基于MAPKs信号通路探讨补肾助孕方改善BN大鼠黄体功能的作用机制

目的 探讨补肾助孕方降低黄体功能不全（LPD）自然模型-棕色挪威（BN）大鼠卵巢凋亡水平的可能作用机制。方法 使用随机数表法将50只SPF级雌性BN大鼠分为模型组、地屈孕酮组（0.002 g·kg^-1）、补肾助孕方低、中、高剂量组（4.5、9、18 g·kg^-1）,给予相应药物剂量灌胃,每天1次,给药3个动情周期。使用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组大鼠c-Jun氨基酸末端激酶（JNK）、磷酸化（p）-JNK、细胞外信号调节激酶（ERK）、p-ERK、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）、p-p38 MAPK、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）、Bcl-2的蛋白表达水平,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测各组大鼠JNK、ERK、p38 MAPK、Bax、Bcl-2 mRNA表达水平,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组大鼠血清孕酮（P）和雌二醇（E₂）水平,苏木素-伊红（HE）染色观察卵巢形态。结果 与模型组比较,补肾助孕各剂量组使用1个周期后,大鼠动情周期恢复情况差异有统计学意义（P<0.05）;补肾助孕方低剂量组卵巢组织形态有所改善,中、高剂量组卵巢组织各级卵泡结构清晰,囊状卵泡及闭锁卵泡减少,颗粒细胞层数较多,黄体数增多、境界清晰、体积较大,以新鲜黄体为主;补肾助孕方低、中、高剂量组大鼠卵巢组织Bcl-2 mRNA表达水平上调,Bax mRNA表达水平下调（P<0.05,P<0.01）;补肾助孕方高剂量组大鼠卵巢组织JNK、p38 MAPK mRNA水平显著下调（P<0.01）;补肾助孕方低、中剂量组大鼠卵巢组织ERK mRNA表达水平上调（P<0.05）。与模型组比较,补肾助孕方中、高剂量组Bcl-2蛋白表达水平均显著上调（P<0.01）,补肾助孕方各剂量组Bax蛋白表达水平显著下调（P<0.01）;补肾助孕方各剂量组大鼠卵巢组织中JNK、ERK、p38 MAPK蛋白表达水平差异无统计学意义;补肾助孕方中、高剂量组大鼠卵巢组织中p-ERK蛋白表达水平显著升高（P<0.01）,p-JNK、p-p38 MAPK蛋白表达水平均显著降低（P<0.01）。补肾助孕方低、中、高剂量组E₂水平呈不同程度升高（P<0.05,P<0.01）,补肾助孕方中剂量组P水平明显升高（P<0.05）。结论 补肾助孕方能够改善BN大鼠血清性激素,恢复动情周期,减少卵泡闭锁及囊泡化、维持黄体形态及功能,从而改善黄体功能,治疗黄体功能不全,其机制可能与调控MAPKs信号通路降低BN大鼠卵巢组织凋亡水平有关。     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨左归丸对60Co-γ射线损伤大鼠卵泡凋亡调控作用

目的 以磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（PI3K/Akt/mTOR）信号通路为靶点,探讨左归丸对⁶⁰Co-γ射线早衰大鼠的保护作用。方法 采用⁶⁰Co-γ射线一次性照射（6.0 Gy,LD₄₀）性成熟雌性SD大鼠60只,随机分成模型组、补佳乐组（0.18 g·kg^-1·d^-1）、补佳乐（0.09 g·kg^-1·d^-1）+左归丸高剂量（23.625 g·kg^-1·d^-1）组、左归丸高剂量（23.625 g·kg^-1·d^-1）组、左归丸中剂量（9.45 g·kg^-1·d^-1）组和左归丸低剂量（4.725 g·kg^-1·d^-1）组,每日1次,治疗21 d,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清［卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）和雌二醇（E₂）］,苏木素-伊红（HE）染色观察卵巢的组织形态变化,原位末端标记法（TUNEL）检测颗粒细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测卵巢组织磷酸化（p）-PI3K、p-Akt、p-mTOR和B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）的蛋白表达结果。结果 与正常组比较,模型组大鼠血清FSH显著上升（P<0.01）,E₂明显下降（P<0.05）,卵巢早期卵泡和黄体数量减少（P<0.01）;颗粒细胞凋亡率显著增加（P<0.01）;卵巢组织p-PI3K、p-Akt、p-mTOR和Bcl-2蛋白表达明显下降,Bax蛋白表达显著增加（P<0.01）;与模型组比较,各给药组干预后卵巢内早期卵泡数量增加,颗粒细胞凋亡率降低,p-PI3K、p-Akt、p-mTOR和Bcl-2蛋白表达有增加趋势,Bax蛋白表达有下降趋势,尤以补佳乐+左归丸高剂量组差异均具有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。结论 左归丸对辐射损伤卵巢的保护作用机制可能是通过活化卵巢组织PI3K/Akt/mTOR蛋白表达,增加Bcl-2蛋白量和抑制Bax蛋白表达。     

