津血源颗粒上调干燥综合征模型鼠唾液腺水通道蛋白5表达的实验研究

目的:探讨津血源颗粒对干燥综合征(SS)模型大鼠唾液腺中水通道蛋白5(AQP5)表达的影响。方法:用免疫组化法分析SS大鼠唾液腺AQP5表达特点。结果:正常组细胞膜上存在较多AQP5蛋白;佐剂组细胞膜上有表达,但数量较正常组明显减少;模型组腺泡萎缩,残存腺泡顶膜表达明显减少甚至消失,与正常组比较,有显著性差异;津血源颗粒组大部分细胞膜有AQP5蛋白表达,较模型组表达数量明显增多,且分布均匀。结论:津血源颗粒可明显增强SS模型鼠唾液腺中AQP5的表达。     

活血解毒方对干燥综合征小鼠颌下腺AQP5表达的影响

目的:探讨活血解毒方对干燥综合征(SS)模型小鼠颌下腺AQP5表达的影响。方法:以BABL/C小鼠为正常组,选取NOD小鼠为SS模型并随机分为模型组、活血解毒方组(HXJD)和白芍总苷胶囊组(TGPC),给药后观察各组小鼠颌下腺形态学和分泌功能的改变,并采用SABC法检测各组小鼠颌下腺AQP5表达水平的变化。结果:药物干预8周后,模型组较正常组表达AQP5明显降低;与模型组比较,TGPC组和HXJD组AQP5表达均显著升高;TGPC组和HXJD组之间AQP5表达无明显差异。结论:活血解毒方可改善SS模型鼠颌下腺腺泡的分泌功能,提高其颌下腺指数,增加SS模型鼠的唾液分泌量;其作用机理与上调AQP5的表达水平有关。     

增液汤干预干燥综合征模型鼠AQP1/AQP8的表达规律研究

目的：观察增液汤干预下干燥综合征（Sjogren＇s Syndrome,SS）模型小鼠肺及结肠组织中水通道蛋白AQP1（aquaporin1）、AQP8（aquaporin8）的表达规律。方法：选用BALB/c小鼠,各组10只,免疫诱导法建立干燥综合征小鼠模型,产生SS特异性临床表现和病理改变,采用免疫组化和Western blot蛋白质印迹法观察增液汤对SS模型小鼠肺及结肠组织中AQP1/AQP8表达的影响。结果：增液汤可以增强肺及结肠组织中AQP1的蛋白表达（P〈0.01）,对AQP8无影响。结论：AQP1在干燥综合征模型鼠多组织中的表达下调,可能是干燥综合征水液代谢障碍,多脏器损伤的机制之一;增液汤恢复机体阴液,起到＂增水＂功效可能与上调AQP1蛋白表达有关。     

增液汤对SS模型鼠颌下腺Th1样细胞因子的影响

目的:观察增液汤对SS模型鼠颌下腺Th细胞亚型的影响。方法:ELISA法测定Th1样细胞因子IL-2、IFN-γ及Th2样细胞因子IL-4、IL-6的表达量。结果:模型组小鼠颌下腺中IL-2的含量明显高于空白组,有统计学意义(P0.01);增液汤组小鼠颌下腺中IL-2的含量低于模型组(P0.05),干扰素组与模型组比较差异显著(P0.01)。模型组、佐剂组小鼠颌下腺中IFN-γ的含量明显高于正常组,有显著性差异(P0.01);增液汤组、干扰素组IFN-γ含量与模型组相比明显降低,差异明显(P0.01)。各组之间IL-4的含量无明显差异。模型组比空白对照组IL-6的含量明显增高,二者相比有显著性差异(P0.01),增液汤组与模型组相比含量下降较多,干扰素组下降趋势也较为明显,均有显著性差异(P0.01)。结论:增液汤可能通过抑制细胞因子IL-6、IFN-γmRNA的基因转录抑制细胞因子蛋白合成及分泌,间接地抑制了Th细胞的分化增殖,从而缓解SS小鼠颌下腺淋巴细胞浸润,减轻SS症状。     

