增骨Ⅱ号注射液对大鼠成骨细胞OC和OPN mRNA表达的影响

目的:研究增骨Ⅱ号注射液对体外培养的大鼠成骨细胞OC和OPN mRNA表达的影响,探讨增骨Ⅱ号注射液防治骨质疏松症的分子机制.方法:体外培养大鼠成骨细胞,分别给予不同浓度、时间的增骨Ⅱ号注射液进行干预实验,然后用RT-PCR技术分别检测各组细胞的OC and OPN mRNA表达,并进行定量分析.结果:增骨Ⅱ号注射液在不同浓度时连续干预至1～5 d,以1 mg/ml浓度条件下,OC and OPN mRNA表达最强;而以1 mg/ml生骨注射液干预防1～5 d,OC和OPN mRNA的表达随时间逐渐增强.结论:增骨Ⅱ号注射液对体外培养的大鼠成骨细胞OC和OPN mRNA表达有明显促进作用,其作用强度随浓度、时间而改变.     

灯盏花对成骨细胞及破骨前体细胞OPG/RANKL/RANK表达的影响

目的 研究不同浓度和不同作用时间的灯盏花对体外培养的成骨细胞和破骨前体细胞中OPG/RANKL/RANK mRNA及蛋白表达的影响,初步探讨灯盏花对骨改建的作用及其机制。方法 体外培养人MG63细胞和小鼠RAW264.7细胞,分别取第三代细胞分为对照组和不同的实验组,分别应用不同浓度的灯盏花（0、0.001、0.01、0.1、1 mg/mL）干预48 h后提取总RNA和蛋白质,同时单独对0、1 mg组设12、24、48 h时间点提取蛋白质,采用半定量RT PCR方法检测MG63细胞OPG mRNA和RANKL mRNA的表达以及RAW264.7细胞RANK mRNA的表达,采用Western blot法检测MG63细胞OPG蛋白和RANKL蛋白的表达以及RAW264.7细胞RANK蛋白的表达。结果 灯盏花随浓度（0、0.001、0.01、0.1、1 mg/mL）增高,干预48 h后MG63细胞OPG mRNA和蛋白表达逐步降低（P〈0.05）;MG63细胞RANKL mRNA和蛋白表达逐步增加（P〈0.05）;RAW264.7细胞RANK mRNA表达增加（P〈0.05）,但0.1 mg/mL组较0.01 mg/mL组 mRNA表达稍降低,RANK蛋白表达逐步增加（P〈0.05）。1 mg/mL灯盏花干预12、24、48 h后MG63细胞OPG蛋白表达随时间逐步降低（P〈0.05）、RANKL蛋白表达随时间逐步增加（P〈0.05）;RAW264.7细胞RANK蛋白表达随时间逐步增加（P〈0.05）。结论 灯盏花大致上呈剂量和时间依赖性抑制成骨细胞OPG表达,促进成骨细胞RANKL的表达和破骨前体细胞RANK的表达,灯盏花可能有促进骨吸收的作用。     

生骨注射液对体外培养大鼠成骨细胞增殖和分化影响的实验研究

目的探讨生骨注射液对体外培养的大鼠成骨细胞增殖和分化的影响，及探讨生骨注射液促进骨折愈合的细胞机制。方法体外培养大鼠成骨细胞，应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法观察生骨注射液对体外培养成骨细胞的增殖、ALP表达的影响。结果生骨注射液对成骨细胞具有明显的促增殖、分化作用。结论生骨注射液具有刺激体外培养成骨细胞增殖、分化的功能．这可能是生骨注射液促进骨折愈合的机制之一。     

重楼皂苷对新生大鼠成骨细胞增殖、分化及Smurf1、Cthrc1、BMP-2表达的影响

目的:探究重楼皂苷对新生大鼠成骨细胞增殖、分化及Smurf1、Cthrc1、BMP-2表达的影响。方法:获取新生大鼠颅骨成骨细胞,经原代培养后传代培养,应用倒置显微镜观察并通过茜素红染色鉴定。将第三代成骨细胞接种至含不同浓度重楼皂苷(0μg/ml、3μg/ml、10μg/ml、30μg/ml)的培养基中培养。应用MTT实验检测重楼皂苷对成骨细胞增殖能力的影响。应用碱性磷酸酶(ALP)活性检测和钙结节染色评估重楼皂苷对成骨细胞分化能力的影响。应用荧光实时定量PCT(qRT-PCR)评估重楼皂苷对成骨细胞分化过程中Smurf1、Cthrc1、BMP-2基因表达的影响。结果:与空白对照组相比,重楼皂苷浓度3μg/ml、10μg/ml、30μg/ml组的细胞增殖能力、ALP活性、钙化结节数量均显著增加。重楼皂苷各浓度组的BMP-2、Cthrc1 mRNA和蛋白表达水平均显著增加,而Smurf1 mRNA和蛋白表达水平均显著降低。结论:重楼皂苷能够通过抑制Smurf1表达、增强Cthrc1表达参与调控BMP-2相关信号通路,从而促进新生大鼠颅骨成骨细胞增殖分化过程。     