补肾养血方对卵巢早衰小鼠凋亡调控蛋白Bcl-2/Bax的影响

目的：探讨补肾养血方对免疫性卵巢早衰（POF）小鼠卵巢凋亡调节基因B细胞淋巴瘤/白血病-2原癌基因（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）表达的影响。方法：以小鼠透明带3（Zp3）为抗原,皮下多点注射免疫 BALB/c雌性小鼠,14 d后强化免疫,建立免疫性卵巢早衰模型。设补肾养血方低、中、高剂量（5.1,10.2,20.4 g·kg^-1）进行治疗,以补佳乐（戊酸雌二醇0.6 mg·kg^-1）为阳性对照,于造模后15 d开始灌胃给药1次/d,连续6周（每1周休息1 d）。放射免疫法检测小鼠血清激素水平,Western法检测卵巢组织 Bcl-2,Bax蛋白的表达。结果：与空白对照组相比,模型组小鼠卵巢Bcl-2蛋白的表达减少,Bax蛋白表达增加,（P<0.05）,模型组小鼠卵巢Bcl-2/Bax下降（P<0.01）,提示模型组卵泡Bcl-2蛋白的低表达、Bax蛋白的高表达可能加速了卵泡的凋亡,导致卵巢早衰;与模型组相比,补肾养血方高、中、低剂量组及西药组小鼠卵巢Bcl-2蛋白的表达明显增加（P<0.01,P<0.05）,卵巢Bax蛋白的表达均减少（P<0.05）,Bcl-2/Bax明显降低（P<0.05）。结论：卵泡凋亡过快可能导致卵巢早衰,补肾养血方可能通过上调卵泡及卵巢间质Bcl-2蛋白的表达,下调Bax蛋白的表达,抑制卵泡的过快凋亡,从而改善卵巢功能。     

当归拈痛汤对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织内外凋亡途径关键因子的影响

目的 观察当归拈痛汤对佐剂性关节炎（AA）大鼠滑膜组织内、外凋亡途径中关键调控因子表达水平的影响,进一步探讨该方防治类风湿关节炎的作用机制。方法 将40只SPF级SD大鼠随机分为正常组、模型组、当归拈痛汤组（11.34 g·kg^-1）和雷公藤组（9.45 mg·kg^-1）,除正常组外,其余各组采用灭活结核分支杆菌佐剂建立佐剂性关节炎大鼠模型,于免疫当天开始按分组每日灌胃给药,正常组与模型组大鼠给予等体积生理盐水,持续28 d。观察大鼠一般情况和体质量改变,足趾容积测量仪检测受试大鼠足趾容积的变化,苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠膝关节滑膜组织形态学改变,蛋白免疫印迹法（Western blot）和实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测各组大鼠滑膜组织肿瘤坏死因子受体超族成员6（Fas）,Fas相关死亡域蛋白（FADD）,B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）,Bcl-2相关X蛋白（Bax）及其共同下游效应分子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3） mRNA和蛋白的表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠足趾容积显著增加（P<0.01）,滑膜细胞增生显著,滑膜组织Fas,FADD,Bax和Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.01）;与模型组比较,当归拈痛汤组和雷公藤组大鼠的足趾肿胀度显著减轻（P<0.01）,滑膜增生情况明显改善,Fas,FADD,Bax和Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.05,P<0.01）,Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平明显下降（P<0.05,P<0.01）。结论 当归拈痛汤可以有效减轻AA大鼠关节肿胀情况,改善滑膜组织异常增生,其作用机制可能与调控内、外在凋亡途径相关因子Fas,FADD,Bax,Bcl-2,Caspase-3表达,促进滑膜细胞凋亡相关。     