丹芪颗粒干预干燥综合征模型大鼠颌下腺水通道蛋白-5的表达研究

目的: 以干燥综合征(SS)模型大鼠颌下腺水通道蛋白-5(AQP5)的表达为靶点,探讨丹芪颗粒对SS的作用机制。 方法: 自身同种鼠抗原合并百白破疫苗加强免疫法免疫模型动物;离体颌下腺灌流法测试中药丹参、黄芪对唾液腺刺激程度;用Western blot分析SS大鼠颌下腺AQP5的表达。 结果: 免疫动物颌下腺出现类似SS的病理改变,存在大量淋巴细胞浸润,提示免疫造模成功。颌下腺中药灌流提示丹参、黄芪有不同程度促进唾液腺分泌的作用。Western blot 检测显示实验各组均出现相对分子质量为42×10³的条带。空白对照组AQP5表达数值正常1.35±0.13,与空白对照组比较,造模生理盐水组AQP5表达数值1.03±0.08明显减少(P<0.05)。造模丹芪高、低剂量组AQP5表达数值较造模生理盐水组明显增强1.31±0.15,1.27±0.10,P<0.05。 结论: 离体颌下腺中药灌流提示丹参有轻度对唾液腺直接促进作用,黄芪也有类似的作用,但两者促进唾液分泌的图形是不同的。丹芪颗粒可能通过增强颌下腺水分子通道的释放,上调AQP5的表达,从而改善唾液腺分泌功能、增加唾液流量,缓解干燥综合征口腔干燥的症状。     

化湿润燥方对干燥综合征模型小鼠颌下腺结构和功能的影响

目的：探索化湿润燥方对干燥综合征(SS)模型NOD/Ltj小鼠颌下腺组织病理损伤和功能的影响,以及对颌下腺细胞水通道蛋白5(AQP5)表达的调节作用。方法：以NOD/Ltj小鼠构建SS动物模型,选取9周龄雌性NOD/Ltj小鼠随机分为模型组、化湿润燥方组(7.15 g·kg^-1·d^-1)、硫酸羟氯喹(HCQ)组(1.30 g·kg^-1·d^-1),选取9周龄雌性BALB/c小鼠为正常组,每组6只。给药8周,记录各组小鼠饮水量、唾液流率,观察各组小鼠颌下腺病理染色结果并进行评分,采用免疫组化法(IHC)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测AQP5蛋白的表达水平。结果：与正常组比较,模型组小鼠饮水量明显增加(P<0.05)、唾液流率明显减低(P<0.05)。与模型组比较,化湿润燥方组小鼠饮水量明显降低(P<0.05)、唾液流率明显增加(P<0.05);HCQ组小鼠唾液流率明显增加(P<0.05)。颌下腺组织病理结果显示,与正常组比较,模型组小鼠病理评分、淋巴细胞浸...     

麦冬多糖对NOD小鼠颌下腺AQP5和VIP mRNA表达的影响

目的观察麦冬多糖对NOD小鼠颌下腺的保护作用。方法给予NOD小鼠高中低剂量麦多冬多糖灌胃11周,观察麦冬多糖对NOD小鼠颌下腺中水通道蛋白5(AQP5)及血管活性肠肽mRNA(VIPmRNA)表达的影响。结果麦冬多糖高中低剂量均可降低颌下腺淋巴细胞浸润度,上调颌下腺AQP5和VIP mRNA的表达。结论麦冬多糖对NOD小鼠颌下腺具有保护作用。     

增液汤对干燥综合征模型小鼠颌下腺Th1样细胞因子IL-2、IFN-γ及Th2样细胞因子IL-4、IL-6的影响

目的：研究增液汤对Th细胞亚型在干燥综合征（SS）小鼠颌下腺表达的影响，探讨增液汤对SS的治疗机理。方法：采用RT—PCR法对SS小鼠颌下腺中Th细胞因子的mRNA表达进行测定。结果：增液汤对IL-6、IFN—γmRNA的表达低于模型组，差异显著，有统计学意义（P〈0．01）。结论：增液汤可能通过抑制细胞因子IL-6、IFN—γmRNA的基因转录抑制细胞因子蛋白合成及分泌，间接地抑制了Th细胞的分化增殖．从而缓解SS小鼠颌下腺淋巴细胞浸润。     