益骨胶囊含药血清对晚期糖基化终末产物作用下成骨细胞分化及BMP-2和OPG的影响

目的研究益骨胶囊含药血清对晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)作用下成骨细胞分化活性及对骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein2,BMP-2)和骨保护蛋白(osteopro-tegerin,OPG)的影响,探讨益骨胶囊防治骨质疏松(osteoporosis,OP)的作用机制。方法选取10月龄SD雌性大鼠40只,随机分为益骨胶囊高、中、低剂量组及空白组,每组10只。运用大鼠灌胃的方法制备含药血清和对照血清。二次酶消化法分离培养新生SD大鼠颅骨成骨细胞,传代后分为空白对照组、模型组、中药低、中、高剂量组。模型组用AGEs(400mg/L)处理,中药低、中、高剂量组分别用AGEs(400mg/L)和低、中、高剂量含药血清共同处理,分别用pNPP、ELISA、茜素红染色法检测成骨细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性、Ⅰ型胶原(typeⅠcollagen,ColⅠ)、骨钙素(bone gla protein,BGP)以及矿化结节,RT-PCR测定成骨细胞中BMP-2、OPG mRNA的表达,ELISA法检测BMP-2、OPG蛋白的表达量。结果原代分离培养的新生大鼠成骨细胞具有典型的成骨细胞特征;与空白对照组比较,模型组成骨细胞(OB)ALP、ColⅠ、BGP、BMP-2、OPG蛋白及BMP-2、OPG mRNA表达降低,矿化结节减少,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,中药各剂量组ALP、ColⅠ、BGP、BMP-2、OPG蛋白及BMP-2、OPG mRNA表达升高,矿化结节增加,且随剂量增加而明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论益骨胶囊含药血清提高AGEs作用下成骨细胞分化和矿化能力,提高BMP-2、OPG的表达,这可能是益骨胶囊防治OP的机制之一。     

淫羊藿苷对骨髓间充质成骨性活性强于金雀异黄酮

目的:比较研究金雀异黄酮与淫羊藿苷对体外培养原代大鼠骨髓间充质细胞(rats bone marrow stromal cell,rBMSC)成骨性分化的影响.方法:体外分离培养大鼠骨髓间充质细胞,筛选最佳的药物浓度;采用终浓度为1×10-5mol·L-1的金雀异黄酮和淫羊藿苷对体外培养原代大鼠骨髓间充质细胞进行干预;在药物干预后的第3,6,9,12,15天后测定碱性磷酸酶活性(alkaline pbosphatase,ALP)和3,6,9,12,15 d测定钙含量;第12天进行钙化结节茜素红染色;在药物干预后第12,24,48,72,96 h Real-time RT-PCR检测OXS,Runx-2,骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP-2)和Collagen-Ⅰ mRNA的表达水平.结果:浓度为1 ×10-5 mol·L-1金雀异黄酮和淫羊藿苷可提高ALP活性最高,增加Ca含量,调节骨代谢活性Runx-2,OXS,BMP-2和Collagen-Ⅰ mRNA的表达水平,淫羊藿苷比金雀异黄酮的成骨性作用更强一些.结论:在促进体外培养骨髓间充质细胞成骨性分化作用方面淫羊藿苷较强于金雀异黄酮.     

补肾健脾活血方对成骨细胞增殖分化及BMP-2、Smad5影响的研究

目的:研究中药复方补肾健脾活血方对大鼠成骨细胞增殖分化及骨形成蛋白-2 (BMP-2)、Smad5表达的影响。方法:将60只3月龄雌性SD大鼠随机分为空白组、补肾健脾活血方组、阿仑膦酸钠组,每组20只。制备对应的含药血清后分别干预成骨细胞,采用细胞计数法(CCK-8)检测成骨细胞增殖活性,碱性磷酸酶染色(ALP)检测成骨细胞分化能力,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)检测BMP-2、Smad5 m RNA表达,蛋白免疫印迹法检测BMP-2、Smad5蛋白表达。结果:干预12 h、24 h、48 h时,各组细胞活性逐渐增强,干预48 h后各组细胞活性均降低。干预48 h时,与空白组、阿伦磷酸钠组比较,补肾健脾活血方组细胞活性最强(P0.05)。补肾健脾活血方组成骨细胞ALP染色最深,明显深于空白组和阿仑膦酸钠组。与空白组比较,补肾健脾活血方组BMP-2、Smad5蛋白及mRNA表达升高(P0.05);阿仑膦酸钠组BMP-2 mRNA表达降低(P0.05)。与阿仑膦酸钠组比较,补肾健脾活血方组BMP-2、Smad5蛋白及mRNA表达升高(P0.05)。结论:中药复方补肾健脾活血方可以促进大鼠成骨细胞增殖分化,提高BMP-2、Smad5 mRNA和蛋白表达。     

