橘核遗传多样性与柠檬苦素类化合物含量的相关性分析

目的研究橘核种质资源遗传多样性与柠檬苦素类化合物含量的相关性,为筛选橘核的主要基原品种提供参考。方法以四川不同产地、不同品种的35份橘核样品为材料,首先利用NTSYSpc2.10e软件对ISSR标记结果进行多态性分析;再采用UPLC法测定橘核样品中柠檬苦素类化合物(柠檬苦素、诺米林、黄柏酮)的含量;最后通过SPSS 21.0软件对二者数据进行相关性分析。结果筛选出的33条ISSR引物共扩增出240条清晰可辨DNA带,遗传相似系数变化范围为0.72~0.92;其中椪柑与大红袍亲缘关系最近,且柠檬苦素类化合物含量类似,而其余品种橘核与大红袍亲缘关系较远,柠檬苦素类化合物含量差异较大。结论与大红袍亲缘关系越接近的品种其类柠檬苦素含量越高,可考虑将椪柑作为橘核的主要基原品种。     

不同橘核炮制品中柠檬苦素和诺米林的测定

目的 考察橘核生品及3种炮制品(橘核麸炒,清炒,盐炙)中柠檬苦素、诺米林的量,探讨炮制对中药橘核成分的影响.方法 取橘核生品及3种炮制品,采用冷凝回流的方法提取试样,以HPLC法测定其中的柠檬苦素、诺米林.色谱柱为Diamonsil Ct8柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-水(65:35),检测波长210 nm,体积流量1.0 mL/min,柱温室温.结果 柠檬苦素在0.0494～0.4940 mg/mL,诺米林在0.0511～1.0220 mg/mL范围内线性关系良好(R2=0.999 3,R2=0.9974),平均同收率分别为99.92％和100.10％,RSD值分别为1.27％和1.18％;橘核经炮制后两种有效成分有一定差异.结论 所建立的HPLC测定方法准确、可靠,为橘核质量评价和标准制定提供了一定的科学依据.     

橘核柠檬苦素类化合物积累与功能基因表达的灰色关联度分析

目的研究橘核传统药用品种大红袍Citrus reticulata‘Dahongpao’中柠檬苦素类化合物生物合成机制与转运规律。方法利用UPLC法测定橘种子生长发育过程中茎、叶、果皮及种子中的柠檬苦素、诺米林、黄柏酮等柠檬苦素类化合物的量,采用灰色关联度分析方法,与克隆获得的角鲨烯合成酶基因(ss)、角鲨烯环氧酶基因(se)、葡萄糖基转移酶基因(lgt)表达量进行关联度分析。结果不同器官中柠檬苦素类化合物在种子中得到最大积累;不同器官中柠檬苦素类化合物的积累与ss、se、lgt基因表达均有较大的关联,但在种子中柠檬苦素的积累与ss、se、lgt基因表达最密切,其中ss基因表达对柠檬苦素、诺米林、黄柏酮的积累贡献最大。结论本实验为柠檬苦素类化合物合成机制与转运规律提供可靠、科学的依据。     

柑橘不同用药部位中橙皮苷、柠檬苦素及诺米林含量与其体外抗氧化和抗乳腺癌活性相关性研究

  目的：考察柑橘不同用药部位——橘核、橘络和陈皮中橙皮苷、柠檬苦素及诺米林的含量与其抗氧化和抗乳腺癌活性的相关性  方法：通过HPLC法检测来自不同产地的橘核、橘络和陈皮药材中橙皮苷、柠檬苦素及诺米林的含量,结合体外DPPH和FRAP抗氧化实验方法以及MTT法研究3种成分的含量差异对药材抗氧化活性和抑制乳腺癌细胞MCF-7增殖作用的影响  结果：橙皮苷含量:陈皮>橘络>橘核;柠檬苦素类物质含量:橘核>橘络>陈皮;体外抗氧化活性:陈皮>橘络>橘核;抑制乳腺癌细胞增殖作用:橘核>橘络>陈皮  结论：橘核、橘络和陈皮的抗氧化活性强弱主要与橙皮苷含量相关,而三者的抗乳腺癌活性强弱主要与其柠檬苦素和诺米林含量相关。     

多指标正交试验法优选橘核的盐制工艺

目的采用多指标正交试验法优选盐制橘核炮制工艺的技术参数。方法以醇溶性浸出物和柠檬苦素、诺米林的量为评价指标,对炮制温度、闷润时间进行考察,采用正交试验综合评分法优选工艺。结果选择的流动相为乙腈-水(62∶38)时,基线较稳定,峰形较好。炮制温度对试验结果有显著影响,闷润时间无明显影响。结论优选的盐制工艺为取净橘核,加入食盐水(水与盐的比例10∶1)拌匀,闷润30 min,在100℃下炒至微黄色(2 kg盐/100kg橘核)。     