清燥布津法对干燥综合征模型小鼠颌下腺AQP-5表达的影响

目的:建立干燥综合征(SS)动物模型,观察清燥布津法对SS小鼠模型颌下腺水通道蛋白-5(AQP-5)表达的影响。方法:雌性BALB/c小鼠颌下腺匀浆离心后的上清液加弗氏完全佐剂(CFA)制成乳化免疫抗原,采用多点注射法免疫同系鼠,同时注射白百破疫苗建立SS小鼠模型。以环戊硫酮为对照组,观察中药清燥布津合剂对SS小鼠模型唾液分泌、病理及颌下腺AQP-5(免疫组化法)表达的影响。结果:模型组与正常对照组比较,小鼠的体质量、唾液流率下降,饮水量增加。颌下腺组织中淋巴细胞重度浸润,腺体破坏。免疫组化方法显示:AQP-5在腺体的分布和表达减少或消失。中药高剂量组与模型组比较,小鼠的体质量、唾液流率增加,饮水量减少。颌下腺组织中只有淋巴细胞的轻度浸润。腺体的结构正常,无破坏。AQP-5在腺泡、闰管、导管等处均有较强表达。中药高剂量组疗效优于其他治疗组。结论:清燥布津法有明显抑制腺体破坏,改善唾液分泌功能的作用,其作用机制可能与抑制免疫炎症、促进AQP-5在小鼠颌下腺的表达有关。     

干燥综合征模型小鼠涎腺AQP1、AQP5基因表达及解毒化瘀中药治疗作用研究

目的：研究水分子通道蛋白1（AQP1）及水分子通道蛋白5（AQP5）在干燥综合征（SS）模型小鼠涎腺的表达及解毒化瘀中药的干预作用。方法：采用诱导法建立SS模型小鼠,并用解毒化瘀中药润燥灵、强的松进行治疗。观察各组小鼠的唾液分泌量变化及小鼠涎腺组织AQP1 mRNA、AQP5 mRNA的表达。结果：与模型组比较,解毒化瘀中药和强的松均能不同程度增加模型小鼠的唾液分泌量,以润燥灵中、高剂量组及强的松组最明显（P〈0．05）。模型组AQP1 mRNA含量与空白组比较,差异无显著性意义（P〉0.05）,经润燥灵及强的松治疗后AQP1 mRNA含量无明显变化（P〉0．05）。模型组AQP5 mRNA含量与空白组比较,明显降低（P〈0．01）,治疗后各组含量均有不同程度升高,以润燥灵中、高剂量组及强的松组最明显（P〈0．05）。结论：SS模型小鼠涎腺组织AQP5 mRNA表达降低,但对AQP1 mRNA无影响,解毒化瘀中药能上调SS模型小鼠涎腺组织AQP5 mRNA的表达。     

增液汤对干燥综合征模型鼠血清肿瘤坏死因子-α和白介素-1β的影响

目的:观察增液汤对干燥综合征模型鼠血清中肿瘤坏因子-α(TNF-α)和白细胞介素1β(I L-1β)的影响。方法:将54只I CR小鼠随机分为6组:空白组,模型组,来氟米特组和增液汤高、中、低剂量组。采用弗氏完全佐剂及I CR小鼠颌下腺蛋白抗原联合诱导干燥综合征(SS)动物模型,60天后眼球取血,采用ELI SA法测定各组小鼠血清中TNF-α和I L-1β的含量。结果:模型组小鼠血清中TNF-α和I L-1β的含量均高于空白组,差异有统计学意义(P<0.05);来氟米特组和增液汤高、中、低剂量组小鼠血清中TNF-α和I L-1β的含量均低于模型组(P<0.05),增液汤高剂量组小鼠血清中TNF-α和I L-1β的含量明显低于来氟米特组(P<0.05),中剂量组小鼠血清中TNF-α和I L-1β的含量明显介于高、低剂量组之间。结论:增液汤治疗SS模型小鼠的机制之一可能是降低了血清中TNF-α和I L-1β的表达水平,而且增液汤剂量越大效果越明显。     

