益骨汤对去卵巢大鼠骨密度骨钙素及成骨细胞增殖的影响

目的:观察补肾中药益骨汤对去卵巢大鼠成骨功能的影响。方法:取12周龄W istar雌性大鼠40只,随机分为A(模型组)、B(治疗组)、C(阳性对照组)、D(正常对照组)4组,每组10只,前3组行完整双侧卵巢摘除术,D组行假手术,术后常规饲养12周,再分别予以生理盐水、益骨汤水提液、α-D3水溶液及生理盐水灌胃治疗12周,处死大鼠,取血清用放免法测定血清中BGP水平;以双能X线密度仪测定大鼠右股骨上干骺端骨密度;取右胫骨上端做病理切片,通过HE染色对成骨细胞进行观察比较。结果:治疗组血清BGP、骨矿含量、骨密度明显高于模型组,HE染色发现其成骨细胞数量明显增加。结论:益骨汤能促进成骨细胞增殖,提高血清BGP水平,加快骨形成,具有治疗OP的作用。     

益骨汤对去卵巢大鼠血清激素及成骨细胞增殖的影响

为观察益骨汤对去卵巢大鼠骨钙素(BGP)、降钙素(CT)及成骨细胞增殖影响。取12周龄Wistar雌性大鼠40只,随机分为A组(模型组)、B组(治疗组)、C组(阳性对照组)、D组(正常对照组),每组10只,A、B、C组行完整双侧卵巢摘除术,D组行假手术,术后常规饲养12周,再分别予以生理盐水、益骨汤水提液、-αD3水溶液及生理盐水灌胃治疗12周,处死大鼠,取血清用放免法测定血清中BGP、CT水平;取右胫骨上端做病理切片,通过HE染色对成骨细胞进行观察比较。结果显示治疗组血清BGP、CT水平明显高于模型组,HE染色发现其成骨细胞数量明显增加。表明益骨汤能促进成骨细胞增殖,提高血清BGP、CT水平,抑制骨吸收,加快骨形成,具有治疗OP的作用。     

红曲治疗实验性大鼠骨折的实验研究

目的为评价红曲治疗大鼠骨折的疗效并探讨其作用机理。方法取12周龄的Wistar大鼠90只,手术法完成大鼠骨折模型后,随机分为3组,分别为治疗组(红曲)、阳性对照组(伤科接骨片)和空白对照组(生理盐水);分组饲养给药2、4、6周,分别行摄X线片、BMP-2免疫组化观察、组织学观察。结果术后第4周X片显示治疗组骨折线趋于消失,骨折端有大量连接性骨痂阴影,基本上达到骨愈合。术后第6周治疗组骨折线基本消失,可见髓腔再通;对照组骨折线趋于消失,骨折端及周围有大量连接线骨痂阴影,空白组中有出现断端硬化不愈合现象。治疗组在胞浆中有BMP-2的棕色深染,染色程度明显高于空白对照组(P<0.05)。结论红曲明显促进了大鼠的骨痂形成,提高BMP-2阳性细胞率,促进间充质细胞分泌BMP-2,并促使其向成骨细胞转化从而加速骨形成,从而具有促进骨折愈合作用。     

仙鹿健骨汤含药血清对成骨细胞矿化结节及BMP-2表达影响的实验研究

目的:观察仙鹿健骨汤含药血清对体外培养的新生SD大鼠成骨细胞矿化功能及骨形成蛋白(BMP-2)表达的影响。方法:取12周龄Wister雌性大鼠48只,随机分为6组,每组8只,分为仙鹿健骨汤低、中、高剂量组(A、B、C组),α-D3对照组(D组)、模型组(E组)及空白对照组(F组),制备含药血清备用。成骨细胞建立采用新生SD乳鼠5只(24h内颅盖骨)进行体外细胞传代培养,分别采用茜素红染色、免疫组化染色法观察体外培养成骨细胞矿化结节变化及成骨细胞BMP-2表达。结果:B、C组及D组对成骨细胞矿化结节形成的作用均优于E组,并接近于F组水平,但组间比较无明显差异,通过免疫组化染色发现各组均有BMP-2的棕黄色深染,但B、C组阳性细胞比例明显高于其他各组,与E组比较有显著差异。结论:仙鹿健骨汤含药血清能明显增加成骨细胞矿化结节形成数,促进矿化功能,并且提高成骨细胞BMP-2表达水平,这可能是该方防治骨质疏松症的机理之一。     

