HPLC法测定不同产地荆芥中6种黄酮类成分

目的通过对不同产地荆芥Schizonepeta tenuifolia中6种黄酮类成分的检测,为其质量控制提供依据。方法采用高效液相色谱(HPLC)法建立荆芥药材中黄酮类成分的检测方法,并以6种黄酮类成分的量为数据来源,对其进行聚类分析。结果不同产地荆芥中6种黄酮类成分的量差异较大,木犀草苷、槲皮苷、橙皮苷、木犀草素、芹菜素、香叶木素的线性范围分别是0.030~0.148μg、0.222~1.108μg、0.357~1.784μg、0.058~0.292μg、0.054~0.269μg、0.050~0.247μg,加样回收率为96.32%~99.97%,RSD2.20%;其中,安徽产地聚为一类,河南1与广东产地为聚一类,河南2、河北、云南、四川、湖北、甘肃产地聚为一类。结论建立的方法简单、灵敏,可用于荆芥的多指标成分的质量控制;其次,河南1、河南2、河北、云南、四川、湖北、广东、甘肃的亲缘关系较近,可以作为同一药用来源。     

基于NF-κB/NLRP3/Caspase-1通路介导的巨噬细胞焦亡探究葛根芩连汤对动脉粥样硬化易损斑块的干预机制

目的 探究葛根芩连汤（GQL）通过调控核转录因子（NF）-κB/NOD样受体蛋白3（NLRP3）/胱天蛋白酶（Caspase）-1通路介导的巨噬细胞焦亡对动脉粥样硬化（AS）易损斑块的作用。方法 12只正常C57BL/6CNC小鼠作为空白组，60只同品系的载脂蛋白E基因敲除（ApoE^-/-）小鼠随机分为5组，即模型组、葛根芩连汤低、中、高剂量组（GQL-D、Z、G组）、立普妥组，以高脂饲料喂养造模。空白组、模型组予等体积无菌蒸馏水灌胃；GQL-D、Z、G、立普妥组分别予对应浓度的药物灌胃8周。苏木素-伊红（HE）染色观测主动脉区域斑块情况，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-18（IL-18）水平，ELISA检测巨噬细胞甘露糖受体（MMR/CD206）/凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、CD206/NLRP3蛋白表达水平，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组小鼠gasdermin D蛋白C端（C-terminal GSDMD）、gasdermin D蛋白N端（N-terminal GSDMD）、NLRP3、含胱天蛋白酶-1前体（pro-Caspase-1）和NF-κB p65蛋白表达水平。结果 与空白组比较，模型小鼠AS病变程度严重，血清IL-1β、IL-18、组织ASC、NLRP3、C-terminal GSDMD、N-terminal GSDMD、pro-Caspase-1和NF-κB p65表达水平明显升高（P<0.05），CD206水平明显下降（P<0.05）；与模型组比较，给药各组小鼠主动脉壁AS病变程度有所减轻，血清IL-1β、IL-18、组织ASC、NLRP3、C-terminal GSDMD、N-terminal GSDMD、pro-Caspase-1和NF-κB p65表达水平有不同程度下降，CD206水平不同程度上升，部分组结果差异有统计学意义（P<0.05）。结论 GQL对AS易损斑块的干预作用可能是通过调控NF-κB/NLRP3/Caspase-1通路，减轻其介导的巨噬细胞焦亡来实现的。     

类鼻疽伯克霍尔德菌感染的临床特点与耐药性分析

目的了解我院类鼻疽病的临床特征,探讨早期诊断治疗及该菌的耐药性分析;统计近6年类鼻疽病病死率,并且了解实验室对该菌的细菌学鉴定和药敏试验方法。方法采用回顾性2003年4月~2010年4月期间收治的43例类鼻疽病感染者的临床症状以及治疗、愈后及半年后进行电话随访统计;结果患者起病时多以带有基础疾病时起病或是农作时外伤引起,临床症状多以畏寒、高热、肺部感染、败血症以及脏器损害和细菌毒素引起的全身反应为主要表现,病情较为严重,药敏结果类鼻疽伯霍尔德杆菌对亚胺培南敏感率达100%,对美洛培南、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦敏感率达80%以上,对头孢他啶敏感率为66.7%,而对广谱青霉素类、氨基糖苷类耐药,对头孢类有不同程度的耐药。结论该病临床特征多样,首诊困难,误诊率高,广谱抗生素治疗无效,易延误病情,住院时间长,治疗成本高,应提高临床医生对此病的认识和警惕以尽快确诊。目前认为碳青霉烯类为首选抗生素,临床用药应为以碳青霉烯类为主的两种抗生素以上联合用药效果好。     

