有机相脂肪酶催化合成脂质体修饰物胆固醇癸二酸单烯酯

目的 在非水相中利用酶法合成胆固醇癸二酸单烯酯,并对其最优合成工艺条件进行研究。方法 利用TLC、MS和NMR法对合成产物进行结构鉴定;通过正交试验对合成处方工艺进行优化。结果 最佳反应条件为胆固醇与癸二酸二乙烯酯物质的量之比为1∶6,Candida rugosa Lipase 10 mg/mL,异辛烷5 mL,温度35 ℃,反应时间24 h。结论 该条件下酯化率可达95%以上。     

一种利用蜗牛酶转化重楼皂苷VI制备偏诺皂苷元的方法＊

目的 建立并优化一种利用蜗牛酶水解重楼皂苷VI制备偏诺皂苷元的转化方法。方法 利用体外酶促体系，使用蜗牛酶水解重楼皂苷VI制备偏诺皂苷元，通过高效液相色谱和核磁检测分离并鉴定产物结构。设计反应时间、酶用量、反应温度和pH值四个单因素，以转化率为考察指标，通过多项式回归及响应面法确定最优的反应条件。结果 通过单因素与正交实验，确定了实验室制备偏诺皂苷元的最优反应条件：反应温度为37°C、酶用量为1.5 mg（每100 μg底物），反应时间36 h，pH为5.35，模型预测产率为53.5%，验证产率为51.5%，与预期基本相符。结论 开发并优化了一种用蜗牛酶转化重楼皂苷VI制备偏诺皂苷元的方法，该方法可行性高，反应得率高，耗时短，成本低，可能对开展中试研究具有潜在的指导作用。     

鸦胆子油的两相体系酶解工艺的研究

目的 利用脂肪酶催化鸦胆子油中的油脂水解成脂肪酸和甘油，得到质量分数相对较高的混合脂肪酸。方法 在对酶量、有机相、水相量、反应时间、温度、pH值的单因素分析的基础上，利用PB实验找出主要的酶解影响因素，并通过响应面分析法对重要影响因素进行酶法水解优化，得出的最优酶解条件。结果 最优酶解条件为加入pH 8.0的磷酸盐缓冲溶液量5 mL/g、石油醚量1 mL/g和酶量12 mg/g，酶解温度为38.8 ℃的条件下酶促水解7 h，该条件下鸦胆子酶解产物的脂肪酸质量分数达63.42%。结论 通过酶解处理，提高了鸦胆子油中药效成分。     

星点设计效应面法优化染料木苷的酶解工艺

目的: 优选染料木苷的酶解工艺。 方法: 利用超微粉碎技术过筛制备不同粒径的染料木苷原料,采用纤维素酶将其水解,制备染料木素。以染料木素转化率为指标,通过单因素试验考察粉酶解时间、温度、粒径及pH对酶解工艺的影响,响应面法优化染料木苷超微粉酶解制备染料木素的工艺。 结果: 染料木苷超微粉酶解反应最佳条件为反应介质pH 5.5乙酸-乙酸钠缓冲液,温度49 ℃,反应时间11 h,酶与底物比1:1。转化率(96.47±1.12)%,比普通粉染料木苷转化率高了1.84倍。 结论: 采用纤维素酶水解染料木苷超微粉制备染料木素的方法简单、酶解时间显著缩短,适用于规模化生产。     

总状毛霉对20(S)-原人参二醇的微生物转化及条件优化

目的: 利用微生物转化的方法构建20(S)-原人参二醇过氧衍生物的新合成途径,并对转化条件进行优化,提高过氧衍生物的产率。方法: 选取总状毛霉Mucor racemosus AS 3.205为转化菌株,从接菌量,底物浓度,转化时间,加样时间,温度,转速等方面对转化条件进行优化。结果: 获得2个20(S)-原人参二醇过氧衍生物,20(S)-原人参二醇为25,26-烯-24(R)过氧羟基-20(S)-原人参二醇和23,24-烯-25过氧羟基-20(S)-原人参二醇;获得了优化的转化工艺,即接种量为10%,底物浓度为0.25 mmol·L^-1,加样时间为转种后48 h,培养温度为28 ℃,转化时间为5 d,摇床转速为150 r·min^-1。结论: 该方法能简便的获得20(S)-原人参二醇过氧衍生物,采用优化后的转化条件25,26-烯-24(R)过氧羟基-20(S)-原人参二醇和23,24-烯-25过氧羟基-20(S)-原人参二醇的产率均明显增大。     