不同补肾方法对骨折大鼠BMP-2表达的影响

目的:研究不同补肾方法对骨头形态发生蛋白-2(BMP-2)在骨折愈合过程中表达的影响。方法:于SD大鼠左胫骨上1/3段造成骨折,对骨折不做任何固定。随机分为生理盐水组、左归丸组、右归丸组、补肾壮筋汤组,每组9只。于1、2、4周时每组处死3只,取骨痂标本,免疫组化法检测标本中BMP-2水平,应用计算机图像分析系统进行定量分析。结果:补肾壮筋汤组BMP-2表达阳性细胞平均光密度(MOD)值显著高于左归丸组、右归丸组及生理盐水组(P<0.05)。结论:补肾壮筋汤能显著促进骨折愈合过程中BMP-2的表达。     

益骨汤对骨质疏松大鼠成骨细胞相关基因表达的实验研究

目的:观察益骨汤对骨质疏松大鼠成骨细胞中WNT10b、β-catenin、BMP-2、BMP-4、DKK1相关基因的表达水平的影响,探讨DKK1在骨质疏松大鼠中发生的作用及益骨汤促成骨细胞增殖的可能机制。方法:将100只大鼠随机分为A组(假手术组)、B组(益骨汤治疗组)、C组(倍美力阳性对照组)、D组(正常对照组)、E组(DKK-1反义寡核苷酸对照组)5组,每组各20只;造模成功后,分别予蒸馏水、益骨汤、倍美力、蒸馏水及DKK1反义寡核苷酸进行干预。培养3个月后,用双能X线骨密度仪进行骨密度测定;提取另一侧股骨总RNA,行RT-PCR检测WNT10b、β-catenin、BMP-2、BMP-4、DKK1 mRNA水平;提取总蛋白,利用Western Blot检测WNT10b、β-catenin、BMP-2、BMP-4、DKK1的蛋白含量。结果:益骨汤治疗组、DKK-1反义寡核苷酸组对WNT10b、β-catenin、BMP-2、BMP-4表达比正常对照组明显上调,差异有统计学意义(P0.05),且益骨汤治疗组5种基因的表达明显高于其他组;而益骨汤治疗组DKK1的表达比正常对照组明显下调,差异有统计学意义(P0.05)。结论:益骨汤能够促进WNT10b、β-catenin、BMP-2、BMP-4基因表达上调,可以抑制DKK1在成骨细胞增殖中的过度表达。     

健脾补肾方调控激素性股骨头坏死大鼠促成骨分化因子的研究

目的观察健脾补肾方对激素性股骨头坏死骨髓间充质干细胞定向分化成骨细胞相关细胞因子的影响,为健脾补肾方治疗激素性股骨头坏死提供相应的分子学基础。方法将健康成年雄性Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、健脾补肾方组,模型组及健脾补肾方组建立激素性股骨头坏死模型。造模后健脾补肾方组每天灌胃健脾补肾汤,模型组和空白组每天灌胃等量生理盐水,均连续12周。灌胃结束后,取3组大鼠血清及股骨头组织,分别应用ELISA及Western blot法检测血清及股骨头组织中骨形态发生蛋白2(BMP-2)、转化生长因子-β(TGF-β)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、血小板衍性生长因子(PDGF)、成骨特异性细胞转录因子2(Runx2)表达情况。结果ELISA法检测,健脾补肾方组血清BMP-2、TGF-β、VEGF水平及骨组织中BMP-2水平均明显高于空白组和模型组(P均<0.05),空白组均明显高于模型组(P均<0.05)。Western blot法检测,健脾补肾方组血清BMP-2表达量高于空白组和模型组,血清TGF-β表达量高于模型组。结论健脾补肾方可能通过调控BMP-2、TGF-β而促进骨髓间充质干细胞定向成骨分化,从而防治骨坏死。     

