沉默ERRα对过表达DKK1、Sost重组腺病毒载体转染的MG63细胞影响研究

目的:探讨雌激素相关受体α(ERRα)对Wnt信号通路抑制因子Dickkopf(DKK)1、骨硬化蛋白Sclerostin(Sost)过表达腺病毒载体转染的MG63细胞和相关蛋白Lrp5、CTGF、FGF2、OPN的影响作用。方法:将培养好的MG63细胞经过表达DKK1、Sost转染后分为空白对照组、过表达DKK1组、过表达Sost组、过表达(DKK1+Sost)组,根据组别不同用包装好的沉默ERRα干预过表达DKK1、Sost重组腺病毒载体转染后的MG63细胞,采用四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色法(MTT)检测细胞增殖、考马斯亮蓝蛋白定量法测定ALP活性、流式分析法测定钙离子浓度,Western blot检测MG63细胞中Lrp5、CTGF、FGF2、OPN蛋白的表达量。结果:①与空白对照组比较,过表达DKK1、Sost、DKK1+Sost组、沉默ERRα干预空载腺病毒组的高细胞活性、ALP活性和Lrp5、CTGF、FGF2、OPN的表达量均降低,钙离子浓度均升高,差异均有统计学意义(P0.05)。②与过表达DKK1、Sost、DKK1+Sost组比较,沉默ERRα干预过表达DKK1、Sost、DKK1+Sost组的细胞活性、ALP活性和Lrp5、CTGF、FGF2、OPN的表达量均降低,钙离子浓度均升高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:沉默ERRα可降低过表达DKK1、Sost重组腺病毒转染后的MG63细胞增殖和ALP活性,升高钙离子浓度,对Lrp5、CTGF、FGF2、OPN蛋白表达有一定影响作用,尤其对DKK1、Sost同时过表达时的作用最为明显。     

补肾健脾活血方对去卵巢大鼠BMP2/Smad信号通路的影响

目的:研究补肾健脾活血方对去卵巢大鼠骨形态发生蛋白2(BMP2)/Smad信号通路的影响。方法:72只6月龄雌性SD大鼠,随机分为假手术组(24只),手术组(48只),双侧卵巢切除法造模,术后3个月两组各随机选取12只检测骨密度验证造模成功。手术组剩余的36只大鼠随机分为双侧卵巢切除模型组(OVX),补肾健脾活血方组(BSJPHX,给药剂量2.979 g·kg~(-1)),阿仑膦酸钠维D3片(Ⅱ)组(ALN,给药剂量1.02 mg·kg~(-1)),假手术组,OVX组给与等体积生理盐水灌胃。12周后处死各组大鼠,双能X射线法检测大鼠全身骨密度,生物力学试验进行胫骨三点弯曲试验,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测BMP2,Smad1,Runt相关转录因子2(Runx2),骨保护素(OPG)基因的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测BMP2,p-Smad1,Runx2,OPG蛋白的表达。结果:造模3个月后,与假手术组比较,OVX组大鼠骨密度明显降低,最大载荷及刚度均降低,BMP2,Smad1,Runx2,OPG基因和蛋白表达水平显著降低(P0.05);给药3个月后,与OVX组比较,BSJPHX组,ALN组骨密度均明显增高,最大载荷及刚度均增加,能显著提高BMP2,Smad1,Runx2,OPG基因和蛋白表达水平(P0.05)。结论:补肾健脾活血方既能通过调控BMP2/Smad通路的信号转导,又能上调OPG的表达,这可能是补肾健脾活血方防治绝经后骨质疏松症的机制之一。     

复原活血汤联合凉性经筋通贴膏外敷治疗单纯性肋骨骨折临床观察

目的观察复原活血汤联合凉性经筋通贴膏外敷治疗单纯性肋骨骨折的临床疗效。方法 96例单纯性肋骨骨折患者随机分为复原活血汤组(A组,32例),凉性经筋通贴膏组(B组,32例),复原活血汤+凉性经筋通贴膏组(C组,32例),观察疼痛程度、肿胀指数、总体治疗有效率。结果 3组患者在治疗后第3、7、14天疼痛程度、肿胀指数上有显著下降趋势,差异有统计学意义(P 0. 05),与A组和B组比较,C组降低更明显,差异有统计学意义(P 0. 05); 3组治疗14 d后总体疗效评价,C组患者治疗显效率及总有效率均高于A组和B组,而无效率低于A组和B组,差异均有统计学意义(P 0. 05)。结论复原活血汤联合凉性经筋通贴膏外敷在治疗早期单纯性肋骨骨折方面疗效显著,能够明显改善患者胸部疼痛和骨折部位的软组织水肿,提高临床疗效。     