寿胎丸通过调控Nrf2信号通路减轻人绒毛膜滋养层细胞的氧化损伤治疗复发性流产

目的 研究寿胎丸含药血清通过核因子E₂相关因子2（Nrf2）信号通路对过氧化氢（H₂O₂）损伤的人绒毛膜滋养层细胞（HTR-8/Svneo）的保护作用,并阐明其可能的机制。方法 细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测不同浓度的H₂O₂溶液（25、50、100、200、400 μmol·L^-1）对HTR-8/Svneo增殖的抑制作用,CCK-8法筛选含药血清的最佳浓度。将细胞分为空白组、模型组、地屈孕酮组、寿胎丸组,CCK-8法检测含药血清对H₂O₂诱导的HTR-8/Svneo细胞增殖活力的影响,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组细胞内活性氧（ROS）含量;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测核Nrf2、血红素加氧酶-1（HO-1）、醌氧化还原酶1（NQO1）、胱天蛋白酶-3（Caspase-3）、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）蛋白表达;细胞免疫荧光检测Nrf2、Bcl-2的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测Nrf2、Caspase-3、Bcl-2相关X蛋白（Bax）mRNA的表达。结果 CCK-8法筛选H₂O₂最佳造模浓度为50 μmol·L^-1,含药血清的最佳体积分数为10%。与空白组比较,模型组细胞的增殖活力显著降低（P<0.01）,细胞内ROS含量显著升高（P<0.01）,Nrf2、HO-1、NQO1、Bcl-2蛋白表达明显下降（P<0.05,P<0.01）,Caspase-3、Bax蛋白表达显著上升（P<0.01）,Nrf2 mRNA表达显著降低（P<0.01）,Caspase-3、Bax mRNA的表达明显升高（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,寿胎丸组细胞的增殖活力显著上升（P<0.01）,细胞内ROS含量显著降低（P<0.01）,Nrf2、HO-1、NQO1、Bcl-2蛋白表达明显上升（P<0.05,P<0.01）,Caspase-3、Bax蛋白表达明显下降（P<0.05,P<0.01）,Nrf2 mRNA表达明显升高（P<0.05）,Caspase-3、Bax mRNA的表达明显降低（P<0.05,P<0.01）。结论 寿胎丸含药血清可以通过激活Nrf2信号通路来抑制H₂O₂诱导的细胞凋亡,对人绒毛膜滋养层细胞具有一定的保护作用。     

对叶百部总生物碱对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及Bcl-2，Bax和cleaved Caspase-3蛋白表达的影响

目的 研究对叶百部总生物碱对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）,Bcl-2相关X蛋白（Bax）和切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3（cleaved Caspase-3）蛋白表达的影响。方法 选择人肝癌SMMC-7721细胞,常规培养及传代,对叶百部总生物碱设置添加干预的质量浓度为50,75,112,167,250 mg·L^-1,另设置仅添加10%胎牛血清作为空白组。采用噻唑蓝（MTT）比色法和细胞克隆实验观察细胞增殖的作用,Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测3种凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax和cleaved Caspase-3的表达。结果 对叶百部总生物碱可抑制SMMC-7721细胞增殖,与空白组比较,细胞增殖抑制率显著升高（P<0.01）,作用24,48,72 h的50%细胞抑制浓度（IC₅₀）分别为（173.36±8.75）,（112.14±16.50）,（96.41±2.60） mg·L^-1,细胞集落形成抑制率显著升高（P<0.01）,存在浓度依赖性。与空白组比较,对叶百部总生物碱可促进细胞凋亡,SMMC-7721细胞凋亡数目和凋亡率显著增加（P<0.01）,在荧光正置显微镜下可观察到典型细胞凋亡形态,如亮蓝色细胞核染色,细胞质浓缩和细胞核固缩等。与空白组比较,抑凋亡蛋白Bcl-2表达显著下调（P<0.01）;与空白组比较,对叶百部总生物碱75,112,167,250 mg·L^-1促凋亡蛋白Bax,cleaved Caspase-3蛋白表达显著上调（P<0.01）。结论 对叶百部总生物碱有很好的抑制SMMC-7721细胞增殖和促进凋亡的作用,其机制可能与抑制Bcl-2蛋白表达和促进Bax,cleaved Caspase-3蛋白表达有关。     

补肾活血方通过调节PI3K/Akt/mTOR信号通路改善DOR大鼠卵巢储备功能

目的 观察补肾活血方调节磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路相关因子改善卵巢储备功能下降（DOR）大鼠卵巢储备功能的作用机制。方法 运用Ataya法腹腔注射环磷酰胺复制60只DOR模型大鼠，将其随机分为模型组、戊酸雌二醇组（0.000 9 g·kg^-1），补肾活血方高、中、低剂量组（33，16.5，8.25 g·kg^-1），同时另设正常组，每组12只；各组相应药物治疗，正常组和模型组给予等体积生理盐水，连续灌胃14 d，每天1次。治疗结束后，苏木素-伊红（HE）染色卵巢组织，光镜观察初级卵泡数、成熟卵泡数、总卵泡数的变化；免疫组化检测卵巢组织中血管内皮生长因子（VEGF）的表达，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测卵巢组织中PI3K，Akt，mTOR，半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3）蛋白表达；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）法检测卵巢组织中PI3K，Akt，mTOR mRNA表达。结果 与正常组比较，模型组卵巢组织中成熟卵泡数量、总卵泡数量明显减少（P<0.05，P<0.01），卵巢组织中VEGF，Caspase-3表达升高（P<0.05），PI3K，Akt，mTOR蛋白及mRNA表达水平降低（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，补肾活血方中、高剂量组成熟卵泡数量、总卵泡数量均有不同程度上升（P<0.05，P<0.01），VEGF补肾活血方中剂量组升高最为明显（P<0.05），补肾活血方低、中、高剂量组及戊酸雌二醇组Caspase-3下降，补肾活血方中、高剂量组PI3K，Akt，mTOR蛋白及mRNA表达水平均升高（P<0.05，P<0.01），且补肾活血方中剂量组更加接近于正常组。结论 补肾活血方可以有效地改善DOR大鼠卵巢储备功能，促进卵泡数量增加。作用机制可能与补肾活血方通过增加卵巢组织中VEGF的表达有关，进而激活PI3K/Akt/mTOR信号通路，从而调节Caspase-3的含量，最后促进卵泡数量的增加。     