柠檬苦素类似物对细胞色素P450的抑制作用

近年来,食品中的成分与药物间的相互作用,特别是与细胞色素P450(CYP)的相互作用已成为临床关注的问题。此次探讨了柠檬苦素类似物对CYP活性的影响。 方法:受试物为柠檬苦素、柠檬苦素类似物、黄柏酮、诺米林(Nomilin,三萜苦味素)及其7-还原体(7a、7b-OH体)、柠檬苦素及黄柏酮的脱氧体共11种。使用未处置、诱导剂处置大鼠肝微粒体及人CYP3A4表达微粒体。酶活性是以乙氧基及pentoxyresorfin O-脱烷基化、p-硝基苯酚2-羟化及睾丸酮6b-羟化分别作为CYP1A1、CYP2B1、CYP2E1及CYP3A的指标,探讨柠檬苦素类似物(0.5～500mM)对这些活…     

橘核UPLC指纹图谱研究

目的:建立橘核UPLC指纹图谱,为其质量控制提供依据。方法:采用Ultimate~? AQ-C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm);以乙腈(A)-水(B)为流动相,梯度洗脱;流速:0.21 mL/min;检测波长:283 nm(0～20 min)、210 nm(20～50 min);柱温:30℃。结果:建立了橘核UPLC指纹图谱,确定了17个共有峰,指认了5个成分,15批橘核样品指纹图谱与对照图谱的相似度均大于0.90,所有样品可聚为2类,并确定黄柏酮、柠檬苦素、诺米林3个组间差异较大的成分。结论:该方法简便、快速,可用于橘核的质量评价。     

橘核中柠檬苦素类物质纯化工艺

目的:优选橘核中柠檬苦素类物质的大孔树脂纯化工艺。方法:通过静态吸附-洗脱试验综合考察16种不同厂家和极性大孔树脂对橘核中柠檬苦素类物质的纯化效果,筛选最佳树脂型号。通过单因素试验考察HPD-722型大孔树脂对柠檬苦素类物质的动态吸附-洗脱条件,包括清洗剂用量、上样液质量浓度、洗脱剂浓度及用量等。结果:HPD-722型大孔吸附树脂对柠檬苦素类物质的纯化效果最佳;最佳纯化工艺为上样液质量浓度在3.503 3~5.403 4 g·L-1,上样流速1~2 BV·h-1,样品溶液pH 6,水洗用量1 BV,80%乙醇6 BV为洗脱剂,洗脱流速2 BV·h-1,洗脱液pH 7;洗脱液中柠檬苦素类物质纯度82.82%,其中柠檬苦素22.53%,诺米林45.90%。结论:采用HPD-722型大孔吸附树脂纯化橘核中柠檬苦素类物质的工艺可行性较高,可有效提高柠檬苦素类物质纯度。     

橘核的研究进展

橘核为我国传统中药,通过查阅历代本草著作等相关文献资料,笔者对橘核的炮制历史沿革、现代炮制规范记载、性味功效、炮制及服用方法、炮制工艺、质量分析、药理作用进行了梳理与总结。结果发现历代橘核的炮制方法主要有清炒、酒制、酒焙等,现代常用的盐水炙法是在古代青盐拌炒的基础上发展起来的,全国及各省市炮制规范大多数收载了橘核和盐橘核。历代所载性味功效与现代基本相符,其味苦性平,归肝、肾经,具有理气、散结、止痛的功效;橘核含有柠檬苦素类、脂肪酸类、蛋白质和矿物元素等成分,现代常用高效液相色谱法(HPLC),气相色谱-质谱联用法(GC-MS)和薄层色谱法(TLC)等对橘核进行检测与分析。橘核有抗肿瘤、抗炎镇痛、抗菌等活性,炮制会使其化学成分的含量发生一定程度的改变。总之,目前关于橘核的研究还不够深入,有必要进一步分析橘核及其炮制品的药效物质基础,探究炮制前后化学成分的变化规律及其与药效活性的相互关系,以阐明炮制机制,为其规范化炮制、质量控制及临床合理用药提供科学依据。     