基于Box-Behnken响应面法的白芍产地加工与炮制生产一体化工艺研究

目的 针对白芍Paeonia lactiflora在传统加工炮制过程中成分流失、生产工序重复等问题,利用响应面法优选白芍产地加工与炮制生产一体化（简称“一体化”）工艺。方法 采用Box-Behnken响应面试验设计方法考察白芍一体化工艺中的煮制时间（X₁）、鲜药材干燥时间（X₂）、鲜药材干燥温度（X₃）3个因素,以4种指标性成分（儿茶素、芍药内酯苷、芍药苷、1,2,3,4,6-O-五没食子酰基葡萄糖）的总评归一值（OD值）作为评价指标,进行一体化工艺优化研究。结果 白芍一体化最佳工艺条件为煮制时间14.11 min,鲜药材干燥时间4.51 h,鲜药材干燥温度52.53℃。结论 Box-Behnken响应面法优选白芍一体化工艺切实可行,具有较强的实际意义,为白芍饮片一体化加工生产提供了科学依据。     

纤维素酶转化朝藿定B制备箭藿苷B的研究

该实验采用纤维素酶水解朝藿定B以制备箭藿苷B。以转化率为指标,通过单因素考察pH、温度、反应时间、酶用量、底物的浓度对转化率的影响,L₉（3⁴）正交试验优化制备工艺;采用MS,¹H-NMR,¹³C-NMR鉴定水解产物。结果表明,酶解反应的最适条件为温度50 ℃,反应介质（pH 5.6）醋酸-醋酸钠缓冲液,底物质量浓度20 g·L^-1,酶与底物质量比3：5,反应时间24 h,反应产物相对分子质量646.23,核磁图谱证实产物为箭藿苷B。该工艺简单可靠,反应条件温和,适合工业化生产。     

AmpC酶抑制剂筛选方法的建立及136种中药材活性评价

目的 建立一种AmpC酶抑制剂的快速筛选方法,为治疗由耐药菌传播引起的感染提供筛选依据。方法 以阿维巴坦钠为阳性对照,采用紫外分光光度法检测反应体系的吸光度变化,通过6种不同底物的筛选比较及反应条件的优化,并对136种中药提取物进行筛选评价。结果 最佳体系为波长489 nm、底物质量浓度0.1 mg/mL、酶浓度400 U/mL、温度30℃、反应时间300 s。136种中药水提物中有12种中药水提物对AmpC酶的抑制率大于70%,其中桑寄生、赤芍、红景天、千斤拔、石见穿5种中药水提物的抑制率大于80%;添加桑寄生可明显提高青霉素的协同抗菌效应,最低抑菌浓度（minimal inhibit concentration,MIC）由2 mg/mL降低至0.8 mg/mL。结论 建立的AmpC酶抑制剂筛选方法快速、高效、可信度高,中药是抗耐药菌感染治疗的重要资源。     

金铁锁β-香树素合酶cDNA的克隆、原核表达和功能鉴定

目的 克隆金铁锁Psammosilene tunicoides三萜皂苷生物合成途径中的关建酶基因——β-香树素合酶全长cDNA,并对其进行表达和分析,为研究其在三萜皂苷合成途径的关键作用及次生代谢产物工程技术在金铁锁上的应用奠定基础。方法 应用RT-PCR和RACE等方法,克隆金铁锁β-香树素合成酶基因全长,将目的片段转化大肠杆菌表达菌株BL21中,IPTG诱导表达,以2,3-氧化鲨烯为底物进行体外酶促,采用HPLC法鉴定产物。结果 克隆得到金铁锁β-香树素合成酶基因,全长2 882 bp,ORF长2 284 bp,编码760个氨基酸。表达产物具有催化2,3-氧化鲨烯生成β-香树素合酶的活性。结论 克隆所得的全长cDNA通过大肠杆菌表达β-香树素合酶,并能催化2,3-氧化鲨烯生成β-香树素,为金铁锁次生代谢工程研究提供了重要的基础。     

薏苡SRAP反应体系的优化

目的 建立稳定可靠的SRAP分子标记反应体系，为进一步研究薏苡种质资源的分子鉴定提供依据。方法 采用改进的SDS法提取薏苡种子胚基因组DNA，并采用单因素试验分析Mg²⁺浓度、dNTP浓度、BSA浓度、模板DNA用量、引物浓度、Taq DNA聚合酶用量等6个因素对薏苡相关序列扩增多态性(SRAP)扩增结果的影响。结果 建立了薏苡最适的SRAP反应体系：10 μL PCR反应体系中，含1×Taq酶配套缓冲液(10 mmol/L Tris·HCl，pH9.0，50 mmol/L KCl，0.1%Triton X-100)，1.5 mmol/L Mg²⁺，0.15 mmol/L dNTP，10 ng模板DNA，10 pmol引物，0.5 U Taq酶。结论 所建立的薏苡SRAP反应体系具有标记位点清晰、反应系统稳定等特点，为薏苡种质资源的分子鉴定提供了良好的基础。     