基于PI3K/Akt信号通路研究升降通癃方中空栓对前列腺增生大鼠的影响

目的 通过观察升降通癃方中空栓对前列腺增生大鼠前列腺中双氢睾酮（DHT）的水平、及前列腺中磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路相关蛋白的影响，探究升降通癃方中空栓治疗前列腺增生大鼠的机制。方法 从60只SD雄性大鼠中随机选取10只为假手术组，其余大鼠经去势后连续4周皮下注射丙酸睾丸酮造前列腺增生大鼠模型，采用随机数字表法随机分为模型组、非那雄胺（0.45 mg·kg^-1）组、升降通癃方中空栓高、中、低剂量（3.98、1.99、0.99 g·kg^-1）组，每组10只。去势7 d后，假手术组及模型组选用空白中空栓、非那雄胺组及升降通癃方中空栓组选用相应中空栓，连续肛塞直肠给药28 d。杀检大鼠，分离并称量前列腺组织，观察药物对各组大鼠前列腺指数的影响，苏木素-伊红（HE）染色前列腺组织进行病理观察，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测DHT的水平，并采用蛋白免疫印迹法检测前列腺组织PI3K/Akt信号通路蛋白及B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、胱天蛋白酶-3（Caspase-3）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、αB-晶状体蛋白（CRYAB）蛋白表达水平。结果 与假手术组比较，模型组大鼠前列腺指数显著升高，光镜下模型组大鼠前列腺明显增生，DHT水平明显升高，CRYAB、Bcl-2、PI3K及Akt蛋白表达水平上升，Caspase-3及Bax蛋白表达水平下降（P<0.05，P<0.01）。与模型组比较，升降通癃方中空栓高剂量组大鼠前列腺指数下降（P<0.05），升降通癃方中空栓各剂量组大鼠前列腺中DHT水平、CRYAB、Bcl-2、PI3K及Akt蛋白表达水平下降，Caspase-3及Bax蛋白表达水平上升（P<0.05，P<0.01）。结论 升降通癃方中空栓可通过降低CRYAB蛋白表达，负性调控PI3K/Akt信号通路，下调DHT水平，Bcl-2、PI3K及Akt蛋白表达水平，上调Caspase-3及Bax蛋白表达水平，抑制细胞增殖和促进细胞凋亡，从而发挥对BPH的治疗作用；高剂量升降通癃方中空栓改善大鼠前列腺增生效果显著。     

补肾助孕方对黄体功能不全模型大鼠卵巢内质网应激的调节

目的 探讨补肾助孕方对米非司酮诱导的黄体功能不全（LPD）模型大鼠卵巢内质网应激（ERS）的调控机制。方法 使用随机数表法将50只SD大鼠分为空白组，模型组，地屈孕酮（0.02 g·kg^-1）组，补肾助孕方低（0.08 g·kg^-1）、高剂量（0.24 g·kg^-1）组。使用蛋白免疫印迹法（Western blot）及实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测各组大鼠卵巢免疫球蛋白重链结合蛋白（BIP），蛋白激酶R样内质网激酶（PERK），肌醇必需酶-1（IRE-1），活性转录因子6（ATF6），C/EBP同源蛋白（CHOP）蛋白和mRNA表达水平，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组大鼠血清孕酮（P）和雌二醇（E₂）水平。结果 与空白组比较，模型组BIP，PERK，CHOP蛋白表达显著升高（P<0.01），PERK及CHOP mRNA表达明显下降（P<0.05）；而IRE-1，ATF6蛋白表达，IRE-1，BIP，ATF6 mRNA表达，血清E₂，P水平差异无统计学意义。与模型组比较，地屈孕酮组CHOP蛋白表达显著降低（P<0.01），而PERK，IRE-1，BIP，ATF6蛋白表达，PERK，IRE-1，BIP，ATF6，CHOP mRNA表达及血清E₂，P水平差异无统计学意义；补肾助孕方低剂量组CHOP蛋白表达显著降低（P<0.01），CHOP mRNA表达水平明显升高（P<0.05），而PERK，IRE-1，BIP，ATF6蛋白和mRNA表达及血清E₂，P水平差异无统计学意义；补肾助孕方高剂量组PERK，BIP，CHOP蛋白表达显著降低（P<0.01），CHOP mRNA表达水平显著升高（P<0.01），而IRE-1和ATF6蛋白表达，PERK，IRE1，BIP，ATF6 mRNA表达及血清E₂，P水平差异无统计学意义。结论 补肾助孕方可以改善黄体功能不全，其机制可能与缓解内质网应激作用有关。     