骨康含药血清对大鼠成骨细胞BMP-2表达的影响

目的:通过观察骨康含药血清对成骨细胞BMP-2表达的影响,探讨其治疗骨质疏松症的作用机制。方法:将6只大白兔随机分为3组:正常血清组、骨康含药血清组和雌二醇含药血清组,分别将血清添加入体外分离、培养的成骨细胞,每组8个样本,采用酶联免疫吸附法,检测成骨细胞BMP-2的表达。结果:骨康含药血清组BMP-2含量显著低于空白对照组(P<0.05),骨康含药血清组与雌二醇含药血清组BMP-2的含量无明显差异。结论:在去势状态下,骨康可能通过促进BMP-2的分泌,达到治疗骨质疏松症的目的。     

薯蓣皂苷元对大鼠成骨细胞增殖、分化及OPG/RANKL mRNA表达的影响

目的:研究薯蓣皂苷元对体外培养的大鼠成骨细胞增殖、分化及护骨素/核因子κB受体活化因子配基(OPG/RANKL) mRNA的影响,探讨薯蓣皂苷元预防与治疗骨质疏松的作用机制。方法:在体外培养的大鼠成骨细胞培养基中分别加入不同浓度的薯蓣皂苷元作用不同时间,用MTT法检测药物对成骨细胞增殖的影响,检测成骨细胞内ALP活性分析药物对成骨细胞分化的影响,用半定量RT-PCR检测成骨细胞内OPG/RANKL mRNA的表达量,分析药物对破骨细胞重要信号传导通路OPG/RANKL/RANK系统的影响。结果:3.64×10-8-3.64×10-7mol/L的薯蓣皂苷元作用于大鼠成骨细胞3d,可促进成骨细胞的增殖(P<0.01),上调成骨细胞内OPG/RANKL mRNA的比值(P<0.01);作用7d,可提高成骨细胞内ALP活性(P<0.05或P<0.01)。结论:适量浓度薯蓣皂苷元可促进成骨细胞的增殖、分化及抑制破骨细胞的形成。     

戴村骨伤膏对人成骨样细胞(MG-63细胞)增殖及BMP-2表达的影响

目的:为了研究戴村骨伤膏对骨折愈合的影响,我们将其运用于人成骨样细胞(MG-63细胞)体外的细胞试验,观察其对细胞增殖及BMP-2表达的影响。方法:在体外培养的MG-63细胞中,加入不同浓度的戴村骨伤膏药物溶液作用后,使用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测细胞增殖以及RT-PCR反应法检测细胞中BMP-2表达情况。结果:戴村骨伤膏药在早期能较明显的促进成骨细胞MG-63的增殖分化及BMP-2的表达,并且效果随着药物浓度的升高而增强,但是随着时间延长药物对MG-63细胞增殖反而起抑制作用。结论:说明戴村骨伤膏对MG-63细胞增殖具有促进和抑制双重效应,其效应强度随作用时间不同而不同。     

白芨胶对大鼠皮肤成纤维细胞VEGFmRNA表达的影响

目的:研究白芨胶对体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞VEGFmRNA表达的影响,探讨白芨胶促进伤口愈合的分子机制。方法:体外培养大鼠皮肤成纤维细胞,分别给予不同浓度的白芨胶进行干预,然后用RT-PCR技术分别检测各组细胞的VEGFmRNA表达,并进行定量分析。结果:白芨胶在不同浓度时连续干预至第3d,以0.5mg/ml浓度条件下,VEGFmRNA表达最强。结论:白芨胶对体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞VEGFmRNA表达有明显促进作用,其作用强度随浓度而改变。     

淫羊藿苷对人成骨细胞增殖与分化的影响

目的:观察淫羊藿苷对人成骨细胞增殖和分化的影响。方法:将人骨髓基质干细胞定向诱导分化为成骨细胞,取第3,4代细胞,MTT法观察淫羊藿苷对人成骨细胞的增殖作用,碱性磷酸酶(ALP)比活性测定观察淫羊藿苷对人成骨细胞分化的影响,RT-PCR方法检测淫羊藿苷对人成骨细胞 BMP-2 mRNA表达的影响。结果:浓度为20μg·mL^-1的淫羊藿苷能够显著促进人成骨细胞的增殖和分化,且使BMP-2 mRNA的表达升高。结论:淫羊藿苷具有促进人成骨细胞增殖和分化的作用,这一作用可能与其升高人成骨细胞BMP 2 mRNA的表达有关。     