增液汤对干燥综合征模型鼠血清TNF-α和IL-1β影响的研究

目的：观察增液汤对干燥综合征模型鼠血清中TNF-α和IL-1β的影响.方法：54只ICR小鼠随机分为6组,即空白组、模型组、来氟米特组和增液汤高、中、低剂量组.采用弗氏完全佐剂及ICR小鼠颌下腺蛋白抗原联合诱导SS动物模型,60天后眼球取血,采用ELISA法测定各组小鼠血清中TNF-α和IL-1 β的含量.结果：模型组小鼠血清中TNF-α和IL-1β的含量均高于空白组,有显著性差异（P＜0.01）;来氟米特组和增液汤高、中、低剂量组小鼠血清中TNF-α和IL-1β的含量均低于模型组,差异显著（P＜0.01）,增液汤高剂量组小鼠血清中TNF-α和IL-1β的含量明显低于来氟米特组（P＜0.01）,中剂量组小鼠血清中TNF-α和IL-1β的含量介于高、低剂量组之间.结论：增液汤治疗SS模型小鼠的机制之一可能是降低了血清中TNF-α和IL-1β的表达水平,且增液汤剂量越大效果越明显.     

增液汤对干燥综合征模型鼠免疫功能影响的研究

目的：观察增液汤对干燥综合征（Sjgren’s syndrome，SS）模型鼠的免疫系统的影响。方法：运用BALb／C近交系小鼠颌下腺组织匀浆与弗氏完全佐剂（CFA）混匀多点注射小鼠皮下，再注射百日咳疫苗加强免疫，产生类似于SS的唾液腺改变及临床表现，观测SS模型鼠颌下腺指数、胸腺指数、脾指数及血清抗体IgG的变化。结果：与模型组比较，增液汤治疗组模型小鼠颌下腺指数明显升高（P〈0．01）；胸腺指数明显升高（P〈0．01）；血清特异性抗体水平明显升高（P〈0．01）；脾指数升高，但没有统计学意义。结论：增液汤对SS模型小鼠具有一定的治疗作用。     

不同清热中药对干燥综合征小鼠颌下腺水分子转运功能的调控作用

目的:探讨不同清热中药对干燥综合征(SS)模型鼠颌下腺水分子转运功能的干预作用。方法:利用C57小鼠建立SS动物模型,共设立12组,即白花蛇舌草组4.51 g·kg-1,紫草组4.51 g·kg-1,青蒿组4.51 g·kg-1,蒲公英组4.51 g·kg-1,大青叶组4.51 g·kg-1,板蓝根组2.25 g·kg-1,半枝莲组2.72 g·kg-1,玄参组2.25 g·kg-1,积雪草组2.25 g·kg-1,七叶一枝花组2.25 g·kg-1。各组小鼠于造模第14天开始ig给予相应药物,正常组、模型组均ig生理盐水20 m L·kg-1,每日1次,连续4周,并于造模前以及造模后2,4,6周固定时间测量小鼠饮水量、唾液流量以及检测各组小鼠水通道蛋白5(aquaporins 5,AQP5)表达。结果:与正常组比较,模型组饮水量增加,在第4,6周差异均有显著统计学意义(P0.05);与模型组比较,治疗组小鼠从治疗2周后小鼠饮水量均有减少,第4周时白花蛇舌草组、青蒿组、大青叶组、半枝莲组与模型组相比差异显著(P0.05),第6周时蛇舌草组、青蒿组、蒲公英组、板蓝根组、半枝莲组、玄参组、大青叶组、积雪草组与模型组比降低,差异显著(P0.05)。与正常组比较,模型组唾液流量降低,在第4,6周时差异显著(P0.05);唾液流量在第4周时板蓝根组、青蒿组、大青叶组、半枝莲组、积雪草组与模型组相比差异显著(P0.05),第6周时各治疗组与模型组比较,增加都比较明显(P0.05)。与正常组比较,模型组AQP5积分吸光度差异有显著统计学意义(P0.05);各治疗组AQP5积分吸光度与模型组相比,各治疗组均有不同程度的提高,其中以青蒿组(76.2±8.1),大青叶组(77.1±6.6),半枝莲组(65.4±9.5)与模型组(41.9±3.9)差异明显(P0.05)。结论:青蒿、大青叶、半枝莲可以通过对SS小鼠降低饮水量、增加唾液流量以及颌下腺AQP5的影响发挥对其颌下腺水分子转运功能的治疗作用。     