仙菟河车方配合电针治疗肾虚肝郁型卵巢早衰的临床观察

  目的：观察仙菟河车方配合电针治疗肾虚肝郁型卵巢早衰的临床疗效。  方法：将60例肾虚肝郁型卵巢早衰患者随机分为治疗组和对照组,每组30例。对照组予戊酸雌二醇片与安宫黄体酮,治疗组予仙菟河车方配合电针治疗。两组疗程均为3个月。观察临床疗效,比较性激素指标、改良Kupperman评分及子宫内膜厚度的变化情况。  结果：①治疗组、对照组临床总有效率分别为76.67%和63.33%;组间临床疗效比较,差异有统计学意义(P<0.05)。②组间治疗后比较,治疗组在降低FSH、LH水平方面优于对照组(P<0.05),而在升高E₂水平方面不如对照组显著(P<0.05)。③组间治疗前后差值比较,治疗组改良Kupperman评分下降程度更甚于对照组(P<0.05)。④组间治疗前后差值比较,治疗组子宫内膜增厚程度较对照组更甚(P<0.05)。  结论：仙菟河车方内服配合电针治疗肾虚肝郁型卵巢早衰的疗效满意,可修复患者下降的卵巢功能,平衡紊乱的内分泌水平,提高生活质量。     

银杏叶内酯K对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

 目的 探讨银杏叶内酯K （ginkgolide K,GNK）对大脑局灶性脑缺血再灌注（MCAO）损伤大鼠的保护作用。方法 采用栓线法大鼠缺血2 h再灌注22 h模型,探讨银杏内酯K对模型大鼠神经缺损症状、脑梗死百分比、脑组织含水率、超氧化物歧化酶（SOD）活性 、丙二醛（MDA）含量及皮层神经元细胞内［Ca2+］_i浓度、Bax蛋白,Bcl-2蛋白及caspase-3蛋白的影响。结果与脑缺血再灌注组相比,GNK （4和8 mg·kg-1）组中大鼠神经缺损评分、脑含水率、脑梗死百分比显著降低（P<0.01）;脑组织丙二醛含量减少、SOD活性升高、［Ca2+］_i显著下降（P<0.01）,Bax和caspase-3蛋白表达显著降低,Bcl-2蛋白表达显著提高。结论 银杏内酯K对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠具有保护作用,本作用机制可能与银杏内酯K减少大鼠脑缺血再灌注后脑组织［Ca2+］_i浓度、抗自由基损伤及其抑制Bax与Bcl-2蛋白表达比例及caspase-3蛋白表达有关。     

黄芪桂枝五物汤加减对糖尿病大鼠坐骨神经细胞凋亡相关Bax和Caspase-12的影响

目的 研究黄芪桂枝五物汤加减对糖尿病大鼠坐骨神经细胞凋亡相关B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白（Bax）和胱天蛋白酶-12（Caspase-12）蛋白与mRNA表达的影响,以探究黄芪桂枝五物汤加减治疗糖尿病周围神经病变的作用机制。方法 选用动物实验方法进行研究,将60只雄性SD大鼠通过高糖高脂饲料喂养联合链尿佐菌素（STZ）腹腔注射诱导成糖尿病大鼠动物模型,连续3 d随机血糖≥16.7 mmol·L^-1者为糖尿病大鼠造模成功,将48只造模成功的糖尿病大鼠随机分为模型组、α-硫辛酸组（0.026 8 g·kg^-1·d^-1）、中药高、低剂量组（2.5、1.25 g·kg^-1·d^-1）,每组各12只,并设正常组10只。监测大鼠体质量和随机血糖水平;干预16周末通过Key point肌电采集系统检测大鼠坐骨神经传导速度;分别通过蛋白免疫印迹法（Western blot）和实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠坐骨神经中Bax和Caspase-12蛋白与mRNA的表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠体质量显著下降（P<0.01）,随机血糖水平显著升高（P<0.01）;干预16周,与模型组比较,中药高剂量组大鼠体质量明显升高（P<0.05）,其他给药组体质量变化差异无统计学意义;各给药组随机血糖水平均显著降低（P<0.01）。与正常组比较,干预16周,模型组大鼠运动和感觉神经传导速度显著降低（P<0.01）;与模型组比较,各给药组大鼠运动和感觉神经传导速度均明显升高（P<0.05,P<0.01）。与正常组比较,模型组大鼠坐骨神经Bax和Caspase-12蛋白表达显著升高（P<0.01）;与模型组比较,各给药组大鼠坐骨神经Bax和Caspase-12蛋白表达均显著降低（P<0.01）。与正常组比较,模型组大鼠坐骨神经Bax和Caspase-12 mRNA表达显著升高（P<0.01）;与模型组比较,α-硫辛酸组、中药高剂量组大鼠坐骨神经Bax mRNA表达明显降低（P<0.05,P<0.01）,中药低剂量组坐骨神经Bax mRNA表达降低有下降趋势;各给药组大鼠坐骨神经Caspase-12 mRNA表达显著降低（P<0.01）。结论 黄芪桂枝五物汤加减可能通过抑制坐骨神经细胞凋亡来改善和修复糖尿病大鼠坐骨神经损伤。     