一株高度耐碳青霉烯类药物的肺炎克雷伯菌耐药性研究

目的了解从临床患者病灶中分离到的一株高度耐碳青霉烯类药物的肺炎克雷伯菌的耐药机制。方法药敏试验采用微量肉汤稀释法与etest法,碳青霉烯酶表型检测采用改良Hodge试验和双纸片增效法,其基因型测定采用多组碳青霉烯耐药相关基因引物PCR并测序,由北京大学临床药理研究所负责完成。结果药敏测试结果除对阿米卡星和多粘菌素敏感外,对临床常用亚胺培南（mic〉32ug/ml）、美罗培南（mic〉32ug/ml）、一至四代的头孢菌素类、硅诺酮类以及庆大霉素、头孢西丁、氨曲南、复方新诺明、四环素、美满霉素、氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、阿莫西林/棒酸、头孢哌酮/舒巴坦,均表现为耐药。碳青霉烯酶表型检测试验改良Hodge试验阳性,双纸片增效法阳性,碳青霉烯耐药基因为blaIMP-4。结论产IMP-4型金属β内酰胺酶的肺炎克雷伯菌已证实在我院存在,其泛耐药性,应引起我们足够的重视。     

类鼻疽伯克霍尔德菌败血症50例鉴定及其耐药性

目的了解类鼻疽伯克霍尔德菌败血症感染的特点和耐药性。方法收集2002年6月～2009年6月我院住院确诊的类鼻疽伯克霍尔德菌败血症感染株50例,采用CLSI推荐的纸片扩散法进行药敏试验。结果病例以农民多见占68%,接触疫水、免疫功能低下为易感因素,多伴有基础性疾病,误诊率高。类鼻疽伯克霍尔德菌对亚胺培南和美洛培南最敏感。结论类鼻疽病中以败血症多见,亚胺培南和美洛培南可作为治疗本病的首选用药。该菌对多种常用抗生素耐药率较高,加强对本病的认识程度,早期进行细菌培养确诊,及时选用有效的抗生素治疗具有重要意义。     

地榆黄酮提取纯化及抗肝肿瘤活性研究

目的 优化地榆黄酮提取纯化工艺,并基于微流控芯片技术,验证地榆黄酮抗肝肿瘤活性。方法 在单因素考察的基础上,采用正交试验设计,选取乙醇浓度、提取时间、溶剂用量及提取次数为考察因素,以黄酮含量和出膏率进行综合评分,优化提取工艺;通过静、动态吸附与解吸实验,以黄酮纯度为指标,优化纯化工艺;采用微流控芯片技术,Hoechst 33342/碘化丙啶（PI）双染法检测地榆黄酮对人肝癌细胞HepG₂凋亡坏死率的影响。结果 最佳提取纯化工艺为15倍量70%乙醇,回流提取3次,每次提取1.5 h,合并滤液浓缩,以HPD-300大孔吸附树脂吸附,上样浓度为0.1 g·mL^-1,上样量为1∶5（生药量/树脂体积）,5BV 70%乙醇洗脱,收集洗脱液,浓缩,干燥。经2次纯化后地榆黄酮纯度为88.60%,收率为80.76%。地榆黄酮对人肝癌HepG₂细胞均具有一定促凋亡作用,不同产地地榆黄酮凋亡坏死率15.89%～26.38%。结论 研究优选的提取纯化工艺简单、可行,地榆黄酮纯度及收率较高,促肝肿瘤细胞凋亡活性较强,适合于工业化生产,为地榆黄酮...     