增液汤对干燥综合征模型鼠治疗作用的观察

目的：观察增液汤对干燥综合征（Sjogren’s syndrome，SS）模型鼠的治疗作用。方法：运用BALb／C近交系小鼠颌下腺组织匀浆与弗氏完全佐剂（CFA）混匀多点注射小鼠皮下，再注射百日咳疫苗加强免疫，产生类似于SS的唾液腺改变及临床表现，观测SS模型鼠进食量、饮水量、体重、唾液流率及颌下腺指数变化。结果：与模型组比较，增液汤中剂量治疗组及干扰素组模型小鼠体重明显增加（P〈0．01），进食量明显增多（P〈0．01），饮水量明显减少（P〈0．01），唾液流率明显增加（P〈0．01），颌下腺指数明显升高（P〈0．01）。结论：增液汤对SS模型小鼠具有一定的治疗作用。     

增液行舟方药对津亏便秘衰老模型水通道蛋白表达的影响

目的观察增液行舟方药增液承气汤、增液汤对津亏便秘衰老模型小鼠皮肤、肺组织水通道蛋白(Aquaporin,AQP)表达的影响。方法将小鼠随机分为空白对照组、模型组、西沙必利组、增液承气汤组、增液汤组。采用限水(1.5ml/d),叠加复方地芬诺酯[10mg/(kg·d)]灌胃,同时10%D-半乳糖皮下注射[1000mg/(kg·d)]6周建立便秘衰老模型。从第4周起分别给予相应药物灌胃干预3周。6周后观察整体状态,检测血清、皮肤和肺组织SOD活性,皮肤AQP3及肺组织AQP1的表达。结果与空白组比较,便秘衰老组血清、皮肤和肺组织SOD活性降低,皮肤AQP3、肺组织AQP1表达降低(P0.01);与便秘衰老组比较,增液承气汤、增液汤组血清、皮肤和肺组织SOD活性升高,皮肤AQP3、肺组织AQP1表达上调(P0.01)。结论增液承气汤、增液汤可能通过增强机体抗氧化、清除自由基的能力,及抑制便秘导致的AQP表达下降,从而实现津液的濡养作用。     

润燥灵对干燥综合征模型小鼠颌下腺水通道蛋白1、5的影响

目的 探讨润燥灵汤对干燥综合征模型小鼠颌下腺AQP1及AQP5的影响.方法 采用诱导法建立干燥综合征(sjogren syndrome,SS)模型,按照随机数字表法随机分为6组,空白组(A)、SS模型组(B)、润燥灵低剂量组(C)、润燥灵中剂量组(D)、润燥灵高剂量组(E)、强的松组(F).A组正常饲养,B组生理盐水灌...     