红芪多糖对高糖培养下雪旺细胞Bcl-2/Caspase-3信号通路的影响

目的 通过观察红芪多糖（HPS）对高糖培养下雪旺细胞（SCs）B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）信号通路的影响,探讨HPS在治疗糖尿病周围神经病变（DPN）过程中可能的作用机制。方法 选取出生5~7 d的SD乳鼠4只,随机分为正常组、高糖组、HPS+高糖组、α-硫辛酸（α-LA）+高糖组,从坐骨神经部位提取SCs,放入37 ℃,5% CO₂培养箱中培养,待细胞达整瓶的80%后,细胞增殖与活性检测（CCK-8）法筛适宜高糖,HPS及α-LA干预的实验浓度,蛋白免疫印迹法（Western blot）,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白与mRNA的表达情况,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（Annexin V-FITC）/碘化丙锭（PI）法流式细胞术检测各组SCs的凋亡率。结果 Western blot,Real-time PCR检测结果显示,与正常组比较,高糖组Bcl-2蛋白及mRNA表达水平降低,Bax、Caspase-3蛋白及mRNA表达水平升高,差异有统计学意义（P<0.01）;与高糖组比较,HPS+高糖组、α-LA+高糖组的Bcl-2蛋白及mRNA表达水平明显升高,Bax、Caspase-3蛋白及mRNA表达水平明显降低,差异有统计学意义（P<0.01）。Annexin V/PI法流式细胞术检测结果显示,与正常组比较,高糖组SCs凋亡率明显增加;与高糖组比较,HPS+高糖组和α-LA+高糖组SCs凋亡率显著降低,差异有统计学意义（P<0.01）。结论 HPS可以减轻SCs凋亡反应状态,其作用机制可能与抑制Bcl-2/Caspase-3信号通路激活有关。     

益气化瘀方治疗气虚血瘀型子宫肌瘤临床观察

  目的：观察益气化瘀方治疗气虚血瘀型子宫肌瘤的临床疗效  方法：将60例子宫肌瘤患者随机分为治疗组与对照组,每组30例。治疗组予益气化瘀方,对照组予桂枝茯苓胶囊。两组疗程均为3个月经周期,观察子宫肌瘤体积、月经情况(经期与经量)、中医证候积分及性激素(FSH、LH、E₂)水平的变化情况  结果：①治疗前后组内比较,两组子宫肌瘤体积差异有统计学意义(P<0.05);组间治疗前后子宫肌瘤体积差值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。②组间治疗后比较,治疗组对经期延长、经量过多的疗效均显著优于对照组(P<0.05)。③治疗前后组内比较,两组中医证候积分差异有统计学意义(P<0.05);组间治疗前后中医证候积分差值比较,差异有统计学意义(P<0.05)。④治疗前后组内比较,两组FSH、LH、E₂水平差异无统计学意义(P>0.05);组间治疗后比较,FSH、LH、E₂水平差异无统计学意义(P>0.05)  结论：益气化瘀方治疗气虚血瘀型子宫肌瘤,可缩小瘤体,改善月经紊乱,缓解临床症状。     

姜黄素对人胰腺癌PANC-1细胞甲基化转移酶表达影响的体外研究

  目的：探讨姜黄素对人胰腺癌PANC-1细胞甲基化转移酶(DNMTs)基因表达的影响及其作用机制  方法：将体外培养的PANC-1细胞分为对照组、吉西他滨组、姜黄素组和联合组。各组分别干预48 h后,采用CCK8法检测人胰腺癌PANC-1细胞的增殖情况,采用RT-PCR法检测DNMTs mRNA表达情况,采用Western blotting法检测DNMT₁和Caspase-3蛋白表达水平  结果：①联合组PANC-l细胞增殖抑制率高于姜黄素组和吉西他滨组(P<0.05)。②吉西他滨组、姜黄素组和联合组DNMT₁及DNMT₃ mRNA表达均较对照组降低(P<0.05);联合组低于吉西他滨组和姜黄素组(P<0.05)。③吉西他滨组、姜黄素组和联合组DNMT₁蛋白表达均较对照组明显下调(P<0.05,P<0.01),Caspase-3蛋白表达均较对照组明显上调(P<0.01);联合组与吉西他滨组和姜黄素组比较有显著差异(P<0.05)  结论：姜黄素可协同吉西他滨促进胰腺癌细胞的凋亡,其机制与调控胰腺癌PANC-1细胞癌基因的去甲基化作用有关。     