椪柑柠檬苦素-UDP-葡萄糖基转移酶基因的克隆、分析及表达

目的克隆中药橘核主要来源品种椪柑Citrus reticulata的柠檬苦素-UDP-葡萄糖基转移酶(limonoid-UDP-glucosyl transferase gene,LGT)基因,并进行生物信息学及表达分析为橘核有效成分合成及调控机制研究提供基础。方法克隆获得LGT序列,通过生物信息学对该基因蛋白的特征进行分析,构建LGT与相关物种LGT的系统进化树,利用RT-PCR分析橘皮、橘肉以及橘核中LGT基因表达量,并进行分析和比较。结果测序所得椪柑LGT序列全长为1 530 bp,具有1 509 bp的完整开放阅读框,编码502个氨基酸。并对其蛋白二级、三级结构进行了分析和预测。基因表达分析结果发现椪柑LGT基因在橘核中表达量最低,其次为橘皮,表达量最高为橘肉。结论成功克隆、分析并表达了椪柑LGT基因,为橘核中柠檬苦素类物质合成及调控机制研究提供基础。     

Decoctions from Citrus reticulata Blanco seeds protect the uroepithelium against Escherichia coli invasion

Ethnopharmacological relevance

Traditional usage suggests Citrus reticulata Blanco seeds have beneficial effects against infection. The purpose of this study was to investigate the effect of Citrus reticulata on the uroepithelium and to determine the mechanisms responsible for protection against urinary tract infection (UTI).

Materials and methods

Human bladder cell lines T24 and 5637 were employed in a cell culture infection model to determine the effects of Citrus reticulata treatment on Escherichia coli adherence and invasion of the uroepithelium. β1 integrin and caveolin-1 mRNA expression was assessed using RT real-time PCR. β1 integrin protein expression was confirmed by Western Blot. The effect of Citrus reticulata on bacteria was investigated using antibacterial sensitivity, yeast agglutination and biofilm assays.

Results

Citrus reticulata treatment decreased β1 integrin expression and reduced bacterial invasion while adhesion of uroepithelial cells was not affected. Caveolin-1 expression was not influenced either and Citrus reticulata did neither exhibit any direct antimicrobial effect nor interfered with type 1 fimbriae binding.

Conclusions

Our results show that Citrus reticulata has a protective effect on the uroepithelium as seen by reduced bacterial invasion of uroepithelial cells. These properties suggest that seeds from Citrus reticulata may have therapeutic potential in preventing UTI.     

中药枳壳中一个新的色原烷苷衍生物

目的:研究中药枳壳Citrus aurantium甲醇提取物的化学成分.方法:中药枳壳甲醇提取物的乙酸乙酯部位经硅胶、RP-18和HPLC等色谱技术分离纯化,根据理化常数和波谱数据鉴定化合物的结构.结果:从中药枳壳中分离得到3个化合物,分别鉴定为citrauranoside(1),limonexin(2),柠檬苦素(3).结论:化合物1为一个新的色原烷苷衍生物.     

榼藤子生品与炮制品HPLC指纹图谱研究

目的:建立榼藤子生、炮制品HPLC指纹图谱的评价方法,分析各样品指纹图谱的变化。方法:采用HPLC-UV分别对榼藤子生品和炮制品的指纹图谱进行研究,用HPLC-ESI-MS对其生品共有峰进行鉴定。结果:标示出生品16个共有峰,炮制品21个共有峰,应用HPLC-MS和对照品保留时间的对应初步鉴定了其中9个共有峰,主要为榼藤子三萜皂苷类和其他糖苷类成分的吸收峰。结论:榼藤子生品炮制后,60%甲醇提取液中部分化学成分含量有不同程度的下降或上升,指纹图谱的主峰数目也有变化,说明该法可以较全面地反映榼藤子炮制前后化学成分的差异,用于控制生品和炮制品的内在质量。     

基于超高效液相-飞行时间质谱技术的 中药女贞子代谢组学研究

目的 :建立中药女贞子生品及不同工艺炮制品的代谢组学分析方法,比较研究其指纹图谱差异,探讨女贞子炮制机制。 方法 :采用超高效液相-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)及多元统计分析技术对生品及不同工艺炮制品进行指纹图谱差异比较分析。 结果 :生品和不同炮制品指纹图谱存在明显差异,且鉴定了一个产生差异的化学成分标志物- ligustaloside B,其在女贞子炮制品中的含量高于女贞子生品。 结论 :UPLC-Q-TOF-MS结合多元统计分析方法可对女贞子药材及其饮片进行质量评价,同时为炮制机制提供了一定依据。     

桂郁金茎叶、生品与炮制品挥发油的比较分析

目的:分析桂郁金茎叶、生品与炮制品的挥发油化学成分。方法:用水蒸气蒸馏法提取挥发油后采用气相色谱-质谱联用法(GC-MS)分析。结果:从桂郁金茎叶中分离得到57个化学成分,鉴定了37个;桂郁金生品中分离出45个化学成分,鉴定了22个;从桂郁金炮制品中分离出44个化学成分,鉴定了32个。结论:3个样品挥发油的成分及含量均存在较大差异。     