养阴润肠方对便秘小鼠结肠水通道蛋白3/9的影响

目的:探讨养阴润肠方对便秘小鼠结肠水通道蛋白3(AQP3)和水通道蛋白9(AQP9)表达的影响。方法:50只雄性ICR小鼠随机分为正常组,模型组,养阴润肠方低、高剂量组,普卢卡必利组,每组10只,采用复方地芬诺酯20 mg·kg~(-1)连续灌胃15 d建立便秘模型,每周计算粪便含水量,用养阴润肠方低、高剂量组(29.6,59.2 g·kg-1)干预15 d,取材结肠组织,进行免疫组化AQP3和AQP9定位和半定量表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测AQP3和AQP9基因和蛋白表达情况。结果:与正常组比较,模型组粪便含水量明显下降(P0.01),AQP3表达增加(P0.01),AQP3的mRNA和蛋白表达均增加(P0.05),AQP9表达减少,AQP9的mRNA和蛋白表达亦均下降,但无统计学差异;与模型组比较,养阴润肠方低、高剂量组粪便含水量均增加(P0.05),AQP3表达下降(P0.05),AQP3的mRNA和蛋白表达均下降(P0.05);养阴润肠方低剂量组的AQP9表达增加(P0.01),AQP9的mRNA和蛋白表达均升高(P0.05),高剂量组表达有升高趋势,但无统计学差异。结论:养阴润肠方可以增加便秘小鼠粪便含水量,其机制可能与降低结肠组织中AQP3和增加AQP9的表达有关,并且大剂量作用反而不明显。     

增液汤对慢传输型便秘大鼠结肠AQP3和血清中NOS的影响

目的通过给予慢传输型便秘大鼠增液汤干预治疗,研究其对慢传输型便秘(STC)大鼠结肠中AQP3含量的影响及血清中NOS水平的影响,探讨慢传输型便秘的发病机制及增液汤润肠通便的作用机制。方法将60只SD大鼠按随机数字表法分为6组,即:正常组,模型组,伊托必利组,增液汤低剂量组,增液汤中剂量组,增液汤高剂量组,除正常组外,其余各组均给予复方地芬诺酯建立慢传输型便秘大鼠模型,造模成功后,分别给予相应药物灌胃治疗,观察增液汤对慢传输型大鼠的通便作用。采用免疫组织化学法检测各组AQP3在结肠的分布和表达情况,测定其平均光密度(MOD)值,并取最终均值代表AQP3阳性表达参数;采用Q-PCR法检测AQP3在结肠组织中的水平,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测AQP3蛋白表达情况。用ELISA检测大鼠血清中NOS的水平变化。结果与正常组相比,模型组近端结肠组织中AQP3含量明显增加(P0.05),经增液汤及伊托必利治疗后,与模型组相比,增液汤中,高剂量组及伊托必利组的近端结肠AQP3含量明显下降(P0.05),差异有统计学意义,增液汤低剂量近端结肠AQP3含量有下降趋势但差异无统计学意义。ELISA检测血清中NOS的浓度,模型组大鼠血清中NOS浓度较正常组相比明显升高(P0.05),差异有统计学意义;经增液汤及伊托必利治疗后,与模型组相比,增液汤低、中、高剂量组及伊托必利组的血清中NOS含量均明显下降(P0.05),差异有统计学意义,其中伊托必利组与增液汤低剂量组比较(P0.05),差异无统计学意义。结论近端结肠组织中AQP3含量增加可能是STC的发病机制之一;增液汤通过下调AQP3表达可能是其发挥"增液行舟"效应从而治疗STC的作用机制之一。     

芪榔合剂对便秘模型小鼠结肠水通道蛋白4、8表达的影响

目的：观察芪榔合剂对功能性便秘模型小鼠结肠AQP4、AQP8表达的影响,以探讨芪榔合剂治疗功能性便秘的作用机制。方法：小鼠随机分为阴性对照组、便秘模型组和芪榔合剂大、小剂量组,除阴性对照组以外均造功能性便秘模型,造模成功后进行药物干预。7d后取小鼠近端结肠5cm,采用RT-PCR法、Western-blot法检测水通道蛋白4（aquaporin4,AQP4）、水通道蛋白8（aquaporin8,AQP8）的表达。结果：便秘模型组与阴性对照组比较AQP4、AQP8表达明显升高;芪榔合剂大小剂量组与便秘模型组比较,AQP4、AQP8表达明显降低。结论：便秘小鼠结肠的AQP4、AQP8表达明显升高,芪榔合剂对功能性便秘小鼠结肠AQP4、AQP8表达有一定的下调作用。