健脾补肾针刺法对PCOS不孕症患者IVF-ET促排卵及子宫内膜容受性的影响

  目的：探讨健脾补肾针刺法对行体外受精(IVF)-胚胎移植(ET)的多囊卵巢综合征(PCOS)不孕症患者促排卵及子宫内膜容受性的影响。  方法：纳入82例行IVF-ET的PCOS不孕症患者,随机分为对照组(42例)和治疗组(40例)。所有患者均给予西药拮抗剂促排方案,治疗组患者在此基础上予健脾补肾针刺法治疗。比较两组患者的获卵数量、受精卵子数及优质胚胎率,检测并比较两组患者的扳机日黄体生成素(LH)、雌二醇(E₂)、孕酮(P)水平,于扳机日检测患者的子宫内膜厚度及血流分布情况,比较两组患者在周期中的促性腺激素(Gn)使用剂量及鲜胚移植数、人绒毛膜促性腺激素(HCG)阳性率、临床妊娠率。  结果：①两组患者的获卵数及受精卵子数比较,差异无统计学意义(P>0.05)；治疗组患者的优质胚胎率高于对照组(P<0.05)。②扳机日治疗组患者的E₂、P水平明显高于对照组(P<0.05)。③扳机日两组患者的子宫内膜厚度比较,差异无统计学意义(P>0.05)；治疗组患者的子宫内膜血流分布阳性情况显著优于对照组(P<0.05)。④治疗期间,治疗组患者的Gn用量较对照组明显减少(P<0.05)。⑤两组患者的HCG阳性率、临床妊娠率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。  结论：健脾补肾针刺法联合西药拮抗剂促排方案可改善行IVF-ET的PCOS不孕症患者的子宫内膜容受性和内分泌激素水平,提高优质胚胎率,减少Gn用量。     

基于雌激素信号通路传导加味八珍益母胶囊治疗卵巢早衰的作用机制

目的 探讨加味八珍益母胶囊对卵巢早衰雌性大鼠血清性激素、性器官及雌激素信号通路传导的影响。方法 采用网络药理学分析，筛选加味八珍益母胶囊治疗卵巢早衰的关键靶点蛋白。选取雌性健康SD大鼠，采用卵巢摘除术建立大鼠卵巢早衰模型，将50只卵巢摘除的大鼠随机分为模型组，戊酸雌二醇组、加味八珍益母胶囊低、中、高剂量组，另取10只健康雌性大鼠设为假手术组，假手术组和模型组大鼠灌胃蒸馏水、其他给药组大鼠灌胃相应剂量药物。21 d后，测定雌性大鼠血清激素水平，包括雌二醇（E₂）、孕激素（P）、卵泡刺激素（FSH）及黄体生成素（LH）；免疫荧光染色（IF）检测关键靶点蛋白雌激素受体1（ESR1）、雌激素代谢P4503A4酶（CYP3A4）和P45019A1酶（CYP19A1），在雌性大鼠子宫组织中的蛋白表达水平。结果 与模型组比较，加味八珍益母胶囊低、中、高剂量组明显升高雌性大鼠血清E₂、P水平；均可改善雌性大鼠子宫内膜状态；升高雌性大鼠子宫组织中雌激素受体1（ESR1）、激素代谢酶CYP3A4及CYP19A1的阳性表达（P<0.05）。结论 加味八珍益母胶囊治疗卵巢早衰可能与其类激素样作用和激活雌激素信号通路有关。     

环磷酰胺联合柿叶乙酸乙酯部位对H22小鼠瘤组织抗氧化能力及Bcl-2,Bax蛋白表达的影响

目的: 通过研究环磷酰胺(CTX)联合柿叶乙酸乙酯部位(PE)对H22荷瘤小鼠瘤组织的抗氧化作用和对瘤组织凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关x蛋白(Bax)蛋白表达的影响,探讨两药联合应用的效果。 方法: 昆明种小鼠,取H22荷瘤鼠腹水接种于昆明种小鼠右前肢腋窝皮下,建立H22荷瘤小鼠模型,将荷瘤小鼠随机分为模型组,CTX组(0.1 g ·kg^-1),CTX联合PE高、中、低剂量组(2,1,0.5 g ·kg^-1),连续ig给药10 d,处死小鼠后计算抑瘤率,采用金氏q值法判断两者合用的效果,检测瘤组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力,丙二醛(MDA)含量,采用免疫组化法检测瘤组织中Bcl-2和Bax蛋白表达情况。 结果: 与模型组比较,各给药组抑瘤率明显升高,SOD水平和Bax蛋白表达均明显升高,MDA水平和Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01);CTX联合PE各剂量组的抑瘤率均高于CTX组,0.85<q<1.15,两药合用作用相加;与CTX组比较,联合用药各剂量组SOD水平和Bax蛋白表达均升高,MDA水平,Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/Bax均降低(P<0.05,P<0.01)。 结论: CTX联合PE能使抑瘤作用相加,其机制可能与两药合用能明显增强H22小鼠机体抗氧化能力,下调Bcl-2蛋白及上调Bax 蛋白的表达有关。     