红曲对体外培养大鼠成骨细胞BMP-2表达的影响

为研究红曲对体外培养大鼠成骨细胞BMP-2表达的影响,从而为治疗骨质疏松症开发出中药新药提供细胞学依据。取成年SD大鼠48只,随机将大鼠分为A组(空白组)、B组(倍美力组)、C组(普拉固组)、D、E、F组(红曲高、中、低剂量组)6组,按10ml.kg-1分别予以生理盐水,倍美力水溶液(0.00625mg.ml-1),普拉固水溶液0.2mg.ml-1)及红曲水提液(1.25g.ml-1、0.625g.ml-1、0.125g.ml-1)灌胃。灌胃10天后,腹腔静脉取血制备含药血清;将从胎鼠颅骨取材的成骨细胞培养于含药血清培养液中,然后应用BMP-2免疫组化染色方法观察红曲对体外培养成骨细胞BMP-2表达的影响。结果显示,通过免疫组化染色发现BMP-2棕色深染位于细胞浆,红曲高、中剂量组成骨细胞棕色深染数量明显高于空白组,低剂量组与空白组无明显差异,阳性细胞比例呈剂量依赖性增长。表明红曲含药血清可以呈剂量依赖性地促进成骨细胞BMP-2表达;在细胞和分子水平为中药红曲治疗骨质疏松症提供了客观化的依据。     

补肾健脾活血方对成骨细胞增殖分化及BMP-2、Smad5影响的研究

目的:研究中药复方补肾健脾活血方对大鼠成骨细胞增殖分化及骨形成蛋白-2 (BMP-2)、Smad5表达的影响。方法:将60只3月龄雌性SD大鼠随机分为空白组、补肾健脾活血方组、阿仑膦酸钠组,每组20只。制备对应的含药血清后分别干预成骨细胞,采用细胞计数法(CCK-8)检测成骨细胞增殖活性,碱性磷酸酶染色(ALP)检测成骨细胞分化能力,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)检测BMP-2、Smad5 m RNA表达,蛋白免疫印迹法检测BMP-2、Smad5蛋白表达。结果:干预12 h、24 h、48 h时,各组细胞活性逐渐增强,干预48 h后各组细胞活性均降低。干预48 h时,与空白组、阿伦磷酸钠组比较,补肾健脾活血方组细胞活性最强(P0.05)。补肾健脾活血方组成骨细胞ALP染色最深,明显深于空白组和阿仑膦酸钠组。与空白组比较,补肾健脾活血方组BMP-2、Smad5蛋白及mRNA表达升高(P0.05);阿仑膦酸钠组BMP-2 mRNA表达降低(P0.05)。与阿仑膦酸钠组比较,补肾健脾活血方组BMP-2、Smad5蛋白及mRNA表达升高(P0.05)。结论:中药复方补肾健脾活血方可以促进大鼠成骨细胞增殖分化,提高BMP-2、Smad5 mRNA和蛋白表达。     

骨碎补总黄酮对大鼠胫骨牵张末期BMP-2与Smad-1表达的影响

目的:探讨骨碎补总黄酮干预下BMP-2与Smad-1在大鼠胫骨牵张成骨末期中的表达。方法:40只大鼠建立大鼠胫骨牵张成骨模型,随机分成4组,分别为对照组、中药组、阻遏剂组及阻遏剂加中药组,每组10只。所有大鼠于牵张第20天时给予拍片评估,处死,取标本,HE染色评价成骨质量,用免疫组化分析各组BMP-2与Smad-1的表达。结果:中药组BMP-2与Smad-1的表达最高(P0.05),阻遏剂加中药组明显高于阻遏剂组(P0.05)。结论:BMP-2与Smad-1的表达在牵张成骨期间对成骨有重要促进作用,补肾法可以促进大鼠胫骨牵张末期BMP-2与Smad-1的表达。     