口服养血方联合蜡疗治疗膝骨关节炎气血虚弱证的疗效观察及作用机制分析

目的:观察口服养血方联合蜡疗治疗膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)气血虚弱证的临床疗效,并探讨其作用机制。方法:2015年1月至2016年12月,采用口服养血方联合蜡疗治疗KOA气血虚弱证患者34例。男16例,女18例。年龄(57. 3±6. 5)岁。病程(21. 3±8. 3)个月。养血方每日早晚各温服250 m L,连续服用1周为1个疗程;蜡疗每日1次,连续治疗7次为1个疗程;每两个疗程之间间隔1 d,均治疗4个疗程。参照《中药新药临床研究指导原则》中骨关节炎的疗效标准评定疗效。抽取患者空腹外周静脉血5 m L,采用酶联免疫吸附法测定血清中可溶性Fas(soluble Fas,s Fas)和可溶性Fas配体(soluble Fas ligand,s Fas L)含量。结果:患者的血清s Fas含量,治疗前(3. 86±1. 12) ng·m L~(-1),治疗1个疗程后(3. 83±1. 09) ng·m L~(-1)、2个疗程后(3. 57±1. 03) ng·m L~(-1)、3个疗程后(3. 27±0. 92) ng·m L~(-1)、4个疗程后(2. 78±0. 83) ng·m L~(-1);血清s Fas L含量,治疗前(0. 91±0. 27) pg·m L~(-1),治疗1个疗程后(0. 86±0. 25) pg·m L~(-1)、2个疗程后(0. 76±0. 23) pg·m L~(-1)、3个疗程后(0. 63±0. 22) pg·m L~(-1)、4个疗程后(0. 32±0. 20) pg·m L~(-1)。治疗4个疗程后按上述疗效标准评定疗效,显效12例、有效15例、无效7例。无效的7例可能与患者不注意起居感受风寒湿邪或没有按时、按量应用药物有关,采用口服独活寄生汤加减(连用3周)联合醋氯芬酸缓释片(连用2周)治疗后症状均缓解。结论:口服养血方联合蜡疗治疗KOA气血虚弱证,可以有效减轻临床症状,其可能通过抑制血清中s Fas及s Fas L的含量达到治疗目的。     

绝经后骨质疏松症相关的LncRNA研究进展

绝经后骨质疏松症(postmenopausal osteoporosis,PMOP)是绝经后妇女常见的全身性骨骼疾病。绝经期间卵巢雌激素减少导致骨小梁微结构遭到破坏,皮质骨吸收增加,皮质孔隙增加,这些影响促进了骨质疏松症的发展并增加了脆性骨折风险。现有研究显示长链非编码RNA(long-chain non-coding RNA,LncRNA)在调节成骨细胞分化、破骨细胞分化等方面有重要作用。本文将就绝经后骨质疏松症相关的LncRNA基因展开综述。     

基于“脾肾相关”理论探讨TGF-β信号通路与肌肉骨骼的关系

"脾肾相关"理论是中医基础理论之一,在临床中对脾系、肾系、骨科等多种疾病的防治有重要的指导作用。脾主肌肉,脾为后天之本;肾主骨,肾为先天之本,二者在生理上相互资助,病理上相互影响。而转化生长因子-β(TGF-β)信号通路在肌肉骨骼中的作用突出,对肌肉骨骼的生长发育影响显著。从"脾肾相关"理论来探讨TGF-β信号转导通路与肌肉骨骼的关系,突出了中西医结合的理念,为肌肉骨骼疾病的防治提供理论指导,在现代西医学研究上亦有切实意义。     