星点设计优化山药多糖冷浸提取工艺

目的:采用星点设计-响应面法对山药多糖冷水提取工艺进行优化。方法:在单因素实验基础上,根据星点实验设计(CCD)原理采用3因素5水平的响应面分析法(RSM),以多糖提取率为响应值,对山药多糖冷水浸提提取工艺进行研究。结果:在分析各个因素的显著性和交互作用后,得出山药多糖冷水浸提最优工艺参数为液料比10.30∶1,提取时间12.26 h,提取次数3次。结论:在最优工艺条件下,山药多糖的实际提取率可达2.885%。     

星点设计-效应面法优化双嘧达莫肺靶向脂质体

 目的确定双嘧达莫(DIP)肺靶向脂质体的较优处方。方法以薄膜蒸发法制备DIP肺靶向脂质体,采用星点设计-效应面法优化处方,以药/磷脂(%)、胆固醇/磷脂(%)和DIP投药量(mg)为自变量,包封率(%)、收率(%)、粒径(μm)与5μm的差值和径距为因变量,计算总评归一值,分别进行多元线性和非线性拟合,用效应面法预测较佳处方。结果总评归一值的多元非线性拟合方程优于多元线性回归方程,根据效应面得到较佳处方范围。以优化处方制备样品,各指标实测值与预测值偏差较小。结论星点设计-效应面法可以准确快速地优化DIP肺靶向脂质体的处方。     

中药防敏润肌唇膏对皮肤刺激性和致敏性研究

[目的]考察中药防敏润肌唇膏对皮肤的刺激及致敏作用,并进行安全性评价。[方法]用皮肤刺激及致敏反应评分表评价中药防敏润肌唇膏对皮肤的刺激、致敏反应。[结果]中药防敏润肌唇膏对家兔正常皮肤及破损皮肤的平均刺激分值均﹤0.50分,即家兔单次及多次性涂用此唇膏后完整皮肤及破损皮肤的涂药部位均未见异常改变。在致敏性实验中,中药防敏润肌唇膏对豚鼠未见致敏作用,而阳性药2,4-二硝基氯苯见有极强致敏性。[结论]中药防敏润肌唇膏对家兔皮肤无刺激性,对豚鼠无致敏性,是一种安全性较好的外用制剂。     

酶促合成3种半乳糖-胆固醇配体及其与肝靶向性的构效关系研究

目的酶促法构建3种不同类型的半乳糖-胆固醇配体修饰的阿霉素(doxorubicin,DOX)脂质体,研究其在小鼠体内的药动学及组织分布特征。方法利用脂肪酶在非水相中合成了3种不同结构的半乳糖-胆固醇配体:CHS-C8-Gal NAc、CHS-C8-GAL、CHS-C8-LA;利用MS、NMR鉴定产物结构;采用薄膜分散-梯度载药法制备DOX脂质体并对其理化性质进行表征;以小鼠为实验对象,采用尾iv给药,通过比较3种配体修饰的DOX脂质体在小鼠体内的药动学与组织分布特征来阐明配体中半乳糖基的结构与去唾液酸糖蛋白受体之间的构效关系。结果产物经MS、NMR鉴定均为目标产物,产率均90%;采用薄膜分散-梯度载药法制备的DOX脂质体粒径90 nm,PDI0.1,包封率99%,24 h渗漏率5%,Zeta电位接近于0;3种配体分子对肝脏亲和力大小依次为CHS-C8-Gal NAcCHS-C8-LACHS-C8-Gal;肝脏对CHS-C8-Gal NAc修饰的脂质体的摄取几乎完全被预注射的asialofetuin所抑制(P0.01),而对CHS-C8-Gal及CHS-C8-LA修饰的脂质体无显著的抑制效果(P0.05)。结论含有N-乙酰半乳糖胺基(N-acetylgalactosamine,Gal NAc)为末端的配体分子能被去唾液酸糖蛋白受体高效识别,而含有D-半乳糖基(D-galactose,Gal)或乳糖醇基(lactitol,LA)为末端的配体分子易被肝枯否细胞上的半乳糖粒子受体所竞争性结合。     

响应面法优化一贯煎中多糖的提取工艺

目的:利用响应面法对一贯煎总多糖的提取工艺进行优化。方法:在分析单因素的基础上,以一贯煎多糖得率为响应值,采用3因素3水平的响应面法(RSM)对其提取工艺进行研究。结果:最佳工艺参数为液固比11∶1,85%乙醇提取2次,每次1.8 h。结论:响应面法可在连续范围内进行分析,具有实验周期短、精密度高的优点。优化结果可为制剂生产提供参考依据。     

