唑检测分析的要求。施药剂量为1152 g·hm^-2（以有效成分含量计）时,腈菌唑在人参根、茎、叶和土壤中的降解半衰期为6.25~9.94 d。施药剂量为576~1152 g·hm^-2时,腈菌唑在人参根、茎、叶和土壤中的最终残留量分别为未检出~0.0601 mg·kg^-1,未检出~0.0817 mg·kg^-1,0.006 0~0.1022 mg·kg^-1和未检出~0.0376 mg·kg^-1。建议我国腈菌唑在干人参中的最大残留限量值分别为0.10 mg·kg^-1,安全间隔期为35 d。     

不同基质条件下西洋参皂苷提取物的自毒作用

人参皂苷是西洋参Panax quinquefolium中所含的主要次生代谢产物,西洋参生长过程中,植株内的人参皂苷可以通过根系分泌及腐解进入到土壤环境中.研究利用高效液相色谱法(HPLC)测定了土壤中人参皂苷含量,根据西洋参田间的实测数据设计皂苷提取物的系列浓度(0.2 ～125 mg· L-1溶液或0.2 ～ 125 mg·kg-1土壤),通过在溶液及土壤基质中的添加实验,观察环境中的皂苷提取物对西洋参种胚和成株苗生长的作用.结果表明,在北京市怀柔区三至四年生西洋参根际土中,检测到人参皂苷Rb1,Rb2,Rd,总量为0.80 ～ 3.19 mg·kg-,按照田间持水量为20％计算,总皂苷在土壤溶液中的质量浓度为4～ 16 mg·L-1.在溶液基质中,0.2～125 mg·L-1西洋参皂苷提取物对西洋参种胚胚根的抑制作用在6％ ～23％,在125mg·L-1时达到显著水平(P＜0.05);对西洋参胚芽无显著抑制作用.营养液中添加25 mg·L-1皂苷提取物,培养20 d时,三年生西洋参成株苗株高下降28％,地上部的生物量下降50％(P＜0.05);对新生须根生长的抑制作用不显著.在土壤基质中,添加同样浓度的皂苷提取物在灭菌和未灭菌土中对西洋参胚根、胚芽生长均无显著影响.由此推论,西洋参的皂苷成分对自身胚根和成株苗生长有自毒作用,但在田间土壤条件下,这种作用有所下降.     

藤梨根对RKO结肠癌细胞失巢凋亡的作用

目的:观察藤梨根对人结肠癌RKO细胞悬浮生长及失巢凋亡作用.方法:200～800 mg·L-1藤梨根作用于RKO细胞,CCK-8(CCK-8)法检测藤梨根对RKO细胞悬浮生长作用,双嵌入剂乙锭均二聚物(EthD-1)染色检测失巢凋亡,比色法检测半胱天冬酶-3(caspase-3)活性,2-7-二氯氢化荧光素乙二脂染色法结合荧光酶标仪检测细胞内活性氧的产生.结果:200 ～800 mg·L-1藤梨根可显著抑制RKO悬浮生长,呈剂量依赖性(P＜0.01).200 ～800 mg·L-1藤梨根作用后悬浮生长RKO细胞吸收EthD-1散发红色荧光,部分细胞可见核碎裂,呈现凋亡形态改变;藤梨根组EthD-1荧光吸光度与对照组比较差异显著(P＜0.01).终质量浓度200 ～800 mg·L-1藤梨根可显著增强RKO细胞caspase-3活性以及细胞内活性氧的产生(P＜0.01).结论:藤梨根可抑制RKO细胞悬浮生长,促使RKO细胞发生失巢凋亡,可能与活化caspase-3以及升高细胞内活性氧水平相关.     