葛根芩连汤治疗糖尿病骨质疏松大鼠的效果及机制

目的:研究葛根芩连汤治疗糖尿病性骨质疏松大鼠的效果及机制。方法:雌性SD大鼠60只,随机均分为3组。对照组20只无处理,余40只腹腔注射链脲佐菌素35 mg/kg,建立大鼠糖尿病模型。葛根芩连汤组:按生药量10 g/kg葛根芩连汤灌胃,模型组同法以0.9% NaCl灌胃,持续灌胃12周。行大鼠空腹胰岛素水平(Fins)、空腹血糖(FBG)、胰岛素敏感指数(ISI)及素抵抗指数(HOMA-IR)检测。RT-PCR、Western Blot检测椎体BMP-2/Smad表达变化,进一步行骨密度、骨钙含量及生物力学性能测定及HE染色。结果:模型组素HOMA-IR,FBG水平较对照组均升高,Fins及ISI降低(P<0.05)。葛根芩连汤组大鼠HOMA-IR,FBG水平与模型组比较降低,Fins及ISI均升高(P<0.05)。模型组大鼠椎体BMP-2、Smad1、Smad4基因和蛋白的表达较对照组降低(P<0.05)。葛根芩连汤组大鼠椎体BMP-2、Smad1、Smad4基因和蛋白较模型组升高(P<0.05)。模型组大鼠骨密度、骨钙含量、极限载荷、极限应力和弹性模量较对照组降低(P<0.05);葛根芩连汤组大鼠骨密度、骨钙含量、极限载荷、极限应力和弹性模量与模型组比较升高(P<0.05),HE染色示葛根芩连汤治疗后大鼠骨质疏松减轻。结论:葛根芩连汤在降低DOP大鼠血糖水平,减轻胰岛素抵抗,通过调高BMP-2/Smad通路发挥治疗大鼠DOP的作用。     

益妇宁软胶囊对去势大鼠骨组织雌激素受体表达的影响

目的:研究不同剂量的益妇宁软胶囊(YFN)对去势大鼠骨组织中雌激素受体(ER)表达的影响,探讨该方对绝经后骨质疏松症(PMO)的治疗机制.方法:采用3月龄SD雌性大鼠60只,50只行双侧卵巢切除术,随机分为YFN大剂量组(相当于原生药0.8 g/kg)、YFN中剂量组(相当于原生药0.4 g/kg)、YFN小剂量组(相当于原生药0.2 g/kg)和阳性药对照组(己烯雌酚0.1 mg/kg)、模型对照组,每组10只;另10只为假手术组.术后4周开始给药,给药12周后收集标本.采用放免法测定血清雌二醇水平,Western blotting免疫印迹法检测胫骨组织中ER表达情况.结论:YFN能明显提高去势大鼠体内雌激素水平及骨组织雌激素受体的表达量,通过这两条途径起到治疗绝经后骨质疏松症的作用.     

强筋壮骨丸对去卵巢大鼠骨转换指标和骨密度的影响

目的:观察强筋壮骨丸对去卵巢大鼠骨转换指标和骨密度的影响。方法:取12周龄SD雌性大鼠40只,随机分为A、B、C、D 4组,每组10只,A组行假手术,其余3组行双侧卵巢摘除术,术后饲养12周后,再治疗12周,测定血清中BGP、CT、AKP、Ca和P的含量;以双能X线骨密度测定仪测定骨密度。结果:强筋壮骨丸组血清中BGP、CT水平及骨密度明显高于模型组。结论:强筋壮骨丸能提高血清激素BGP、CT水平,增加骨密度,抑制骨吸收,促进骨形成,具有治疗骨质疏松症的作用。     

生骨注射液对大鼠成骨细胞BMP-2 mRNA表达影响的实验研究

目的:研究生骨注射液对体外培养的大鼠成骨细胞BMP-2mRNA表达的影响,探讨生骨注射液促进骨折愈合的分子机制.方法:体外培养大鼠成骨细胞,分别给予不同浓度、时间的生骨注射液进行干预实验,然后用RT-PCR技术分别检测各组细胞BMP-2 mRNA的表达,并进行定量分析.结果:在不同浓度时,生骨注射液连续干预至第5 d,以1 mg/ml浓度条件下,BMP-2 mRNA表达最强;而以1 mg/ml生骨注射液干预1～5 d,BMP-2 mRNA的表达随时间逐渐增强.结论:生骨注射液对体外培养的大鼠成骨细胞BMP-2 mRNA表达有明显促进作用,其作用强度随浓度、时间而改变.     