健康人群电阻抗层析成像的特征及正常范围分析

目的探讨北京地区健康志愿者肺组织的电阻抗层析成像(EIT)测量值的正常范围。方法采用分层抽样方法选取102例健康志愿者(男、女志愿者各51例),分别收集其坐位、仰卧位时平静呼吸和最大呼吸状态下的总阻抗(GI)和阻抗区域(ROI)。分析不同年龄、性别、体质量指数(BMI)和其他分层因素的阻抗值范围。结果无论男性或女性,在最大呼吸状态下,GI和ROI值均高于平静呼吸状态;男性GI和ROI均高于女性(卧位平静呼吸状态下除外)。在4个ROI中,无论男性或女性,ROI2和ROI3占GI比率较高。结论本研究测得了北京地区健康志愿者EIT的基础范围值,可作为EIT系统研究和临床使用的参考依据。     

基于微流控芯片的矿物药白矾硝石治疗宫颈癌配伍规律研究

目的:开展矿物药白矾、硝石配伍组对宫颈癌Hela细胞抑制作用的研究,筛选出白矾、硝石最佳配伍比例及浓度,为进一步解释平消片中白矾、硝石的配伍比例的合理性提供实验依据。方法:设计并制作一种集浓度自动生成及配伍功能的微流控芯片,结合Hoechst 33342/PI双染荧光技术,以Hela细胞凋亡坏死率为评价指标,进行白矾、硝石配伍组对Hela细胞体外抑制试验,并在此基础上开展白矾、硝石配伍组与平消片的药效差异性研究。结果:白矾、硝石各配伍组与对照组的Hela细胞凋亡坏死率相比,差异有统计学意义(P0.01),白矾、硝石最佳配伍比例为1∶1,最佳浓度为7.5 g/L,最佳配伍组Hela细胞的凋亡坏死率为(49.92±1.53)%;平消片阳性对照组Hela细胞凋亡坏死率为(36.21±0.23)%,原方白矾、硝石组凋亡坏死率为(32.18±1.12)%,经统计分析,两组差异无统计学意义(P0.05)。结论:白矾、硝石的最佳配伍比例与平消片中白矾、硝石比例一致;白矾、硝石配伍组对平消片原方药效贡献率为88.90%。白矾、硝石为平消片的抗宫颈癌的主要药效物质基础,本研究科学解释了平消片矿物药白矾、硝石配伍合理性及组方合理性,同时也为矿物药在抗肿瘤方面的新药研发提供了实验依据。     

败酱总黄酮提取纯化工艺优化及纯化前后体外抗肝肿瘤药效对比研究

目的优选败酱总黄酮的提取纯化工艺,并结合体外药效实验,考察纯化前后的活性,为败酱合理开发和利用提供依据。方法采用正交试验设计法,以总黄酮提取量为指标,优选提取工艺;采用大孔吸附树脂法,以总黄酮含量为考察指标,优选纯化工艺;采用MTT法比较总黄酮纯化前后体外肝癌细胞抑制作用。结果败酱总黄酮最佳提取工艺为15倍量60%乙醇回流提取,提取3次,每次1h。最佳纯化工艺为HPD-300树脂,上样浓度0.1 g饮片/mL,0.9 g/mL(饮片/湿树脂)比例、6倍水除杂,4倍70%乙醇洗脱,收集洗脱液水浴蒸干,即得败酱总黄酮富集物;纯化后总黄酮体外抗肝肿瘤IC_(50)值比纯化前降低81.16%。结论该工艺方法先进合理,适合工业生产,具有简便、快速、准确等优点,为败酱的进一步研究及开发奠定基础。     

基于多元统计分析的茜草药材指纹图谱研究

目的 建立茜草药材的高效液相指纹图谱,为不同产地茜草药材的质量评价提供方法。方法 采用高效液相谱法对10批不同产地茜草进行测定;采用相似度评价、聚类分析、主成分分析3种方法对指纹图谱进行研究。结果 建立了茜草HPLC指纹图谱共有模式图标定了12个共有峰,并指认了4个共有峰化学成分;10批茜草指纹图谱与对照指纹图谱之间相似度均大于0.90; 10批次样品被聚类为两大类;主成分分析显示,提取出5个主成分,累计方差贡献率达93.78%。结论 建立的指纹图谱较全面、直观地反映了茜草整体化学成分信息,结合多元统计分析,为茜草药材的质量评价提供参考。