吴茱萸汤颗粒剂、配方颗粒剂及传统汤剂中指标成分的含量比较

目的:比较吴茱萸汤颗粒剂、配方颗粒剂与传统汤剂中指标性成分的含量差异。方法:采用不同高效液相色谱法(HPLC)测定吴茱萸颗粒剂、配方颗粒剂与传统汤剂中吴茱萸碱、吴茱萸次碱、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1的含量,并对含量测定方法进行考察。结果:颗粒剂、配方颗粒剂与传统汤剂中吴茱萸碱和吴茱萸次碱质量浓度之和分别为47.32,13.49,12.60 mg·L~(-1),颗粒剂、配方颗粒剂中二者的质量浓度之和分别为传统汤剂的3.76,1.07倍;人参皂苷Re和人参皂苷Rb1质量浓度之和分别为335.23,345.28,307.39 mg·L~(-1)。颗粒剂、配方颗粒剂中二者的质量浓度之和分别为传统汤剂的1.09,1.12倍。结论:比较吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量时,颗粒剂与传统汤剂相差较大,而配方颗粒剂与传统汤剂基本一致;比较人参皂苷Re和人参皂苷Rb1的含量时,颗粒剂、配方颗粒剂与传统汤剂基本一致。     

雷公藤不定根培养体系的建立及中试放大研究

以MS为基本培养基,进行雷公藤不定根的诱导研究时发现,不论是以雷公藤幼叶还是以幼叶诱导的愈伤组织为外植体,在添加1.0 mg·L^-1 IBA的培养基上均可以诱导出不定根并建立良好的不定根培养体系;以雷公藤愈伤组织建立的悬浮细胞在添加2.0~4.0 mg·L^-1 NAA时,也可以形成不定根并建立稳定的不定根培养体系,雷公藤不定根的3个培养体系中雷公藤甲素含量均超过自然生长的根皮中的含量,其中AR3不定根中雷公藤甲素含量最高,为根皮的5.3倍。在使用5 L发酵罐进行中试放大培养时,与250 mL摇瓶培养相比,每升培养基不定根增长量、次生代谢产物含量差异不大,这为通过组织培养生产雷公藤次生代谢产物奠定了基础。     

参玉口服液澄清工艺优选

目的:优选参玉口服液的澄清工艺.方法:以人参皂苷含量、总多糖含量、澄明度和稳定性为评价指标,考察KBT-ZTC絮凝澄清法、酶解法、微滤法、酶解-微滤法及絮凝澄清-微滤法对参玉口服液质量的影响.结果:最佳澄清处理方法为絮凝澄清-微滤法,参玉口服液澄清稳定、有效成分保留率得以提高,人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、总多糖质量分数分别为0.331 1,0.282 8,0.098 4,96.33 mg·g-1.结论:KBT-ZTC絮凝澄清法与微滤法联用能有效除去杂质,保留有效成分,且工艺稳定,可作为参玉口服液的澄清工艺.     

枇杷不同器官及不同物候4种三萜酸含量的动态变化

为考察4种三萜酸成分在枇杷各器官中分布,揭示不同物候枇杷叶三萜酸动态变化规律,观测枇杷物候,采集花、果实以及不同物候期的叶;采用高效液相色谱法测定熊果酸、齐墩果酸、科罗索酸和山楂酸含量。结果表明,4种三萜酸在所测样品器官中的质量分数高低顺序为落叶(23.2 mg·g^-1)>成熟叶(21.7 mg·g^-1)>嫩叶(17.5 mg·g^-1)>果肉(7.36 mg·g^-1)>花 (6.40 mg·g^-1),种子中未检出这4种三萜酸成分;在枇杷树萌芽、现蕾、开花、结果等不同物候采收的枇杷叶中4种三萜酸总量发生小幅波动,落叶变化范围17.8~26.2 mg·g^-1,成熟叶变化范围在16.5~23.5 mg·g^-1,嫩叶变化范围在14.7~21.5 mg·g^-1。随叶片发育、成熟、衰老,三萜酸含量有所增加;不同物候阶段对枇杷叶干物质积累及4种三萜酸含量产生一定影响。枇杷成熟叶在果实膨大时的干物质和三萜酸积累较多。文章对地域分布广泛的枇杷等植物药在次生代谢产物和采收期等相关研究上具有一定参考作用。