XCT-790对沉默DKKl、Sost腺病毒载体转染MG63细胞中OPG、CTGF、FGF2、TNFα的影响研究

目的 研究ERRα抑制剂（XCT-790)对沉默Wnt信号通路抑制因子Dickkopf1(DKK1)、骨硬化蛋白Sclerostin( Sost)重组腺病毒载体转染MG63细胞中OPG、CTGF、FGF2、TNFα的影响。方法 本实验将培养好的MG63细胞分为空白对照组、沉默DKK1组、沉默Sost组、沉默（DKK1 + Sost)组、XCT-790处理空载腺病毒组、XCT-790处理沉默DKK1组、XCT-790处理沉默Sost组、XCT-790处理沉默（DKK1 + Sost)组,根据组别不同分别用包装好的沉默DKK1、Sost腺病毒载体转染MG63细胞,应用 Western blot检测MG63细胞中OPG、CTGF、FGF2、TNFα蛋白的表达量。结果 （1 )与空白对照组对比,沉默DKK1、Sost、 DKK1 + Sost可以提高OPG、CTGF、FGF2表达量（P <0. 05),降低TNFα表达量（P <0. 05) ;XCT-790干预MG63细胞可降低OPG、CTGF、FGF2 表达量（P <0. 05),增加 TNFα表达量（P<0. 05) ;(2)与沉默 DKK1、Sost、DKKl + Sost 组比较,XCT-790 处理沉默DKKl、Sost、DKKl + Sost组可降低因沉默DKK1、Sost、DKKl + Sost而增加OPG、CTGF、FGF2的表达量的作用（P <0. 05 ), 增加因沉默DKK1、Sost、DKKl + Sost而降低TNFα的表达量（P <0. 05)。结论 XCT-790可以降低MG63细胞中OPG、CTGF、 FGF2表达量,升高TNF α表达量;还可以调节因沉默DKK1、Sost、DKK1 + Sost而改变的MG63细胞中OPG、CTGF、FGF2及 TNFα的表达量。     

补骨脂对成骨细胞和破骨细胞增殖分化的影响研究进展

骨质疏松症是一种以骨量减少、骨微结构破坏,导致骨脆性增加,易于发生骨折为特征的全身性骨骼疾病。骨质疏松的发病机制为骨重建动态平衡被破坏,成骨细胞与破骨细胞功能失衡,导致骨代谢失衡,骨吸收加快,骨形成减少,最终造成骨吸收远大于骨形成,净骨量丢失。骨质疏松的形成与成骨细胞和破骨细胞二者在体内的动态平衡密切相关,其中破骨细胞主要介导骨吸收,在骨骼的形成和骨密度的调节中发挥着重要作用;成骨细胞则是特殊的骨形成细胞,能合成骨基质,调节机体的骨矿化,参与骨重塑等活动。     

补肾健脾活血方干预沉默DKK1、Sost骨细胞对细胞活性和相关蛋白的影响研究

目的用补肾健脾活血方干预沉默Dickkopf(DKK)1、骨硬化蛋白Sclerostin(Sost)转染的成骨细胞,观察其对细胞活性和相关蛋白的影响。方法将培养好的细胞分为空白对照组(NC组)、沉默DKK1(Ad-sh DKK1)组和沉默Sost(Ad-sh Sost)组,空载腺病毒转染NC组,沉默DKK1和Sost重组腺病毒转染其余两组,再分别给予空白血清和含药血清干预,观察细胞增殖、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性以及骨相关蛋白变化情况。结果 (1)三组含药血清干预后的细胞活性强于空白血清干预后的细胞活性。与空白血清干预的三组比较,含药血清干预后的三组细胞活性在24、48、72 h均增加,尤其在72 h时含药血清对Ad-sh DKK1组的细胞活性作用更强,与同组空白血清比较,差异有统计学意义(P0.05);(2)三组含药血清干预与空白血清干预比较ALP活性明显升高,差异有统计学意义(P0.01)。含药血清干预后,与NC组比较,其余两组ALP活性显著升高,差异有统计学意义(P0.01),Ad-sh DKK1组和Ad-sh Sost组比较,ALP活性升高不明显;(3)与空白血清干预比较,含药血清干预后三组的结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)均升高,与NC组比较,Ad-sh DKK1组OPG、OPN差异有统计学意义(P0.05和P0.01),Ad-sh Sost组CTGF、OPG、OPN差异有统计学意义(P0.05)。结论补肾健脾活血方含药血清可显著促进沉默DKK1、Sost干预后细胞增殖和提高ALP活性,上调沉默DKK1、Sost腺病毒转染细胞CTGF、OPG、OPN的表达。