马兜铃蜜制前后挥发油GC-MS分析

目的:采用GC-MS方法对马兜铃蜜制前后挥发油进行化学成分的定性定量分析。方法:采用水蒸气蒸馏法从马兜铃饮片中提取挥发油,用峰面积归一化法测定各组分的相对百分含量,并用GC-MS对其化学成分进行鉴定。结果:从马兜铃生品及蜜制品中共鉴定出133个化合物,占挥发油总成分的90%以上。马兜铃蜜制后有新化合物产生,并且总化合物数量减少,同时有部分化合物经炮制后含量发生变化。结论:此方法稳定可靠,重复性好,GC-MS联用适用于马兜铃挥发油的化学成分分析,为马兜铃饮片质量评价提供了一定的科学依据。     

Modulating effect of Leptadenia reticulata (Retz) Wight & arn against chromate (VI)-induced immunosuppression and oxidative stress on mouse splenic lymphocytes and bone marrow derived macrophages

Ethnopharmacological relevance

Leptadenia reticulata (Retz) Wight & arn is mentioned in the ancient ayurvedic literature as an immune booster and rejuvenator.

Aims of the study

To investigate, the effects of different forms of the extract of Leptadenia reticulata [Aqueous extract (JAE), Padavashesha kashaya (JPK) and Tarpana kashaya (JTK)] to alleviate the experimental immunosuppression induced by the immunotoxicant chromate (VI) in vitro.

Materials and methods

Standard cell proliferation and cytotoxicity assays like MTT assay, trypan blue dye exclusion test, neutral red dye uptake test, NBT reduction test, determination of percentage cell survival and estimation of markers of oxidative stress were performed in the study. The study was conducted on primary cultures of mouse splenic lymphocytes and bone marrow derived macrophages.

Results and Conclusions

Treatment with all the three forms of the extract used in the study offered protection against chromate (VI)-induced immunosuppression and the overall protective effect was found to be superior in the case of the aqueous extract of Leptadenia reticulata (JAE). These results confirm that Leptadenia reticulata acts as a modulator and alleviates the immunosuppressive conditions induced by chromate (VI).     

Chemical composition and anti-inflammatory activity of copaiba oils from Copaifera cearensis Huber ex Ducke, Copaifera reticulata Ducke and Copaifera multijuga Hayne—A comparative study

Copaiba oil is an oleoresin obtained from the Copaifera L. genus (Leguminoseae) commonly featured in anti-inflammatory recipe prescribed by Amazonian traditional medical practitioners and featured in Europe and North America pharmacopeias of the past. Chemical and anti-inflammatory activity investigations from the copaiba oils obtained from Copaifera multijuga Hayne, Copaifera cearensis Huber ex Ducke and Copaifera reticulata Ducke species have proved that, although similar, these oleoresins possess varied composition and anti-inflammatory activity. Chromatographic studies showed that the main compound among sesquiterpenes was β-caryophyllene (57.5, 19.7 and 40.9%, respectively), followed by α-humulene, α-copaene, α-bergamotene, δ-cadinene, with different amounts in each oleoresin. Among the diterpenes, copalic acid was the main component from Copaifera multijuga Hayne (6.2%) and was found in all the oleoresins studied. In Copaifera cearensis Huber ex Ducke, clorechinic (11.3%) and hardwickiic acids (6.2%) were the major diterpenes while kaurenoic (3.9%) and kolavenic acids (3.4%) predominated in Copaifera reticulata Ducke. The pharmacologic effects of the three oleoresins were evaluated in vitro by measuring the NO production by murine macrophages and in vivo using the zymosan induced pleurisy model in mice. The Copaiba Oil from Copaifera multijuga Hayne (100 mg/kg) was the most potent, inhibiting both NO production and the pleurisy induced by zymosan. The oleoresins from Copaifera cearensis Huber ex Ducke and Copaifera reticulata Ducke were also able to inhibit NO production and the pleurisy but with less intensity.     

盐补骨脂标准汤剂质量评价体系的建立

目的建立盐补骨脂标准汤剂质量评价体系。方法收集了15批合格的补骨脂药材,炮制成符合《中国药典》2015年版规定的盐补骨脂饮片,制备盐补骨脂标准汤剂冻干粉,建立HPLC指纹图谱,对共有色谱峰进行指认,并结合飞行时间质谱确定其主要化学组成。结果苯并呋喃苷类和呋喃香豆素类为盐补骨脂标准汤剂的主要成分。测定15批标准汤剂的出膏率为16.31%~20.59%,指标成分补骨脂素、异补骨脂素总量为1.17%~1.50%,转移率为13.55%~23.57%,且指纹图谱相似度均大于0.9。结论建立了稳定、可靠的盐补骨脂标准汤剂全面质量评价方法,为盐补骨脂配方颗粒及相关制剂的质量控制提供参考。