响应面法优化车前子油的提取工艺及抗氧化活性研究

目的:优化超临界CO2萃取车前子油的最佳工艺条件,研究车前子油中脂肪酸的组成成分和含量以及其抗氧化活性.方法:在单因素实验基础上,利用响应面法,以萃取率为响应值,建立数学模型,获得最佳工艺;利用GC-MS分析车前子油中脂肪酸组成及含量,并采用自由基清除能力体系初步评价车前子油的抗氧化活性.结果:通过二次回归模型响应面分析得出最佳超临界CO2萃取车前子油最佳工艺条件是萃取温度70℃,萃取压力30 MPa,萃取时间120 min,CO2流速30 L·h-1,在此最佳工艺条件下车前子油萃取率为35.07％,理论值为35.91％,与理论值相对误差小于5％.经GC-MS分析得车前子油主要成分为亚麻酸、亚油酸、硬脂酸和棕榈酸,其中不饱和脂肪酸含量超过88％.抗氧化活性研究中,由DPPH+和ABTS+自由基清除实验得IC50分别为1.13,3.57g·L-1.结论:由响应面法优化得到的车前子的提取工艺方便可行,得到的车前子油具有较强的抗氧化活性,值得进一步开发应用.     

响应面法优化淫羊藿黄酮磷脂复合物制备工艺

目的:确定淫羊藿黄酮磷脂复合物制备最佳工艺.方法:采用溶剂挥发法制备淫羊藿黄酮磷脂复合物,以药物与磷脂的结合率为评估标准,采用Plackett-Burman设计对淫羊藿黄酮磷脂复合物制备工艺影响因素的重要性进行考察,用Box-Behnken对重要影响因素的水平进行优化,并且进行多元线性回归与二项式方程拟合,用效应面法预测最佳工艺.结果:投料比例、反应时间与反应温度对磷脂复合物形成影响具有显著性意义;二项式方程拟合度高,预测性好,复相关系数r=0.988,效应面法优选出的最佳工艺为磷脂与淫羊藿总黄酮提取物以3.6∶1投料,反应温度38℃,反应时间2.4h,主药浓度10g·L-1,最佳工艺试验验证结果与二项式拟合方程预测结果相差＜2％.结论:应用响应面法优化得到的淫羊藿黄酮磷脂复合物最佳制备工艺稳定可行,可用于工业生产.     

星点设计-效应面法优选南五味子的提取工艺

目的:采用星点设计-效应面法优化南五味子的提取工艺。方法:以溶剂浓度,溶剂倍数及提取时间为自变量,五味子甲素提取率为因变量对自变量各水平进行多元线性回归和二项式拟合,用效应面法选择最佳提取工艺,进行预测分析,并将预测值与实验值进行比较。结果:二项式拟合复相关系数较高,r为0.9565,最佳提取工艺为62%的乙醇溶液回流提取2次,体积倍数为11.20倍,提取时间为3.00h。提取率预测值与实验值偏差为0.22%。结论:试验值与预测值吻合度高,星点设计-效应面法优化南五味子的提取工艺不仅方法简便,且预测性良好。     

应用Box-Behnken实验设计优化水飞蓟素固体脂质纳米粒处方研究

目的应用Box-Behnken实验设计,优化水飞蓟素固体脂质纳米粒的最佳处方。方法采用三因素三水平Box-Behnken实验设计,以水飞蓟素为模型药物,采用乳化蒸发-低温固化法制备固体脂质纳米粒。利用效应曲面法对影响固体脂质纳米粒包封率、载药量和粒径的主要因素进行考察,以包封率、载药量和粒径为响应值,建立相应的二项式数学模型优化处方。结果最优处方为固体脂质纳米粒中脂质单硬脂酸甘油酯量为5.05%,7.25%Poloxmer 188作为乳化剂,药物的量为15%。结论采用Box-Behnken实验设计可用于水飞蓟素固体脂质纳米粒的处方优化筛选。     

响应面法优化锁阳总黄酮超声提取工艺

目的：利用响应面分析法优化锁阳黄酮超声提取工艺.方法：在单因素实验基础上,根据Box-Benhnken中心组合设计原理,以乙醇浓度、料液比、提取温度、超声提取时间为自变量,总黄酮提取率为响应值,设计4因素3水平响应面分析试验,来确定锁阳总黄酮最佳超声提取工艺.结果：锁阳总黄酮最佳提取工艺为：超声功率为600W、提取2次条件下,以乙醇浓度为70％;料液比1：30;提取温度77℃;超声提取时间62min,锁阳总黄酮提取率达28.815％.结论：响应面分析所得二次模型方程能较好地预测实验结果,实验设计和响应面法优化得到的提取工艺参数准确可靠,该研究可为锁阳资源的合理开发和质量控制提供理论依据和数据参考.