鹿瓜多肽注射液对大鼠成骨细胞增殖及分化的影响

目的:研究鹿瓜多肽注射液对大鼠成骨细胞增殖、分化的影响。方法:体外分离、培养SD大鼠成骨细胞,CCK-8法检测成骨细胞增殖活性;碱性磷酸酶(ALP)活性试剂盒检测成骨细胞ALP活性比;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测成骨细胞Ⅰ型胶原(Col1α1)、骨钙素(Bglap)及Runx-2的表达水平。结果:鹿瓜多肽注射液干预成骨细胞3d,发现鹿瓜多肽注射液组成骨细胞活性较对照组明显增强(P<0.05);在鹿瓜多肽注射液干预细胞后第8天时,鹿瓜多肽注射液组成骨细胞ALP活性较对照组明显增加(P<0.05);鹿瓜多肽注射液组成骨细胞骨钙素及Runx-2表达均较对照组明显增强。结论:鹿瓜多肽注射液能显著促进成骨细胞发育成熟。     

黄芪多糖的提取及对体外培养成骨细胞成骨能力的影响

目的：了解黄芪多糖对体外培养成骨细胞增殖、分化能力的影响。方法：采用水煮醇沉法提取黄芪多糖,用ＴＬＣ进行定性,用比色法定量,用含高低两种剂量（０．５ｍ ｇ／ｍ ｌ,５．０ｍ ｇ／ｍ ｌ）的黄芪多糖的培养液体外培养成骨细胞,ＭＴＴ法及ＡＬＰ比活性测定观察成骨细胞增殖率及细胞活性变化。结果：低浓度黄芪多糖（０．５ｍ ｇ／ｍ ｌ）及高浓度黄芪多糖（５．０ｍ ｇ／ｍ ｌ）短期时（２ 天）促进成骨细胞增殖;高浓度（５．０ｍ ｇ／ｍ ｌ）长期（４ 天）抑制成骨细胞增殖,降低其活性。结论：黄芪多糖对成骨细胞增殖、活性有双向调节作用     

降糖防聋方对体外高糖培养成骨细胞骨钙素分泌的影响

目的:探讨降糖防聋方对体外高糖培养成骨细胞骨钙素的影响.方法:采用改良的组织块法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞,用不同浓度的降糖防聋方含药血清及不含降糖防聋方含药血清的α-MEM培养液加入到成骨细胞高糖(糖终浓度为300 kg·L-1)培养体系,作用不同时间,应用放免法测定细胞骨钙素(BGP)的水平.结果:100,50,10 mg·L-1的降糖防聋方含药血清对体外高糖培养成骨细胞具有明显的促进作用(P＜0.05),在较高浓度对对成骨细胞增殖无明显抑制效应.结论:降糖防聋方含药血清对高糖培养成骨细胞骨钙素有不同程度调节改善作用.     

茶多酚EGCG对人骨髓基质干细胞成骨分化基因表达的影响

目的:观察茶多酚EGCG对人骨髓基质干细胞成骨分化基因ALK、COL1A1、RUNX2、BMP-2表达的影响.方法:培养人骨髓基质干细胞,用浓度为10-5M、10-6M茶多酚EGCG以及空白对照组分别作用人骨髓基质干细胞21 d后,采用荧光定量PCR的方法检测成骨相关基因ALK、COL1A1、RUNX2、BMP-2的表达变化.结果:BMP-2基因的表达水平为:10-5M茶多酚组>10-6M茶多酚组>DMSO对照组;ALK、RUNX2、COL1A1基因在茶多酚EGCG组与空白对照组之间表达无明显变化.结论:茶多酚EGCG可以提高人骨髓基质干细胞BMP-2基因的表达水平,有可能是茶多酚促进人骨髓基质干细胞成骨分化的重要基因.     

淫羊藿总黄酮对大鼠成骨细胞代谢调控的机制研究

目的：探讨淫羊藿总黄酮对大鼠成骨细胞代谢调控的影响。方法:取新生SD大鼠的颅骨,胶原酶法培养成骨细胞。应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法(PNPP)和RT-PCR方法观察淫羊藿总黄酮对体外培养成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶活性和OPG mRNA,RANKL mRNA表达的影响。结果:淫羊藿总黄酮能刺激成骨细胞增殖,提高碱性磷酸酶活性,增强OPG mRNA的表达（P<0.05或P<0.01）。结论:淫羊藿总黄酮能促进成骨细胞的增殖、分化,增加OPG mRNA的表达,对RANKL的表达无明显影响。