补肾壮督方对大鼠退变髓核组织中miR-155-5p及凋亡相关蛋白的影响

目的 观察大鼠退变椎间盘髓核组织miR-155-5p及凋亡相关蛋白表达差异，及补肾壮督方对其的影响。方法 SD雄性大鼠，采用纤维环全层针刺造模，随机分为空白对照组，模型组，低剂量中药组、中剂量中药组及高剂量中药组。中药干预4周后，TUNEL法检测退变椎间盘中髓核细胞凋亡率，qRT-PCR检测miR-155-5p及Bax、Bcl-2、Cytc mRNA的表达；Western Blot检测髓核组织中active Caspase-3，Bcl-2、Cytc及Bax蛋白表达水平。结果 模型组大鼠髓核细胞凋亡率明显增加(P < 0.05)，Cytc和Bax mRNA及其蛋白表达量均显著增加(P < 0.05)，Bcl-2 mRNA及其蛋白表达量显著下降(P < 0.05)，Bax/Bcl-2比值显著增加(P < 0.05)。中药干预后检测，髓核细胞凋亡率明显减少(P < 0.05)，Cytc和Bax mRNA及其蛋白表达量均明显下降(P < 0.05)，Bcl-2 mRNA及其蛋白显著增加(P < 0.05)，Bax/Bcl-2比值显著减小(P < 0.05)。结论 补肾壮督方可能通过减少active Caspase-3、Cytc和Bax蛋白表达，增加Bcl-2蛋白表达，抑制线粒体凋亡通路，从而改善椎间盘退变；miR-155-5p可能参与髓核细胞凋亡的线粒体凋亡通路。     

基于NLRP3炎症通路探讨健脾益肾化浊方对多囊卵巢综合征大鼠卵巢功能的影响

目的 探究健脾益肾化浊方（JPYSHZ）改善多囊卵巢综合征（PCOS）卵巢功能的作用机制。方法 将70只SD雌性大鼠随机分为6组,空白组和模型组各15只,二甲双胍组（0.1 g·kg^-1）、JPYSHZ低、中、高剂量组（1.275、2.55、5.10 g·kg^-1）组各10只。空白组给予生理盐水（10 mL·kg^-1）灌胃和普通饲料喂养,其余各组均采用来曲唑（1 mg·kg^-1）灌胃联合高脂饲料喂养21 d构建PCOS模型,造模结束后,空白组和模型组给与等体积生理盐水灌胃,各药物组给予相应剂量的药物灌胃,共30 d。比较造模前与造模后大鼠体质量和空腹血糖（FPG）变化;苏木素-伊红（HE）染色观察各组大鼠卵巢组织形态学改变;酶联免疫吸附测定法（ELISA）监测大鼠血清促卵泡生成素（FSH）、促黄体生成素（LH）、睾酮（T）、抗苗勒管激素（AMH）和雌二醇（E₂）水平,并计算LH/FSH;免疫组化法和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠卵巢组织中核苷结合寡聚化域蛋白样受体3（NALP3）、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、胱天蛋白酶-1（Caspase-1）、核转录因子-κB（NF-κB）、白细胞介素（IL）-1β、IL-18和IL-6）蛋白表达水平。结果 与空白组比较,模型组大鼠卵巢中可见较多囊性扩张的大卵泡,未见优势卵泡、卵泡颗粒层减少且排列松散,黄体数量明显减少;血清T、LH、AMH和LH/FSH明显升高（P<0.05,P<0.01）,FSH和E₂明显降低（P<0.05,P<0.01）;卵巢组织中NALP3、ASC、Caspase-1、NF-κB、IL-1β、IL-18和IL-6蛋白相对表达量均明显升高（P<0.05,P<0.01）。与模型组比较,JPYSHZ各剂量组和二甲双胍组卵巢组织中可见各级生长卵泡和黄体,囊性扩张卵泡减少,卵泡颗粒层厚度增加,可见成熟卵泡,卵母细胞局部形态完整;血清T、LH、AMH和LH/FSH明显降低（P<0.05,P<0.01）,E₂和FSH明显升高（P<0.05）;卵巢组织中NALP3、ASC、Caspase-1、NF-κB、IL-1β、IL-18和IL-6蛋白相对表达量明显下降（P<0.05,P<0.01）。结论 JPYSHZ可通过抑制NLRP3炎症小体激活,减少卵巢组织中各炎性因子释放,调节内分泌水平,有效减轻PCOS炎症状态,发挥改善卵巢功能作用。