仙灵强骨口服液对去势老龄大鼠骨质疏松症的影响

目的：观察仙灵强骨口服液对去卵巢大鼠骨质疏松症的治疗作用。方法：采用12月龄SD雌性大鼠,行双侧卵巢切除术,随机分为强骨口服液高、中、低剂量组(6,3,1.5 g·kg^-1))和阳性药(尼尔雌醇)组、模型组、假手术组。术后45 d开始给药,给药90 d后取出大鼠股骨及第四腰椎骨进行股骨骨形态计量学测定、股骨骨密度测量、股骨三点弯曲实验及椎骨压缩实验,同时测定血清中碱性磷酸酶(ALP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(StrACP)水平。结果：仙灵强骨口服液可显著增加骨密度、降低血清StrACP水平,明显提高骨最大应力、弹性模量、刚度水平,同时对股骨形态计量学有改善作用。结论：仙灵强骨口服液对去卵巢大鼠的骨质疏松症有治疗作用。     

补肾健脾方药对卵巢切除大鼠骨生物力学的影响

为探讨补肾健脾方药对去卵巢大鼠骨生物力学性能的影响 ,取 10月龄SD雌性大鼠 4 0只 ,随机分为模型组、正常对照组、阳性对照组、中药组 ,每组 10只 ,正常对照组行假手术 ,其余 4组行完整双侧卵巢摘除术。术后第 3天开始灌胃给药 ,连续用药满 12周后处死 ,分离出L3腰椎体及左侧股骨 ,进行骨生物力学测试。结果显示补肾健脾方药能明显提高和改善去卵巢大鼠椎体及股骨的生物力学性能。     

鹿茸对实验型骨折愈合中BMP-2表达的影响

目的:探讨鹿茸对实验型骨折愈合中BMP -2 (骨形成发生蛋白-2 )表达的影响。方法:取雄性SD大鼠75只随机分为5组,即正常组(A)、单纯造模组(B)、伤科接骨片组(C)、鹿茸低剂量组(D)、鹿茸高剂量组(E)。除了A组外,麻醉下徒手造成大鼠右胫骨中段骨折,于术后1、2、3周分别处死不同组的大鼠各5只,A组于第3周集中处死。取骨及骨痂组织制成蜡块,以免疫组化技术显示BMP -2 ,进行计算机真彩色图像定量分析,HE染色镜下测骨痂的厚度。结果:在骨的愈合过程中骨痂中BMP -2的含量总体变化趋势相同,实验组与伤科接骨片组BMP -2含量以及骨痂的厚度优于同期的其他对照组(P <0 . 0 1) ,实验鹿茸高剂量组BMP -2的高峰出现在第2周,对照组出现在第3周。结论:高剂量鹿茸能够加强BMP -2在骨痂组织的表达,并能提高实验鼠骨折端骨痂的厚度,可能为鹿茸促进骨折愈合的一种机制。     

补肾健脾活血方对去卵巢大鼠BMP2/Smad信号通路的影响

目的:研究补肾健脾活血方对去卵巢大鼠骨形态发生蛋白2(BMP2)/Smad信号通路的影响。方法:72只6月龄雌性SD大鼠,随机分为假手术组(24只),手术组(48只),双侧卵巢切除法造模,术后3个月两组各随机选取12只检测骨密度验证造模成功。手术组剩余的36只大鼠随机分为双侧卵巢切除模型组(OVX),补肾健脾活血方组(BSJPHX,给药剂量2.979 g·kg~(-1)),阿仑膦酸钠维D3片(Ⅱ)组(ALN,给药剂量1.02 mg·kg~(-1)),假手术组,OVX组给与等体积生理盐水灌胃。12周后处死各组大鼠,双能X射线法检测大鼠全身骨密度,生物力学试验进行胫骨三点弯曲试验,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测BMP2,Smad1,Runt相关转录因子2(Runx2),骨保护素(OPG)基因的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测BMP2,p-Smad1,Runx2,OPG蛋白的表达。结果:造模3个月后,与假手术组比较,OVX组大鼠骨密度明显降低,最大载荷及刚度均降低,BMP2,Smad1,Runx2,OPG基因和蛋白表达水平显著降低(P0.05);给药3个月后,与OVX组比较,BSJPHX组,ALN组骨密度均明显增高,最大载荷及刚度均增加,能显著提高BMP2,Smad1,Runx2,OPG基因和蛋白表达水平(P0.05)。结论:补肾健脾活血方既能通过调控BMP2/Smad通路的信号转导,又能上调OPG的表达,这可能是补肾健脾活血方防治绝经后骨质疏松症的机制之一。